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문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 신속하고 정확하게 키토을리고당을 정량할 수 있는 방법으로 HPLC에 의한 방법을 확립하고 기존의 비색법과 비교 검토하였다.
제안 방법
- HPLC에 의한 키토을리고당의 정량은 키토을리고당을 D-glucosamine로 분해한 다음, D-glucosamine을 분석하므로서 가능하였다. D-glucosaminet- 분석하기 위한 HPLC 분석 조건은 검출기로서 RI detector 그리고 컬럼으로 Bondclone 10 NHjcolumn(330X 3.9 mm, 10 micron, Phenomenex)을 사용하고 이동상으로는 acetonitrile : H20(65 : 35)으로 하였다. 키토을리고당의 정량은 비색법 보다 HPLC법이 높은 회수율을 보였으며, 분석시간도 시료당 10분 이내로서 비색법의 4 시간 보다 더 짧았다.
- Fig. 2는 각 농도별로 뷴석한 D-glucosaminee 결과로서 비색법과 HPLC법을 비교하였다. HPLC에 의해 분석한 D-glucosaminee 각 농도별로 비례하여 일직선을보이면서 중가하였으며 비색법과 비교하였을 때도 매우 잘 일치하였다.
- 3은 D-glucosamine을 고농도(100~300 mg/ml, 에서 HPIjC로 분석한 결과이다. HPLC에 의한 D-glucosamirie의 분석은 고농도에서도 농도가 증가함에 따라 HPLC peak 면적이 일직선으로 비례하였다.
- HPLC을 이용한 키토을리고당의 정량은 키토을리고당을 D-glucosamine화한 다옴, D-glucosamine을 HPLC에 의해 분석하여 정량하였다.
- 여액 10mL에 HCl 7 nW H2O 3mL을 가하고 혼합시킨 후 5mL을 취하여 탈기밀봉 후 110℃에서 24시간 반옹으로 키토을리고당을 glucosamine으로 분해하였다(10). 분해된 시료는 60℃ 감압 하에서 농축하여 HCl 과 HQ를 제거한 후 비색법은 물로 녹여 사용하고, HPLC법은 65% CHQNIHPLC용 용매)로 녹이고 여과하여 사용하였다.
- 키토을리고당의 정량법으로 기존의 비색법과 HPLC 방법을 비교 검토하였다. HPLC에 의한 키토을리고당의 정량은 키토을리고당을 D-glucosamine로 분해한 다음, D-glucosamine을 분석하므로서 가능하였다.
대상 데이터
- D-glucosamine 표준품은 Signs사의 D-glucosamine-HCl를 사용하였으며 키토을리고당은 국내의 SK사, 진식품 및 미국의 Tishcon Corw사의 것을 사용하고 키토산 제품으로는 국내 바이오테크사의 제품을 사용하였다.
- HPLC 분석조건으로 사용된 columne BondclonelO NH2(300 X 3.9 mm, 10 micron, phenomenex), 이 동상은 CH3CN: H2O == 65 : 35을 사용하였으며, 검출기는 RI를 그리고 유속은 0.8 mUmin으로 하였다.
성능/효과
- 1과 같다. D-glucosamineel 표준품인 D-glucosamine-HCl을glucosamine으로의 분해과정을 거친 후 HPLC로 분석한 결과가 retention time 7고분에서 단일 피크를 보였으며 키토을리고당도 같은 조건으로 분석하였을 때 retention time 7.2분에서 피크를 보였다.
- 2는 각 농도별로 뷴석한 D-glucosaminee 결과로서 비색법과 HPLC법을 비교하였다. HPLC에 의해 분석한 D-glucosaminee 각 농도별로 비례하여 일직선을보이면서 중가하였으며 비색법과 비교하였을 때도 매우 잘 일치하였다. 상관관계를 니타내는 Re HPLC 법이 0.
- SK사의 키토을리고당은 비색법으로는 28.4%(w/w)였으나 HPLC법으로는 25.1%(w/w)였으며, 진식품사와 Tishcon Corp사의 경우도 각각 비색법으로는 79.3%(w/w), 23.8%(w/w) 그리고 HPLC법으로는 71.9%(w/w), 21.4%(w/w)로서 진식품사와 Tishcon Corf사 모두 비색법으로 분석한 결과치가 HPLC법으로 분석한 결과치 보다 9.3%~11.6%(w/w) 정도 많은 양이 검출되었다. 또한 바이오테크사의 키토산은 비색법에 의하여 1.
- 4%였다. 각 농도에서 D-glucosamine의 회수율은 비색법보다 HPLC법이 더 높은 값을 보였다. 이것은 HPLC에 의한 정량이 더 정확하다는 것을 알 수 있다.
- 결론적으로 HPLC에 의한 키토을리고당의 정량은 비색법 보다 분석시간의 단축효과가 있으며 또한 더 정확하였다. 그리고 비색법은 glucosamine의 농도 2.
- 따라서 D-glucosaminee HPLC에 의한 정량이 가능하였으며 또한 비색법보다도 더 짧은 시간에 더 용이하게 분석이 가능하였다.
- 비색법은 키토산 등에 의한 false positive response가 일어났으나 HPLC법은 glucosamine 이외의 다른 성분에 의한 영향을 받지 않았다. 따라서 HPLC에 의한 키토을리고당의 정량은 가능하였으며 기존의 비색법 보다 신속 . 정확하였다.
- 따라서 키토을리고당의 정량을 비색법으로 하였을경우 glucosamine 이외의 키토산 둥 다른 성분에 의한 false positive response가 일어남을 알 수 있었다.
- 6%(w/w) 정도 많은 양이 검출되었다. 또한 바이오테크사의 키토산은 비색법에 의하여 1.2%로 키토을리고당이 검출되었으나 HPLC 법으로는 검출되지 않았다.
- 기존의 방법여]색법)보다 더 신속 . 용이하고 정확하였다.
- 9 mm, 10 micron, Phenomenex)을 사용하고 이동상으로는 acetonitrile : H20(65 : 35)으로 하였다. 키토을리고당의 정량은 비색법 보다 HPLC법이 높은 회수율을 보였으며, 분석시간도 시료당 10분 이내로서 비색법의 4 시간 보다 더 짧았다. 비색법은 키토산 등에 의한 false positive response가 일어났으나 HPLC법은 glucosamine 이외의 다른 성분에 의한 영향을 받지 않았다.
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