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제안 방법
- 5주간의 실험 종료 후 에테르로 가볍게 마취하여 혈액을 심장으로부터 채혈하였다. 당화헤모글로빈 (HbAlc) 측정을 위해 채혈한 혈액중 whole blood 0.
- 8 주령의 db/db 마우스 중 혈당을 측정하여 당뇨가 유발된 것이 확인 된 생쥐를 한군 4 마리씩으로 하여 일반 사료를 공급한 db/db 비발현군 (Lean 군), 일반 사료를 공급한 db/db 발현군 (Nontreated 군), 손바닥 선인장 열매 분말이 1% 함유된 사료를 공급한 db/db 발현군 (Fructus 군), 손바닥 선인장 잎 분말이 1% 함유된 사료를 공급한 db/db 발현군 (Leaves 군), 대조 약물인 acarbose가 0.05% 함유된 사료를 공급한 db/db 발현군 (Acarbose 군)으로 나누어 5주간 사육하였다.
- db/db 발현군 당뇨병 모델 생쥐를 사용하여 5주간 손바닥 선인장 잎 또는 열매을 투여하면서 당뇨병 개선효과를 조사하였다. 체중 변화를 살펴보면 db/db 비발현 Lean군에 비해 db/db 발현군의 체중은 최종은 5주 후에 약 1.
- db/db 비발현군인 Lean군과 발현군인 Nontreated군, Fructus군, Leaves군, Acarbose 투여군의 혈당 변화를 즉정하였다(Table Ⅱ). Lean군의 경우 혈당이 약간 증가하였으나 1, 2, 4, 5주에 걸쳐 큰 변화가 없음이 관찰되었던 반면, 발현군은 Lean군에 비해 혈당이 아주 큰 폭으로 상승하였다.
- 제거한 나머지 부분을 길이에 따라 균등하게 proximal(윗부분), middle(중간부분), distal(아랫부분)의 3부분으로 나누었다. 각 부분의 습중량을 측정한 다음 소장 점막을 긁어내어 생리식염수에 현탁하여 15초간 3회 초음파 처리하고 4℃, 20000×g에서 1시간동안 원심 분리 한 후 상층액을 maltase 및 sucrase의 효소로 사용하였다.
- 그러나, 선인장의 항당뇨효과에 대해서는 연구가 되어있지 않으므로 여기에서는 당뇨모델 동물인 db/db 생쥐를 이용하여 손바닥 선인장의 항당뇨 효과를 조사하였다.
- 또한 주위의 혈당농도에 비례하여 서서히 증가하므로12,13)HbAlc의 수치는 혈당의 변화를 반영할 수 있다. 따라서 혈중 HbAlc 농도를 측정하였다(Table Ⅴ). 혈중 HbAlc의 농도는 발현군인 Nontreated군에 비해 Acarbose군이 가장 낮았으나, Non-treated군에 대해 Acarbose군, Fructus군과 Leaves군들이 유의적으로 낮아지지는 않았다.
- 비발현군(Lean군)과 약물을 처리하지 않은 발현군(Nontreated군), 발현군에 손바닥 선인장 열매를 투여한 군(Fructus군), 발현군에 손바닥 선인장 잎을 투여한 군(Leaves 군), 현재 항당뇨 약물로 사용하고있는 acarbose를 투여한 발현군(Acarbose군)으로 나누어 손바닥 선인장의 항당뇨효과를 조사하였다. 각 군간의 체중 변화를 살펴보면 Lean군에 비해 db/db 발현군의 최종 체중은 약 1.
- 일주일에 한번 몸무게 변화량을 조사하고, 이틀에 한번 사료 섭취량 및 물 섭취량을 조사하였다.
- 자유스럽게 물을 섭취할 수 있도록 공급하면서 일주일에 한번 20시간 동안 절식시키며 뇨를 채취하고, 공복시 혈당을 측정하였다. 채취한 뇨를 total glucose 측정용 kit로 뇨중 glucose량을 측정하였고, 뇨중 단백질량은 bovine serum albumin을 표준물질로 하여 Bradford method6)로 측정하였다.
- 채혈 후 소장 전체를 분리해 saline으로 세척한 후, 이 중 십이지장을 제거한 나머지 부분을 길이에 따라 균등하게 proximal(윗부분), middle(중간부분), distal(아랫부분)의 3부분으로 나누었다. 각 부분의 습중량을 측정한 다음 소장 점막을 긁어내어 생리식염수에 현탁하여 15초간 3회 초음파 처리하고 4℃, 20000×g에서 1시간동안 원심 분리 한 후 상층액을 maltase 및 sucrase의 효소로 사용하였다.
대상 데이터
- ) 에서 구입하였다. Bio-protein assay kit는 Bio-Rad Co. (U.S.A.)에서 구입하여 사용하였고, 기타 시약은 특급시약을 사용하였다.
- )에서 구입하였다. o-phenylene diamine, peroxidase, maltose는 Wako Co. (Japan)에서 구입하였고 sucrose, starch는 Yakuri Co. (Japan)에서 구입 하였고 blood glucose test strip은 LXN Corp. (U.S.A.)에서 구입하였고 total glucose kit는 Asan Co. (Korea)에서 구입하였으며 Acarbose는 Bayer Co. (U.S.A.) 에서 구입하였다. Bio-protein assay kit는 Bio-Rad Co.
- 본 실험에 사용한 Opuntia ficus-indica fructus (손바닥 선인장 열매 ), Opuntia ficus-indica leaves (손바닥 선인장 잎)의 동결건조 분말은 북제주군 농협에서 제공받아 사용하였다.
- 수컷 8주령 db/db 마우스를 Charles River사에서 분양 받아 사용하였으며 사료로는 삼양(주) pellet형 곡물 사료를 공급하고, 온도는 23±2℃, 습도는 50±5%에서 사육하였다.
데이터처리
- 실험결과는 평균±표준편차로 나타내었으며, 실험군간의 유의성 검정은 Student's t-test를 수행하여 결정하였다.
이론/모형
- 2ml은 EDTA가 처리된 튜브에 넣어 4℃ 이하에서 측정시까지 보관하였다. HbAlc는 microparticle emzyme immunoassay(MEIA) 방법으로 7일 이내에 측정하였다.
- 측정하였다. 채취한 뇨를 total glucose 측정용 kit로 뇨중 glucose량을 측정하였고, 뇨중 단백질량은 bovine serum albumin을 표준물질로 하여 Bradford method6)로 측정하였다.
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