초록 ▼

용어보기논문에서 용어와 풀이말을 자동 추출한 결과로, 시범 서비스 중입니다. AI-Helper

베타-1,4 결합으로 연결된 N-acetylglucosamine의 다량체인 키틴은 자연계에서 두 번째로 많이 존재하는 다당류이며, 곰팡이의 세포벽, 곤충의 외골격, 갑각류의 껍질에 많이 존재한다. 키틴 분해효소인 Chitinase는 세균류, 진균류, 바이러스, 고등식물로부터 생산된다. 이러한 미생물 또는 식물유래의 Chitinase는 토양에서의 키틴분해와 곰팡이에 대한 방어역할을 수행한다. 이번연구에서 외생균근균인 송이버섯의 자실체로부터 제작된 ...

베타-1,4 결합으로 연결된 N-acetylglucosamine의 다량체인 키틴은 자연계에서 두 번째로 많이 존재하는 다당류이며, 곰팡이의 세포벽, 곤충의 외골격, 갑각류의 껍질에 많이 존재한다. 키틴 분해효소인 Chitinase는 세균류, 진균류, 바이러스, 고등식물로부터 생산된다. 이러한 미생물 또는 식물유래의 Chitinase는 토양에서의 키틴분해와 곰팡이에 대한 방어역할을 수행한다. 이번연구에서 외생균근균인 송이버섯의 자실체로부터 제작된 cDNA Library로부터 Chitinase 유전자를 클로닝 하였다. Chitinase의 cDNA는 499개의 amino acid를 가지는 약 55 kDa 의 단백질을 암호화하는 1500 bp의 ORF를 가지고 있음을 알 수 있었다. Chitinase 단백질의 아미노산 서열은 Family 18 glycosyl hydrolase catalytic domains (FDGIDVDWE) 을 가지며 ClassicⅤ의 fungal chitinase에 속하는 것으로 보인다. 또한 계통발생학적 분석을 통하여 Grifola umbellata 와 71%의 상동성을 가지고 있음이 확인 되었다. 송이유전자의 Genome walking분석을 통해 Chitinase 유전자는 5개의 인트론을 가지며, 곰팡이 세포벽합성에 중요한 유전자인 β-glucan synthase와 인접해 있음을 알 수 있었다. 대장균에서의 GST-ChiTM fusion 던백질을 발현시키기 위해서 18℃, 25℃, 30℃, 37℃에서 0.1에서 1.0 mM IPTG를 첨가함으로서 1시간에서 20시간까지 발현유도를 시켰다. 그러나 대장균에서 Chitinase 단백질은 inclusion body의 형태로 발현이 되었다. 이처럼 대장균에서는 불활성 형태로 발현되기 때문에 우리는 Pichia expression system에서 Chitinase 단백질의 발현을 시도해 보았다. Pichia expression system에서의 Chitinase 발현연구에서 우리는 colony PCR법을 통해 P. pastoris 유전체의 his4 locus로의 chitinase 유전자의 통합된 형질전환체는 분리할 수 있었으나 단백질의 발현은 확인 할 수 없었다. 다음 실험에서 앞에서 획득한 형질전환체를 이용하여 더 좋은 발현조건을 구축할 필요성이 있다.

주제어