쇠비름 (Portulaca oleracea)의 항산화 효과를 탐색하기 위해 MeOH과 CH$_2$Cl$_2$를 이용해서 추출하여 crude extract를 조제하였다. 그리고 이 조추출물 (crude extract)에 대해 n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH, $H_2O$로 순차적으로 용매분획하였다. 쇠비름의 조추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을 이용한 과산화지질 억제능을 측정하였다. 그 결과 쇠비름 조추출물이 DPPH 라디칼에 대한 강한 소거작용과 in vitro 과산화지질 억제효과가 있음이 확인되었다. 조추출물의 DPPH radical 소거효과에 대한 $IC_{50}$/은 53.33 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 천연 항산화제인 L-ascorbic acid (1.25 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)와 a-tocopherol (6.99 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)보다는 약하지만, 합성 항산화제로 널리 사용되고 있는 BHT(87.84 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)보다는 월등히 뛰어난 라디칼 소거능이 관찰되었다. 또한 각 분획물 중 EtOAc와 n-BuOH 분획물의 DPPH라디칼 소거효과가 가장 우수하였다. 마우스 간 균질물(mouse liver homogenate)을 이용한 과산화지질 저해효과에 대해서도 쇠비름 조추출물의 농도의존적인 (0.1 mg/$m\ell$~5 mg/$m\ell$) 상관성이 관찰되었으며, 특히 n-BuOH 분획물은 L-ascorbic acid의 효과와 거의 대등한 것을 나타났다. 이것으로 쇠비름 조추출물이 항산화효과 (in vitro)가 있음이 증명되었으며, 이 항산화활성은 극성이 비교적 큰 화합물들에 의한 것임을 추정할 수 있다. 현재 쇠비름 추출물로부터 항산화활성성분을 분리하기 위한 연구가 진행 중이다.
쇠비름 (Portulaca oleracea)의 항산화 효과를 탐색하기 위해 MeOH과 CH$_2$Cl$_2$를 이용해서 추출하여 crude extract를 조제하였다. 그리고 이 조추출물 (crude extract)에 대해 n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH, $H_2O$로 순차적으로 용매분획하였다. 쇠비름의 조추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을 이용한 과산화지질 억제능을 측정하였다. 그 결과 쇠비름 조추출물이 DPPH 라디칼에 대한 강한 소거작용과 in vitro 과산화지질 억제효과가 있음이 확인되었다. 조추출물의 DPPH radical 소거효과에 대한 $IC_{50}$/은 53.33 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 천연 항산화제인 L-ascorbic acid (1.25 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)와 a-tocopherol (6.99 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)보다는 약하지만, 합성 항산화제로 널리 사용되고 있는 BHT(87.84 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$)보다는 월등히 뛰어난 라디칼 소거능이 관찰되었다. 또한 각 분획물 중 EtOAc와 n-BuOH 분획물의 DPPH라디칼 소거효과가 가장 우수하였다. 마우스 간 균질물(mouse liver homogenate)을 이용한 과산화지질 저해효과에 대해서도 쇠비름 조추출물의 농도의존적인 (0.1 mg/$m\ell$~5 mg/$m\ell$) 상관성이 관찰되었으며, 특히 n-BuOH 분획물은 L-ascorbic acid의 효과와 거의 대등한 것을 나타났다. 이것으로 쇠비름 조추출물이 항산화효과 (in vitro)가 있음이 증명되었으며, 이 항산화활성은 극성이 비교적 큰 화합물들에 의한 것임을 추정할 수 있다. 현재 쇠비름 추출물로부터 항산화활성성분을 분리하기 위한 연구가 진행 중이다.
The antioxidative activity of Portulaca oleracea was tested using in vitro experimental models. Antioxidative activities were determined by measuring DPPH radical scavenging activity and lipid peroxide using 2-thiobarbituric and (TBA). The crude extract was sequentially partitioned with n-hexane, 15...
The antioxidative activity of Portulaca oleracea was tested using in vitro experimental models. Antioxidative activities were determined by measuring DPPH radical scavenging activity and lipid peroxide using 2-thiobarbituric and (TBA). The crude extract was sequentially partitioned with n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH, $H_2O$. A remarkable antioxidative effect was observed in the EtOAc and n-BuOH fractions. The DPPH radical scavenging effect ($IC_{50}$=17.90 $\mu\textrm{g}$/ml) of the n-BuOH soluble fraction was comparable with that of the natural antioxidant, $\alpha$-tocopherol ($IC_{50}$=6.99 $\mu\textrm{g}$/ml) and the inhibition effect of lipid peroxidation in mouse liver homogenate was similar to that of the natural antioxidant, L-ascorbic acid at a concentration of 1.0 mg/ml to 5 mg/ml.
The antioxidative activity of Portulaca oleracea was tested using in vitro experimental models. Antioxidative activities were determined by measuring DPPH radical scavenging activity and lipid peroxide using 2-thiobarbituric and (TBA). The crude extract was sequentially partitioned with n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH, $H_2O$. A remarkable antioxidative effect was observed in the EtOAc and n-BuOH fractions. The DPPH radical scavenging effect ($IC_{50}$=17.90 $\mu\textrm{g}$/ml) of the n-BuOH soluble fraction was comparable with that of the natural antioxidant, $\alpha$-tocopherol ($IC_{50}$=6.99 $\mu\textrm{g}$/ml) and the inhibition effect of lipid peroxidation in mouse liver homogenate was similar to that of the natural antioxidant, L-ascorbic acid at a concentration of 1.0 mg/ml to 5 mg/ml.
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문제 정의
본 연구에서는 쇠비름의 조 추출물과 이를 각종 용매로 추출한 분획물에 대해 DPPH radical 소거 능과 mouse liver homogenate를 이용한 지질 과산화 억제 능에 대해 살펴봄으로써 쇠비름의 항산화 효과를 탐색하였다.
제안 방법
이 crude extract를 용매의 극성에 따라 순차적으로 분획하여 n-hexane fraction, 15% aq. MeOH fraction, EtOAC fraction, n-BuOH fraction, H2O fraction으로 분획하였다. 분리된 각각의 쇠비름 용매 분획을 회전 진공 농축기 (Eyela, N-N series)로 감압 농축시켜용매를 제거하고 각각의 농축물을 얻었다(Fig.
그리고 이 조 추출물 (crude extract) 에 대해 n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH, HQ로 순차적으로 용매분획하였다. 쇠비름의 조 추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거 능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을이용한 과산화지질 억제 능을 측정하였다.
양이 가장 많이 생성되었다. 따라서 이 mouse liver homogenate를 이용한 본 지질 과산화질과산화 반응시간을 8시간으로 하여 실험을 행하였다.
MeOH fraction, EtOAC fraction, n-BuOH fraction, H2O fraction으로 분획하였다. 분리된 각각의 쇠비름 용매 분획을 회전 진공 농축기 (Eyela, N-N series)로 감압 농축시켜용매를 제거하고 각각의 농축물을 얻었다(Fig. 1).
쇠비름 조 추출물 (crude extract)의 항산화 능을 DPPH 에 대한 전자공여능 (electron donating ability, EDA %)으로 측정하였고 각 분획물의 억제 강도는 대조군에 비해 DPPH free radical을 50% 억제하는데 요구되는 농도 (1喝) 로써 비교하였다.
MeOH, EtOAc, n-BuOH, HQ로 순차적으로 용매분획하였다. 쇠비름의 조 추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거 능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을이용한 과산화지질 억제 능을 측정하였다. 그 결과 쇠비름 조 추출물이 DPPH 라디칼에 대한 강한 소거작용과 in vitro 과산화지질 억제효과가 있음이 확인되었다.
정상적인 mouse의 liver homogenate# 사용하여 지질 과산화에 대한 in 1成ro에서의 시료의 농도별 지질 과산화 억제 효과를 L-ascorbic acid를 표준물질로 비교 관찰하였다. 먼저 실험에 사용된 mouse liver homogenate의 반응시간에 따른 지질과산화반응을 측정한 결과를 Fig.
추출에 적합하도록 세절한 후 추출 관에 넣고 48시간 동안 CH2C12 와 MeOH로 각각 추출하여 혼합하였다. 이 crude extract를 용매의 극성에 따라 순차적으로 분획하여 n-hexane fraction, 15% aq.
대상 데이터
본 실험에 사용한 쇠비름은 거제도 대금리 인근의 농가 지역에서 자생하는 것을 7월~8월 사이에 채집하였다.
쇠비름 (Portulaca 况eracea)의 항산화 효과를 탐색하기 위해 MeOH과 CH2CI2를 이용해서 추출하여 crude extract* 조제하였다. 그리고 이 조 추출물 (crude extract) 에 대해 n-hexane, 15% aq.
실험동물은 암수 구별 없이 체중 20-25 g의 ICR mouse로 온도 20±2℃, 습도 50±10%의 동물 실에서 일주일간 고형시료 (삼양유지(주))로 사육하였다. 이 실험동물을 ether로 마취 후 해부하여 간 문맥에 0.
데이터처리
반응 혼합액을 100℃에서 30분간 가열한 뒤 실온에서 냉각시켰다 냉각 후 2000 rpm에서 15분간 원심분리 시킨 후 상층 액을 취하여 흡광도를 spectrophotometer (532 nm)로 측정하여 정량하였다. TBA 값은 532 nm에서의 흡광도가 0.1일 때를 1 unit으로 한 후, mouse 간 1 g 에 대한 TBA 값을 환산하여 표시하였으며 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
그리고 각 농도별 시료(10 //g/ml-100 陽/ml) 50 必 와 제조한 DPPH 용액을 혼합하여 10분간 상온에서 반응시킨 후 518 nm에서 흡광도를 측정한다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 유리 라디칼 소거 활성을 백분율로 나타내었으며 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
성능/효과
그리고 15% aq. MeOH 분획물은 비교적 낮은 활성 (170.16 园ml)을 보였으며 "-hexane 분획물과 수층은 DPPH free radical 100 /zg/ml 이상의 높은 농도에서도 소거 능이 거의 없는 것으로 나타났다.
1~5 mg/ml)에 따른 지질 과산화 억제율이 농도 의존적이었다. DPPH radical 억제 효과에서와 마찬가지로 EtOAC 분획물과 n-BuOH 분획물의 지질 과산화 저해 활성이 다른 분획들에 비해 명백히 뛰어난 것으로 나타났다. “-Hexane 분획물과 15% aq.
“-Hexane 분획물과 15% aq. MeOH 분획물의 효과는 아주 약한 활성을 나타내었으며 수층의 효과는 거의 없는 것으로 확인되었다.
쇠비름의 조 추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거 능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을이용한 과산화지질 억제 능을 측정하였다. 그 결과 쇠비름 조 추출물이 DPPH 라디칼에 대한 강한 소거작용과 in vitro 과산화지질 억제효과가 있음이 확인되었다. 조추출물의 DPPH radical 소거효과에 대한 心。은 53.
radical 소거 활성은 비교적 약한 효과였다. 그러나 우수한 합성항산화제로서 많이 사용되고 있는 BHT (butylated hydroxy toluene)에 소거 능에 비해서는 비교적 뛰어난 활성을 나타내었다. 쇠비름 각 분획물의 DPPH 라디칼 소거활성 결과를 Table 1에 나타내었다.
농도별로 (10 jUg/ml-100 /zg/ml) free radical 소거 활성을 측정한 결과 10 俸/ml에서 13.43%의 소거율을 나타내었고 25 俸/ml과 50 陽/ml에서는 각각 25.91%, 48.47%, 그리고 100 俸/ml 농도에서는 71.45 %의 소거율을 보여 농도 의존적인 효과가 있음을 알 수 있다.
따라서 쇠비름 조 추출물의 DPPH free radical 소거활성은 EtOAc 분획물과 n-BuOH 분획물에 의한 것임을 알 수 있으며 그 활성 성분들은 비교적 극성이 큰 화합물임을 추정할 수 있다.
84 傩/ml)보다는 월등히 뛰어난 라디칼 소거능이 관찰되었다. 또한 각 분획물 중 EtOAc와 n-BuOH 분획물의 DPPH 라디칼 소거효과가 가장 우수하였다. 마우스 간 균질물 (mouse liver homogenate)을 이용한 과산화지질 저해 효과에 대해서도 쇠비름 조 추출물의 농도 의존적인 (0.
또한 각 분획물 중 EtOAc와 n-BuOH 분획물의 DPPH 라디칼 소거효과가 가장 우수하였다. 마우스 간 균질물 (mouse liver homogenate)을 이용한 과산화지질 저해 효과에 대해서도 쇠비름 조 추출물의 농도 의존적인 (0.1 mg/ml ~ 5 mg/ml) 상관성이 관찰되었으며, 특히 n-BuOH 분획물은 L-ascorbic acid의 효과와 거의 대등한 것을 나타났다. 이것으로 쇠비름 조 추출물이 항산화 효과 (in 协ro)가 있음이 증명되었으며, 이 항산화 활성은 극성이 비교적 큰 화합물들에 의한 것임을 추정할 수 있다.
반응시간이 (2~8 hr) 경과함에 따라 mouse liver homogenate 의 산화정도는 시간 의존적으로 증가하였으며 8시간 경과 시 과산화지질의 양이 가장 많이 생성되었다. 따라서 이 mouse liver homogenate를 이용한 본 지질 과산화질과산화 반응시간을 8시간으로 하여 실험을 행하였다.
수층을 제외한 모든 층에서 농도 의존적으로 라디칼 소거 활성이 나타났으며 특히, w-BuOH 분획물에서의 효과가 다른 분획들보다 훨씬 높게 나타났다. 이들의 IC50을 살펴보면 n-BuOH 분획물이 17.
이러한 결과로써 쇠비름의 항산화 활성 성분은 아마도 EtOAc 분획물과 n-BuOH 분획물에 존재하며 쇠비름의 항산화 효과는 강력한 라디칼 소거 활성과 함께 지질과산화 억제 활성에 기인됨을 유추할 수 있다. 따라서 과산화지질의 생성은 병리현상이나 조직손상 정도를 나타내는 지표이기 때문에 쇠비름 추출물의 생리활성에 대한 더 많은 검토가 필요할 것으로 생각된다.
후속연구
기인됨을 유추할 수 있다. 따라서 과산화지질의 생성은 병리현상이나 조직손상 정도를 나타내는 지표이기 때문에 쇠비름 추출물의 생리활성에 대한 더 많은 검토가 필요할 것으로 생각된다. 지금까지 보고된 쇠비름 추출물에 대한 생리활성으로는 간 해독, 이뇨, 항부종, 항염증 효과와 담배의 니코틴 성분 제거 효과가 있음이 알려져 있으나(18-20), 항산화 효과에 대한 보고는 이것이 처음이다.
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