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5. 최종 연구결과 요약
◦ 특정유전자 결손 감염성 구제역바이러스 cDNA 및 바이러스 증식용 보조 세포주 제작
가. 구제역바이러스의 구조 및 비구조단백질 유전자 중 특정 유전자를 결손시킨 감염성 구제역바이러스 전체 cDNA 작성
1) 구제역 바이러스 P1 단백질 중 특정 구조단백질 암호화 유전자 결손/치환된 감염성 구제역바이러스 전체 cDNA* 작성 (2014년∼2015년)
- VP4 유전자 결손 감염성 cDNA 제작 (1종)
- VP0의 VP4 및 VP2 연결부분 아미노산 치환 감염성 cDNA 제작 (

5. 최종 연구결과 요약
◦ 특정유전자 결손 감염성 구제역바이러스 cDNA 및 바이러스 증식용 보조 세포주 제작
가. 구제역바이러스의 구조 및 비구조단백질 유전자 중 특정 유전자를 결손시킨 감염성 구제역바이러스 전체 cDNA 작성
1) 구제역 바이러스 P1 단백질 중 특정 구조단백질 암호화 유전자 결손/치환된 감염성 구제역바이러스 전체 cDNA* 작성 (2014년∼2015년)
- VP4 유전자 결손 감염성 cDNA 제작 (1종)
- VP0의 VP4 및 VP2 연결부분 아미노산 치환 감염성 cDNA 제작 (3종)
* O1 Manisa의 전체 cDNA (pBluescript II SK+ 벡터삽입 형태) 유전자 주형
- O1 Manisa VP3 유전자를 제거한 감염성 cDNA 제작
2) 구제역 바이러스 비구조단백질 암호화 유전자 결손/치환된 감염성 구제역 바이러스 전체 cDNA 작성 (2014년∼2015년)
- 3B 부분 결손(2종) 및 picornaviridae에 속하는 4종 바이러스의 3B 유전자 치환 감염성 cDNA 확보
- 3D 부분 결손 감염성 cDNA 확보(2종)
나. 단백질발현시스템 이용 특정 구제역 바이러스 구조 및 비구조 단백질 발현 세포주 작성을 위한 재조합 렌티바이러스 제작 및 형질도입세포 작성(2014년∼2015년)
1) 구조단백질 VP0(VP4+VP2) 및 비구조단백질 (3ABC) 유전자 포함 렌티바이러스 제작 및 바이러스 역가평가
- VP0-렌티바이러스 : 10³ 이상 viral RNA 검출
- 3ABC-렌티바이러스 : 10⁵ 이상 viral RNA 검출
2) 구제역 바이러스 구조단백질 발현 세포주(helper cell) 작성
- 구제역바이러스 구조단백질(VP0) 발현세포주 작성
; BHK T7-9, BHK 21, LFBK, ZZR, IBRS-2
- VP3 단백질 발현 세포주 작성: BHK T7-9, ZZR
3) 구제역바이러스 비구조단백질(3ABC, 3D) 발현 세포주 작성
- 3ABC 발현세포주 : BHK T7-9, BHK 21, LFBK, ZZR, IBRS-2
- 3D 발현세포주 : BHK T7-9, BHK 21

◦ 일회증식 구제역바이러스 생산(2015)
가. 비구조단백질 발현 Helper cell(형질전환세포)를 이용한 일회증식 바이러스 제작
1) 3B 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 3ABC 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- 3ABC 발현 BHK T7-9 세포에 3B 유전자 결손/치환 감염성 cDNA transfection한 후 5대 및 10대 계대세포에서 일회증식 바이러스 미확인
2) 3D 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 3D 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- 3D 발현 BHK T7-9, BHK21 및 ZZR 세포에 3D 유전자 결손/치환 감염성 cDNA를 transfection한 후 3대 계대 세포에서 일회증식 바이러스 미확인
나. 구조단백질 발현 Helper cell(형질전환세포)를 이용한 일회증식 바이러스 제작
1) VP0 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 VP0 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- BHK T7-9 세포에 VP0 유전자 결손/치환 감염성 cDNA를 transfection한 후 ZZR 세포에 계대한 결과 바이러스감염(세포변성)확인
- 증식 바이러스에 대한 유전자 분석결과 세포내 VP O 유전자가 결손부위에 Homologous recombination되어 O1 Manisa주와 동일한 것으로 확인
2) VP3 유전자 결손/치환 감염성 cDNA의 VP3 발현 형질전환세포에서의 바이러스 작성 실험
- BHK T7-9 세포에 VP3 유전자 결손/치환 감염성 cDNA를 transfection한 다음 14대 계대한 결과 VP3 유전자가 결손된 유전체 확인

(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 1p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 5
• 1. 재 료 ... 5
• 2. 연구전략 및 방법 ... 5
• Ⅲ. 연구결과 ... 6
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 21
• 1. 구제역바이러스의 구조 및 비구조단백질 유전자 중 특정 유전자를 결손시킨 감염성 구제역바이러스 전체 cDNA 작성 ... 21
• 2. 단백질발현시스템 이용 특정 구제역 바이러스 구조 및 비구조 단백질 발현 세포주 작성을 위한 재조합 렌티바이러스 제작 및 확인 ... 22
• 3. 일회증식 바이러스 작성 ... 22
• Ⅴ. 고 찰 ... 23
• Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 24
• Ⅶ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 25
• Ⅷ. 주요연구과제 변경사항 ... 25
• IX. 참고자료 ... 25
• 끝페이지 ... 26