떡갈나무의 부위별 추출물에 대한 항균활성 및 항산화활성을 시험하였다. 항균활성은 paper disk법과 bioautography법으로 시험하였다. 잎으로부터 추출된 ethyl acetate 가용부는 Klebsiella pneumoniae균에 대해서 가장 강한 항균력을 나타냈다. 수피로부터 추출된 ethyl acetate 가용부는 Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae균에 대해 항균효과가 우수하였다. 목절부의 에탄올 추출물은 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 및 Vibrio parahaemolyticus균에 대해서 저해효과가 가장 높게 나타났다. 떡갈나무 에탄올 추출물의 항균활성은 잎, 수피, 목질부의 순으로 높게 나타났다. Bioautography법에 의한 항균활성은 목질부 에탄올 추출물에 있어서 Rf치 0.41~0.63 영역의 물질이 가장 강한 저해를 나타냈다. 떡갈나무의 부위별 추출물에 대한 항산화활성 시험 결과, 잎 추출물에서는 petroleum ether 가용부가 매우 낮은 항산화활성을 나타냈으나, ethyl acetate 불용부에서는 높은 항산화활성을 나타냈다. 수피와 목질부의 추출물에 있어서. petroleum ether 가용부를 제외한 나머지 분획물의 항산화활성은 BHT의 항산화 성보다 약 2배 정도 높은 수치를 보였다.
떡갈나무의 부위별 추출물에 대한 항균활성 및 항산화활성을 시험하였다. 항균활성은 paper disk법과 bioautography법으로 시험하였다. 잎으로부터 추출된 ethyl acetate 가용부는 Klebsiella pneumoniae균에 대해서 가장 강한 항균력을 나타냈다. 수피로부터 추출된 ethyl acetate 가용부는 Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae균에 대해 항균효과가 우수하였다. 목절부의 에탄올 추출물은 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 및 Vibrio parahaemolyticus균에 대해서 저해효과가 가장 높게 나타났다. 떡갈나무 에탄올 추출물의 항균활성은 잎, 수피, 목질부의 순으로 높게 나타났다. Bioautography법에 의한 항균활성은 목질부 에탄올 추출물에 있어서 Rf치 0.41~0.63 영역의 물질이 가장 강한 저해를 나타냈다. 떡갈나무의 부위별 추출물에 대한 항산화활성 시험 결과, 잎 추출물에서는 petroleum ether 가용부가 매우 낮은 항산화활성을 나타냈으나, ethyl acetate 불용부에서는 높은 항산화활성을 나타냈다. 수피와 목질부의 추출물에 있어서. petroleum ether 가용부를 제외한 나머지 분획물의 항산화활성은 BHT의 항산화 성보다 약 2배 정도 높은 수치를 보였다.
Antimicrobial activity and antioxidative activity of the organosoluble extractives from the leaves, bark and xylem of Quercus dentata were investigated. Antimicrobial activity was tested by paper disk method and bioautography methods, The most pronounced antimicrobial activities of leaves parts were...
Antimicrobial activity and antioxidative activity of the organosoluble extractives from the leaves, bark and xylem of Quercus dentata were investigated. Antimicrobial activity was tested by paper disk method and bioautography methods, The most pronounced antimicrobial activities of leaves parts were ethyl acetate solubles fraction against the Klebsiella pneumoniae by the paper disk method. The strongest activities of bark parts were ethyl acetate solubles fraction against Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae. Ethanol extractives from xylem parts showed high activities against Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Vibrio parahaemolyticus. These antimicrobial activities of ethanol extractives from Quercus dentata were in order to xylem > bark > leaves. The strong inhibition zones of the ethanol extractives and its fractions of xylem showed Rf values in 0.41~0.63. In leaves extractives, the petroleum ether solubles showed lower antioxidative activity and ethyl acetate insolubles showed higher antioxidative activity of 70% compared with the $EC_{50}$ values of the control. Antioxidative activity of bark and xylem extractives showed higher approximately 2 times than the control except the petroleum ether solubles.
Antimicrobial activity and antioxidative activity of the organosoluble extractives from the leaves, bark and xylem of Quercus dentata were investigated. Antimicrobial activity was tested by paper disk method and bioautography methods, The most pronounced antimicrobial activities of leaves parts were ethyl acetate solubles fraction against the Klebsiella pneumoniae by the paper disk method. The strongest activities of bark parts were ethyl acetate solubles fraction against Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae. Ethanol extractives from xylem parts showed high activities against Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Vibrio parahaemolyticus. These antimicrobial activities of ethanol extractives from Quercus dentata were in order to xylem > bark > leaves. The strong inhibition zones of the ethanol extractives and its fractions of xylem showed Rf values in 0.41~0.63. In leaves extractives, the petroleum ether solubles showed lower antioxidative activity and ethyl acetate insolubles showed higher antioxidative activity of 70% compared with the $EC_{50}$ values of the control. Antioxidative activity of bark and xylem extractives showed higher approximately 2 times than the control except the petroleum ether solubles.
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문제 정의
강장(强壯) 등에 효능이 있다고 알려져 있다. 본 연구는 떡갈나무에 함유된 항균활성 및 항산화활성을 수목의 부위별로 구분하여 검정함으로써, 유용 항균제 및 식품보존제로서의 이용가능성을 탐색하는데 그 목적이 있다.
제안 방법
TLC plate를 건조시켜 전개 용매를 완전히 제거한 후, clean bench 안에 넣어 UV(ultraviolet)하에서 2시간 동안 TLC plate의 전개면이 닿도록 밀착시키고. 2~3시간 방치하는 동안 전개된 분획물이 한천배지 중에 확산되도록 하였다. TLC plate를 제거한 후, 한천평판을 281! incubator에서 24~48시간 배양하였다.
DPPH와의 반응성을 BHT(butylated hydroxy Zoluene)를 대조구로 하여 비교 검토하였다. BHT 의 각 농도에 있어서 DPPH의 radical 포착성능을 분광광도계 518nm에서 흡광도 감소를 측정하여 항산화활성의 기준치로 하였다. 각 시료농도의 메탄올용액 4ml에 0.
, 1989)으로 측정하였다. DPPH와의 반응성을 BHT(butylated hydroxy Zoluene)를 대조구로 하여 비교 검토하였다. BHT 의 각 농도에 있어서 DPPH의 radical 포착성능을 분광광도계 518nm에서 흡광도 감소를 측정하여 항산화활성의 기준치로 하였다.
Incubator에서 배양시킨 다음 전개된 분획물이 한천배지의 확산된 부위에 항균활성에 의한 clear zone이 형성되는지를 확인하였다. 항균활성을 나타낸 clear zone의 Rf(Rate of flow)치를 계산하였다.
Paper disk법에 의한 항균시험 결과, 항균활성이 비교적 높게 나타나는 3종의 균을 선택하여 공시균으로 하였다.
Paper disk법으로 잎, 수피, 목질부위에 대하여 활성을 확인한 결과, 목질부에서 가장 항균활성이 뛰어났으므로 목질부에 대하여 표준물질과의 비교분석을 TLC분석법으로 행하였다.
BHT 의 각 농도에 있어서 DPPH의 radical 포착성능을 분광광도계 518nm에서 흡광도 감소를 측정하여 항산화활성의 기준치로 하였다. 각 시료농도의 메탄올용액 4ml에 0.5mM DPPH 용액 1ml를 첨가하여 총 5ml가 되도록 하고, 용액들이 잘 혼합될 수 있도록 vortex로 약 30초간 교반시킨 후에 UV분광계를 사용하여 518nm에서 흡광도 감소를 측정하였다. blank에서는 메탄올 4ml에 0.
각 추출물은 여과지 Whatman No. 2로 여과한 다음, 40P에서 감압농축시킨 후, petroleum ether(LPE), diethyl ether(Et2O), ethyl acetate(EtQAc)로 순차로 연속 추출하여 Fig. 1과 같이 분획하였다.Cim, 1998; Moon et al.
떡갈나무 각 부위의 조제 시료는 95% 에탄올에 72시간 실온에서 침지시켜 추출하였으며, 3회 반복 추출하였다. 각 추출물은 여과지 Whatman No.
떡갈나무 에탄을 추출물 및 분별물의 항균시험을 위하여 100,000ppm 농도로 조제하였고, 대조구인 streptomycine 100,000ppm으로 조제하여 사용하였다.
한천평판상에서 시료를 함침시킨 paper disk로 부터 화합물의 성분에 의해 균이 성장저해를 나타내는 clear zone의 직경을 측정한 후, 다음의 식으로 계산치를 구하여 대조구와 비교하였다(Kim et al., 1997). 이때 대조구로는 streptomycin sulfate를 사용하였다.
형성되는지를 확인하였다. 항균활성을 나타낸 clear zone의 Rf(Rate of flow)치를 계산하였다.
항산화활성을 조사하기 위하여 각 부위별 에탄올추출물 및 분획물을 2ppm에서부터 100ppm까지 10단계의 농도로 조제하였다. 항산화활성은 DPPH 법 (Yoshida et al.
대상 데이터
발색시약으로서 페놀성 물질의 확인에는 DSA(diazotized sulfanilic acid)를 사용하였으며, 이때 각 부위의 분획물 농도는 105ppm으로 조제하였고, 전개용매는 cyclohexane : ethyl acetate (7:3, v/v)를 사용하였다.
, 1994). 배지는#인 한천배지를 사용하였다. 단, 비브리오균은 30g/의 NaCl< 첨가하여 멸균시켜 46X1 의 incubator.
본 연구에 사용한 시료는 1997년 8월 경남 진주소재의 월아산에서 수령 30년생 된 떡갈나무 (Quercus dentata Thunberg)를 채취하여 공시재료로 사용하였다.
본 연구에서 사용한 떡갈나무(Quercus dentata)는 낙엽 교목으로 수피는 회갈색이고. 한방에서는 가을에 열매를 따서 햇볕에 말리어 껍질을 벗기고 알맹이를 가루로 만들어서 위장병.
이론/모형
각 부위별 에탄올 추출물 및 분휙물의 각 균에대한 생육저해활성은 agar 기ate롤 사용한 증식저해 시험으로서 paper disk법에 따라 관찰하였다. 농도 10'ppm으로 조제한 각 시료를 clean bench 내에서 멸균된 paper disk(직경 8mm, 두께 1.
항균활성에 관여하는 물질의 확인법으로 TLCCthin layer chromatography)# 이용한 Bioautography법을 이용하였다(池川 등, 1989). TLC plate(Silica gel 6OF254.
농도로 조제하였다. 항산화활성은 DPPH 법 (Yoshida et al., 1989)으로 측정하였다. DPPH와의 반응성을 BHT(butylated hydroxy Zoluene)를 대조구로 하여 비교 검토하였다.
성능/효과
7 배. 2.7배의 높은 항산화성을 보였다.
34mm에 비해 56%의 저해활성을 나타냈다. Ethyl acetate 블용부는 Klebsiella pneumoniae균에서 저해반경 4.18mm로 대조구 7.32mm에 대해 57%의 저해활성 효과를 보였으며 , Vibrio parahaemolyticuse:^ 대해서도 저해활성이 나타났다.
Paper disk법에 의한 항균활성 결과를 보면, 부위별의 에탄올 추출물과 분획물은 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 및 Vibrio parahaemolyticuse6^ 대해 강한 항균활성을 보였으며, 항균력은 목질부> 수피>잎 순서로 나타났다.
Staphylococcus aureuse Klebsiella pneu~ mozHae균에서는 에탄올 추출물, petroleum ether 가용부와 dieuiyl ether 가용부의 Rf치 0.34~0.35 위치에서 약간의 항균성이 나타났다,
Pseudomonas aeruginosa 및 Salmonella typhymurfum균을 제외한 나머지 4종의 균에 대해 활성을 나타내었다. Vibrio parahaemolyticus균에 대해서는 petroleum ether 가용부, diethyl ether 가용부와 ethyl acetate 가용부에서만 항균활성을 보였다.
petroleum ether 가용부에서는 항산화성이 극히 낮게 나타난 반면, ethyl acetate 불용부에서는 항산화능이 가장 높게 나타났다. Ethyl acetate 불용부 분획물에 항산화능을 높게 발휘할수 있는 것은 구성성분 중에 전자공여체가 다량 존재하기 때문으로 생각돤다.
2에 보이는 물질은 flavonoid인 quercetin dihydrate와 lignan?! pinoresinol, syringaresinol이었다. 따라서 표준물질과의 Rf치 비교에서 활성영역과 일치하는 물질은 flavoooid와 lignan등을 포함한 페놀성 물질이 관여할 가능성이 높은 것으로 추정이되었다.
이상의 결과를 종합하여 보면. 떡갈나무의 부위별 추출물 및 분획물의 항산화활성은 잎, 수피 및목질부 부위의 petroleum ether 가용부에서 가장낮은 활성을 보였고, 이를 제외한 나머지 분획물에서는 대조구인 BHT보다 더 높은 항산화활성을 보였다.
목질부 에탄올 추출물과 분획물은 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 3종의 균에 대하여 강한 항균활성을 보였다. 목질부의 에탄올 추출물과 각 분별물의 Rf 치 0, 41~0.
12에서도 저해활성이 나타났다. 목질부 에탄올 추출물의 분별물 중 diethyl ether 가용부와 ethyl acetate 가용부에서 항균활성이크게 나타났음을 확인할 수 있었다.
목질부 추출물은 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae균에 대해 항균활성이 높게 나타났다. 특히 에탄올 추출물이 가장 큰 저해활성을 보였으며.
목질부에탄을 추출물은 이미 언급한 잎 추출물과 수피 추출물에 비해 높은 항균활성을 나타냈다. 에탄올 추출물과 분별물 모두 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 및 Vibrio parahaemolyticuse:^ 대해 강한 활성이 나타났다.
목질부의 에탄올 추출물과 각 분별물의 Rf 치 0, 41~0.63을 중심으로 이ear zone이 크게 나타났다, petroleum ether 가용부와 diethyl ether 가용부 및 ethyl acetate 가용부의 Rf치 0.26~0.27에서도 항균활성이 약하게 나타났으며. diethyl ether 가용부와 ethyl acetate 가용부의 Rf치 0.
Kang 둥(1994)은 솔잎 (Pine Needle) 열수 추출물의 대두유의 산화 안정성에 기여한 것은 구성성분 중 ethyl acetate 가용분 분획 중의 polyphenol 성분이 관계한다고 보고하였으며, Kim 둥(1995)은 식물체에는 일반적으로 여러 종류의 flavonoid 화합물이 함유되어 있는데, 이들의 항산화활성은 초산에틸 가용부 및 불용부에 함유되어 있다고 보고한 바 있다. 본 실험의 결과에서도 부위별로 항산화성 물질의 분포는 대체로 초산에 틸가용부 및 불용부에 집중되어있다는 결과를 얻을 수 있었다.
분획물 중 각 균에 대해 저해활성을 크게 나타낸 분획물은 Mhyl acetate 불용부였으며, 저해활성은 Klebsiella pneumoniaee:^ 대해서 가장 크게 나타났고, 저해반경이 2.14mm로서 대조구인 streptomycin 7.32mm에 비해 약 29%의 저해효과를 나타냈다.
Salmonella typhynwrium균에 대해서는 diMhyl 어나가 용부에서만 낮온 활성을 보였으며, 그외 나머지 분획물에서는 활성이 나타나지 않았다. 분획물 중 각 균에 대해 저해활성이 가장 큰 것은 ethyl acetate 가용부이었고, 대조구와 비교하여 Klebsiella pneumorziae균에 서는 저 해 반경 이 4.56mm로 대 조구 7.32mm에 비해 약 63%의 활성 저해가 나타났으며 , Bacillus subtilis균에서는 저 해반경 이 4.67mm로 대조구 8.34mm에 대해 60%의 저해활성 효과가 나타났다.
항산화활성은 에탄올 추출물과 ethyl acetate 불용부에 대체로 집중되어 있었으며 대조구 BHT보다 2배 정도 높게 나타났다. 수피와 목질부의 추출물에서 petroleum ether 가용부를 제외한 나머지 분획물에서의 항산화활성은 가장 널리 이용되고 있는 항산화제인 인공합성품 BHT의 항산화성보다 대략 2배 정도 높은 항산화성 수치를 보였다.
에탄올 추출물과 분별물 모두 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 및 Vibrio parahaemolyticuse:^ 대해 강한 활성이 나타났다. 에탄올 추줄물이 가장 높은 저해활성을 보였으며, 그 다음으로 ethyl acetate 불용부와 가용부였다. 에탄올 추출물은 Staphylococcus aureus균에서 저해활성 반경이 5.
목질부에탄을 추출물은 이미 언급한 잎 추출물과 수피 추출물에 비해 높은 항균활성을 나타냈다. 에탄올 추출물과 분별물 모두 Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae 및 Vibrio parahaemolyticuse:^ 대해 강한 활성이 나타났다. 에탄올 추줄물이 가장 높은 저해활성을 보였으며, 그 다음으로 ethyl acetate 불용부와 가용부였다.
에탄올 추줄물이 가장 높은 저해활성을 보였으며, 그 다음으로 ethyl acetate 불용부와 가용부였다. 에탄올 추출물은 Staphylococcus aureus균에서 저해활성 반경이 5.17mm로 대조구 7.41mm에 비해 70%로 가장 높은 저해활성을 보였으며, Bacis subEi/is균에서는 저해반경이 4.68mm로 대조구 8.34mm에 비해 56%의 저해활성을 나타냈다. Ethyl acetate 블용부는 Klebsiella pneumoniae균에서 저해반경 4.
그 다음으로 ethyl acetate 가용부와 불용부였다. 에탄올 추출물은 Staphylococcus aureus균에서 저해활성 반경이 5.17mm로 대조구 7.41mm에 비해 약 70% 로 가장 큰 저해활성을 보였다. 떡갈나무의 잎.
에탄을 추출물의 Rf치 0.48, petroleum ether 가용부에서 Rf치 0.44, diethyl ether 가용부 Rf치 0.46, ethyl acetate 가용부에서 Rf치 0, 46, ethyl acetate 불용부 Rf치 0.48 위치에서 강한 항균활성을 보였다.
이상의 결과를 종합하여 보면. 떡갈나무의 부위별 추출물 및 분획물의 항산화활성은 잎, 수피 및목질부 부위의 petroleum ether 가용부에서 가장낮은 활성을 보였고, 이를 제외한 나머지 분획물에서는 대조구인 BHT보다 더 높은 항산화활성을 보였다.
잎의 에탄올 추출물과 분획물온 Bacillus subtil is, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneiummiaB균의 3종균에 대해 활성을 보였다. 에탄을 추출물의 Rf치 0.
목질부와 수피의 에탄올 추출물과 각 분획물에서의 항산화능을 비교해 볼 때, 거의 비슷한 수치를 나타내고 있지만. 전체적으로 수피 부위보다는 항산화능이 낮게 나타났다. 대조구 BHT의 ECm)값보다 에탄올 추출물.
항균활성이 높게 나타났다. 특히 에탄올 추출물이 가장 큰 저해활성을 보였으며. 그 다음으로 ethyl acetate 가용부와 불용부였다.
값을 나타냈다. 항산화활성은 에탄올 추출물과 ethyl acetate 불용부에 대체로 집중되어 있었으며 대조구 BHT보다 2배 정도 높게 나타났다. 수피와 목질부의 추출물에서 petroleum ether 가용부를 제외한 나머지 분획물에서의 항산화활성은 가장 널리 이용되고 있는 항산화제인 인공합성품 BHT의 항산화성보다 대략 2배 정도 높은 항산화성 수치를 보였다.
63 영역에서 넓은 clear zone을 형성하였다. 활성부위 와 표준물질의 Rf치를 비교한 결과, Rf치 0.41-0.63 영역에 표준물질의 flavonoid류인 flavone의 Rf치가 0.46으로 나타났다. 활성부위와 표준물질과의 성분비교 결과, 활성에 관계하는 물질은 flavonoid와 lignan등을 포함한 페놀성 물질인 것으로 추정이되었다.
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