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문제 정의
- 그러나, 옻나무 목질부에 대한 연구는 없었기에 저자들은 식물화학적 방법으로 flavonoid 성분인 미지의 물질과 함께 garbanzol, sulfuretin, fisetin 및 fustin을 분리하였고 이들의 NMR data의 완전 assignment, UV spectrum에서의 특성, 세포독성 및 항산화활성을 측정하였다. 이러한 연구로서 옻나무 목질부에 분포하는 5-OH 결여 flavonoid의 lacsase와의관련성, 옻나무 목질부의 생리활성물질의 예측에 기여하고자 하였다.
제안 방법
- 있다. 그러나, 옻나무 목질부에 대한 연구는 없었기에 저자들은 식물화학적 방법으로 flavonoid 성분인 미지의 물질과 함께 garbanzol, sulfuretin, fisetin 및 fustin을 분리하였고 이들의 NMR data의 완전 assignment, UV spectrum에서의 특성, 세포독성 및 항산화활성을 측정하였다. 이러한 연구로서 옻나무 목질부에 분포하는 5-OH 결여 flavonoid의 lacsase와의관련성, 옻나무 목질부의 생리활성물질의 예측에 기여하고자 하였다.
- 기기 및 시약 - 융점은 Electrothermal digital melting point apparatus를 사용하여 측정하였으며 보정하지 않았다. 선광도 측정은 JASCO DIP-360 Digital Polarimeter로 25℃에서 측정하였다.
- 않았다. 선광도 측정은 JASCO DIP-360 Digital Polarimeter로 25℃에서 측정하였다. IR spectrum은 Bomem MB-100 FT-IR Spectrometers KBr disk법으로 측정하였으며, 질량 스펙트럼은 Finnigan Mat TSQ-700으로 70 eV의 에너지로 이온화하였다.
- 6% HCl-MeOH용액, 무수 NaOAc 분말, 및 H3BO3 분말을 각각 사용하였다. 이 때 흡수극대에서의 파장, 흡광도를 읽고 log ε치를 계산하고 기록하였다. 실리카겔은 독일 Merck사의 Kiesel gel 60 (1.
- 분리 -EtOAc 분획 20g을 silica gel 700g을 충전시킨 내경 7 cm의 컬럼에서 전개용매 CHCl3-Me OH-H2O(73:27:10, 하층)으로 전개하였다. 첫 시료가 용출될 무렵부터 약 80ml씩 용출액을 받기 시작하여 모두 70개의 분획을 얻었다.
- 첫 시료가 용출될 무렵부터 약 80ml씩 용출액을 받기 시작하여 모두 70개의 분획을 얻었다. 이를 전부 TLC 체크하여 분획들을 유사한 것끼리 합쳐 모두 9개의 소분획으로 하였다. 이들을 각각 rotary evaporator에서 감압농축하여 용출된 순서대로 RV-1 부터 RV-9까지 labeling하였다.
- DPPH 법에 의한 항산화 실험7)-60μM DPPH 500 B와 시료 용액 500 μl를 혼합하여 상온에서 30분간 반응시킨 후 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 공시험군으로 DPPH 대신 에탄올을 사용하였으며 대조군으로는 시료 대신 물을 사용하였을 때를 100%로 하여 DPPH radical 소거 정도를 %로 구했다.
- 공시험군으로 DPPH 대신 에탄올을 사용하였으며 대조군으로는 시료 대신 물을 사용하였을 때를 100%로 하여 DPPH radical 소거 정도를 %로 구했다.
- 이식 후 24시간 지난 후 100μl new media와 시료들을 가한 다음 48시간 incubation 하였다. 세포주들을 한번 세정한 후 5mg/ml 의 MTT 농도를 가지는 50111 FBS-free medium를 가하였다. 37℃에서 4시간 incubation한 후 배지를 제거하였고 세포주에 형성된 formazan blue는 50μl DMSO 가하여 이탈시켰다.
- 37℃에서 4시간 incubation한 후 배지를 제거하였고 세포주에 형성된 formazan blue는 50μl DMSO 가하여 이탈시켰다. 최종적으로 540nm에서 optical density를 측정하였다.
대상 데이터
- 사용되어 왔다. 도료의 피막을 구성하는 본체는 옻나무의 urushiol의 polymer로 이루어진다.4) 옻나무를 약용으로 할 때에는 그 수피를 혈액순환약 및 통경의 목적으로 사용되며5) 옻닭과 같이 식품으로도 이용된다.
- 측정하였다. 이 때 사용한 shift reagent는 2M-NaOH, 5% AlCl3-MeOH 용액, 3.6% HCl-MeOH용액, 무수 NaOAc 분말, 및 H3BO3 분말을 각각 사용하였다. 이 때 흡수극대에서의 파장, 흡광도를 읽고 log ε치를 계산하고 기록하였다.
- 이 때 흡수극대에서의 파장, 흡광도를 읽고 log ε치를 계산하고 기록하였다. 실리카겔은 독일 Merck사의 Kiesel gel 60 (1.07734.1000) 제품을 사용하였고, TLC plate도 역시 독일 Merck 사의 silica gel 60F254 (1.05715)의 제품을 사용하였다. 본 실험에 사용된 각종 용매 및 기타 시약은 1급 시약을 사용하였다.
- 식물재료 - 강원도 원주시 일대에서 채집한 옻나무(Rhus vemidftud)의 목질부를 세절하여 추출을 위한 시료로 사용하였다. 기원식물의 표본은 상지대학교 응용식물과학부의 김갑태 교수가 보관하고 있다.
이론/모형
- 선광도 측정은 JASCO DIP-360 Digital Polarimeter로 25℃에서 측정하였다. IR spectrum은 Bomem MB-100 FT-IR Spectrometers KBr disk법으로 측정하였으며, 질량 스펙트럼은 Finnigan Mat TSQ-700으로 70 eV의 에너지로 이온화하였다. 1H- 및 13C-NMR spectrum은 내부표준물질 tetramethyl silane (TMS)를 첨가하여 Bruker AM-300 Spectro meters.
- MTT법에 의한 세포독성 - 이미 보고된 방법8)에 따라 MTT assay법에 의하여 백혈병 세포주인 HL-60 cell, 간암세포주인 HepG2 cell 및 흰쥐의 정상 간세포인 primary hepatocyte cell의 세포주에 대한 cyto-toxity를 측정하였다. 세포주를 96 microtiter plate에 이식한 다음 하룻밤 incubatioii하였다.
성능/효과
- 그리고, 옻나무속에 속하는 식물만 200종이 존재하며 이들 대부분은 온대지방에 분포하지만 일부는 아열대와 열대지방에도 분포한다.2) 한국에 존재하는 옻나무속 식물에는 옻나무(Rhus verniciflua), 개옻나무(Rhus trkhocarpa), 붉나무(Rhus chinensis), 검양옻나무(Rhus succedanea), 산검양옻나무(Rhus sylvestris) 등이 있다.3)
- RV-5는 octadecylsilame(ODS)를 충전시킨 내경 3 cm의 컬럼에서 전개용매 MeOH-H2O(1:1)로 정제하여 혼입물을 제거하였고 주물질을 농축한 후 MeOH 에서 황색의 침상결정(화합물 3)을 얻었다. RV-8는 역시 혼입물을 포함하고 있었으므로 상기와 유사한 ODS column chromatography를 시행하여 정제를 시도하였으나 역시 불순물을 함유하고 있었으므로 여기서 얻어진 농축물을 다시 Sephadex LH-20 chromatogra-phy로 정제하였을 때 혼입물인 혼합물 1, 2 보다 여실히 빠르게 용출하는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 사실은 B-고리의 형태에 따라 화합물 4의 부피가 다른 두 화합물의 그것보다 큰 것으로 생각되었다.
- 그러므로, 1H-1H COSY HMQC spectrum의 분석과 유사구조의 NMR assignment를 참고하여 그 결과를 Table Ⅰ과 Ⅱ에 나타내었다. 분리된 4종 화합물 모두 가장 저자장에서 H-5가 관찰되었으며 각각 J치의 크기로부터 ortho-위치에 수소가 있음을 알 수 있었다. H-5가 저자장 영역에서 나타나는 것은 4-keto 구조의 영향에 의한 것으로 생각된다.
후속연구
- 마지막으로 옻나무 목질부의 식품의약적 측면에서 sulfuretin은 높은 농도에서 항산화능과 세포독성을 가짐이 제시되었으며 다른 화합물의 경우는 다른 각도에서 생리활성 연구가 모색되어야 할 것으로 믿어진다.
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