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문제 정의
- 본 연구에서는 노화 및 동맥경화억제 작용이 있는 물질을 검색하고자 백모 오가피에서 분리한 terpenoid 및 lignan 성분들의 항산화 작용을 평가하기 위하여 DPPH에 의한 유리기소 거작용 및 저밀도지단백의 산화에 미치는 영향을 측정하였다.
제안 방법
- 5 m2에 증류수를 가하여 10 m/이 되도록 조제)과 3:1로 혼화하였다. 0.7% agarose gel에 각 시료 20 W씩을 점적하고 TBE 완충액(Ris base 10.8 g, boric acid 5.50 g, 0.05 M EDTA 20 m/에 증류수를 가하여 1000 血이 되도록 조제, pH 7.4)을 전개액으로 사용하여 20 mA 의 전류로 agarose gel 전기영동을 시행하였다. 전기영동이 끝난후 Coomassie brilliant blue 염색시액으로 30분간 염색한 후 4°C 에서 탈염을 실시하였다.
- 2, 500 rpm에서 20분간 원심분리한 후, 그 상등액을 취하여 532 nm에서 spectrophotometer를 이용하여 생성된 MDA의 양을 측정하였다. 18)MDA 표준시료로는 10 nM 1, 1, 3, 3-tetra ethoxy propane 용액을 사용시 조제하여 사용하였으며, 각 시료의 LDL 지질과산화 억제 효과를 비교 검토하기 위해서 CiF+에 의해 유도되는 과산화지질의 생성을 50% 억제하는 데 필요한 시료의 농도 (ICgo)를 측정하였다.
- 냉각시켰다. 2, 500 rpm에서 20분간 원심분리한 후, 그 상등액을 취하여 532 nm에서 spectrophotometer를 이용하여 생성된 MDA의 양을 측정하였다. 18)MDA 표준시료로는 10 nM 1, 1, 3, 3-tetra ethoxy propane 용액을 사용시 조제하여 사용하였으며, 각 시료의 LDL 지질과산화 억제 효과를 비교 검토하기 위해서 CiF+에 의해 유도되는 과산화지질의 생성을 50% 억제하는 데 필요한 시료의 농도 (ICgo)를 측정하였다.
- LDL 산화에 미치는 영향을 보고자 agarose gel electrophoresis 를 이용하여 이동거리를 측정하였다. LDL에 각 화합물을 농도별로 첨가한 후 37°C 에서 4시간 산화시키고 speedvac concentrator에서 1시간 농축시킨 후 시료완충액(IM tris base 0.
- 사람 저밀도 지질 단백(LDL)의 분리는 신선한 human plasma 에 aprotinine 0.002%, EDTA, NaN3< 각각 0.05%씩 가해 천천히 혼화한 후 KBrt 가 해 밀도를 조정 (d=1.00&T1.025)하여 1차 초원심분리(40, 000rpm, 4°C, 16hr)하였다. 이때 분리된 VLDL을 제거하고 LDL이 포함된 분획을 취한 후 KBr을 가하여 밀도를 조정(d=1.
- 전기영동이 끝난후 Coomassie brilliant blue 염색시액으로 30분간 염색한 후 4°C 에서 탈염을 실시하였다. 시료를 가하지 않고 산화시킨 LDL曰 이동도(cm)에 대한상대 이동도를 구하여 산화에 미치는 영향을 평가하였다.19)
대상 데이터
- 흰털 오가피 Acanthopanax divaricatus var. 以如o;幼“:畑3에서 분리된 3, 4-seco-lupane 계 성분인 화합물 I(22a-hydroxychiisano- genin), 화합물 U(24-hydroxychiisanogenin), 화합물 III(chiisano- genin), 화합물 IV(chiisanoside)와 free lignan계 성분인 화합물 V(Z-sesamin), 화합물 VI(/-savinin)4, 5)-g-오오진 박사로부터 기증받아서 사용하였다. 비교 약물로는 Acanthopanax속에 함유된 flavonoid 성분인 quercetin(Extrasynthese Co.
- 以如o;幼“:畑3에서 분리된 3, 4-seco-lupane 계 성분인 화합물 I(22a-hydroxychiisano- genin), 화합물 U(24-hydroxychiisanogenin), 화합물 III(chiisano- genin), 화합물 IV(chiisanoside)와 free lignan계 성분인 화합물 V(Z-sesamin), 화합물 VI(/-savinin)4, 5)-g-오오진 박사로부터 기증받아서 사용하였다. 비교 약물로는 Acanthopanax속에 함유된 flavonoid 성분인 quercetin(Extrasynthese Co.)과 kaempferol (Extrasynthese Co.)을 사용하였으며 용매에 녹여 시료로 이용하였다.
데이터처리
- 모든 실험 결과는 평균士표준오차로 나타내었으며 자료분석은 Student's t-test를 이용하여 유의성을 검정하였다.
이론/모형
- 4의 phosphate buffered saline(PBS)으로 4°C에서 48시간 동안 투석시킨 후 사용 흐!였다. LDL중 단백질 정량은 bovine serum albumin을 표준품으로 하는 Lowry's method®1 에 의해 결정흐]였고, LDL의 순수도는 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)로써 확인하였다.
성능/효과
- 2°)흰털오가피에서 분리한 triterpenoid 및 lignan계 성분의 유리기 소거작용에 미치는 활성을 측정한 결과는 Table I과 같다. Inter pene 배당체인 화합물 III 즉 chiisanoside는 Acanthopanax 속에 함유된 flavonoid 성분으로 이미 항산화 작용이 보고用)되어 있는 quercetin 보다 우수한 항산화 작용을 나타내었으며 그의 비당성분인 화합물 I-III 즉 chiisanogenin 및 유도체들은 배당체에 비하여는 작용이 1/20 정도로 감소하는 것으로 나타나서 비당성분보다는 배당체가 더 우수한 항산화 작용을 나타냄을 알 수 있었다. Lignane계 성분인 /-sesamin 및 Z-savinin은 triterpene계 성분보다 더우수한 항산화 활성을 나타내었으며 Z-sesamin의 활성이 가장 우수하였다.
- Inter pene 배당체인 화합물 III 즉 chiisanoside는 Acanthopanax 속에 함유된 flavonoid 성분으로 이미 항산화 작용이 보고用)되어 있는 quercetin 보다 우수한 항산화 작용을 나타내었으며 그의 비당성분인 화합물 I-III 즉 chiisanogenin 및 유도체들은 배당체에 비하여는 작용이 1/20 정도로 감소하는 것으로 나타나서 비당성분보다는 배당체가 더 우수한 항산화 작용을 나타냄을 알 수 있었다. Lignane계 성분인 /-sesamin 및 Z-savinin은 triterpene계 성분보다 더우수한 항산화 활성을 나타내었으며 Z-sesamin의 활성이 가장 우수하였다. 이러한 결과는 한 등 22)이 가시오가피에서 S-GPT S-GOT의 활성 및 BSP를 측정한 결과 lignan glycoside 및 free 1谚nan의 경우가 현저한 활성을 나타내었다는 보고와도 일치하였다.
- 본 실험에서는 지질의 산화정도를 측정하는 방법인 MDA를 표준으로 하는 TBARS 분석을이용하여 측정한 결과는 Table II와 같다. 각 시료의 200|也m/ 의 농도에서 화합물 I(22a-hydroxychiisanogenin)을 제외하고는모든 화합물 이 유의성 있는 LDL 지질과산화억제 작용을 나타내었으며 화합물 VGsesamin)의 활성이 가장 우수하였다. 참깨 중에 들어 있는 (-)-sesamin도 간microsomes에서 지질과산화를억제하였으며弗)운동으로 유도된 혈장의 지질과 산화에 대하여 비타민C나 비타민E는 효과가 없으나 sesamin은 강한 항산화작용31)을 나타낸다고 보고되어 있다.
- 활성이 가장 우수하였다. 또한 유리기소거작용에 있어서는 배당체인 chiisanoside가 비당체 성분들보다는 우수한 항산화활성을 나타내었으나 LDL© 전기 영동 이동도를 이용한 항산화 실험에서는 비당체인 chiisanogenin이 배당체인 chiisano- side보다 산화억제 작용이 강하게 나타났다.
- 백모 오가피에서 분리된 triterpenoid 성분인 22a-hydroxy- chiisanogenin, 24-hydroxychiisanogenin, chiisanogenin, chii- sanoside와 lignan계 성분인 /-sesamin, Z-savinin의 유리기 소거작용 및 저밀도지단 백 산화 억제에 미치는 작용을 측정한 결과 I- sesamin의 활성이 가장 우수하였다. 또한 유리기소거작용에 있어서는 배당체인 chiisanoside가 비당체 성분들보다는 우수한 항산화활성을 나타내었으나 LDL© 전기 영동 이동도를 이용한 항산화 실험에서는 비당체인 chiisanogenin이 배당체인 chiisano- side보다 산화억제 작용이 강하게 나타났다.
- 龄 역시 Acanthopanax 속에 함유된 flavonoid 성분인 kaempferol严의 산화LDL에 대한 항산회작용’%] quercetin>myricetin>kaempferol>apigenin 의 순서로 알려져 있으며 본 실험에서도 역시 quercetin이 강하게 나타났다. 화합물 I(22a-hydroxychiisanogenin)이 화합물 II(24-hydroxychiisanogenin)보다 이동거리 억제작용이 유의성있게 나타났으며 화합물 IU(chiisanogenin)이 화합물 IV (chiisanoside)보다 더 유의성 있는 억제 작용을 나타내어 LDL에대한 항산화 작용은 비당체 성분이 더 우수함을 알 수 있었다. 화합물 V(sesamin)는 LDL의 이동거리 억제 작용이 비교물질로 사용한 quercetin 보다는 적지만 유의성 있는 LDL 산화억제작용을 나타내었다.
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