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문제 정의
- 본 연구에서는 쇠비름의 조 추출물과 이를 각종 용매로 추출한 분획물에 대해 DPPH radical 소거 능과 mouse liver homogenate를 이용한 지질 과산화 억제 능에 대해 살펴봄으로써 쇠비름의 항산화 효과를 탐색하였다.
제안 방법
- 이 crude extract를 용매의 극성에 따라 순차적으로 분획하여 n-hexane fraction, 15% aq. MeOH fraction, EtOAC fraction, n-BuOH fraction, H2O fraction으로 분획하였다. 분리된 각각의 쇠비름 용매 분획을 회전 진공 농축기 (Eyela, N-N series)로 감압 농축시켜용매를 제거하고 각각의 농축물을 얻었다(Fig.
- 그리고 이 조 추출물 (crude extract) 에 대해 n-hexane, 15% aq. MeOH, EtOAc, n-BuOH, HQ로 순차적으로 용매분획하였다. 쇠비름의 조 추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거 능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을이용한 과산화지질 억제 능을 측정하였다.
- 양이 가장 많이 생성되었다. 따라서 이 mouse liver homogenate를 이용한 본 지질 과산화질과산화 반응시간을 8시간으로 하여 실험을 행하였다.
- MeOH fraction, EtOAC fraction, n-BuOH fraction, H2O fraction으로 분획하였다. 분리된 각각의 쇠비름 용매 분획을 회전 진공 농축기 (Eyela, N-N series)로 감압 농축시켜용매를 제거하고 각각의 농축물을 얻었다(Fig. 1).
- 쇠비름 조 추출물 (crude extract)의 항산화 능을 DPPH 에 대한 전자공여능 (electron donating ability, EDA %)으로 측정하였고 각 분획물의 억제 강도는 대조군에 비해 DPPH free radical을 50% 억제하는데 요구되는 농도 (1喝) 로써 비교하였다.
- MeOH, EtOAc, n-BuOH, HQ로 순차적으로 용매분획하였다. 쇠비름의 조 추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거 능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을이용한 과산화지질 억제 능을 측정하였다. 그 결과 쇠비름 조 추출물이 DPPH 라디칼에 대한 강한 소거작용과 in vitro 과산화지질 억제효과가 있음이 확인되었다.
- 정상적인 mouse의 liver homogenate# 사용하여 지질 과산화에 대한 in 1成ro에서의 시료의 농도별 지질 과산화 억제 효과를 L-ascorbic acid를 표준물질로 비교 관찰하였다. 먼저 실험에 사용된 mouse liver homogenate의 반응시간에 따른 지질과산화반응을 측정한 결과를 Fig.
- 추출에 적합하도록 세절한 후 추출 관에 넣고 48시간 동안 CH2C12 와 MeOH로 각각 추출하여 혼합하였다. 이 crude extract를 용매의 극성에 따라 순차적으로 분획하여 n-hexane fraction, 15% aq.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 쇠비름은 거제도 대금리 인근의 농가 지역에서 자생하는 것을 7월~8월 사이에 채집하였다.
- 쇠비름 (Portulaca 况eracea)의 항산화 효과를 탐색하기 위해 MeOH과 CH2CI2를 이용해서 추출하여 crude extract* 조제하였다. 그리고 이 조 추출물 (crude extract) 에 대해 n-hexane, 15% aq.
- 실험동물은 암수 구별 없이 체중 20-25 g의 ICR mouse로 온도 20±2℃, 습도 50±10%의 동물 실에서 일주일간 고형시료 (삼양유지(주))로 사육하였다. 이 실험동물을 ether로 마취 후 해부하여 간 문맥에 0.
데이터처리
- 반응 혼합액을 100℃에서 30분간 가열한 뒤 실온에서 냉각시켰다 냉각 후 2000 rpm에서 15분간 원심분리 시킨 후 상층 액을 취하여 흡광도를 spectrophotometer (532 nm)로 측정하여 정량하였다. TBA 값은 532 nm에서의 흡광도가 0.1일 때를 1 unit으로 한 후, mouse 간 1 g 에 대한 TBA 값을 환산하여 표시하였으며 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
- 그리고 각 농도별 시료(10 //g/ml-100 陽/ml) 50 必 와 제조한 DPPH 용액을 혼합하여 10분간 상온에서 반응시킨 후 518 nm에서 흡광도를 측정한다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 유리 라디칼 소거 활성을 백분율로 나타내었으며 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
성능/효과
- 그리고 15% aq. MeOH 분획물은 비교적 낮은 활성 (170.16 园ml)을 보였으며 "-hexane 분획물과 수층은 DPPH free radical 100 /zg/ml 이상의 높은 농도에서도 소거 능이 거의 없는 것으로 나타났다.
- 1~5 mg/ml)에 따른 지질 과산화 억제율이 농도 의존적이었다. DPPH radical 억제 효과에서와 마찬가지로 EtOAC 분획물과 n-BuOH 분획물의 지질 과산화 저해 활성이 다른 분획들에 비해 명백히 뛰어난 것으로 나타났다. “-Hexane 분획물과 15% aq.
- “-Hexane 분획물과 15% aq. MeOH 분획물의 효과는 아주 약한 활성을 나타내었으며 수층의 효과는 거의 없는 것으로 확인되었다.
- 쇠비름의 조 추출물과 각 분획물들에 대해 DPPH radical 소거 능과 마우스 간 균질물 (homogenate)을이용한 과산화지질 억제 능을 측정하였다. 그 결과 쇠비름 조 추출물이 DPPH 라디칼에 대한 강한 소거작용과 in vitro 과산화지질 억제효과가 있음이 확인되었다. 조추출물의 DPPH radical 소거효과에 대한 心。은 53.
- radical 소거 활성은 비교적 약한 효과였다. 그러나 우수한 합성항산화제로서 많이 사용되고 있는 BHT (butylated hydroxy toluene)에 소거 능에 비해서는 비교적 뛰어난 활성을 나타내었다. 쇠비름 각 분획물의 DPPH 라디칼 소거활성 결과를 Table 1에 나타내었다.
- 농도별로 (10 jUg/ml-100 /zg/ml) free radical 소거 활성을 측정한 결과 10 俸/ml에서 13.43%의 소거율을 나타내었고 25 俸/ml과 50 陽/ml에서는 각각 25.91%, 48.47%, 그리고 100 俸/ml 농도에서는 71.45 %의 소거율을 보여 농도 의존적인 효과가 있음을 알 수 있다.
- 따라서 쇠비름 조 추출물의 DPPH free radical 소거활성은 EtOAc 분획물과 n-BuOH 분획물에 의한 것임을 알 수 있으며 그 활성 성분들은 비교적 극성이 큰 화합물임을 추정할 수 있다.
- 84 傩/ml)보다는 월등히 뛰어난 라디칼 소거능이 관찰되었다. 또한 각 분획물 중 EtOAc와 n-BuOH 분획물의 DPPH 라디칼 소거효과가 가장 우수하였다. 마우스 간 균질물 (mouse liver homogenate)을 이용한 과산화지질 저해 효과에 대해서도 쇠비름 조 추출물의 농도 의존적인 (0.
- 또한 각 분획물 중 EtOAc와 n-BuOH 분획물의 DPPH 라디칼 소거효과가 가장 우수하였다. 마우스 간 균질물 (mouse liver homogenate)을 이용한 과산화지질 저해 효과에 대해서도 쇠비름 조 추출물의 농도 의존적인 (0.1 mg/ml ~ 5 mg/ml) 상관성이 관찰되었으며, 특히 n-BuOH 분획물은 L-ascorbic acid의 효과와 거의 대등한 것을 나타났다. 이것으로 쇠비름 조 추출물이 항산화 효과 (in 协ro)가 있음이 증명되었으며, 이 항산화 활성은 극성이 비교적 큰 화합물들에 의한 것임을 추정할 수 있다.
- 반응시간이 (2~8 hr) 경과함에 따라 mouse liver homogenate 의 산화정도는 시간 의존적으로 증가하였으며 8시간 경과 시 과산화지질의 양이 가장 많이 생성되었다. 따라서 이 mouse liver homogenate를 이용한 본 지질 과산화질과산화 반응시간을 8시간으로 하여 실험을 행하였다.
- 수층을 제외한 모든 층에서 농도 의존적으로 라디칼 소거 활성이 나타났으며 특히, w-BuOH 분획물에서의 효과가 다른 분획들보다 훨씬 높게 나타났다. 이들의 IC50을 살펴보면 n-BuOH 분획물이 17.
- 이러한 결과로써 쇠비름의 항산화 활성 성분은 아마도 EtOAc 분획물과 n-BuOH 분획물에 존재하며 쇠비름의 항산화 효과는 강력한 라디칼 소거 활성과 함께 지질과산화 억제 활성에 기인됨을 유추할 수 있다. 따라서 과산화지질의 생성은 병리현상이나 조직손상 정도를 나타내는 지표이기 때문에 쇠비름 추출물의 생리활성에 대한 더 많은 검토가 필요할 것으로 생각된다.
후속연구
- 기인됨을 유추할 수 있다. 따라서 과산화지질의 생성은 병리현상이나 조직손상 정도를 나타내는 지표이기 때문에 쇠비름 추출물의 생리활성에 대한 더 많은 검토가 필요할 것으로 생각된다. 지금까지 보고된 쇠비름 추출물에 대한 생리활성으로는 간 해독, 이뇨, 항부종, 항염증 효과와 담배의 니코틴 성분 제거 효과가 있음이 알려져 있으나(18-20), 항산화 효과에 대한 보고는 이것이 처음이다.
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