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문제 정의
- 이러한 오미자에 대한 성분 분석 및 약리 작용에 대한 보고는 김 등(1973), 양 등(1982), 정 등 (1986), 서 등(1987), 이 등(1989), 오 등(1990), 이 등 (1990)을 위시한 여러 보고가 있으나, 약리 작용 및 일반 성분 분석 수준에 머물고 있어 아직도 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구는 오미자에 대한 성분 분석을 보완하고자 일반 성분은 물론 특수성분까지 포괄적인 분석을 실시하여 결과를 얻었기에 보고한다.
- 본 연구는 농림수산특정과제의 일환으로 이루어진 연구이기에 관계된 분들에게 감사를 표한다.
제안 방법
- 10ml로 정용된 유리 페놀산, 페놀산 Ester 및 불용성 결합형 페놀산 획분 중 일부를 membrane filter(Millipore, 0.45 m, Waters사)로 여과하고 김 등(1987)조건으로 표품과 같이 HPLC를 행하여 정량분석을 실시하였다.
- SACC에서 얻어진 각 지질획분의 구성 지방산을 확인하기 위하여 시료를 Metcalfe 등(1966)의 방법 으로 유도체화하여 이 등(1988)의 조건으로 GC(Hewlett Packard 5890 series Ⅱ)분석을 실시 하였다.
- Sodium sulfate를 씻은 물과 유리 페놀산 추출 시 남은 수용액 상 및 분리시킨 부연 침전물들을 모두 합한 후, 이들을 가수 분해하기 위해 4N NaOH 250ml를 가하고 질소가스하의 상온에서 4시간 동안 방치한 다음, 6N HCl을 가하여 pH 2로 조정한 뒤, hexane으로 5회 세척하고 이후는 유리 페놀산과정을 그대로 실시하였다.
- 건조시료 50g을 수증기 증류하여 얻어진 유상 물질을 ethylether 50ml로 3회 용매추출하고 질소가스로 농축한 후, ethylether를 사용하여 50ml로 정용한 다음, GC/MS(Hewlett packard Co., 5970 series Mass Selective Detector)분석을 실시하였으며, 분석조건은 column은 Ultra 2(Cross-Linked 5% Phenyl Methyl Silicone, 25m × 0.32mm × 0.52㎛ film), 주입구 온도는 300℃, Oven 온도는 초기 온도 60℃에서 1분간 유지 한 후, 분당 7℃씩 상승하여 100℃까지 승온한 다음 l00℃에서 1분간 유지하고 또다시 분당 3℃씩 상승하여 160℃까지 승온한 후, 10분간 유지하고 분당 10℃씩 상승하여 280℃까지 상승한 다음 10분간 유지하였다.
- 농축물을 0.2N sodium citrate buffer(pH 2.2)로 녹여 10ml로 정용하고 아미노산 자동분석기(LKB 4150 ALPHA)로 분석하였다.
- 상등액은 동량의 수포화 ehter로 2회 세척한 다음, 수층을 감압농축하고 그 중 2ml를 취하여 수분을 완전 제거후, 14% BF3/MeOH과 CHCl3을 각각 2ml씩 가하여 60℃ 수욕상에서 25분간 반응시킨 후 포화 ammonium sulfate 4ml을 가하여 방치, CHCl3을 회수하여 GC 분석을 실시하였다. GC분석조건은 Hewlett packard 5890 series Ⅱ, 칼럼은 Ultra 2(Crosslinked MethylSiliconGum, 25 × 0.
- 상등액을 동량의 ethylether로 세척한 후, 수용액을 다시 감압 농축하고 총 50ml가 되게 0.2M Na-citrate완충액(pH 2.2)으로 농축물을 녹인 다음 아미노산 자동분석기로 분석하였다.
- 즉, 시료를 So×hlet 추출기를 사용하여 diethylether로 12시간 환류 추출하여 지용성 물질을 제거한 다음 풍건하고 30g씩을 평취하여 250ml의 70% EtOH : 70% acetone = 1 : l(v/v) 혼합용매를 가한 뒤, 5분간 진탕처리하고 원심분리시켜 상등액을 분리하였다. 이 같은 조작을 5번 더 되풀이하여 합친 상등액 1,250ml를 100ml까지 감압농축하고, 다시 증류수 100ml를 가한 다음, 50ml가 될 때까지 감압농축한 후, 농축액을 유리페놀산 및 페놀산에스터의 분석용으로 이용하였다. 나머지 잔사로 불용성 결합형 페놀산의 정량을 실시 하였다.
- 100ml mass flask에 증류수 80ml, 건조물 1g 상당량의 시료 추출액, Folin-Denis시약 2ml를 넣고 포화탄산나트륨 5ml를 가한 뒤 증류수로 채워 100ml로 하였다. 잘 혼합하고 1시간 동안 정치시킨 다음, 660nm에서 흡광도를 측정하였으며, 0.1%〜3.0% 농도 범위의 tannic acid 용액을 만들어 흡광도를 측정하고, 작성된 검량선으로부터 total phenol 함량을 tannic aicd로 환산하여 나타냈다.
- 실시하였다. 즉, 건조시료 10g을 평취하여 95% ethanol 40ml와 혼합 후, 마쇄, 추출하고 여과하였다. 100ml mass flask에 증류수 80ml, 건조물 1g 상당량의 시료 추출액, Folin-Denis시약 2ml를 넣고 포화탄산나트륨 5ml를 가한 뒤 증류수로 채워 100ml로 하였다.
- . 즉, 시료를 So×hlet 추출기를 사용하여 diethylether로 12시간 환류 추출하여 지용성 물질을 제거한 다음 풍건하고 30g씩을 평취하여 250ml의 70% EtOH : 70% acetone = 1 : l(v/v) 혼합용매를 가한 뒤, 5분간 진탕처리하고 원심분리시켜 상등액을 분리하였다. 이 같은 조작을 5번 더 되풀이하여 합친 상등액 1,250ml를 100ml까지 감압농축하고, 다시 증류수 100ml를 가한 다음, 50ml가 될 때까지 감압농축한 후, 농축액을 유리페놀산 및 페놀산에스터의 분석용으로 이용하였다.
대상 데이터
- 오미자는 1998년 11월 강원도 홍천군 남면 양덕리에서 구입하여 냉동 보관하면서 사용하였다.
이론/모형
- Folin-Denis법(이와 이, 1994)에 따라 실시하였다. 즉, 건조시료 10g을 평취하여 95% ethanol 40ml와 혼합 후, 마쇄, 추출하고 여과하였다.
- Krygier 등(1982)의 방법에 따라 분석을 실시하였다. 즉, 시료를 So×hlet 추출기를 사용하여 diethylether로 12시간 환류 추출하여 지용성 물질을 제거한 다음 풍건하고 30g씩을 평취하여 250ml의 70% EtOH : 70% acetone = 1 : l(v/v) 혼합용매를 가한 뒤, 5분간 진탕처리하고 원심분리시켜 상등액을 분리하였다.
- 유리당 함량은 노 등(1983)의 방법으로 전처리하여 Leo 등(1992)의 방법에 따라 HPLC 분석을 실시 하였다.
- 지질성분의 추출 및 정제는 현 등(1997)의 방법을 사용하였다.
- 지질의 분리는 권 등(1987)의 방법으로 Silicic acid column chromatography(이하 SACC)에 의하여 중성 지질, 당 지질 그리고 인 지질을 각각 분리 하였다.
성능/효과
- 1. 유기산함량은 42.179mg%였으며, 주로 함유되어 있는 유기산은 malic acid와 citric acid로 각각 33, 691ppm과 3,330.5ppm이었다.
- 2. 총 페놀함량은 1.560%였으며 주로 페놀산 Ester와 불용성 결합형 페놀산이 함유되어 있었고 구성 페놀산은 chlorogenic acid, coumalic acid, gentisic acid의 순으로 함유되어 있었다.
- 3. 총 지질함량은 160.5mg/g 건물량였으며 주로 중성 지질이 많았고 불포화 지방산이 포화 지방산보다 3배 정도 많이 함유되어 있었으며, 불포화 지방산 중에서는 linoleic acid와 oleic acid가 주로 함유되어있었고, 포화 지방산으로는 palmitic acid가 가장 다량 함유되어 있었다.
- 1의 방법에 의해 분획한 오미자의 유리 페놀산, 페놀산 Ester 및 불용성 결합형 페놀산획분 및 10종의 표품에 대해 HPLC를 실시하여 구성 페놀산을 확인한 결과는 Table 1과 같다. 3획분 모두 chlorogenic acid의 함량이 가장 높게 나타났으며, Coumalic acid, gentisic acid의 순이었으나, 유리페놀산 획분에서 Gentisic acid의 함량이 다른 획분에 비해 높게 나타나는 것은 특이 하였다.
- 4. 정유 성분으로는 caryophyllene, calarene, cubebene, acoradiene 그리고 β-himachalene 등의 성분이 발견되었다.
- Folin-Denis법에 따라 총 페놀 함량을 측정하고 그 함량을 tannic acid로 환산한 결과, 1.560%로 나타났다
- 불포화 지방산 중에서는 linoleic acid와 oleic acid가 많았으며, 포화지방산 중에서는 palmitic acid와 capric acid의 함량이 많았다. 불포화지방산이 포화지방산보다 함량이 3배 정도로 많아 오미자의 지방산 조성이 상당히 우수함을 시사하여 주었다.
- 불포화 지방산 중에서는 linoleic acid와 oleic acid가 많았으며, 포화지방산 중에서는 palmitic acid와 capric acid의 함량이 많았다. 불포화지방산이 포화지방산보다 함량이 3배 정도로 많아 오미자의 지방산 조성이 상당히 우수함을 시사하여 주었다.
- 오미자 시료를 전처리하고 HPLC로 분석한 결과, fructose, sucrose, glucose 그리고 ribose가 각각 1.83%, 1.13%, 1.05%, 0.04% 함유되어 있었다.
- 오미자 시료를 전처리하고 유도체화하여 GC 분석을 10종의 표품과 같이 실시하여 정성 정량한 결과, malonic acid는 2.8 ppm, succinic acid는 21.6 ppm, maleic acid는 2.3 ppm, malic acid는 38,691 ppm, pyroglutamic acid는 101 ppm, citric acid는 3,330.5 ppm, 그리고 glutaric acid는 흔적량 검출되어 오미자에 주된 유기산은 malic acid와 citric acid임을 알 수 있었고 총 유기산 함량은 42.149mg%였다.
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