새송이버섯의 갓과 대를 열수, $50\%$에탄을 및 $100\%$에탄올 등의 추출용매를 사용하여 건물 중량의 50배에 해당되는 부피(w/v)일 때,추출물들의 생리활성을 탐색하였다. 전자 공여작용의 경우 갓의 $50\%$ 에탄올 추출물에서 $88\%$의 높은 전자공여능을 나타내었으며, SOD 유사활성을 측정한 결과 갓의 열수 추출물이 $62.57\%$로 다른 추출물에 비해 높은 활성을 보여 주었다. Tyrosinase 저해 활성의 경우 전자공여능 및 SOD유사활성에서 대보다 갓의 활성이 높았던 것과는 반대로 대의 활성이 높았으며, 그중 $100\%$ 에탄을 추출물에서 $58.57\%$로 비교물질로 사용된 $0.1\%$ L-ascorbic acid보다 $31.29\%$ 더 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다. Angiotensin converting enzyme 저해활성에서도 SOD 유사활성과 비슷하게 갓의 열수 추출물이 $95.14\%$로 매우 높은 활성을 보였으며, 총 폴리페놀 함량의 경우 갓의 열수 및 $50\%$ 에탄을 추출물에서 각각 $1427.25\;mg\%$, $1426.82\;mg\%$로 높은 함량을 나타내었다. 아질산염 소거작용을 측정한 결과 pH 1.2일 때 갓과 대의 소거능이 높게 나타났다. 이와같은 결과는 새송이버섯의 생리활성을 밝혀 기능성 소재로써 이용도가 크게 증가할 것으로 판단된다.
새송이버섯의 갓과 대를 열수, $50\%$ 에탄을 및 $100\%$ 에탄올 등의 추출용매를 사용하여 건물 중량의 50배에 해당되는 부피(w/v)일 때,추출물들의 생리활성을 탐색하였다. 전자 공여작용의 경우 갓의 $50\%$ 에탄올 추출물에서 $88\%$의 높은 전자공여능을 나타내었으며, SOD 유사활성을 측정한 결과 갓의 열수 추출물이 $62.57\%$로 다른 추출물에 비해 높은 활성을 보여 주었다. Tyrosinase 저해 활성의 경우 전자공여능 및 SOD유사활성에서 대보다 갓의 활성이 높았던 것과는 반대로 대의 활성이 높았으며, 그중 $100\%$ 에탄을 추출물에서 $58.57\%$로 비교물질로 사용된 $0.1\%$ L-ascorbic acid보다 $31.29\%$ 더 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다. Angiotensin converting enzyme 저해활성에서도 SOD 유사활성과 비슷하게 갓의 열수 추출물이 $95.14\%$로 매우 높은 활성을 보였으며, 총 폴리페놀 함량의 경우 갓의 열수 및 $50\%$ 에탄을 추출물에서 각각 $1427.25\;mg\%$, $1426.82\;mg\%$로 높은 함량을 나타내었다. 아질산염 소거작용을 측정한 결과 pH 1.2일 때 갓과 대의 소거능이 높게 나타났다. 이와같은 결과는 새송이버섯의 생리활성을 밝혀 기능성 소재로써 이용도가 크게 증가할 것으로 판단된다.
Physiological activities of pileus and stipe extracts from fresh Pleurotus eryngii were examined. Electron donating ability (EDA), superoxide dismutase (SOD)-like activity, tyrosinase inhibitory effect, angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity, total polyphenol contents and nitrite sc...
Physiological activities of pileus and stipe extracts from fresh Pleurotus eryngii were examined. Electron donating ability (EDA), superoxide dismutase (SOD)-like activity, tyrosinase inhibitory effect, angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity, total polyphenol contents and nitrite scavenging ability were examined for extracts of pileus and stipe of Pleurotus eryngii extracted with water, $50\%$ and $100\%$ ethanol. Volume of the solvent used was 50 time of sample on a weight/volume basis. EDA was $88\%$ in $50\%$ ethanol extract (pileus). Also, SOD-like activity was $62.57\%$ in water extract (pileus). Tyrosinase inhibitory effects of all samples were higher than $0.1\%$ L-ascorbic acid solution. ACE inhibitory activity of water extract of pileus was found to be the highest value of $95.14\%$. In addition, total polyphenol contents were the highest in water and $50\%$ ethanol extracts of pileus $(1427.25\;mg\%,\;1426.82\;mg\%)$. Finally, nitrite scavenging ability of $50\%$ ethanol extract of pileus at pH 1.2 showed approximately $95\%$. The results will be useful for understanding the physiological activities of Pleurotus eryngii extracts.
Physiological activities of pileus and stipe extracts from fresh Pleurotus eryngii were examined. Electron donating ability (EDA), superoxide dismutase (SOD)-like activity, tyrosinase inhibitory effect, angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity, total polyphenol contents and nitrite scavenging ability were examined for extracts of pileus and stipe of Pleurotus eryngii extracted with water, $50\%$ and $100\%$ ethanol. Volume of the solvent used was 50 time of sample on a weight/volume basis. EDA was $88\%$ in $50\%$ ethanol extract (pileus). Also, SOD-like activity was $62.57\%$ in water extract (pileus). Tyrosinase inhibitory effects of all samples were higher than $0.1\%$ L-ascorbic acid solution. ACE inhibitory activity of water extract of pileus was found to be the highest value of $95.14\%$. In addition, total polyphenol contents were the highest in water and $50\%$ ethanol extracts of pileus $(1427.25\;mg\%,\;1426.82\;mg\%)$. Finally, nitrite scavenging ability of $50\%$ ethanol extract of pileus at pH 1.2 showed approximately $95\%$. The results will be useful for understanding the physiological activities of Pleurotus eryngii extracts.
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문제 정의
따라서 본 연구에서는 시판되고 있는 새송이 버섯의 갓과 대를 이용한 용매추출 조건에 따른 생리활성을 살펴보고 자 전자공여 작용, SOD 유사 활성, tyrosinase 저해활성, ACE 저해활성, 총 폴리페놀 함량 및 아질산염 소거작용 등의 생리활성 측정을 통해 기능성 식품으로서의 적용을 위한 가능성을 검토하고자 하였다.
제안 방법
2 mm PE film에 밀봉포장하여 냉동고에 보관하면서 사용하였다. 추출용매로는 water, 50% 및 100% ethan이을 사용하였으며, 용매량은 건물 중량의 50배에 해당하는 부피(w/v)를 사용하였고, 시료의 추출은 Fig. 1과 같은 방법으로 실 시 하였 다.
전자공여 작용(electron donationg abilities, EDA)은 Kang 등(15)의 방법을 변형하여 각각의 추출물에 대한 DPPH(a, a-diphenyl-picrylhydrazyl)의 전자공여 효과로 각 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 추출물 0.
전자공여 작용(electron donationg abilities, EDA)은 Kang 등(15)의 방법을 변형하여 각각의 추출물에 대한 DPPH(a, a-diphenyl-picrylhydrazyl)의 전자공여 효과로 각 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 추출물 0.2 mL에 4 X IO" M DPPH 용액(99% ethanol에 용해) 0.8 mL, 99% ethanol 2 mL를 가하여 총액의 부피가 3 mL가 되도록 하였다. 이 반응액을 약 10초간 혼합하고 실온에 15분 방치한 후 분광광도계(UV/ VIS spectrometer, Jasco, Japan)를 사용하여 525 nm에서 흡광도를 측정하였다.
Angiotensin converting enzyme 저해 효과 측정은 Cush- mari과 OndetEi의 방법(18)을 변형하여 행하였다, 즉, 반응 구 는 0.3 M NaCI을 함유하는 0.1 M potassium phosphate buffer(pH 8.3)에 기질인 hippuryl-L-histidyl-L니eucine (HHL, Sigma, H1635) 2.5 mM을 녹인 액 0.15 mL, ACEtSig- ma, A6778, 0.2 unit/mL) 0.1 mL와 각 추출 시료 용액 0.1 mL를 혼합하였으며, 대조구는 추출 시료 대신 증류수 0.1 mL를 첨가하여 37°C에서 30분간 반응시키고, 1 N HC1 0.25 mL 첨가로 반응을 중지시 킨 뒤 ethyl acetate를 1.5 mL 첨가 하였다. Ethyl acetate 층으로부터 용매를 증류시킨 잔사에 1 mL의 증류수를 가하여 추출된 hippuric acid를 분광광도계를 사용하여 228 nm에서 홉 광도를 측정한 후 다음식 에 따라 저해율을 구하였다.
5 mL 첨가 하였다. Ethyl acetate 층으로부터 용매를 증류시킨 잔사에 1 mL의 증류수를 가하여 추출된 hippuric acid를 분광광도계를 사용하여 228 nm에서 홉 광도를 측정한 후 다음식 에 따라 저해율을 구하였다.
총 폴리페놀 함량(total polyphenol content)은 분석 방법으로 널리 사용되고 있는 Folin-Denis 방법(19)을 응용하여 측정하였다. 각각의 추출 조건에 따라 제조된 추출물 0.
아질산염 소거효과(nitrite-scavenging effect)는 Gray와 Dugan(20)의 방법으로 측정하였다. 즉, 1 mM NaNO2 0.1 mL에 각각의 추출물을 0.2 mL를 가하고 여기에 0.1 N HC1 (pH 1.2) 및 0.2 N citrate buffer(pH 3.0, 4.2 및 pH 6.0)를 0.7 mL 가 하여 반응액의 pH를 각각 1.2, 3.0, 4.2 및 6.0으로 달리하여 반응용액의 부피 를 1 mL로 하였다. 이를 37°C에서 1시간 동안 반응시킨 다음 여기 에 2% acetic acid 5 mL, Griess 시 약 0.
0으로 달리하여 반응용액의 부피 를 1 mL로 하였다. 이를 37°C에서 1시간 동안 반응시킨 다음 여기 에 2% acetic acid 5 mL, Griess 시 약 0.4 mL를 가하여 잘 혼합시켜 15분간 실온에서 방치 시 킨 후 분광광도계를 사용하여 520 nm에서 흡광도를 측정 하 여 잔존하는 아질산염량을 구하였다. 그리고 대조구는 Griess 시약 대신 증류수 0.
총 폴리페놀의 함량은 catechin 표준 곡선(R2=1.0)에 의해 측정하였다. Fig.
새송이버섯의 갓과 대를 열수, 50%에탄올 및 100% 에탄 올 등의 추출용매를 사용하여 건물 중량의 50배에 해당되는 부피(w/v)일 때, 추출물들의 생리활성을 탐색하였다. 전자공여작용의 경우 갓의 50% 에탄올 추출물에서 88%의 높은 전자공여능을 나타내었으며, SOD 유사 활성을 측정한 결과 갓의 열수 추출물이 62.
DPPH(l, l-diphenyl~2-picryl hydrazyl)를 이용하여 전자공여 작용을 측정하였다. DPPH는 분자 내 radical을 함유하여 다른 free radical들과 결합하여 안정한 complex를 만들고 있어 항산화 활성이 있는 물질과 만나면 라디칼이 소거되며 이때 고유의 청남색이 엷어지는 특성을 가지고 있어 이색 차를 비색정 량하여 전자공여 능력 을 측정한다(22).
대상 데이터
본 실험에 사용된 새송이 버섯 (7기eumms eryngii)은 가락시장에서 구입하여 갓과 대를 절단하여 실험에 사용하였다. 각 시료는 깨끗이 수세한 후 0.
데이터처리
통계처 리 는 SPSS 10.0 for windows program을 사용하여 각각의 시료에 대해 평균士표준편차로 나타내었으며, 각 군에 따른 유의차 검증은 분산분석(ANOVA, analysis of var- iance)과 Duncan의 다중 검증법 (DMRT, Duncan's multiple range test)(21)으로 유의성을 검증하였다.
A11 values are expressed as mean±SD of triplicate determinations. Means with the same lettered superscrpits in a same column are not significantly different at the 0.05 level by Duncan's multiple range test.
이론/모형
SOD 유사 활성의 측정은 Marklund와 Marklund의 방법을 변형한 Kim 등(16)의 방법을 이용하여 실시하였다. 즉, 각 추출물을 감압 농축한 후 tris-HCl buffer(50 mM tris [hydroxymethyl]amino-methane +10 mM EDTA, pH 8.
Tyrosinase 저해효과 측정은 Wong 등(17)의 방법에 따라 측정하였으며 , tyrosinase . 조효소액은 mushroom ty- rosinase(Sigma, T3824, 110 units/mL)를 50 mM sodium phosphate buffer(pH 7.
아질산염 소거효과(nitrite-scavenging effect)는 Gray와 Dugan(20)의 방법으로 측정하였다. 즉, 1 mM NaNO2 0.
성능/효과
새송이버섯의 갓과 대를 열수, 50%에탄올 및 100% 에탄 올 등의 추출용매를 사용하여 건물 중량의 50배에 해당되는 부피(w/v)일 때, 추출물들의 생리활성을 탐색하였다. 전자공여작용의 경우 갓의 50% 에탄올 추출물에서 88%의 높은 전자공여능을 나타내었으며, SOD 유사 활성을 측정한 결과 갓의 열수 추출물이 62.57%로 다른 추출물에 비해 높은 활성을 보여주었다. Tyrosinase 저해활성의 경우 전자공여능 및 SOD 유사 활성에서 대보다 갓의 활성이 높았던 것과는 반대로 대의 활성이 높았으며, 그 중 100% 에탄올 추출물에서 58.
82 mg%로 높은 함량을 나타내었다. 아질산염 소거작용을 측정한 결과 pH 1.2일 때 갓과 대의 소거능이 높게 나타났다. 이와 같은 결과는 새송이 버섯의 생리활성을 밝혀 기능성 소재로써 이용도가 크게 증가할 것으로 판단된다.
2는 새송이 버섯의 갓과 대를 시료g당 각각 열수, 50% 및 100% 에탄올 등의 추출용매를 50 mL씩 사용하여 추출 조건 에 따른 전자공여능을 나타낸 것이다. 갓과 대의 전자공여능을 살펴보면, 갓의 경우 50% 에탄올 추출물에서 88%의 가장 높은 활성을 나타내었으며, 열수 및 100% 에탄올 추출물에서 는 각각 58.39%, 58.46%로 유사하였다. 대의 경우도 갓과 마찬가지로 50%에 탄올 추출물에서 58.
46%로 유사하였다. 대의 경우도 갓과 마찬가지로 50%에 탄올 추출물에서 58.92%로 높은 활성을 보였으나, 갓과는 달리 열수 및 100% 에탄올 추출물에서 각각 21.42%, 44%의 활성을 가지는 것으로 조사되었다. 본 실험의 비교물질로 사용된 0.
42%, 44%의 활성을 가지는 것으로 조사되었다. 본 실험의 비교물질로 사용된 0.1% 및 1% L-ascorbic acid의 측정 결과 각각 97.40%, 97.46%로 전자공여 작용이 우수하였으며, 갓의 높은 활성을 보였던 50% 에탄 올 추출물과 비교시 약 9% 정도 낮은 수준이었으나, 추출 시 시료량이 나 추출물의 농도를 좀 더 높여준다면 항산화 능력에 대한 이용 가능성이 높을 것으로 판단되었다. Song 등(24)이 보고한 찔레 영지버섯 추출물의 전자공여능과 비교시 1 mg/mL일 때 91.
3은 새송이버섯의 갓과 대를 시료g당 각각 열수, 50% 및 100%에탄올 등의 추출용매를 50 mL씩 사용하여 추출 조건에 따른 SOD 유사 활성을 나타낸 것이다. 갓의 경우 열수, 50% 및 100%에탄올 추출물이 각각 62.57%, 33.35%, 21.33%로 유의적으로 감소하는 경향을 나타내 었으며, 대의 경우도 갓과 마찬가지로 각각 12%, 9.81%, 7.89%로 감소하는 값을 보여주었다. 앞서 실험한 전자공여 작용과 비교시 갓 추출물이 대추출물보다 활성이 높은 것은 비슷하였으나, SOD 유사활성 에서는 열수 추출물이 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다.
89%로 감소하는 값을 보여주었다. 앞서 실험한 전자공여 작용과 비교시 갓 추출물이 대추출물보다 활성이 높은 것은 비슷하였으나, SOD 유사활성 에서는 열수 추출물이 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다. 비교물질로 사용된 0.
앞서 실험한 전자공여 작용과 비교시 갓 추출물이 대추출물보다 활성이 높은 것은 비슷하였으나, SOD 유사활성 에서는 열수 추출물이 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다. 비교물질로 사용된 0.1% 및 1% L-ascorbic acid의 경우 각각 79.93%, 99.07%로 나타났으며, 가장 높은 활성을 나타낸 갓의 열수 추출물에 비해 다소 높은 활성을 보여주었다. 갓과 대의 경우 Kim 등(28)의 보고에서 식물체의 에탄올 주 줄보다 열수주줄물이 효과가 크다는 결과와 유사하였다.
Tyrosinase 는 tyrosine으로부터 3, 4 - dihydroxy phenol alanine(DOPA)과 DOPA-quinone을 거쳐 최종적으로 흑갈색의 melanin 색소 생성에 관여하는 효소로 써 야채나 과실류, 특히 감자의 갈변 현상과 피부에 암갈색의 색소 물질을 침착시키는 원인이 되기도 하며, 페놀성 물질들이 가공이나 저장 중에 갈 변화 하는 원인이 된다(29). Fig. 4는 새송이 버 섯의 갓과 대의열수와 에탄올 농도에 따른 추출 조건일 때 tyrosinase 저해효과를 나타낸 것으로써 갓의 경우 열수, 50% 및 100%에 탄올 추출물이 각각 27.76%, 36.34%, 50.58 %로 유의적으로 증가하는 값을 보였으며, 그 중 100%에 탄 올 추출물이 높은 활성을 나타내었다. 대의 경우도 갓과 유사호!.
58 %로 유의적으로 증가하는 값을 보였으며, 그 중 100%에 탄 올 추출물이 높은 활성을 나타내었다. 대의 경우도 갓과 유사호!.게 에탄올 농도가 증가할수록 값이 각각 46.89%, 54.22 %, 58.57%로 증가하는 경향을 보였으나, 앞서 실험한 전자공여능과 SOD 유사 활성 과 달리 대의 추출 조건에서 높은 활성을 보이는 것으로 조사되었다. 특히 비교물질로 사용된 0.
57%로 증가하는 경향을 보였으나, 앞서 실험한 전자공여능과 SOD 유사 활성 과 달리 대의 추출 조건에서 높은 활성을 보이는 것으로 조사되었다. 특히 비교물질로 사용된 0.1% 및 1% L-ascorbic acid의 경우 각각 27.28%, 99.71%의 활성을 보였으며, 갓과 대의 경우 모든 추출물에서 0.1% L- ascorbic acid보다 높은 활성을 가지 는 것으로 나타났다. Jung 등(30)의 연구에서 보고된 팽이버섯(83%), 표고버섯(68%) 및 느타리버섯(61%)의 tyrosinase 저해율에는 미치지 못하였으나 목이 버섯(9%)보다는 높은 활성을 보였고, 열수 추출물보다 에탄올 추출물에서 tyrosinase 저해능이 높았다는 Kwon 등⑶)의 보고와 일치하는 결과를 보여주었다.
5에 나타내었다. 갓의 경우 열수와 에탄올 50% 및 100% 추출물에서 각각 95.14%, 76.85%,72.24%로 유의적 으로 감소하는 값을 나타내었으며 , 그 중 열수 추출물이 가장 높은 활성을 나타내는 것으로 나타났다. 대의 경우도 갓과 유사하게 열수, 50% 에 탄올 및 100% 에탄 올 추출물에서 각각 51.
24%로 유의적 으로 감소하는 값을 나타내었으며 , 그 중 열수 추출물이 가장 높은 활성을 나타내는 것으로 나타났다. 대의 경우도 갓과 유사하게 열수, 50% 에 탄올 및 100% 에탄 올 추출물에서 각각 51.67%, 51.07%, 36.09%로 감소하는 경향을 나타내었다. 특히 앞서 실험 한 SOD 유사 활성 과 비슷한 경향을 보여 ACE 저해활성 에서도 역시 갓의 열수 추출물에서 활성이 높은 것으로 조사되었고, 특히 새송이 버섯 갓의 열수 추출물은 Kang 등(5)이 연구한 큰 느타리 균사 배양 배지 추출물에서 84.
0)에 의해 측정하였다. Fig. 6은 새송이 버섯의 총 폴리페놀 함량은 갓의 경우 열수, 50%에탄올 및 100% 에탄올 추출물에서 각각 1427.25 mg%, 1426.82 mg%, 1383.48 mg%로 열수 추출물에서 높은 함량을 보였으며, 대의 경우 열수, 50%에탄올 및 100% 에탄올 추출물에서 각각 1326.30 mg%, 1351.13 mg%, 1322.50 mg%로 50% 에탄올 추출물에서 높게 나타났다. 앞서 실험한 SOD 유사 활성 및 ACE 저해활성 과 유사하게 갓의 열수 추출물에서 높은 값을 나타내 상대적으로 다른 추출물보다 높은 polyphenol 함량을 가지 는 것으로 조사되었다.
50 mg%로 50% 에탄올 추출물에서 높게 나타났다. 앞서 실험한 SOD 유사 활성 및 ACE 저해활성 과 유사하게 갓의 열수 추출물에서 높은 값을 나타내 상대적으로 다른 추출물보다 높은 polyphenol 함량을 가지 는 것으로 조사되었다. 이는 Kim 등(25, 35)의 연구에서 팽이버섯과 만가닥 버섯의 물 추출물이 3.
0에서 반응시킨 후 아질산염 소거능을 측정한 결과는 Table 1과 같다. 갓의 경우 아질산염 소거 능 력은 추출용매에 따른 차이를 볼 수 없었으나, 대의 경우에 탄올 농도가 증가할수록 아질산염 소거능력이 증가하는 경향을 나타내었고, pH의 증가에 따라 소거능력이 감소하여 pH에 대해 의존적임을 알 수 있었다. 다만, pH 4.
2에서 갓과 대의열수 추출물은 에탄올 추출물에 비해 그 활성이 다소 높게 나타났다. 아질산염 소거능은 갓 추출물이 대추출물보 다 조금 높은 편이었으며, 갓의 경우 pH 1.2 조건에서 50% 에탄올 추출물이 95.12%로 다른 추출물보다 높은 소거능을 보였다. Gray와 Dugan(20)이 보고한 것과 같이 nitrite는 아민류와 반응하여 발암물질인 nitrosoamine을 형성 하는 과정이 pH가 낮을수록 반응 속도가 빨라져 pH 1.
57%로 다른 추출물에 비해 높은 활성을 보여주었다. Tyrosinase 저해활성의 경우 전자공여능 및 SOD 유사 활성에서 대보다 갓의 활성이 높았던 것과는 반대로 대의 활성이 높았으며, 그 중 100% 에탄올 추출물에서 58.57%로 비교물질로 사용된 0.1% L-ascorbic acid보다 31.29% 더 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다. Angio tensin converting enzyme 저해활성에서도 SOD 유사활성 과 비슷하게 갓의 열수 추출물이 95.
29% 더 높은 활성을 가지는 것으로 조사되었다. Angio tensin converting enzyme 저해활성에서도 SOD 유사활성 과 비슷하게 갓의 열수 추출물이 95.14%로 매우 높은 활성을 보였으며, 총 폴리페놀 함량의 경우 갓의 열수 및 50% 에탄올 추출물에서 각각 1427.25 mg%, 1426.82 mg%로 높은 함량을 나타내었다. 아질산염 소거작용을 측정한 결과 pH 1.
후속연구
2일 때 갓과 대의 소거능이 높게 나타났다. 이와 같은 결과는 새송이 버섯의 생리활성을 밝혀 기능성 소재로써 이용도가 크게 증가할 것으로 판단된다.
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