갈파래는 해양성 조류 중 녹조류의 일종으로 현재 식용으로 이용되지 않고 방치되어 갈파래에 함유되어 있는 유용물질의 효용성을 과학적으로 증명하여 활용가치를 창출하고 해양자원의 이용범위를 확대하는 것은 중요하고도 절실하다. LPS는 그람 음성균의 세포벽을 만드는 물질의 일종으로 NO를 생성시키고 $Ca^{2+}$를 증가시키며 free radicals를 형성하여 간 조직의 막을 파괴하고 간의 지방을 축적시키고 노화를 촉진하는 역할을 한다. 갈파래를 에틸에테르, 에틸아세테이트, 수층으로 분획하고 그 분획을 선 투여하고 LPS를 후 투여한 경우에 항산화효소에서 분획 별 LPS에 대한 예방효과를 관찰하고 효소활성화 최적 분획을 검색하고자 하였다. 흰쥐를 사용하여 갈파래 분획을 14일간 매일 1회 복강 내로 선 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 투여하였다. SOD의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 1.93배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 45.04% ULA군은 46.86%, ULW군은 47.46% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. CAT의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 1.29배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 66.96% ULA군은 46.51%, ULW군은 42.94% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. GPx의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 3.72배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다, 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 34.06% ULA군은 11.52%, ULW군은 24.9% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. 전반적으로 3가지 항산화효소 SOD, CAT, GPx 전부에서 LPS를 투여하면 높던 효소활성이 낮아지고 갈파래분획을 선 투여하면 LPS를 투여하더라도 효소활성이 낮아지지 않고 상승된 높은 효소활성을 나타냄으로서 고-저-고 패턴의 상관성을 보여 주었고 갈파래 분획의 선투여가 LPS에 대한 예방적 보호효과에 중요한 역할을 한 것으로 관찰되었다. 갈파래 분획 중에서 에틸에테르 분획이 실험적으로는 가장 높은 예방적 보호효과틀 나타냈으나 용매의 제거비용 및 해독 면에서 불 때 수층 분획이 실용적으로는 활용가치가 더 높을 것으로 사료되었다.
갈파래는 해양성 조류 중 녹조류의 일종으로 현재 식용으로 이용되지 않고 방치되어 갈파래에 함유되어 있는 유용물질의 효용성을 과학적으로 증명하여 활용가치를 창출하고 해양자원의 이용범위를 확대하는 것은 중요하고도 절실하다. LPS는 그람 음성균의 세포벽을 만드는 물질의 일종으로 NO를 생성시키고 $Ca^{2+}$를 증가시키며 free radicals를 형성하여 간 조직의 막을 파괴하고 간의 지방을 축적시키고 노화를 촉진하는 역할을 한다. 갈파래를 에틸에테르, 에틸아세테이트, 수층으로 분획하고 그 분획을 선 투여하고 LPS를 후 투여한 경우에 항산화효소에서 분획 별 LPS에 대한 예방효과를 관찰하고 효소활성화 최적 분획을 검색하고자 하였다. 흰쥐를 사용하여 갈파래 분획을 14일간 매일 1회 복강 내로 선 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 투여하였다. SOD의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 1.93배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 45.04% ULA군은 46.86%, ULW군은 47.46% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. CAT의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 1.29배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 66.96% ULA군은 46.51%, ULW군은 42.94% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. GPx의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 3.72배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다, 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 34.06% ULA군은 11.52%, ULW군은 24.9% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. 전반적으로 3가지 항산화효소 SOD, CAT, GPx 전부에서 LPS를 투여하면 높던 효소활성이 낮아지고 갈파래분획을 선 투여하면 LPS를 투여하더라도 효소활성이 낮아지지 않고 상승된 높은 효소활성을 나타냄으로서 고-저-고 패턴의 상관성을 보여 주었고 갈파래 분획의 선투여가 LPS에 대한 예방적 보호효과에 중요한 역할을 한 것으로 관찰되었다. 갈파래 분획 중에서 에틸에테르 분획이 실험적으로는 가장 높은 예방적 보호효과틀 나타냈으나 용매의 제거비용 및 해독 면에서 불 때 수층 분획이 실용적으로는 활용가치가 더 높을 것으로 사료되었다.
Lipopolysaccharide(LPS) was posttreated after the 14 day-pretreatment of Ulva lactuca fractions(ULF), and their correlativity to enzymatic activity alteration was investigated in the liver of rats. ULF was intraperitoneally administered into rats at dose of $1m{\ell}/kg$ of 100 mg/kg conc...
Lipopolysaccharide(LPS) was posttreated after the 14 day-pretreatment of Ulva lactuca fractions(ULF), and their correlativity to enzymatic activity alteration was investigated in the liver of rats. ULF was intraperitoneally administered into rats at dose of $1m{\ell}/kg$ of 100 mg/kg concentration for 14 days. On the day 15, $1m{\ell}/kg$ of LPS was injected. The corelativity was examined by measuring the changed values of superoxide dismutase(SOD) in mitochondrial fraction and catalase(CAT), glutathione peroxidase(GPx) in liver homogenate. The results showed that LPS treatment decreased the high values of SOD, CAT, GPx to the low values, but ULF pretreatment increased the low values of SOD, CAT, GPx to the high values. It was suggested that ULF, LPS and antioxidative enzymes like SOD, CAT, GPx had the corelativity of the high-low-high pattern and that the ULF pretreatment played the proper preventive role in the protection against the LPS treatment-induced enzymatic inactivity in the water fraction.
Lipopolysaccharide(LPS) was posttreated after the 14 day-pretreatment of Ulva lactuca fractions(ULF), and their correlativity to enzymatic activity alteration was investigated in the liver of rats. ULF was intraperitoneally administered into rats at dose of $1m{\ell}/kg$ of 100 mg/kg concentration for 14 days. On the day 15, $1m{\ell}/kg$ of LPS was injected. The corelativity was examined by measuring the changed values of superoxide dismutase(SOD) in mitochondrial fraction and catalase(CAT), glutathione peroxidase(GPx) in liver homogenate. The results showed that LPS treatment decreased the high values of SOD, CAT, GPx to the low values, but ULF pretreatment increased the low values of SOD, CAT, GPx to the high values. It was suggested that ULF, LPS and antioxidative enzymes like SOD, CAT, GPx had the corelativity of the high-low-high pattern and that the ULF pretreatment played the proper preventive role in the protection against the LPS treatment-induced enzymatic inactivity in the water fraction.
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문제 정의
갈파래를 에틸에테르, 에틸아세테이트, 수층으로 분획하고 그 분획을 선 투여하고 LPS를 후 투여한 경우에 항산화 효소에서 분획 별 LPS에 대한 예방효과를 관찰하고 효소 활성화 최적 분획을 검색하고자 하였다. 흰쥐를 사용하여 갈파래 분획을 14일간 매일 1회 복강 내로 선 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 투여하였다.
본 연구는 갈파래는 해양성 조류 중 녹조류의 일종으로 갈파래에 함유되어 있는 유용물질의 효용성을 과학적으로 증명하기 위하여 에틸에테르, 에틸아세테이트, 수층으로 분획하여 그 분획물을 선 투여하고 LPS를 후 투여한 경우에 항산화 효소에서 분획별 LPS에 대한 예방효과를 관찰하고 효소 활성화 최적 분획을 검색하고자 하였다.
제안 방법
Fig- 1과 같이 갈파래 추출 분획은 건조중량의 20배에 해당하는 95% ethanol를 침지시켜 8시간 추출한 다음 evapo- rator를 이용하여 주줄물을 농죽하고 극성도 차이에 의한 방버으로 5개 분획을 언었고 이 중 타 선행연구에서 유효한 효자가 있는 에틸에테르분획, 에틸 아세테이트분획, 수층 분획을 시료로 사용하였다.
에틸에테르분획군(ULE; Ulva lactucu ethyl ether fraction-pretreated and LPS-posttreated group), 에틸아세테이트븐획군(ULA; Ulva lactuca ethyl acetate fraction-pretreated and LPS-posttreated group), 수층분획구(ULA; Ulva lactuca \'/ater fraction-pretreated and LPS-posttreated group) 등의 시료군에는 100 ㎎/㎏ 농도의 각각의 분획을 1㎖/kg씩 복강니에 14일간 매일 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 1㎖/kg 의 용량을 복강 내로 투여하였다. LPS를 투여하고 절식 시킨 뒤 5시간 후에 ether로 마취하고 해부하여 간을 적출하여 실험하였다.
제공받았고 7일 동안 적응시켰다. 실험횐쥐는 난괴법에 따라 총 35마리를 7마리씩 5군으로 나누었고 군별로 cage에 분리시키고 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였으며 22±FC의 온도와 60+5% 상대습도로 유지시켰다. 정상군 (NOR; normal group)은 15일 동안 1 ㎖/kg of 0.
9% saline을 매일 투여한 후 15일째 되는 날 LPS를 5ng/kg의 농도로 만늘어 IM/kg의 용량으로 복강 내로 투여하였다. 에틸에테르분획군(ULE; Ulva lactucu ethyl ether fraction-pretreated and LPS-posttreated group), 에틸아세테이트븐획군(ULA; Ulva lactuca ethyl acetate fraction-pretreated and LPS-posttreated group), 수층분획구(ULA; Ulva lactuca \'/ater fraction-pretreated and LPS-posttreated group) 등의 시료군에는 100 ㎎/㎏ 농도의 각각의 분획을 1㎖/kg씩 복강니에 14일간 매일 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 1㎖/kg 의 용량을 복강 내로 투여하였다. LPS를 투여하고 절식 시킨 뒤 5시간 후에 ether로 마취하고 해부하여 간을 적출하여 실험하였다.
실험횐쥐는 난괴법에 따라 총 35마리를 7마리씩 5군으로 나누었고 군별로 cage에 분리시키고 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였으며 22±FC의 온도와 60+5% 상대습도로 유지시켰다. 정상군 (NOR; normal group)은 15일 동안 1 ㎖/kg of 0.9% saline을 투여하고 대조군(CON; LPS-treated gr이고)은 14일 동안 l㎖/kg of 0.9% saline을 매일 투여한 후 15일째 되는 날 LPS를 5ng/kg의 농도로 만늘어 IM/kg의 용량으로 복강 내로 투여하였다. 에틸에테르분획군(ULE; Ulva lactucu ethyl ether fraction-pretreated and LPS-posttreated group), 에틸아세테이트븐획군(ULA; Ulva lactuca ethyl acetate fraction-pretreated and LPS-posttreated group), 수층분획구(ULA; Ulva lactuca \'/ater fraction-pretreated and LPS-posttreated group) 등의 시료군에는 100 ㎎/㎏ 농도의 각각의 분획을 1㎖/kg씩 복강니에 14일간 매일 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 1㎖/kg 의 용량을 복강 내로 투여하였다.
최적 분획을 검색하고자 하였다. 흰쥐를 사용하여 갈파래 분획을 14일간 매일 1회 복강 내로 선 투여하고 15일 째 되는 날에 LPS를 투여하였다.
대상 데이터
Table 1과 같이 실험동물은 체중 170-180 g 내외의 생후 7주 암컷 흰쥐(Sprague-Dawley)를 대구 효창 사이언스로부터 제공받았고 7일 동안 적응시켰다. 실험횐쥐는 난괴법에 따라 총 35마리를 7마리씩 5군으로 나누었고 군별로 cage에 분리시키고 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였으며 22±FC의 온도와 60+5% 상대습도로 유지시켰다.
갈파래는 부산광역시 기장읍 앞바다 및 광안리 수변 공원 주변에 서식하는 것을 채취하고 수 회 세척하여 소금 성분을 최대한 제거한 후 그늘에서 건조 하여 사용하였다.
2 mM cytochrome C 150 μ1를 넣은 혼합에 sample 8 μ1를 넣고/ xanthine oxidase원액을 10 μ1를 넣어 mixing한 후 Elisa 에 이용하여 550 nm에서의 흡광도 변화를 2 min 동안 측정하였다. 효소의 활성도는 표준액으로 Sigma사의 superoxide dismutase standard를 사용하여 측정하였다.
데이터처리
본 실험에 대한 모든 실험 결과는 평균치와 표준편차로 나타내었고, 통계적 유의성은 SPSS를 이용한 ANOVA로 검정하였다.
이론/모형
단백질의 정량은 Lowry 등의 방법[18]에 의해서 750 nm 에서 흡광도를 측정 하고 표주 단백 시료를 bovine serum albumin (BSA)으로 정량하였다.
성능/효과
46% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. CAT 의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 1.29배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 66.
이 반응에서 촉매 효소인 GPx는 selenium 원자가 공유 결합되어있는 것이 특징이며 上2。2와 lipid peroxide와 같은 peroxides의 다양한 종류늘을조절한다[22]. Table 4와 같이 GPx의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 3.72배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 34.
SOD의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 1.93배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE 군은 45.
중요한 역할을 한 것으로 관찰되었다. 갈파래 분획 중에서 에틸에테르 분획이 실험적으로는 가장 높은 예방적 보호효과를 나타냈으나 용매의 제거비용 및 해독 면에서 놀 때 수층 분획이 실용적으로는 활용가치가 더 높을 것으로 사료되었다.
중요한 역할을 한 것으로 관찰되었다. 갈파래 분획 중에서 에틸에테르 분획이 실험적으로는 가장 높은 예방적 보호효과를 나타냈으나 용매의 제거비용 및 해독 면에서 볼 때 수층분획이 실용적으로는 활용가치가 더 높을 것으로 사료되었다.
29배 정드로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ILE군은 66.96% ULA군은 46.51%, ULW군은 42.94% 상하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효스 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다.
Table 2와 같이 SOD의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 L93배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 45.04% ULA군은 46.86%, ULW군은 47.46% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다.
72배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 34.06% ULA군은 11.52%, ILW군은 24.9% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다.
72배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 34.06% ULA군은 11.52%, ULW군은 24.9% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다.
Table 2와 같이 SOD의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 L93배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 45.04% ULA군은 46.86%, ULW군은 47.46% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다.
29배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다. 갈파래 분획별로 활성도를 보면 대조군에 비해 ULE군은 66.96% ULA군은 46.51%, ULW군은 42.94% 상승하였으며 갈파래 분획의 선 투여가 LPS의 후 투여로 인한 효소 불활성을 예방하여 활성을 높이는 역할을 한 것으로 나타났다. GPx의활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 3.
Cu, Zn SOD는 곰팡이나 mammalian cell 에 존재하고15, 2이 Mn-SOD의 경우 진 핵, 원핵 생물에 존재하는 것으로 진핵생물은 mitochondria 에 원핵생물은 matrix 혹은 periplasmic space에 주로 존재한다[26]. 본 실험에서 초점으로 맞춘 Fe-SOD는 박테리아나 blue green algae, protozoa등에 존재하지만[25] 최근에는 육상고등생물에게 존재하는 것으로 밝혀졌다. Table 2와 같이 SOD의 활성도는 대조군에서는 정상군에 비해 L93배 정도로 낮았으며 LPS를 투여함으로써 활성도를 낮춘 것으로 나타났다.
전반적으로 3가지 항산화효소 SOD, CAT, GPx 전부에서 LPS를 투여하면 높던 효소활성이 낮아지고 갈파래분획을 선 투여하면 LPS를 투여하더라도 효소활성이 낮아지지 않고 상승된 높은 효소활성을 나타냄으로서 고-저-고 패턴의 상관성을 보여 주었고 갈파래 분획의 선투여가 LPS에 대한 예방적 보호 효과에 중요한 역할을 한 것으로 관찰되었다. 갈파래 분획 중에서 에틸에테르 분획이 실험적으로는 가장 높은 예방적 보호효과를 나타냈으나 용매의 제거비용 및 해독 면에서 놀 때 수층 분획이 실용적으로는 활용가치가 더 높을 것으로 사료되었다.
전반적으로 3가지 항산화효소 SOD, CAT, GPx 전부에서 LPS를 투여하면 높던 효소활성이 낮아지고 갈파래분획을 선 투여하면 LRS를 투여하더라도 효소활성이 낮아지지 않고 상승된 높은 효소활성을 나타냄으로서 고-저-고 패턴의 상관성을 보여 주었고 갈파래 분획의 선투여가 LPS에 내한 예방적 보호 효과에 중요한 역할을 한 것으로 관찰되었다. 갈파래 분획 중에서 에틸에테르 분획이 실험적으로는 가장 높은 예방적 보호효과를 나타냈으나 용매의 제거비용 및 해독 면에서 볼 때 수층분획이 실용적으로는 활용가치가 더 높을 것으로 사료되었다.
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