초록 ▼

본 연구는 세포배양일본뇌염백신 역가시험 대체시험법 개발‧확립 연구를 위해 계획되었으며, 시험법 확립 및 국가표준품 in vitro 역가 규격 설정을 위해 2년 동안 수행되는 과제이다. 1차연도는 in vitro 역가 대체 시험법의 확립을 위하여 시험법 밸리데이션 및 국제 공동연구를 위한 연구 프로토콜 작성, 두 시험법의 관계성 확인을 위한 역가 비교시험을 수행하였다. 시험법 대체를 위한 지침서로는 유럽 공정서인 유럽약전의 일반 사항(EP 9.3, general chapter 5.2.14 : 백신의 품질관리를 위한 in vivo 시험

본 연구는 세포배양일본뇌염백신 역가시험 대체시험법 개발‧확립 연구를 위해 계획되었으며, 시험법 확립 및 국가표준품 in vitro 역가 규격 설정을 위해 2년 동안 수행되는 과제이다. 1차연도는 in vitro 역가 대체 시험법의 확립을 위하여 시험법 밸리데이션 및 국제 공동연구를 위한 연구 프로토콜 작성, 두 시험법의 관계성 확인을 위한 역가 비교시험을 수행하였다. 시험법 대체를 위한 지침서로는 유럽 공정서인 유럽약전의 일반 사항(EP 9.3, general chapter 5.2.14 : 백신의 품질관리를 위한 in vivo 시험법의 in vitro 시험으로 대체)에서 제시하는 시험법 대체 시 고려사항에 대한 지침을 참고 하였다. 대체 시험법 확립을 위해 ICH 가이드에 따라 시험법 밸리데이션을 수행하였으며 필수 항목에 대하여 모두 기준에 적합하였다. 시험법 밸리데이션을 결과를 바탕으로 국제 공동연구에서 이용할 연구 프로토콜을 작성하였으며 영문판으로 참여 예정자에게 배포하였다. 또한 동물 역가시험법과 비동물 역가시험법을 비교하기 위해 역가 관계성 시험 및 가혹조건 시험을 수행하였다. 두 시험법의 역가 관계성 결과를 확인하기 위하여 일본뇌염 상용백신 29로트를 이용하여 역가를 각각 도출하고 관계성을 비교하였다. 그 결과 두 역가 사이의 관계성을 비교하기 어렵다는 결과를 도출하였다. 또 다른 역가 비교 시험으로는 스트레스 조건인 고온(56 ℃)으로 백신(항원)을 일정기간(4주) 노출하여 두 시험법에서 어떠한 반응을 도출하는지 비교하였다. 각 시험법 내에서 고온(56 ℃)과 정상온도(4 ℃)에서의 노출기간 동안의 역가를 경향성을 통계적으로 분석한 결과 정상온도는 노출기간 동안 유의한 변화가 없었으나 고온에 노출 된 경우, 두 시험법 각각 모두 역가 감소 경향을 나타냈다. 또한 두 시험법 간에 고온(56℃)에서의 역가 경향성을 분석한 결과 두 시험법 모두 노출 기간에 따라 역가가 감소하고 있었으며 두 감소 경향은 동일한 기울기로 감소한다는 것을 통계적 분석으로 확인하였다.

당해년도에는 세포배양일본뇌염백신의 베이징 항원에 대한 기능적 타당성을 검증하기 위해 단클론항체 2종 (5F15, 7D71)의 특성분석(정제 및 결합친화도 측정, 중화능 시험, 에피토프 맵핑)이 수행되었다. 그 결과 5F15는 98.29%, 7D71은 99.44% 정제되었으며 5F15가 7D71보다 결합친화도가 약 5배가 크다는 것을 확인하였다. 중화능시험 결과 5F15가 7D71보다 중화항체가가 약 1.5배 더 크다는 것을 확인하였다. 두 번째로 정량측정을 위해 여러 가지 스트레스 조건의 검체를 이용하여 반응성을 확인하기 위해 추가적으로 유효기간 경과 검체에 대한 역가 비교를 수행했다. in vivo, in vitro 결과 모두 정상 항원 역가와 일관성을 유지하였으며 유효기간 경과에 따른 감소 경향이 확인 불가하였다. 마지막으로 정량대체 시험법에 대한 국제 공동연구가 수행 되었으며 공동연구 결과를 근거로 세계 최초로 세포배양일본뇌염백신(베이징주) 국가표준품의 in vitro 역가(규격) 설정을 하여 백신 품질관리 시험법에 활용할 예정이다.

(출처 : 요약문 3p)

Abstract ▼

This study was designed to study the development & establishment of an alternative test method for cell-derived Japanese encephalitis vaccine(JEV) potency test, and it is a two-year project to establish the in vitro test method and to set the in vitro potency unit for Korean National Reference Stand

This study was designed to study the development & establishment of an alternative test method for cell-derived Japanese encephalitis vaccine(JEV) potency test, and it is a two-year project to establish the in vitro test method and to set the in vitro potency unit for Korean National Reference Standard Material. Last year, to establish in vitro assays, we conducted a test protocol for method validation and international collaborative study, and a potency comparison test to check the relationship between the two assays. As a guideline for the replacement of the test method, EP were consider to the general requirements of the European Pharmacopoeia(General Chapter 5.2.14).

Method validation was performed in accordance with the ICH Guide to establish alternative test methods, and all required items met the criteria. Based on the results of the method validation, a study protocol for international collaboration was prepared and distributed in English version to prospective participants. To compare the animal potency test with the non-animal potency test, a potency relationship test and a stress condition test were performed. To confirm the results of the potency relationship between the two assays, 29 lots of the JEV were used to compared the relationship. The test results show that it is difficult to compare the relationship between the potency. Another potency comparison test was the exposure of the vaccine (antigen) for a period of time (4 weeks) to a high temperature (56 °C), a stress condition, to compare the response of the two assays.

The statistical analysis of the trends of the potency during the exposure periods at high temperature (56 °C) and normal temperature (4 °C) in each test method showed that the normal temperature was not significantly changed during the exposure period. Both assays tended to decrease in potency. In addition, the analysis of potency tendency at high temperature (56 °C) between the two assays showed that the potency decreased with the duration of exposure and that the decreasing tendency decreased with the same slope.

In this year, the characteristic analysis(purification and binding affinity measurement, neutralization ability test, epitope mapping)of two monoclonal antibodies(5F15, 7D71) was performed to verify the functional validity of the cell-derived JEV(Beijing strain). As a result, it was confirmed that 5F15 was purified by 98.29% and 7D71 by 99.44% and that 5F15 had about higher binding affinity than 7D71. Also, in neutralization ability test, it was confirmed that the neutralizing antibody titer of 5F15 was approximately 1.5 times higher than that of 7D71. Second, in order to confirm the reactivity using JEV vaccine samples under various stress conditions for quantitative measurement, an additional titer comparison was performed on samples after the expiration date. Both the in vivo and in vitro results were consistent with the normal antigen titer, and the decreasing trend with the passage of the expiration period was not confirmed. Lastly, international collaborative study on alternative assays was conducted.
Based on the results of the collaborative study, the in vitro potency unit for cell-derived JEV (Beijing strain) will be established and the alternative in vitro test will be conducted the potency test for quality control of vaccine.

(출처 : Summary 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• 목차 ... 5
• 연구개발과제 연구결과 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 11
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 91
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 95
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 97
• 제7장 참고문헌 ... 98
• 제8장 첨부서류 ... 99
• [첨부 1] 국제 공동연구 프로토콜 ... 100
• [첨부 2] 국제 공동연구 제안에 관한 사전 질의서 ... 110
• [첨부 3] 국제 공동연구 결과 보고서 초안(작성중) ... 113
• 끝페이지 ... 114