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문제 정의
- 따라서 본 연구는 청미래덩굴잎의 추출물질에 대한 항균효과 가능성을 검토하고자 하였다.
제안 방법
- 용량을 200ml로 하였다. 또한 첨가군은 각각 50g의 딸 기에 청미래덩굴(망개)잎 추출액 1% 용액을 (1.0, 5.0, 10.1 및 20ml) 첨가하여 저장 기간에 따른 항미생물의 생육변화 중 일반세균수, 효모 및 곰팡이는 위(1)의 실험 방법으로 실시하였다.
- 측정하였다. 무기성분은 시료에 식물체 분해액 (HC1O4:H2SO4:H2O=9:2:5)을 가하여 Hot Plate에서 무색으로 변할 때까지 분해한 후 ICP (Inductivity Coupled Plsma, Dandenong Victoria 3175, Austalia)로 분석하였다.
- 시판하고 있는 보리차 5g을 물 1/에 넣고 끓인 것과 그것에 각각 건조 분쇄한 청미래덩굴잎 (0.5, 1.0, 2.5 및 5.0g)을 첨가하여 끓인 후 저장 기간에 따른 항미생물의 생육변화 중 일반 세균수, 효모 및 곰팡이는 위(1)의 실험 방법으로 실시 하였다.
- 시험균액을 도말한 후, 디스크를 올려놓았다. 시험용액을 원액, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 및 1/32희석용액 75㎕를 디스크에 분주하였다. 즉시 37℃에서 24시간 배양한 후 억제대를.
- 가열 처리하였다. 열처리된 시료는 즉시 ice box에 냉각시키고, 2000/zg 농도로 paper disc에 흡수 시 킨 다음 shigella sormei, Enterobacter cloacae, Lactobacollus casei, Bacillus subtilis 및 Staphylococcus aureus 균을 시험균으로 사용하여 paper disc method를 이용하여 억제대 생성 유무를 확인하였다. 즉 멸균된 tryptic soy agar배지에 시험균량을 MacFarland Scale 0.
- 이때, 일반 세균수는 식품 공전상 미생물 시험법에서 검체에 존재하는 세균 중 표준한천 배지 내에서 발육할 수 있는 증온균 수를 측정하는 표준 평판법을 사용하여 35℃에서 24~48시간 배양 하였으며 효모및 곰팡이는 일반세균수 방법에 준하여 배지는 potato dextrose agar(Difco)를 사용하여 2 5℃에서 48시간 배양한 후 발생한 집락수를 계산하였으며 그 평균 집락수에 희석 배수를 곱하여 효모 와 곰팡이 수를 산출 하였다.
- 즉 멸균된 tryptic soy agar배지에 시험균량을 MacFarland Scale 0.5로 희석한 다음 멸균 면봉을 사용하여 균일하게 도포한 후, 각 추출물 시료를 흡수시킨 paper disc(8mm, Whatman NO, 2)를 TSA평판 배지에 올려 놓고 난 다음 37℃ 배양기에서 24시간 배양하면서 억제대 생성 유무를 판정하였다.
- 즉 시험균을 Mac Farland scale 0.5의 농도에 시험 균을 희석한 후, 면봉을 사용하여 tryptic soy agar에 도말하였다. 시험균액을 도말한 후, 디스크를 올려놓았다.
- 청미래덩굴(망개)잎 추출물(0.05, 0.1 및 0.21%) 과 소르빈산(0.05, 0.1%)을 각각 팥앙금에 첨가하여 저장기간에 따른 항미생물 변화를 실시하였다.
- 청미래덩굴(망개)잎 추출물의 열 안정성을 조사하기 위하여 동결 건조한 에탄올 추출물 시료를 실온 100℃에서 각각 30, 60분 및 1210에서 15분 동안 가열 처리하였다. 열처리된 시료는 즉시 ice box에 냉각시키고, 2000/zg 농도로 paper disc에 흡수 시 킨 다음 shigella sormei, Enterobacter cloacae, Lactobacollus casei, Bacillus subtilis 및 Staphylococcus aureus 균을 시험균으로 사용하여 paper disc method를 이용하여 억제대 생성 유무를 확인하였다.
- 청미래덩굴(망개)잎 추출물의 항균시험은 직경 10mm의 디스크를 이용하여 다음과 같이 실시하였다. 즉 시험균을 Mac Farland scale 0.
대상 데이터
- 5.1 추출물을 증류수에 녹인 후 pore size 0.22㎛인 멤브레인 필터로 여과한 용액을 시험 용액으로 사용하였다.
- 시중에 유통되고 있는 딸기를 수집하여 잘 씻은 후 대조군은 중량 50g을 달아 믹서기에 분쇄한 후 총 용량을 200ml로 하였다. 또한 첨가군은 각각 50g의 딸 기에 청미래덩굴(망개)잎 추출액 1% 용액을 (1.
- 청미래덩굴(망개)잎의 추출물질을 환류 냉각관이 부착된 flask 내에 분말 시료를 넣고 시료 중량의 10배량의 75%에탄올을 가하여 60℃의 수욕상에서 6시간 동안 2회 반복 추출한 후 감압여과하고, 여액을 rotary vacuum evaporator 사용하여 농축하고, 이를 동결건조기를 사용 건조한 후 밀봉하여 4℃의 냉장고에 보관하여 실험시 사용하였다.
- 청미래덩굴잎을 깨끗한 물로 수세한 후 원적외선 건조기 (Dry of infrared ray, KFDT01B)로 6 0℃에서 12시간 건조한 후 건식 분쇄기로 분쇄하고, 표준체 150mesh(lTOH CO, Japan)로 체를 친 다음 균질한 분말시료를 추출용 시료로 사용하였다.
이론/모형
- 청미래덩굴(망개)잎 건조분말 시료의 일반성분 및 무기성분을 AOAC법'$에 준하여 측정하였고, 수분 함량은 105℃ 상압건조법, 회분은 550℃ 의 직접 회화법 조단백함량은 Kjeltec Auto 1035 Sampler System, (Tecator, Sweden)로 정량 하였으며, 조지방 함량은 Soxhelt 추출법⑸, 조섬유는 Fibertec System(M 1020, Hot Extractor Foss, Sweden)으로 측정하였다. 무기성분은 시료에 식물체 분해액 (HC1O4:H2SO4:H2O=9:2:5)을 가하여 Hot Plate에서 무색으로 변할 때까지 분해한 후 ICP (Inductivity Coupled Plsma, Dandenong Victoria 3175, Austalia)로 분석하였다.
성능/효과
- 1. 추출물질용액에 대한 항균시험 결과, 50% 에탄올 121℃, 15분 멸균한 용액에서 각 세균에 대한 항미생물(생육억제)효과가 높았다.
- 2. 추출물질의 50% 에탄올 121 ℃, 15분간 멸균한 원액과, 1/2, 1/4 희석한 농도 에서 Staphylococcus aureus, Enterobacter cloacae, Shigella some, Aeromonas hydrophila, Bacillus sub- tills, Stereptococcus faecalis 및 Lactobacillus azsei 균에서 항미생물(생육억제)효과가 있었다.
- 3. 팥앙금은 소르빈산과 본 추출액 각각 O.lg/kg을첨가한 것에서 본 추출액이동 등이상의 미생물 억제 효과가 있었다.
- 4. 보리차 음료는 건조 분말한 청미래덩굴(망개)잎의 5.0g//를 첨가한 군이 control 군에 비해 저장 기간에 따라 현저한 미생물억제 효과가 있었다.
- 5. 딸기쥬스는 청미래덩굴(망개)잎 추출물 1%용액 20.0ml를 첨가한 군이 control군 에 비해 저장 기간에 따라 현저히 미생물억제 효과가 있었다.
- 1x11)7 CFU/로 나타났으며, 효모 및 곰팡이에서는 2.OxlO3~6.1xio7, 7.6x102~2.8x106으로 나타났으며 특히, 본 추출물 1% 희석용액 20m를 첨가한 군에서 미생물 생육이 억제되는 경향을 보였다. 이는 정22)등이 보고한 오이추출물의 항미생물 효과에서 나타난 것과 같은 거의 유사한 경향을 보이고 있는 것으로 미루어 청미래덩굴(망개) 잎 추출물을 이용한 딸기 쥬스에 적용 시 식품첨가효능이 있을 것으로 생각된다.
- 2x10 CFU/로 control군에 비해 미생물 생육이 억제되었다. 또한, 소르빈산을 첨가한 군과 본 추출물을 첨가한 동등량에서 저장 기간에 따라 거의 유사하게 미생물 생육이 억제 되었다. 한편, 효모와 곰팡이는 저장기간의 초기에 생육억제의 변화가 있었으나, 그이외의 기간에는 세균에 나타난 결과와 비슷한 양상을 보였다.
- 시판 딸기를 구입하여 중량 50g을 잘 씻은 후 분쇄하여 총 용량을 200로 한 각 군에, 청미래덩굴(망개)잎 추출물 1% 희석용액 1.0, 5.0, 10.0 및 20를 첨가하여 25℃에서 저장기간에 따라 미생물의 생육변화를 관찰한 결과 Table 11, 12와 같이 contr이군과 본추출물 1% 희석용액 20.0 첨가 군에서 저장기가에 따른 총 세균은 1.5x103~6.4x107, 2.0x103 ~6.1x11)7 CFU/로 나타났으며, 효모 및 곰팡이에서는 2.OxlO3~6.
- 이상을 종합하면 50% 에탄올 추출물에서 가장 효과가 좋았으며, 멤브레인 필터로 여과하는 것보다 오토클레이브 처리를 하는 것이 항균효과가 높았다.
- 청미래덩굴(망개)잎 시료의 일반성분의 측정한 결과는 Table2와 같이 청미래덩굴(망개)잎의 일반성분 함량은 수분 6.98%, 조단백질 10.96%, 조섬유 18.75%, 조지방 3.76%, 조회분 5.28% 이었으며, 미네랄 함량은 칼슘이 6.67mg/100g으로 가장 높았고, 나트륨을 제외한 그 밖의 나머지 성분들은 극미량이 함유되어 있는 것으로 나타났다. 한편, 청미래덩굴(망개)잎의 일반성분을 분석한 국내의 연구결과는 없으며, 다만 신갈나무잎의 일반성분 함량 중 조지방 277%로 보고한⑹것과 비교하여 청미래덩굴(망개)잎의 함량이다소 많은 것으로 나타났으며, 그 이외의 성분은 유사한 함량으로 나타났다.
- 청미래덩굴(망개)잎 에탄올 추출물을 팥앙금에 대해 0.1, 0.5 및 1.0g/kg과 합성보존제인 소르빈산 0.05, O.lgAg-fr 각각 첨가하여 저장기간에 따라 2 5℃에서 방치한 후 미생물의 생육변화는 1일째 control군 및 첨가한 군에서 저장기간에 따라 25℃ 에서 방치한 후 미생물의 생육변화는 1일째 con- trol군의 경우 1.6x10, CFU/로 나타난 반면, 소르빈산과 본 추출물의 동량(O.lg/kg) 첨가 군에서는 각각 1.3X102 CFUM 1.2x10 CFU/로 control군에 비해 미생물 생육이 억제되었다. 또한, 소르빈산을 첨가한 군과 본 추출물을 첨가한 동등량에서 저장 기간에 따라 거의 유사하게 미생물 생육이 억제 되었다.
- 67mg/100g으로 가장 높았고, 나트륨을 제외한 그 밖의 나머지 성분들은 극미량이 함유되어 있는 것으로 나타났다. 한편, 청미래덩굴(망개)잎의 일반성분을 분석한 국내의 연구결과는 없으며, 다만 신갈나무잎의 일반성분 함량 중 조지방 277%로 보고한⑹것과 비교하여 청미래덩굴(망개)잎의 함량이다소 많은 것으로 나타났으며, 그 이외의 성분은 유사한 함량으로 나타났다.
- 0g에서 저장 1일째 세균이 나타나지 않았다. 한편, 효모와 곰팡이의 경우도 세균에서의 결과와 비슷하였으며 저장 1일째 control군의 경우 7.4xltf CFU/mC 반면 5.0g을 첨가 군에서 4.3x10 CFU/로 현격히 생육이 억제되는 경향을 보였다. 이는 Sano등이 보고한 녹차 또는홍차잎가루에서 항세균2D, 항암 항돌연변이등의 효과가 있는 것으로 나타난 것과 같은 맥락이었다.
후속연구
- 이는 한등이 보고한 몰약에서 얻은 단일물질을 첨가한 것과 비교한 미생물 균수의 억제 결과와 거의 유사하였다. 따라서 청미래덩굴(망개)잎의 추출물은 인공 합성보존제와 비슷한 생육 억제 효과가 있는 것으로 입증되므로, 식품의 안전과 인체에 유해한 자연식품 보존제의 기능이 있을 것으로 생각된다.
- 이는 Sano등이 보고한 녹차 또는홍차잎가루에서 항세균2D, 항암 항돌연변이등의 효과가 있는 것으로 나타난 것과 같은 맥락이었다. 따라서 청미래덩굴(망개)잎이 전례적으로 녹차로도 이용해 온 만큼 앞으로도 현대인들의 건강식품 차로 이용될 수 있게 청미래덩굴(망개)잎의 녹차 기능성에 대하여 연구해 볼 가치가 있다고 생각된다.
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