초록 ▼

혈장분획제제의 국가출하승인을 위해 수행하고 있는 발열성물질시험은 동물을 사용하는 in vivo 시험법으로, 다수의 토끼가 소요되기 때문에 생명존중 및 실험동물의 윤리문제가 지적되고 있다. 이는 3R로 대표되는 동물시험의 최소화를 위한 국제적인 노력에 부합하지 않는 것으로, in vitro 발열 대체시험법에 대한 적극적인 검토와 도입이 필요하였다. 뿐만아니라, 토끼발열시험은 발열물질의 정량평가가 어렵고, 시험자의 숙련도와 실험동물의 상태 및 주변의 환경적 요인이 시험결과에 크게 영향을 미칠 수 있기 때문에 점차 축소 및 대체할 필요가

혈장분획제제의 국가출하승인을 위해 수행하고 있는 발열성물질시험은 동물을 사용하는 in vivo 시험법으로, 다수의 토끼가 소요되기 때문에 생명존중 및 실험동물의 윤리문제가 지적되고 있다. 이는 3R로 대표되는 동물시험의 최소화를 위한 국제적인 노력에 부합하지 않는 것으로, in vitro 발열 대체시험법에 대한 적극적인 검토와 도입이 필요하였다. 뿐만아니라, 토끼발열시험은 발열물질의 정량평가가 어렵고, 시험자의 숙련도와 실험동물의 상태 및 주변의 환경적 요인이 시험결과에 크게 영향을 미칠 수 있기 때문에 점차 축소 및 대체할 필요가 있다.

본 연구과제의 목적은 단핵구를 이용한 단핵구활성시험을 in vitro 대체시험법으로써 개발하는 것이다. 이를 위해, 토끼단핵구를 이용하여 단핵구활성시험의 시험조건을 설정하였고, 엔도톡신과 비엔도톡신성 발열물질에 대해 기존의 토끼발열시험과 토끼단핵구활성시험을 수행하였다.

그 결과, 토끼발열시험에서 엔도톡신 및 비엔도톡신성 발열물질의 농도가 증가함에 따라 토끼의 체온상승이 증가하였고, 토끼단핵구활성시험에서 엔도톡신 및 비엔도톡신성 발열물질의 농도가 증가함에 따라 발열에 직접적인 원인이 되는 Pyrogenic 사이토카인의 분비량이 비례적으로 증가하였다. 유사한 경향을 보인 두 시험법 결과인 토끼의 체온상승과 토끼단핵구로부터 분비되는 사이토카인의 양에 대한 상관성 분석결과 높은 상관관계가 확인되었다.

또한 토끼단핵구와 사람단핵구(상용화 키트)를 이용한 단핵구활성시험의 검출한계(LOD)를 비교하여 토끼단핵구활성시험의 우수한 민감도를 확인하였고, 혈장분획제제 최종제품에 대한 적용가능성을 탐색하였다.

본 연구에서는 토끼단핵구를 시험재료로 사용함으로써 동물의 사용량을 획기적으로 감소할수 있었다. 본 연구의 결과는 혈액제제의 안전성을 위해 수행되고 있는 주요 시험항목인 발열성물질시험에 in vitro 발열시험법을 추가적으로 도입하기 위한 기초자료로 활용될 것이다.

(출처 : 국문 요약문 2p)

Abstract ▼

The Rabbit Pyrogen test(RPT) is an animal test which is currently performed for national lot release of final blood products. However, it requires a lot of rabbits and it does not line with the global trend, also represented as 3R. In addition, there has been a need of replacement due to its difficu

The Rabbit Pyrogen test(RPT) is an animal test which is currently performed for national lot release of final blood products. However, it requires a lot of rabbits and it does not line with the global trend, also represented as 3R. In addition, there has been a need of replacement due to its difficulty in quantification of pyrogen, and to its sensitivity to condition of animals and technique of examinant.

The aim of this research is to develop an alternative pyrogen test for national lot release of final blood products using monocyte. We established test conditions and methods for monocyte activation test(MAT) using rabbit peripheral blood mononuclear cell. And we conducted rabbit pyrogen test and also monocyte activation test for endotoxin and non-endtoxoin pyrogens.

As a result, the rise in body temperature of rabbit increased in proportion to increase in concentration of these four pyrogens. And the release of pyrogenic cytokines also increased in proportion to increase in concentration of four pyrogens. And a high correlation was confirmed between the results obtained from the two test methods.

In addition, the detection limit of the monocyte activation test using rabbit monocyte and human monocyte(commercial kit) was compared. And rabbit monocyte shows better sensitivity.
And also we conducted the rabbit monocyte activtion test for final blood products such as human serum albumin and human coagulation factor

In this study, we can reduce significantly the use of animals by using rabbit peripheral blood mononuclear cells. The results of this research will be used as basic data for introduction of in vitro pyrogen test, which is the critical test for the safety of blood products

(출처 : SUMMARY 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 국문 요약문 ... 2
• Summary ... 3
• 목차 ... 4
• 연구개발과제 연구결과 ... 5
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 5
• 제2장 연구개발과제의 국내･외 연구개발 현황 ... 7
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 9
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 29
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 30
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 30
• 제7장 참고문헌 ... 32
• 제8장 첨부서류 ... 33
• 끝페이지 ... 37