초록 ▼

1주관기관 연구 결과
A형간염백신 시제품 생산 및 비임상시험 실시를 최종 목표로 하여 1, 2 주관기관이 연구를 수행하였음. 세부 연구목표는 A형간염 바이러스 발현 및 발현 세포주 개발, A형간염 바이러스 재조합 항원 발현 세포주 개발, A형간염 바이러스 및 항원의 고효율 대량 생산 연구, A형간염 바이러스 및 항원 정제 연구, A형간염 바이러스 및 항원 formulation 연구, A형간염 백신 유효성 연구, A형간염 백신 시제품 생산, A형간염 백신 비임상 시험 수행임.
1주관기관은 A형간염바이러스 세포 발현 플랫폼을

1주관기관 연구 결과
A형간염백신 시제품 생산 및 비임상시험 실시를 최종 목표로 하여 1, 2 주관기관이 연구를 수행하였음. 세부 연구목표는 A형간염 바이러스 발현 및 발현 세포주 개발, A형간염 바이러스 재조합 항원 발현 세포주 개발, A형간염 바이러스 및 항원의 고효율 대량 생산 연구, A형간염 바이러스 및 항원 정제 연구, A형간염 바이러스 및 항원 formulation 연구, A형간염 백신 유효성 연구, A형간염 백신 시제품 생산, A형간염 백신 비임상 시험 수행임.
1주관기관은 A형간염바이러스 세포 발현 플랫폼을 개발하여 세포배양을 통한 바이러스 생산 시스템을 구축하였음, 바이러스 대량 생산 후 정제 공정과 불활화 공정을 통해 백신 원액을 생산하였음. 바이러스 원액 생산은 A형간염바이러스의 3 batch 생산을 통해 최적화하였음. 백신 원액을 면역증강제인 aluminum hydroxide에 흡착시켜 백신 시제품을 제조하였음,
백신 생산 공정의 품질시험 항목을 설정하고 시험하여 원액과 최종원액의 품질을 검증하였음.
A형간염 바이러스 항원이 비교백신인 Havrix 와 비교하여 1배, 2배 함유한 백신을 마우스에서 면역시험한 결과 동등 이상의 항체가와 중화항체가를 확인하였음.
1차연도 연구 종료 후 1주관기관의 세포발현 바이러스 항원 생산 플랫폼을 선정하여 비임상용 시제품 백신을 생산하고 품질 검증 연구를 수행하였음.
비임상시험은 단회투여독성시험, 반복투여독성시험 및 회복시험, 안전성약리시험을 수행하였음. A형간염백신 시제품을 비임상 시험한 결과 비교백신인 Havrix 대비 동등 이상의 안전성 및 유효성을 확인함.

2주관기관 연구 결과
A형간염 바이러스 항원 단백질 백신을 개발하기 위해 면역원성이 높은 부위를 선별하고 4종류의 단백질 백신 소재 발현을 위한 재조합 유전자 발현 벡터 및 재조합 미생물 세포를 확보하였음.
1. 3N : VP1 외피단백질 N 말단 1 ~ 100 아미노산 부위가 세 번 반복된 단백질 소재
2. 3N-3D2 : 3N에 3D2가 융합된 단백질 소재 (3D2는 A형간염 바이러스 감염 환자의 혈청 내 항체와 면역반응이 높은 것으로 확인된 VP1의 C 말단 부분 및 2A의 N 말단 부위 (D2)가 세 번 반복된 단백질임)
3. 3R : VP3 외피단백질의 34 ~ 143 아미노산 부위가 세 번 반복된 단백질 소재
4. 3D2-3R : 3D2에 3R이 융합된 단백질 소재
재조합 3N-His, His-3N-3D2, 3R-His, 3D2-3R-His는 약 43, 70, 40, 65 KDa의 크기로 재조합 미생물 세포에서 발현되었고 Ni-NTA agarose resin을 이용한 affinity chromatography 방법으로 분리 정제하였으며 Alhydrogel adjuvant와 혼합하여 시험백신 3N, 3N-3D2, 3R, 3D2-3R을 제조하였음.
시험백신의 항원성 및 면역원성을 평가를 위해 동물모델 마우스에 시험백신 및 HavrixTM (양성대조군)을 복강주사하고 항체 형성 여부를 ELISA 방법으로 분석하고 시험백신 및 HavrixTM을 투여한 마우스에서 확보한 혈청이 A형간염 바이러스의 증식에 미치는 영향을 분석하였음. 시험백신 모두 재조합 항원 단백질 및 HAV antigen을 인지하는 IgG 항체의 생성을 유도하였고 3N-3D2, 3D2-3R 시험백신이 3N, 3R 시험백신에 비해 더 많은 항체의 생성을 유도하였음. 시험백신이 면역된 마우스의 혈청은 A형간염 바이러스의 증식을 억제하였고 3N-3D2, 3D2-3R 시험백신이 3N, 3R 시험백신에 비해 바이러스 증식 억제 효과가 높았음. 하지만 HavrixTM과 비교하여 바이러스 증식 억제 효과는 낮았음.

(출처 : 요약문 5p)

Abstract ▼

Study results of the first host institution
The first and second host institutions performed a nonclinical study to prepare a hepatitis A vaccine prototype. The objectives were: development of a cell line to produce hepatitis A virus (HAV), development of a cell line expressing recombinant HAV an

Study results of the first host institution
The first and second host institutions performed a nonclinical study to prepare a hepatitis A vaccine prototype. The objectives were: development of a cell line to produce hepatitis A virus (HAV), development of a cell line expressing recombinant HAV antigen, high-efficiency mass production of HAV and its antigen, purification of HAV and its antigen, formulation of HAV and its antigen, analysis of efficacy of the hepatitis A vaccine, production of a hepatitis A vaccine prototype, and nonclinical study of the hepatitis A vaccine.
The first host institution developed a cellular HAV expression platform and established an HAV production system through cell culture. After mass production of the virus, bulk was produced through purification and inactivation processes. The bulk production was optimized by producing three batches of HAV. The vaccine prototype was manufactured by adsorbing the bulk to an aluminum hydroxide adjuvant.
Quality testing items of the vaccine manufacturing process were established and tested to verify the bulk production and final bulk quality.
Immunization testing of the vaccine containing 1× and 2× HAV antigen, equivalent or higher antibody titer, and neutralizing antibody titer was performed in mice and the results compared with those for the Havrix comparative vaccine.
After completion of the first year of the study, the cellular virus antigen production platform of the first host institution was selected to produce a prototype vaccine for nonclinical use, and a quality verification study was conducted.
For nonclinical single- and repeated-dose toxicity and recovery testing of the hepatitis A vaccine prototype, a pharmacological study was performed. The safety and efficacy of the vaccine were found to be equivalent to or even higher than those of the Havrix comparative vaccine.

Study results of the second host institution
To develop antigen protein vaccine materials for hepatitis A virus, highly immunogenic regions were selected from VP1 and VP3 surface proteins, and recombinant gene expression vectors were constructed for expression of four types of protein vaccine materials and recombinant microbial cells were obtained.
1. 3N : Protein material in which the N-terminal 1-100 amino acid region of VP1 is repeated three times
2. 3N-3D2: Protein material in which 3D2 is fused to 3N (3D2 is a three repeat of D2 that is the C-terminal part of VP1 and the N-terminal part of 2A, which has been confirmed to have a high immune response with antibodies in the serum of hepatitis A virus-infected patients.)
3. 3R: Protein material in which the 34 ~ 143 amino acid region of VP3 is repeated three times
4. 3D2-3R: 3D2 and 3R fused protein material

Recombinant 3N-His, His-3N-3D2, 3R-His, and 3D2-3R-His were expressed in sizes of about 43, 70, 40, and 65 KDa, respectively, from recombinant microbial cells. These were purified by affinity chromatography using Ni-NTA agarose resin. Test vaccines 3N, 3N-3D2, 3R, and 3D2-3R were prepared by mixing with Alhydrogel adjuvant.

To evaluate the antigenicity and immunogenicity of the test vaccines, the test vaccines and HavrixTM (positive control) were intraperitoneally injected into an animal model mouse, and antibody formation was analyzed by ELISA. The effects of serum obtained from mice administered with the test vaccines and HavrixTM on the proliferation of hepatitis A virus were analyzed. All of the test vaccines induced the production of IgG antibodies that recognize recombinant antigen proteins and HAV antigen. The 3N-3D2 and 3D2-3R test vaccines induced more antibody production than the 3N and 3R test vaccines. The sera of mice immunized with the test vaccines inhibited the proliferation of hepatitis A virus, and the 3N-3D2 and 3D2-3R test vaccines had a higher inhibitory effect on virus growth than the 3N and 3R test vaccines.
However, the antiviral effect was lower than that of HavrixTM.

(source : SUMMARY 6p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 3
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• 6.1 총괄연구개발과제의 연구성과 실적 및 향후 계획 ... 8
• 7. 참여연구원 현황표 ... 11
• 목차 ... 12
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 13
• 1-1. 연구개발의 목적, 필요성, 범위 ... 13
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 15
• 2-1. 기술개발 및 시장현황 ... 15
• 3. 연구개발과제의 수행 과정 및 수행 내용 ... 20
• 3-1. 연구개발과제의 최종 목표 ... 20
• 3-2. 연구개발과제의 추진전략⋅방법 ... 21
• 3-3. 연구개발과제의 추진체계 ... 23
• 3-4. 연구개발 성과 및 평가방법 ... 24
• 3-5. 연구개발 기간 내 주요 변경사항 ... 25
• 3-6. 연구개발과제의 수행 내용 ... 25
• 4. 연구개발과제의 수행 결과 및 목표 달성 정도 ... 92
• 4-1. 정성적 연구개발성과 ... 92
• 4-2. 정량적 연구개발성과 ... 93
• 4-3. 세부 정량적 연구개발성과 ... 94
• 4-4. 계획하지 않은 성과 및 관련 분야 기여사항 ... 98
• 5. 목표 미달 시 원인분석 ... 99
• 5-1. 목표 미달 원인(사유) 자체분석 내용 ... 99
• 5-2. 자체 보완활동 ... 99
• 5-3. 연구개발 과정의 성 ... 99
• 6. 연구개발성과의 관련 분야에 대한 기여 정도 ... 100
• 7. 연구개발성과의 관리 및 활용 계획 ... 100
• 8. 참고문헌 ... 102
• 끝페이지 ... 103