한의학에서 당뇨병 (소갈) 처방으로 사용되는 생진양혈탕과 황금탕 처방 성분 중의 하나인 오매의 포도당 이용에 대한 효과를 조사하기 위해서 오매를 70% 에탄올로 추출한 후 메탄올과 물을 섞은 용액으로 단계별로 XAD-4 column으로 분획하였다. 본 연구에서는 3T3-L1 섬유아세포와 지방세포에서 오매의 추출 분획물이 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 물질이거나, 인슐린 작용을 향상시키는 인슐린 민감성 물질이거나, 또는 $\alpha$-glucoamylase 활성을 억제하는 물질로 작용하는 지 여부를 조사하였다. 오매 분획물은 인슐린성 물질로 작용하지 않았다. 반면에 20%나 40% 메탄올 분획층은 분화 유도 물질의 작용을 억제하여 3T3-L1 섬유아세포에서 지방세포로의 분화를 억제하였다. 한편 오매 분획층 중 60%, 80% 그리고 100% 메탄올 분획층은 3T3-L1 지방세포에서 인슐린 작용을 향상시키는 인슐린 민감성제로 작용하였다. in vitro 실험에서 20 그리고 40% 메탄올 분획층은 $\alpha$-glucoamylase의 활성을 저하시켜 말토스와 dextrin의 분해를 방해하였다. 그러나 in vivo에서는 오매 에탄올 추출물을 말토스나 dextrin을 투여하기 10분전에 투여하였을 때 최고 혈당 값과 area under the curve 값은 대조군과 차이가 없었다. 결론적으로 오매에는 지방 세포의 분화를 억제하는 물질과 인슐린 민감성을 향상시키는 물질이 함유하고 있으므로 비만을 동반한 당뇨병 및 인슐린 저항성의 치료와 예방에 중요한 역할을 할 것으로 사료된다.
한의학에서 당뇨병 (소갈) 처방으로 사용되는 생진양혈탕과 황금탕 처방 성분 중의 하나인 오매의 포도당 이용에 대한 효과를 조사하기 위해서 오매를 70% 에탄올로 추출한 후 메탄올과 물을 섞은 용액으로 단계별로 XAD-4 column으로 분획하였다. 본 연구에서는 3T3-L1 섬유아세포와 지방세포에서 오매의 추출 분획물이 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 물질이거나, 인슐린 작용을 향상시키는 인슐린 민감성 물질이거나, 또는 $\alpha$-glucoamylase 활성을 억제하는 물질로 작용하는 지 여부를 조사하였다. 오매 분획물은 인슐린성 물질로 작용하지 않았다. 반면에 20%나 40% 메탄올 분획층은 분화 유도 물질의 작용을 억제하여 3T3-L1 섬유아세포에서 지방세포로의 분화를 억제하였다. 한편 오매 분획층 중 60%, 80% 그리고 100% 메탄올 분획층은 3T3-L1 지방세포에서 인슐린 작용을 향상시키는 인슐린 민감성제로 작용하였다. in vitro 실험에서 20 그리고 40% 메탄올 분획층은 $\alpha$-glucoamylase의 활성을 저하시켜 말토스와 dextrin의 분해를 방해하였다. 그러나 in vivo에서는 오매 에탄올 추출물을 말토스나 dextrin을 투여하기 10분전에 투여하였을 때 최고 혈당 값과 area under the curve 값은 대조군과 차이가 없었다. 결론적으로 오매에는 지방 세포의 분화를 억제하는 물질과 인슐린 민감성을 향상시키는 물질이 함유하고 있으므로 비만을 동반한 당뇨병 및 인슐린 저항성의 치료와 예방에 중요한 역할을 할 것으로 사료된다.
Hypoglycemic effect of Prunus mume (PM) extract containing in Sangjinyangheul-tang and Hwangkeumtang, one of the diabetic herbal medicines, was determined by investigating insulin-like action, insulin sensitizing action and a-glucoamylase suppressing action. Insulin-like activity of 3T3-L1 fibroblas...
Hypoglycemic effect of Prunus mume (PM) extract containing in Sangjinyangheul-tang and Hwangkeumtang, one of the diabetic herbal medicines, was determined by investigating insulin-like action, insulin sensitizing action and a-glucoamylase suppressing action. Insulin-like activity of 3T3-L1 fibroblast was not shown with the treatment of PM methanol extracts. However, treatment with 20% or 40% PM methanol extracts and differentiation inducers significantly decreased the differentiation of 3T3-L1 fibroblasts to adipocytes. A significant insulin sensitizing activity was observed in 3T3-L1 adipocytes, giving PM extracts (60%, 80% and 100%) with 1 ng/mL insulin to reach glucose uptake level increased by 50 ng/mL of insulin alone. In addition, 20% and 40% methanol extracts of PM suppressed the a-glucoamylase activity by 30% in vitro. However, there was no significant differences in the peak of serum glucose levels and area under the curve in Sprague Dawley male rats treated with PM ethanol extract or cellulose and 2 g maltose or dextrin/kg body weight. These data suggested that PM extracts contain effective insulin sensitizing compounds, lipid synthesis suppressing compounds and possibly a-glucoamylase suppressing compounds. Therefore, PM extracts are beneficial for anti-diabetic treatment in obese diabetic patients.
Hypoglycemic effect of Prunus mume (PM) extract containing in Sangjinyangheul-tang and Hwangkeumtang, one of the diabetic herbal medicines, was determined by investigating insulin-like action, insulin sensitizing action and a-glucoamylase suppressing action. Insulin-like activity of 3T3-L1 fibroblast was not shown with the treatment of PM methanol extracts. However, treatment with 20% or 40% PM methanol extracts and differentiation inducers significantly decreased the differentiation of 3T3-L1 fibroblasts to adipocytes. A significant insulin sensitizing activity was observed in 3T3-L1 adipocytes, giving PM extracts (60%, 80% and 100%) with 1 ng/mL insulin to reach glucose uptake level increased by 50 ng/mL of insulin alone. In addition, 20% and 40% methanol extracts of PM suppressed the a-glucoamylase activity by 30% in vitro. However, there was no significant differences in the peak of serum glucose levels and area under the curve in Sprague Dawley male rats treated with PM ethanol extract or cellulose and 2 g maltose or dextrin/kg body weight. These data suggested that PM extracts contain effective insulin sensitizing compounds, lipid synthesis suppressing compounds and possibly a-glucoamylase suppressing compounds. Therefore, PM extracts are beneficial for anti-diabetic treatment in obese diabetic patients.
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문제 정의
오매가 갈증을 없애는 것이 신맛에 의한 것일 수도 있지만 당뇨병을 완화하여 혈당을 저하시키고 갈증을 없 애 주는 것 일 수도 있다. 그러 므로 본 연구에서는 오매가 인슐린 작용을 향상시 키는 인슐린 민감성 효과, 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 물질로서 의 효과 그리 고 a -glucoam- ylase의 억제제로의 효과가 있는 지 여부를 조사하였다. 이 연구 결과로 오매가 당뇨병에 미치는 영향을 알았기에 이를 보고하고자 한다.
column으로 분획하였다. 본 연구에서는 3T3-L1 섬유아세포와 지방세포에서 오매의 추출 분획물이 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 물질이거나, 인슐린 작용을 향상시키는인슐린 민감성 물질이 거나, 또는 a -glucoamylase 활성을 억제하는 물질로 작용하는 지 여부를 조사하였다. 오매 분획물은 인슐린성 물질로 작용하지 않았다.
본 연구에서는 3T3-L1 지방세포에 소량의 인슐린인 1 ng/mL과 오매의 분획 물을 처 리 하였을 때 50 ng/mL 인슐린을 처리하였을 때와 마찬가지로 포도당의 흡수를 증가시키는 지를 조사하였다. 저농도의(0.
3T3-L1 섬유아세포는 인슐린, DEX와 I3MX로 조성 된 분화유도물질을 첨가하였을 때 지방세포로 전환되는데(14, 15), 이 기전은 아직 확실하게 알려지지는 ??았다. 본 연구에서는 오매 분획물에 인슐린성 물질로 작용하는 물질이 함유되어 있는 지를 조사하기 위하여 3T3-L1 섬유아세포에 분화 유도물질 중 인슐린을 제외한 DEX와 I3MX와 함께 오매 의 메 탄올 분획 물을 각각 100 11g/ mL의 농도로 처 리하였을 때 그리고 인슐린을 포함한 분화유도물질과 함께 오매 분획물을 각각 100 Ug/nmL로 처리하였을 때 지방세포로의 분화정도를 축적된 중성지방 함량으로 결정하였다. 인슐린성 물질의 존재 여부는 분화를 인슐린을 제외한 유도분화 물질과 함께 오매 분획물을 첨가하였을 때 중성지방 생성량이 대조군인 DMSO를 처리한 것보다 많은 경우에 오매 추출물에 인슐린성 물질이 함유되어 있다고 간주하였다.
그러 므로 본 연구에서는 오매가 인슐린 작용을 향상시 키는 인슐린 민감성 효과, 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 물질로서 의 효과 그리 고 a -glucoam- ylase의 억제제로의 효과가 있는 지 여부를 조사하였다. 이 연구 결과로 오매가 당뇨병에 미치는 영향을 알았기에 이를 보고하고자 한다.
제안 방법
5 N NaOH로 세포를 분해하였다. 분해된 세포를 초산으로 중화시키고 함유된 "c의 함량을 베타 counter(Tri-Carb 2100TR, Packard Bioscience, Boston, MA, US A) 로 측정하였다.
한편 오매 분획 층 중 60%, 80% 그리 고 100% 메 탄올 분획 층은 3T3- L1 지방세포에서 인슐린 작용을 향상시키는 인슐린 민감성 제로 작용하였다. In vitro 실험 에서 20 그리고 40% 메탄올 분획 층은 a -glucoamylase-2] 활성 을 저 하시 켜 말토스와 dextrin의 분해 를 방해하였다. 그러 나 in uiuo에서 는 오매 에탄올 추출물을 말토스나 dextrin을 투여하기 10분전에 투여하였을 때 최고혈당 값과 area under the curve 값은 대조군과 차이 가 없었다.
측정하였다(13). Sprague Dawley 숫컷 백서 (중앙 실험 동물, Seoul, Korea)를 16시간 동안 금식시킨 후 오매 추출물 500 mg/kg 체중을 투여하고 10분 뒤 에 포도당 대신 dextrin 또는 말토스를 투여 하여 讥勇uo에 서 a-glucoamylase효소의 활성 을 조사하였다. 물론 경구 당부하 검사는 췌장의 베타세포에서의 인슐린 분비 정도와 체내 인슐린 민감성과 밀접하게 연관되어 있지 만, 말토스나 dextrin은 포도당과는 달리 소화하는 과정 이더 필요하므로 말토스나 dextrin을 투여한 후 초기 에 혈당 상승은 소화 흡수와 관련이 있는 것으로 간주하였다.
물론 경구 당부하 검사는 췌장의 베타세포에서의 인슐린 분비 정도와 체내 인슐린 민감성과 밀접하게 연관되어 있지 만, 말토스나 dextrin은 포도당과는 달리 소화하는 과정 이더 필요하므로 말토스나 dextrin을 투여한 후 초기 에 혈당 상승은 소화 흡수와 관련이 있는 것으로 간주하였다. 경구당 부하 검 사에서 2 g 말토스나 dextrin/kg B.W.을 경구투여한 후 0, 1), 20, 30, 45, 60, 90, 120 min에 꼬리로부터 혈액을 채취하여 혈청 포도당 농도를 측정하였다. 실험 동물 수는 각 군마다 8마리로 하였다.
실험 동물 수는 각 군마다 8마리로 하였다. 대조군으로 500 mg의 셀룰로즈를 투여하였다. 경구 당부하 검사에서 혈당 변화는 area under the curve를 계산하여 혈당이 상승하는 정도를 나타내는 지표로 사용하였다.
대조군으로 인슐린 0, 1 그리고 50 ng/mL를 사용하였다. 모든 실험은 3 반복하였고, 실험결과는 인슐린과 오매 분획물을 모두 처리하지 않은 것의 값에 대한 비로 나타내었다 (12).
반응 후생성 되는 유리 포도당 양을 측정하여 a-glucoamylase의 활성을 측정하였다. 대조군은 오매 분획층의 용매 인 DMSO만을 처리한 것에서 생성되는 유리 포도당 양으로 결정하였다. 결과는 DMSO만을 처리하였을 때 생성되는 유리 포도당 양에 비 해 오매 분획층을 넣었을 때 유리 포도당의 생성이 감소되는 정도를 백분율(%)로 계산하였다.
2 M 초산 용액을 넣어주었다. 반응 후생성 되는 유리 포도당 양을 측정하여 a-glucoamylase의 활성을 측정하였다. 대조군은 오매 분획층의 용매 인 DMSO만을 처리한 것에서 생성되는 유리 포도당 양으로 결정하였다.
Louis, MO, USA)와 함께 오매 분획물을 각각 100 Ug/mL 첨가하여 5일간 배양하였다. 배양 후 3T3- L1 섬유아세포가 지방세포로 분화되는 정도를 조사하였다. 또한 인슐린을 첨가한 유도 분화물질과 함께 오매 분획 물을 처리하여 5일간 배양하였다.
않다(1-3). 본 연구팀은 동의보감에서 당뇨병의 처방에 많이 사용하는 50여종의 약초들을 중심 으로 먼저 3T3-L1 섬 유아세포와 지방세포를 사용하여 讥 I戒ro에서 인슐린 민감성이나 인슐린 유사성 물질을 탐색하였다. 효과가 있는 한약재의 분획 층은 더 분리하여 단일 물질로 분리하고 있으며, 이 물질들의 효과는 백서 에 장기간 투여하였을 때 인슐린 민감성이나 인슐린 분비능의 변화를 조사하고 있다.
Media를 제거 하고 HEPES 용액 에서 37°에서 30분 동안 배양한 후 1 liCi/mL의 ["C]2-deoxyglucose와 1 mM 포도당을 첨가하여 22°C에서 30분 동안 배양할 때 포도당이 세포 내로의 섭 취 정도를 세포내 에 함유된 "c의 양으로 결정하였다. 비 특이 적 인 포도당 섭 취 를 배 제 하기 위 해서 glucose transporter 4(GLUT4)의 작용을 억 제 하는 cyto B와 함께 배양하였을 때의 포도당 이 동량을 빼고 세포내로 이 동한 포도당의 양을 측정 하였다. 세포는 10 mM 포도당이 함유한 PBS 으로 세척하고 0.
In 疵。에서 오매 추출물이 탄수화물의 소화 흡수에 미치는 영향은 경구 당부하 검사를 변형시켜 측정하였다(13). Sprague Dawley 숫컷 백서 (중앙 실험 동물, Seoul, Korea)를 16시간 동안 금식시킨 후 오매 추출물 500 mg/kg 체중을 투여하고 10분 뒤 에 포도당 대신 dextrin 또는 말토스를 투여 하여 讥勇uo에 서 a-glucoamylase효소의 활성 을 조사하였다.
0R, Golden Valley, MN, USA)하여 상등액을 회전 진공 농축기(Bchi R-114, Essen, Germany)로 35°C에서 감압 농축한 후 동결건조(Ilshin Freeze dryer, Seoul, Korea) 하여 분말 추출시료를 만들었다. 열수분말추출시료 1 g을 증류수 10 mL에 현탁시 켜 현탁액으로 만든 후, amberlite XAD-4 gel을 충진한 유지 컬럼(직 경: 30 mm, 길이: 300 mE으로 정제하였다. 이때 용출액은 메탄올의 양을 증량시켜 극성을 변화시키면서 H2O(Fr.
오매 1 kg에 70% 에탄올 10 L을 넣고 2시간 열수로 2회 반복 추출한 후 거즈로 여과하고 450xg로 원심 분리 (Meg- afuge 1.0R, Golden Valley, MN, USA)하여 상등액을 회전 진공 농축기(Bchi R-114, Essen, Germany)로 35°C에서 감압 농축한 후 동결건조(Ilshin Freeze dryer, Seoul, Korea) 하여 분말 추출시료를 만들었다. 열수분말추출시료 1 g을 증류수 10 mL에 현탁시 켜 현탁액으로 만든 후, amberlite XAD-4 gel을 충진한 유지 컬럼(직 경: 30 mm, 길이: 300 mE으로 정제하였다.
오매를 70% 에탄올로 추출하여 동결건조시 킨 추출물이 in uiuo에 서 a -glucoamylase 활성 을 억 제 하여 식 후 혈 당을 저하시키는 지를 조사하기 위해서 398土62 点 숫컷 백서에게 500 mg/kg B.W의 오매 추출물 또는 셀룰로즈를 공급하고 10분 후에 2 gAg B.W.의 말토스 또는 dexEn을 공급하여 당부하검사를 하였을 때 혈당 변화를 나타내었다. 말토스를 기질로 공급하였을 때 경구 당 부하검사 결과는 최고 혈당값 그리고 혈당 변화 그래프로부터 계산한 area under the curve는 오매 추출물을 투여 한 군과 셀룰로즈를 투여한 대조군 사이 에 차이가 거의 없었다(Fig.
오매의 분획물에 인슐린성 물질이 함유되어 있는 지를 조사하기 위하여(11) 유도 분화물질 중 인슐린을 제외한 0.25 RM의 dexamethasone(DEX, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)과 0.5 mM의 l-methyl~3-isobutylxanthine(IBMX, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)와 함께 오매 분획물을 각각 100 Ug/mL 첨가하여 5일간 배양하였다. 배양 후 3T3- L1 섬유아세포가 지방세포로 분화되는 정도를 조사하였다.
오매의 분획층이 인슐린 민감성 물질이 함유되어 있는 지의 여부를 조사하기 위해서 3T3-L1 지방세포에 인슐린 1 ng/mL과 함께 각 분획층을 넣고 1시간 동안 배양한 후에 포도당 섭취 정도를 인슐린 50ng/m丄를 처리한 결과와 비교하였다. 대조군으로 인슐린 0, 1 그리고 50 ng/mL를 사용하였다.
열수분말추출시료 1 g을 증류수 10 mL에 현탁시 켜 현탁액으로 만든 후, amberlite XAD-4 gel을 충진한 유지 컬럼(직 경: 30 mm, 길이: 300 mE으로 정제하였다. 이때 용출액은 메탄올의 양을 증량시켜 극성을 변화시키면서 H2O(Fr. 1), 20% 메탄올(Fr. 2), 40% 메탄올(Fr. 3), 60% 메 탄올(Fr. 4), 80% 메 탄올(Fr. 5) 및 100% 메탄올 (Fr. 6)으로 나누어 분획하여 감압농축 후 동결건조하여 사용하였다. 각각의 분획 층은 10% DMSO에 1 mg/mL로 녹인 후 sonicator로 20초 동안 진탕하여 침전물 없이 모두 용해시켰다.
지방세포로의 분화정도는 생성된 중성지 방의 함량으로 측정 하였다. 중성 지 방의 농도는 중성 지 방 측정 kit(영동제약, 서울, 한국)로 측정하였다.
이 두 경우 모두에서 대조군은 오매 분획물이 함유되 지 않은 DMSO를 오매 분획물 대신 첨가하여 배양하였다. 지방세포로의 분화정도는 생성된 중성지 방의 함량으로 측정 하였다. 중성 지 방의 농도는 중성 지 방 측정 kit(영동제약, 서울, 한국)로 측정하였다.
한의 학에서 당뇨병 (소갈) 처 방으로 사용되는 생진양혈탕 (生津養血湯)과 황금탕(黃苓湯) 처 방 성 분 중의 하나인 오매의 포도당 이용에 대한 효과를 조사하기 위 해서 오매를 70% 에탄올로 추출한 후 메탄올과 물을 섞은 용액으로 단계별로 XAD-4 column으로 분획하였다. 본 연구에서는 3T3-L1 섬유아세포와 지방세포에서 오매의 추출 분획물이 인슐린처럼 작용하는 인슐린성 물질이거나, 인슐린 작용을 향상시키는인슐린 민감성 물질이 거나, 또는 a -glucoamylase 활성을 억제하는 물질로 작용하는 지 여부를 조사하였다.
대상 데이터
본 실험 에 사용한 오매는 서울 경동시장에서 2002년 8월에 구입한 후 한국한의학연구원에서 엄격하게 감별하고 선정한 것을 사용하였고, 일련 번호를 붙이고 한국한의학연구원 표본실에 보관하고 있다.
본 연구에서 사용한 3T3-L1 섬유아세포는 생물학적 특성이 잘 밝혀져 있고, 인슐린과 같은 유도물질의 존재하에서는 지방세포로 분화되는 특성을 갖고 있어 분화를 촉진하는 물질인 인슐린과 유사한 물질(인슐린성 물질)의 존재 여부를 탐색하는 실험에 사용한다. 3T3-L1 섬유아세포는 인슐린, DEX와 I3MX로 조성 된 분화유도물질을 첨가하였을 때 지방세포로 전환되는데(14, 15), 이 기전은 아직 확실하게 알려지지는 ??았다.
을 경구투여한 후 0, 1), 20, 30, 45, 60, 90, 120 min에 꼬리로부터 혈액을 채취하여 혈청 포도당 농도를 측정하였다. 실험 동물 수는 각 군마다 8마리로 하였다. 대조군으로 500 mg의 셀룰로즈를 투여하였다.
데이터처리
오매 추출물의 세포의 분호-능 효과와 in d泊■。에 서 a -glucoamylase 활성 에미치는 영향은 대조군과의 비를 백분율로 계산하여 one sample t-test 방법으로 통계적 유의성을 검증하였다. In 房&에서의 포도당 섭취 실험 에서도 오매의 효과를 셀룰로즈를 공급한 정 상 대조군과 비 교하여 two sample t-test로 통계적 유의성을 검증하였다. 모든 통계 처리의 유의성 검증은 a =0.
대조군은 오매 분획층의 용매 인 DMSO만을 처리한 것에서 생성되는 유리 포도당 양으로 결정하였다. 결과는 DMSO만을 처리하였을 때 생성되는 유리 포도당 양에 비 해 오매 분획층을 넣었을 때 유리 포도당의 생성이 감소되는 정도를 백분율(%)로 계산하였다.
모든 결과는 세 번 반복에 대한 평균과 표준편차로 계산하여 나타나었다. 지방세포 3T3-L1 에서 포도당 섭취가 증가하는 정도는 인슐린 1 ng/m丄만을 넣고 측정한 값과 인슐린 1 ng/mL와 오매 분획 물을 함께 넣고 측정 한 값을 two sam ple t-test로 통계적 유의 성 을 검증하였다.
지방세포 3T3-L1 에서 포도당 섭취가 증가하는 정도는 인슐린 1 ng/m丄만을 넣고 측정한 값과 인슐린 1 ng/mL와 오매 분획 물을 함께 넣고 측정 한 값을 two sam ple t-test로 통계적 유의 성 을 검증하였다. 오매 추출물의 세포의 분호-능 효과와 in d泊■。에 서 a -glucoamylase 활성 에미치는 영향은 대조군과의 비를 백분율로 계산하여 one sample t-test 방법으로 통계적 유의성을 검증하였다. In 房&에서의 포도당 섭취 실험 에서도 오매의 효과를 셀룰로즈를 공급한 정 상 대조군과 비 교하여 two sample t-test로 통계적 유의성을 검증하였다.
나타나었다. 지방세포 3T3-L1 에서 포도당 섭취가 증가하는 정도는 인슐린 1 ng/m丄만을 넣고 측정한 값과 인슐린 1 ng/mL와 오매 분획 물을 함께 넣고 측정 한 값을 two sam ple t-test로 통계적 유의 성 을 검증하였다. 오매 추출물의 세포의 분호-능 효과와 in d泊■。에 서 a -glucoamylase 활성 에미치는 영향은 대조군과의 비를 백분율로 계산하여 one sample t-test 방법으로 통계적 유의성을 검증하였다.
성능/효과
즉, 오매 분획 층 Fr. 4, 5, 6은 인슐린의 필요량을 30〜50배 감소시 킨다는 것을 알 수 있었다. 그 중에서도 Fr.
5). 그러나 dextrin을 투여하여 경구 당부하 검사를 한 경우에 혈당이 급격하게 증가하지 않고 15분에서 60분까지 거의 일정한 농도를 유지 하는 것으로 보아 q-shicoamylase의 활성을 억 제하여 dextrin 이 천천히 분해되 어 혈당이 급격하게 상승하는 것을 방지한 것으로 추정된다.
5가 포도당 흡수를 가장 많이 증가시 켰다. 그러므로 메탄올 60%, 80% 그리고 100%에서 용출된 분획층에 인슐린 민감성 물질이 함유되어있다는 것을 알 수 있었고, 인슐린 민감성 물질의 후보자들은 비 극성 에 가까운 양쪽성 물질 일 가능성 이 높다고 예측하고 있다.
001)로 유의성 있게 분화를 촉진시 켰다. 또한 분화유도 물질과 함께 분화유도물질을 첨가하였을 때도 1 Ug/mL에서는 122.3土5.3%(p<0.05)로 분화를 촉진시켜 인슐린성 물질로 작용한다는 것을 알 수 있었다. 또한 Kameda 등(18)은 인슐린은 지 방세포에서 지 방분해를 저해하고 지방합성을 촉진 하는 호르몬으로 인슐린처럼 지방합성을 촉진 시키든지 지방분해를 억제하는 물질을 인슐린성 물질이라고 정의하였고, 로얄제 리 로부터 불포화지방산 trans-10-hydroxy-2- decanoic acid와 마황에서 non-pseudoephedrine이 인슐린 성 물질임을 확인하였다.
본 연구의 Fig. 1에서 보여준 것처럼 3T3-L1 지방세포에 처리한 인슐린 농도가 50 ng/mL까지는 인슐린 농도가 높아짐에 따라 포도당 섭취가 증가하였으나 그 후에는 인슐린 농도가 높아져도 포도당 섭취가 증가하지 않았다. 즉, 50 ng/ mL 인슐린 농도가 인슐린 수용체를 통한 인슐린 작용을 나타내는 최대 농도로 이 농도 이하에서는 인슐린 농도에 비 례하여 인슐린 작용이 증가하지만 그 이상 증가하지 않는다는 것을 알 수 있었다.
인슐린을 처리하면 3T3-L1 지방세포의 세포막에 인슐린이 결합하고 이것은 일련의 인슐린 신호전달체계인 insulin receptor substrate- 1(IRS 1)-phosphatidyl inositol-3-phosphate(Pl3 kinase)-Akt의 과정 을 증폭시 킨다. 이 결과로 GLUT4가 세포막으로 translocation되는 것이 증가하게 되어 포도당의 흡수를 증가시키는 것으로 사료된다. 그러므로 3T3-L1 지방세포는 인슐린의 작용력을 향상시키는 물질을 탐색하거나 인슐린 신호전달체계를 연구하는 모델로 적합하다고 사료된다(12, 14).
인슐린을 첨가하지 않고 분획층만을 넣은 상태에서 포도당을 흡수하는 정도를 측정 하였는데 그 값이 기 저 값과 유사하거나 오히려 낮아 분획물이 세포막을 투과적으로 만드는 detergent로 작용하여 비 특이 적 으로 포도당의 흡수를 증가시키는 것은 아니라는 것을 확인하였다. 다른 연구에서도 천연물 추줄물을 처 리하였을 때 인슐린 작용을 증가시 켜 포도당 흡수를 증가시키는 것들이 있다고 보고하였다.
1에서 보여준 것처럼 3T3-L1 지방세포에 처리한 인슐린 농도가 50 ng/mL까지는 인슐린 농도가 높아짐에 따라 포도당 섭취가 증가하였으나 그 후에는 인슐린 농도가 높아져도 포도당 섭취가 증가하지 않았다. 즉, 50 ng/ mL 인슐린 농도가 인슐린 수용체를 통한 인슐린 작용을 나타내는 최대 농도로 이 농도 이하에서는 인슐린 농도에 비 례하여 인슐린 작용이 증가하지만 그 이상 증가하지 않는다는 것을 알 수 있었다. 그러므로 인슐린 민감성 물질을 탐색할 때 저농도의 인슐린과 탐색하고자 하는 물질을 처리하였을 때 포도당의 흡수가 현저하게 증가하는 경우는 처리한 물질을 인슐린 민감성 물질로 간주할 수 있다.
나머지 분획층을 처리한 경우는 DMSO만을 처리한 대조군에 비해 지방 세포로의 전환을 촉진하거나 억제하지 않았다. 즉, 오매에는 지방의 생성을 억제하는 물질이 모두 함유되어 있는 것을 알 수 있었다. 현재 어떤 기전에 의해서 지방 합성이 억제되는 지에 대한 연구를 진행하는 중이다(Table 1).
인슐린 민감성 물질은 제2형 당뇨병의 근본적 인 문제인 인슐린 저항성 을 완화시 켜 소량의 인슐린으로 혈당을 정상화시 키고 궁극적으로 혈당에 필요한 인슐린 양을 저하시켜 고인슐린혈증을 없애줄 수 있는 것으로 알려지고 있다(19, 20). 즉, 인슐린 민감성 물질은 당뇨병뿐 아니라 인슐린 저항성 증후군의 증세를 완화시 킬 수 있을 것으로 사료된다. 결국 인슐린 저항성을 완화시킨다는 것은 인슐린이 인슐린 수용체와 결합한 후 세포내에서 일어나는 신호전달 체계가 원활하게 일어날 수 있도록 도와주어 세포에서 포도당의 이용을 향상시키는것이다.
한편 인슐린을 포함한 분화유도물질과 함께 오매 분획물을 처리하였을 때 중성지방 생성량이 낮은 것은 중성지방의 분화를 방해하는 것으로 비 만을 방지할 수 있는 것으로 간주하였다. 오매 분획 물 중 Fr.
후속연구
그러 나 in uiuo에서 는 오매 에탄올 추출물을 말토스나 dextrin을 투여하기 10분전에 투여하였을 때 최고혈당 값과 area under the curve 값은 대조군과 차이 가 없었다. 결론적으로 오매 에는 지 방 세포의 분화를 억제하는 물질과 인슐린 민감성을 향상시키는 물질이 함유하고 있으므로 비 만을 동반한 당뇨병 및 인슐린 저항성의 치료와 예방에 중요한 역할을 할 것으로 사료된다.
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