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문제 정의
- 본 연구는 한국산 인삼 및 인삼제품의 ginsenosides 분 석법 개발 및 ginsenosides 함량을 동정, 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다.
제안 방법
- 한국산 인삼 및 인삼제품 중의 ginsenosides의 분석조건은 다음과 같다. HPLC는 HITACHI 655A-II를 사용하였으며 검출기는 SHIMADU SPD-10Avp, 검출파장은 208nm로 측정하였다. columne GL Science사의 Inertsil ODS-3v(5 μm, 4.
- 또한 용리액을 포함한 다른 분석 조건은 상기 HPLC에 의한 ginsenoside와 동일한 방법을 사용하였다. Mass의 측정은 positive ion mode (MS + Na)로 측정하였다. 또한 mass spectrometry의 조건은 다음과 같이 설정하였다.
- 이에 본 연구는 국산 인삼 및 일반 소비자가 일상적으로 음용하고 있는 인삼차에 함유된 사포닌을 alcohol로 추출하여 사포닌을 HPLC로 분리하고 각각의 사포닌의 동정은 LC-MS에 의한 질량분석계로 분석하였다. 또한, 한국산 인삼 및 인삼차에 함유되어 있는 각각의 사포닌의 종류 및 함량을 측정하고 시판되고 있는 인삼차 속에 함유되어 있는 사포닌의 종류와 양을 연구하였다.
- 이에 본 연구는 국산 인삼 및 일반 소비자가 일상적으로 음용하고 있는 인삼차에 함유된 사포닌을 alcohol로 추출하여 사포닌을 HPLC로 분리하고 각각의 사포닌의 동정은 LC-MS에 의한 질량분석계로 분석하였다. 또한, 한국산 인삼 및 인삼차에 함유되어 있는 각각의 사포닌의 종류 및 함량을 측정하고 시판되고 있는 인삼차 속에 함유되어 있는 사포닌의 종류와 양을 연구하였다.
- 표준제품 ginsenosides# (Table 2>와 같은 조건으로 분석하여 얻은 각각의 ginsenoside peak 면적을 HITACHI Chromato-integrator D-2500으로 측정하였다. 표준제품의 ginsenosides 함량과 면적을 구해 각각의 검량선을 작성하였다.
- 표준제품의 ginsenoside Rgl, ginsenoside Rb2, ginsenoside Rc 및 ginsenoside Rd 4종류를 HPLC로 분석하고 각각의 ginsenoside의 retention time및 최소 검출량을 구한 것이 (Table 3>이다. (Table 3>에서 알 수 있는 것과 같이 0~2000 ng의 범위에서는 상관계수가 r2=0, 99로 좋은 결과를 얻었다.
- 표준제품 ginsenosides# (Table 2>와 같은 조건으로 분석하여 얻은 각각의 ginsenoside peak 면적을 HITACHI Chromato-integrator D-2500으로 측정하였다. 표준제품의 ginsenosides 함량과 면적을 구해 각각의 검량선을 작성하였다. 한편 한국산 인삼의 추출물을 HPLC로 분석하고 얻은 면적을 표준 제품의 검량선에서 각각의 ginsenoside 함량을 산출하였다.
- 표준제품의 ginsenosides 함량과 면적을 구해 각각의 검량선을 작성하였다. 한편 한국산 인삼의 추출물을 HPLC로 분석하고 얻은 면적을 표준 제품의 검량선에서 각각의 ginsenoside 함량을 산출하였다.
대상 데이터
- HPLC는 HITACHI 655A-II를 사용하였으며 검출기는 SHIMADU SPD-10Avp, 검출파장은 208nm로 측정하였다. columne GL Science사의 Inertsil ODS-3v(5 μm, 4.0 x 250 mm)를 사용하였으며 또한 용리액은 (A): acetonitrile, (B): water을 사용하고, 분리조성은 A/B의 혼합 배합에 의한 gradient법을 인 용하였다(Table 1). 유속은 1 mL/min, column 온도는 SOt), chart speed는 2.
- 금산산 6년근 인삼을 대구시내 백화점에서 구입하였으며 중간 부분 15 g을 잘게 썰어 사용하였다. 자른 시료를 250 mL의 삼각 플라스크에 넣고 100%의 ethanol 50 mL를 첨가해 80℃의 water bath에 20분간 데운 후 grinder에 갈아 여과한 후 100 mL으로 정용하였으며 이것을 10분간 원심분리한 후, 상등액 20 /μl를 HPLC에 직접 주입하였다.
- 분말 인삼차는 고려인삼 산업주식회사(충남 천안시 소재)에서 제조한 것으로 대구 시내 백화점에서 구입하였다. 고려인삼차 1.
- 분말 홍삼차는 고려인삼 산업주식회사에서 제조한 것으로 대구 시내 백화점에서 구입하였다. 고려 홍삼차를 1.
- 인삼의 표준시약으로는 Extrasynthese사의 제품ginsenoside Rgl, ginsenoside Rb2, ginsenoside Rc및 ginsenoside Rd의 4종류를 일본 오사카에서 구입하여 사용하였다. 또한 각각의 ginsenoside를 1~2 mg으로 정 량한 후 5 mL의 vial에 넣고 ethanol 2 mL를 첨가해 용해시켜 ginsenoside의 표준용액을 만들었다.
이론/모형
- (Figure 2>에서 알 수 있듯이 3종 류의 인삼추출물의 chromatograme 유사한 p&ttem을 가지고 있었고 중요한 Peak는 7종류가 검출되었다. 각각의 Peak를 동정하기 위하여 LC-MS에 의한 질량분석법 을 이용하였으며, 각각의 Peak에 해당하는 마스스펙트[M+Na]+를 (Figure 3>에 나타내었다. HPLC의 peak.
- 각각의 ginsenoside의 동정은 Finnigan LCQ Advantage MAX형의 Liquid Chromatography- Mass spectrometry (LC-MS)(Finnigan, San Jose, CA)에 따라 실시하였다. 분리용 columne Inertsil ODS-3v (4.
성능/효과
- 8%이므로 1 g/dw로 환산해 보면 약 29, 269 μg로서 ginsenoside의 함량이 가장 많은 것을 알 수 있다. 7종류의 ginsenosides의 분포를 조사한 결과 분말 인삼차, 홍삼차 모두 Rbl의 비율이 33.8~46.7%로 가장 많았고, 다음으 로 Rc가 30.9~31.0%의 순이였으며 이 두 물질이 차지하는 비율이 전체의 64~78%가 되었다. 따라서 분말 인삼차 와 분말 홍삼차에는 공통 성분이 존재함을 알 수 있다.
- 그 결과는 다음과 같다. ginsenoside Rgl과 Re의 분리는 어 렵다고 알려져 있으나 본 연구에서 사용한 acetonitrile와 water의 농도 조절법에 의해 두 물질을 완전히 분리하는 것이 가능하게 되었다. 한국산 인삼, 분말 인삼차 및 분말 홍삼차중의 ginsenoside 함량은 7종류의 총 함량이 가장 많은 것이 분말 홍삼차로서 1 g/dw 당 23, 211 μg 포함되어 있었으며 분말 인삼차에는 1 g/dw 당 15, 217 μg로 홍 삼차와 비교하여 적음을 알 수 있었다.
- 인삼근은 분말 인삼차 및 분말 홍삼차와 비슷하게 Rbl가 가장 많이 함유되어 있음을 알 수 있었으며 ginsenoside의 함량은 Rbl, Rgl, Rc순으로 나타났다. 그리고 ginsenoside 함량을 비교하여 보면 분말 인삼차와 분말 홍삼차에는 두 번째로 Rc가 함량이 많았으나 인삼근 에는 Rgl이 두 번째로 함량이 많이 있음을 알 수 있었다. 이러한 원인은 분명치는 않으나 분말 인삼차의 제조과정 중 열처리과정에서 ginsenoside의 일정 부분이 열변성 또는 형질변화를 일으킨 것으로 사료된다.
- (Table 3>에서 알 수 있는 것과 같이 0~2000 ng의 범위에서는 상관계수가 r2=0, 99로 좋은 결과를 얻었다. 또한 최소 검출량을 얻은 결과 Rgl, Rb2 및 Rd는 31.3-58.2 ng였으나, Rc는 183 ng으로 다른 3종류의 ginsenosTde와 비교해서 1/3~1/5정도 검출감도가 저하됐다. 그 이유는 Rc의 배당체가 tz-L-arabinose(furanose)이유로 자외부 흡수가 저하되었기 때문이라고 사료된다.
- 이러한 원인은 분명치는 않으나 분말 인삼차의 제조과정 중 열처리과정에서 ginsenoside의 일정 부분이 열변성 또는 형질변화를 일으킨 것으로 사료된다. 또한, 분말 인삼차 와 인삼근의 ginsenoside 구성 성분의 차이가 있음을 알 수 있었다.
- 2%로 미량임을 알 수 있었다. 인삼근은 분말 인삼차 및 분말 홍삼차와 비슷하게 Rbl가 가장 많이 함유되어 있음을 알 수 있었으며 ginsenoside의 함량은 Rbl, Rgl, Rc순으로 나타났다. 그리고 ginsenoside 함량을 비교하여 보면 분말 인삼차와 분말 홍삼차에는 두 번째로 Rc가 함량이 많았으나 인삼근 에는 Rgl이 두 번째로 함량이 많이 있음을 알 수 있었다.
- 따라서 분말 인삼차 와 분말 홍삼차에는 공통 성분이 존재함을 알 수 있다. 즉ginsenoside의 함량으로 보면 Rbl, Rc, Re 의 순이 었고, 또한 Rf 및 Rd는 전체의 1.5~2.2%로 미량임을 알 수 있었다. 인삼근은 분말 인삼차 및 분말 홍삼차와 비슷하게 Rbl가 가장 많이 함유되어 있음을 알 수 있었으며 ginsenoside의 함량은 Rbl, Rgl, Rc순으로 나타났다.
- ginsenoside Rgl과 Re의 분리는 어 렵다고 알려져 있으나 본 연구에서 사용한 acetonitrile와 water의 농도 조절법에 의해 두 물질을 완전히 분리하는 것이 가능하게 되었다. 한국산 인삼, 분말 인삼차 및 분말 홍삼차중의 ginsenoside 함량은 7종류의 총 함량이 가장 많은 것이 분말 홍삼차로서 1 g/dw 당 23, 211 μg 포함되어 있었으며 분말 인삼차에는 1 g/dw 당 15, 217 μg로 홍 삼차와 비교하여 적음을 알 수 있었다. 한편 인삼근에는 1g/dw 당 총 ginsenosidee] 함량이 29, 268 ug인 것을 알 수 있었으며 인삼차와 홍삼차에 포함되어 있는 ginsenoside의 양은 Rbl, Rc, Re의 순서 였으며 국산 인 삼근의 ginsenoside 함유량의 순서는 Rbl, Rgl, Rc순으 로 나타났다.
- 한국산 인삼, 분말 인삼차 및 분말 홍삼차중의 ginsenoside 함량은 7종류의 총 함량이 가장 많은 것이 분말 홍삼차로서 1 g/dw 당 23, 211 μg 포함되어 있었으며 분말 인삼차에는 1 g/dw 당 15, 217 μg로 홍 삼차와 비교하여 적음을 알 수 있었다. 한편 인삼근에는 1g/dw 당 총 ginsenosidee] 함량이 29, 268 ug인 것을 알 수 있었으며 인삼차와 홍삼차에 포함되어 있는 ginsenoside의 양은 Rbl, Rc, Re의 순서 였으며 국산 인 삼근의 ginsenoside 함유량의 순서는 Rbl, Rgl, Rc순으 로 나타났다. 인삼차와 인삼근의 ginsenoside 구성 성분 에는 차이가 있음을 알 수 있었다.
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