초록 ▼

□ 연구개요
⦁ CD19과 CD123에 대해 이중으로 특이적인 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)를 발현시킨 자연살해(natural killer, NK) 세포를 개발하고 그 유효성을 평가하여 난치성 백혈병 치료의 기술적 기반을 확보하기 위한 연구임.
⦁ 항-CD19 및 항-CD123 항체를 클로닝하여, 렌티바이러스 벡터를 이용하여 항-CD19, 항-CD123 및 항-CD19/CD123에 대한 항원특이적 키메라 항원 수용체를 발현하는 NK 세포를 생산함.
⦁ 다양한 백혈병 세포

□ 연구개요
⦁ CD19과 CD123에 대해 이중으로 특이적인 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)를 발현시킨 자연살해(natural killer, NK) 세포를 개발하고 그 유효성을 평가하여 난치성 백혈병 치료의 기술적 기반을 확보하기 위한 연구임.
⦁ 항-CD19 및 항-CD123 항체를 클로닝하여, 렌티바이러스 벡터를 이용하여 항-CD19, 항-CD123 및 항-CD19/CD123에 대한 항원특이적 키메라 항원 수용체를 발현하는 NK 세포를 생산함.
⦁ 다양한 백혈병 세포주를 사용하여 항-CD19, 항-CD123, 항-CD19/CD123 CAR NK 세포의 세포살상능력을 비교, 평가함.

□ 연구 목표대비 연구결과
1) 항-CD19 항체 개발
⦁ 항-CD19 항체는 기존에 알려진 FMC63의 높은 특이성으로 인해, CD19과 같이 B세포 계열 백혈병과 림프종에서 발현되는 CD22 항체로 대체하여 개발함.
2) 항-CD123 항체 개발
⦁ 동물 면역 항체 라이브러리를 이용하여 항-CD123 항체를 클로닝함.
3) 단일 표적 CAR 벡터 제작
⦁ CD19 항체인 FMC63, CD22 항체인 CI4-47, CD123 항체인 TRCh5.4-2, Klon43 scFv를 이용하여 단일 표적 CAR 발현 벡터를 성공적으로 클로닝함.
4) 이중 표적 CAR 벡터 제작
⦁ CD19 항체, CD22 항체, CD123 항체를 이용하여, CD19/CD22와 CD19/CD123 이중 표적 CAR 유전자를 렌티바이러스 벡터에 성공적으로 클로닝함.
5) 이중 표적 CAR NK 세포 생산 및 검증
⦁ 신규 클로닝한 CD22 항체와 CD123 항체를 사용하여 CD19/CD123과 CD19/CD22 이중 표적 CAR-NK92 세포를 성공적으로 생산했으며 B 세포 림프종 세포주에 대한 세포살상능력을 확인함.
6) CD19 CAR-γδ T 세포 검증
⦁ NK 세포의 이외의 다른 면역세포에서 CAR 효능을 평가하기 위해 CD19 CAR-γδ T 세포를 생산하여 세포살상능력을 평가함. 시험관 내에서 증식된 CD19 CAR-γδ T 세포를 사용하여 B 세포 림프종 세포주 살상효과를 검증하고, NSG 마우스를 대상으로 생체 내 전임상 효능을 성공적으로 평가함

□ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과(연구개발결과의 중요성)
1) 기술적 측면
⦁ 기존의 CD19 항체 이외의 CD123, CD22에 대한 새로운 표적 항체를 클로닝하여, 다양한 암 항원을 표적으로 하는 CAR　세포치료제 생산의 근거를 마련함
⦁ 부작용이 적고 제조 과정이 쉬운 CAR NK 세포와 CAR 감마델타 T 세포에 대한 기술적 기반 마련
⦁ 다양한 암 항원과 복수의 항원을 표적으로 하는 CAR 세포치료제 platform을 확보하여 혈액암 이외의 다양한 암종에 대한 세포면역치료를 시도하기 위한 기반을 마련함.
⦁ 국내, 외에서 개발 및 수요가 증가하고 있는 CAR-T 세포치료제 산업에서 필요로하는 세포치료 관련 인력 양성에 기여함
2) 경제 산업적 측면
⦁ 최근 시장성이 커지고 있는 혈액암 치료용 CAR 기반 세포면역치료제의 국내 원천기술 기반 확보

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1) 연구목표 ... 4
• 2) 연구의 필요성 ... 4
• 3) 연구의 가설 및 근거 ... 4
• 4) 연구의 범위 ... 5
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
• 1) 항-CD123 항체 개발 ... 5
• 2) Anti-CD22 CAR 제작 ... 5
• 3) CAR-NK cell 제작을 위한 바이러스 벡터 클로닝 ... 6
• 4) 항-CD19, 항-CD123 CAR 제작 및 세포독성 실험 ... 6
• 5) Bi-specific (이중 표적) CAR NK 세포 제작 및 세포독성 실험 ... 6
• 6) 감마델타 T 세포 및 알파베타 T 세포에 대한 CAR 도입 및 세포살상 능력 검증 ... 7
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 7
• 1) 정성적 연구개발성과(연구개발결과) ... 7
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 15
• 3) 목표 달성 수준 ... 15
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 15
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 16
• (1) 기술적 측면 ... 16
• (2) 경제 산업적 측면 ... 16
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 16
• 6. 참고문헌 ... 16
• 붙임1. 세부 정량적 연구개발성과 ... 17
• 붙임2. 연구책임자 대표적 연구실적 및 증빙(요약문 및 사본) ... 19
• 끝페이지 ... 23