초록 ▼

□ 연구개요
간암은 치료 후에도 전이/재발률이 70% 이상 유난히 높은 암임. 우리는 선행연구에서 간암세포에 결합 특이성을 보이는 단일클론항체 NPB40을 선발하고 타겟 항원이 B7-H3임을 밝혔음. B7-H3은 정상세포에서는 발현하지 않지만 많은 암세포에서 발현하는 면역조절 분자로 다양한 암세포의 전이와 면역회피에 관여하는 것으로 알려짐.
이 연구제안서에서는 간암의 높은 전이/재발률이 B7-H3 발현을 통한 면역 회피 및 생존에 기인한다고 가정함. 따라서 NPB40 항체가 간암 세포에 대한 ADCC (antibody-d

□ 연구개요
간암은 치료 후에도 전이/재발률이 70% 이상 유난히 높은 암임. 우리는 선행연구에서 간암세포에 결합 특이성을 보이는 단일클론항체 NPB40을 선발하고 타겟 항원이 B7-H3임을 밝혔음. B7-H3은 정상세포에서는 발현하지 않지만 많은 암세포에서 발현하는 면역조절 분자로 다양한 암세포의 전이와 면역회피에 관여하는 것으로 알려짐.
이 연구제안서에서는 간암의 높은 전이/재발률이 B7-H3 발현을 통한 면역 회피 및 생존에 기인한다고 가정함. 따라서 NPB40 항체가 간암 세포에 대한 ADCC (antibody-dependent cellular cytotoxicity)를 촉진할 수 있는지, 중화 반응 유도로 NK cell의 cytotoxicity을 촉진할 수 있는지, Antibody-drug conjugate (ADC)에 응용될수 있는지 분석함. 이런 결과는 간암 전이/재발의 치료 표적으로 B7-H3에 대한 항체를 평가하고 항암 항체치료제로서 가능성을 확인할 수 있음.

□ 연구 목표대비 연구결과
- 인간만능줄기세포를 면역주사하여 NPB40 항체를 제조하였으며 NPB40은 정상세포인 PBMC, hepatocyte 에는 거의 결합하지 않지만 간암을 포함하는 다양한 암세포에는 결합하였음. 후속연구로 NPB40항원이 B7-H3임을 밝힘.
- 간암세포에서 B7-H3를 Knockdown하거나 NPB40항체로 B7-H3-high와 -low로 sorting한 후 암세포 부착, 생존, 성장을 측정한 결과 B7-H3 발현이 암세포에서 이들 특성에 중요함을 증명함.
- 면역관문 역할을 하는지 관찰하기위해서, B7-H3에 대한 항체를 처리한 간암세포에서 NK세포의 살상효과가 증가하는지 분석한 결과 항체처리로 NK세포의 살상효과가 증가함을 관찰함. 하지만 ADCC에 의한 결과인지 구분하기 힘듬. 따라서 NPB40항체의 ADCC 및 ADC효과를 별도로 수행함.
- NPB40 항체의 키메라항체를 제조하였으며 HCC세포에서 chi-NPB40의 ADCC 효과를 관찰하여 in vivo에서 ADCC에 의한 항암 효과 가능성을 보여줌. 또한 ADC를 통한 cytotoxicity를 증명하기위해 NPB40의 internalization을 증명하고 DMDM과 MMAF toxin을 이용하여 간암세포에서 ADC에 의한 cytotoxicity를 증명하여 ADC에 의한 항암효과 가능성도 보여줌.

□ 연구개발성과의 활용 계획 및 기대효과 (연구개발결과의 중요성)
B7-H3는 pan-cancer specific antigen임을 증명하였으며 간암세포에서 B7-H3가 암세포 부착, 생존, 성장에 중요함을 증명함. B7-H3를 표적하는 키메라 항체 chi-NPB40은 ADCC/ADC에 의한 cytotoxicity를 보여줌. 따라서 in vivo에서도 ADCC 및 ADC에 의한 항암효과도 기대됨. B7-H3 과발현 간암세포는 현저히 높은 생존율을 보여주며 B7-H3발현은 암줄기세포 (CSC) 특성으로 가진 것으로 평가됨. 따라서 B7-H3을 인식하는 chi-NPB40은 다양한 암세포에서 암줄기세포를 타겟하여 암 치료 효과를 극대화할 수 있는 면역 항체치료제가 될 것으로 기대됨. 향후 우리는 chi-NP40을 치료용 인간화 항체로 개발하여 새로운 항암 항체치료제로 임상시험과 산업화를 추진함.

(출처 : 연구결과 요약문 2p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구결과 요약문 ... 2
• 목차 ... 3
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 4
• 1-1. 연구 필요성 ... 4
• 1-2. 최종 목표 ... 5
• 1-3. 연구 범위 ... 5
• 2. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 5
• 2-1. 인간 만능줄기세포의 배양 및 순수 인간 만능줄기세포의 확립 ... 5
• 2-2. 순수 인간만능줄기세포에 결합하는 NPB40 하이브리도마 제조 ... 6
• 2-3. NPB40의 각종 암세포와 정상세포에 대한 결합 특이성 분석 ... 6
• 2-4. NPB40이 인식하는 항원 동정 ... 6
• 2-5. NPB40이 인식하는 항원 검증 ... 6
• 2-6. 간암세포주에서 B7-H3의 부착능, 생존, 성장에 미치는 영향 분석 ... 6
• 2-8. NPB40을 이용한 B7-H3양성 및 음성 세포 sorting 및 세포 생존 확인 ... 7
• 2-9. NK 세포 매개 세포독성 분석 ... 7
• 2-10. 간암 및 췌장암 세포주에서 NPB40처리 후 B7-H3 세포막 내부화 분석 ... 7
• 2-11. NPB40 항체 유전자 클로닝 및 생쥐-인간 키메라 Chi-NPB40 항체의 발현 벡터 제조 ... 7
• 2-12. 생쥐-인간 키메라 항체 Chi-NPB40의 발현과 정제 ... 8
• 2-13. 키메라 항체 Chi-NPB40의 간암세포주에 대한 ADCC에 의한 독성 측정 ... 8
• 2-14. 생쥐-인간 키메라 항체 Chi-NPB40의 간암세포주에 대한 ADC에 의한 독성 측정 ... 8
• 3. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 수준 ... 9
• 1) 정성적 연구개발성과 (연구개발결과) ... 9
• 2) 세부 정량적 연구개발성과 ... 14
• 3) 목표 달성 수준 ... 14
• 4) 목표 미달 시 원인 분석 ... 14
• 4. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도(연구개발결과의 중요성) ... 14
• 5. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 14
• 6. 참고문헌 ... 14
• [붙임1] 세부 정량적 연구개발성과 ... 17
• [붙임2] 연구책임자 대표적 연구실적 및 증빙(요약문 및 사본) ... 18
• 끝페이지 ... 20