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문제 정의
- 본 연구는 산란계의 맹장에서 분리한 Lactobacillus fermentum YL-3을 생균제로 이용하기 위한 방법으로 최대한 안전하게 균주를 장내에까지 도달할 수 있도록 미세캡슐을 제조하고, 유산균 캡슐 제조시 이용되는 다양한 첨가물이 미생물의 활성에 미치는 영향과, 완성된 캡슐의 장기보존 중에 생균제의 viability의 변화를 조사하여 보다 효율적인 캡슐제조법을 제시하고자 하였다.
- 본 연구에서는 생균제로서의 L. fermentum YL-3의 미세캡슐화 를 시도하였고, 균체에 대한 캡슐 재료의 영향을 조사함으로써 캡슐제조시 균에 대한 손상을 최소화하고자 하였다. 그리고 제조된 캡슐의 내산성과 저장성을 조사하여 유산균의 내산성과 저장능의 증진에 적합한 캡슐의 제조 및 보존 방법을 연구하였다.
제안 방법
- 유산균 캡슐의 내산성능을 조사하기 위히여 먼저, L fermentum YL-3를 42C에서 250 mL의 Lactobacilli MRS broth에 18시간 동안 배양하고 4"C에서 10, 000 rpm으로 10분간 원심분리하여 균체를 모은 뒤 6M HC1 을 이용한 PH 2의 수용액 1 niL을 가한 다음 0, I, 2, 3, 4시간 간격으로 I mL씩 취하고 원심분리하여 MRS agar에서 3TC, 24시간 동안 배양하여 생균수를 측정하여 L. fermentum YL-3 생균의 내산성을 측정하였다. 그리고 미세캡슐의 경우, 미사캡슐 수용액 1mLL를 원심분리히.
- 1.fermentum YL-3를 microencapsulation방법으로 캡슐을 제조하고, Kim 등(11)의 macrocapsule과 크기 및 형태, 생존율을 비교하고자 하였다. 먼저, microcapsule—] 제조는 L.
- L. fermentum YL-3 균체, microcapsule, 그리고 macrocapsule을 각각 4℃와 25℃에서 10일간 저장하면서 일별로 생균수를 측정하여 저장성을 비교하였다. 그 결과 Fig 6에서와 같이 25<,C에서는 macrocapsule0] 가장 좋은 활성을 나타낸 반면, microcapsule 은 생균체보다 더 낮은 활성을 보였다.
- 75g씩 첨가한 후 10분간 교반하면서 6M HC1 로 전체수용익의 pH가 2, 3, 4가 되도록 첨가하여 미세캡슐을 제조하였다. 그리고 confocal laser scanning microscopy(CLSM, MRC-1024, Bio-Rad Inc., Hemel hempstead, England, Kr/Ar Ion Laser)를 이용하여 microcapsule의 형태와 capsulation된 균체의 형태를 관찰하였다. 먼저, L fermentum YL-3 배양액을 원심분리하여 균체를 모은 뒤 saline buffer로 2회 세척하고 균체를 pyronin Y(Sigma, USA)로 10분간 염색한 후 원심분리를 통하여 3회 세척하여 미세캡슐방법으로 캡슐을 제조하였다.
- fermentum YL-3의 내산성에 미치는 영향을 즉정하였다. 그리고 macroencapsule이 L. fermentum YL-3의 내산성에 미치는 영향도 미세캡슐과 동일한 방법으로 pH 2에 노출시킨 후 생균수를 측정하여 분석하였다.
- fermentum YL-3 균주를 42C에서 250 mL의 Lactobacilli MRS broth에 18시간 동안 배양하고 4%?에서 10, 000 rpm으로 10분간 원심분리하여 (Vision Science, Korea) 균체를 모은 뒤 saline biiflfet로 2회 세척하고 균체를 5% sodium alginate 용액과 1 : 3(w/w)의 비율로 섞어 교반기로 균질화를 하였다. 그리고 soybean oil이 75 niL가 들어있는 비이커에 균체와 sodium alginate가 교반된 혼합물을 첨가하고 교반기로 5-10분간 균질화하여 W/O 상으로 유도하고, Tween 80과 Span 80을 각각 0.75g씩 첨가한 후 10분간 교반하면서 6M HC1 로 전체수용익의 pH가 2, 3, 4가 되도록 첨가하여 미세캡슐을 제조하였다. 그리고 confocal laser scanning microscopy(CLSM, MRC-1024, Bio-Rad Inc.
- fermentum YL-3를 250 mL의 MRS broth에서 4ZC에서 18시간 동안 4℃에서 10, 000 rpm으로 10분간 원심분리하여 균체를 농축하였다. 그리고 농축된 균체를 5%(w/V)alginate solution과 1:3(w/w)의 비율로 교반기(IKA Labotech- nik, Germany)를 이용하이 균질화한 경우와 균체에 1 niL으] 1.5% (w/v) CaCL s이니tion(Jiinsci)을 첨가한 경우 그리고 균체에 1mL의 soybean 이를 첨가한 경우를 각각 25℃에서 1시간 동안 방치하면서 0, 5, 10, 20, 30, 60분 간격으로 plate count 방법을 이용하여 생균수를 측정하였다.
- 1% Tween 20을 사용하였다. 그리고 앞의 과정을 통해 균질화된 용액을 peristaltic pump (Vision Scientific Co., Ltd., Korea)를 이용하여 멸균된 l.5%(w/v) 염화칼슘용엑에 적하하면서 캡슐의 견고성을 강화하기 위하여 I시간 정도 magnetic bai로 교반하여 macrocapsule을 제조하였다. 그리고 제조된 macrocapsule의 형태와 생균수를 분석하여 미세캡슐과 비교 분석하였다.
- 5%(w/v) 염화칼슘용엑에 적하하면서 캡슐의 견고성을 강화하기 위하여 I시간 정도 magnetic bai로 교반하여 macrocapsule을 제조하였다. 그리고 제조된 macrocapsule의 형태와 생균수를 분석하여 미세캡슐과 비교 분석하였다. 생균수의 측정방법으로는 MRS agar를 이용한 plate count법으로 측정하였다.
- fermentum YL-3의 미세캡슐화 를 시도하였고, 균체에 대한 캡슐 재료의 영향을 조사함으로써 캡슐제조시 균에 대한 손상을 최소화하고자 하였다. 그리고 제조된 캡슐의 내산성과 저장성을 조사하여 유산균의 내산성과 저장능의 증진에 적합한 캡슐의 제조 및 보존 방법을 연구하였다. 먼저, 인체에 무독성인 sodium alginate를 캡슐의 원료로 선택하여 microcapsule을 제조한 결과 생균제가 alginate 캡슐에 포집되어 존재하는 것을 확인할 수 있었고, pH 2에서 120-126 pim 크기의 견고한 캡슐을 제조하였으며, pH가 증가할수록 크기가 커지지만 pH 3 이상에서는 견고성이 너무 떨어져 캡슐의 형성이 어려워 오히려 pH 3에서의 캡슐보다 작은 형태를 나타내었다.
- 또한, 캡슐 제조시 첨가되는 보존제와 계면활성제로 사용되는 Tween 80과 Span 80 그리고 캡슐을 용해시킬 때 사용되는 0.1 M sodium citrate 용액이 균체에 미치는 영향을 조사하기 위하여 L. firmentum YL-3를 250 mL의 MRS broth에서 42℃에서 18시간 동안 VC에서 10, 000 rpm으로 10분간 원심분리하여 균체를 농축하였다 그리고 농축된 균체를 l%(w/v) Tween 80과 1 %(w/v) Span 80 을 각각 첨가한 경우와 0.1 M sodium citrate용액을 첨가한 경우를 각각 25℃에서 1시간 동안 방치하면서 0, 5, 10, 20, 30. 60분 간격으로 plate count 방법을 이용하여 생균수를 측정하였다.
- , Hemel hempstead, England, Kr/Ar Ion Laser)를 이용하여 microcapsule의 형태와 capsulation된 균체의 형태를 관찰하였다. 먼저, L fermentum YL-3 배양액을 원심분리하여 균체를 모은 뒤 saline buffer로 2회 세척하고 균체를 pyronin Y(Sigma, USA)로 10분간 염색한 후 원심분리를 통하여 3회 세척하여 미세캡슐방법으로 캡슐을 제조하였다. 그리고 제조한 미세캡슐을 0.
- 여 미세캡슐을 모은 뒤 6M HC1 을 이용한 pH 2의 수용액 I mL를 가한 다음 0, 1, 2, 3, 4시간 동안 노출시킨 후 원심분리하여 각각의 시간대에서 캡슐을 분리하였다. 분리된 캡슐을 saline buffcr로 원심분리하여 세척후 saline buffer 1 mL와 0.1 M sodium citrate(pH 8.0)용액 9 mL의 혼합액에 캡슐을 넣어 5-10분간 교반하여 캡슐을 용해한 후 1 mL를 취히여 MRS agar에서 37℃, 24시간 동안 배양하여 생균 수를 측정함으로써 미세캡슐이 L. fermentum YL-3의 내산성에 미치는 영향을 즉정하였다. 그리고 macroencapsule이 L.
- 그리고 미세캡슐의 경우, 미사캡슐 수용액 1mLL를 원심분리히.여 미세캡슐을 모은 뒤 6M HC1 을 이용한 pH 2의 수용액 I mL를 가한 다음 0, 1, 2, 3, 4시간 동안 노출시킨 후 원심분리하여 각각의 시간대에서 캡슐을 분리하였다. 분리된 캡슐을 saline buffcr로 원심분리하여 세척후 saline buffer 1 mL와 0.
- 03% FITC(fluorescein isothiocyanate, Sigma, USA)로10-15분간 염색한 후 멸균된 증류수로 3회 세척하였다. 염색된 미세캡슐을 CLSM의 광학적 절편(optical sectioning)과 Z축 연속 영상을 재구성하여 캡슐의 형태 및 균체를 관찰하였다.
대상 데이터
- Sodium alginate와 L. fermentum YL-3를 이용하여 microcapsule 을 pH 2, 3, 4에서 제조하여 CLSM으로 각각의 캡슐을 측정한 결과 pH 2, 3, 4에서 각각 !2O-I26nm, 444-486 401-463 pim의 캡슐이 제조되었다(Table 1). 그리고 균체와 캡슐을 서로 다른 형광염색액으로 염색하여 CLSM으로 관찰한 결과 캡슐내에 균체가 포집되어 있음을 확인할 수 있었다(Fig.
- fermentum YL-3를 캡슐화 하였다. L. fermentum YL-3를 microcapsule 제조방법과 동일한 방법으로 배양하고 원심분리한 균체와 보존제, sodium alginate의 비율을 1 :1 :2(w/w/w)로 섞어 균질화 하였다 보존제로는 2.5% MSG와 3% ascorbic acid, 2.5% mannitol, 0.1% Tween 20을 사용하였다. 그리고 앞의 과정을 통해 균질화된 용액을 peristaltic pump (Vision Scientific Co.
- 7%(w/v) agar(Junsei,Japan)가 첨가된 Lactobacilli MRS agar를 사용하였다. Microcapsule의 피막 물질로는 sodium alginate(Kanto, Japan)을 사용하였고 캡슐을 경 화시키기 위해 6M HCi(Wako, Japan)을 이용하였다. 그 외 부재 료로 soybean oil(Shindongbang, Korea), Tween 80(Difco, USA), Span 80(Showa, Japan)를 사용했으며, Microcapsule을 제조하기 위하여 피막물질로 sodium alginate, calcium chloride(SCI, Korea)와 보존제로는 ascorbic acid(Shinyo, Japan), mannitoI(Kanto, Japan), Tween 80, monosodium glutamate(MSG, Acros, USA)를 사용하였다.
- 가축용 사료 생균제로 이용된 유산균주는 28-32주령 산란계의 맹장에서 분리한 L. fermentum YL-3를 이용하였으며 (10), Lactobacilli MRS broth(Difco, USA)에서 37℃, 24시간 동안 배양하고 1주일마다 계대배양하여 사용하였다. 그리고, L.
- Microcapsule의 피막 물질로는 sodium alginate(Kanto, Japan)을 사용하였고 캡슐을 경 화시키기 위해 6M HCi(Wako, Japan)을 이용하였다. 그 외 부재 료로 soybean oil(Shindongbang, Korea), Tween 80(Difco, USA), Span 80(Showa, Japan)를 사용했으며, Microcapsule을 제조하기 위하여 피막물질로 sodium alginate, calcium chloride(SCI, Korea)와 보존제로는 ascorbic acid(Shinyo, Japan), mannitoI(Kanto, Japan), Tween 80, monosodium glutamate(MSG, Acros, USA)를 사용하였다. 그리고 캡슐을 용해하여 생균수를 즉정하기 위해 sodium citrate(Shinyo, Japan)를 이용하였다.
- fermentum YL-3를 이용하였으며 (10), Lactobacilli MRS broth(Difco, USA)에서 37℃, 24시간 동안 배양하고 1주일마다 계대배양하여 사용하였다. 그리고, L. firmentum YL-3의 생균수 측정을 위한 배지로는 1.7%(w/v) agar(Junsei,Japan)가 첨가된 Lactobacilli MRS agar를 사용하였다. Microcapsule의 피막 물질로는 sodium alginate(Kanto, Japan)을 사용하였고 캡슐을 경 화시키기 위해 6M HCi(Wako, Japan)을 이용하였다.
이론/모형
- 그리고 농축된 균체를 5%(w/V)alginate solution과 1:3(w/w)의 비율로 교반기(IKA Labotech- nik, Germany)를 이용하이 균질화한 경우와 균체에 1 niL으] 1.5% (w/v) CaCL s이니tion(Jiinsci)을 첨가한 경우 그리고 균체에 1mL의 soybean 이를 첨가한 경우를 각각 25℃에서 1시간 동안 방치하면서 0, 5, 10, 20, 30, 60분 간격으로 plate count 방법을 이용하여 생균수를 측정하였다.
- 그리고 미세캡슐과 비교하기 위한 niacrocapsule의 제조는 Kim 등(11)이 사용한 방법을 이용하여 L. fermentum YL-3를 캡슐화 하였다. L.
- 그리고 제조된 macrocapsule의 형태와 생균수를 분석하여 미세캡슐과 비교 분석하였다. 생균수의 측정방법으로는 MRS agar를 이용한 plate count법으로 측정하였다.
성능/효과
- 그리고 캡슐제조시 사용되는 재료가 균체에 미치는 영향을 조사한 결과 캡슐의 주재료인 sodium alginate와 CaCl2는 균의 활성을 떨어뜨리는 것으로 조사되었고 그 외의 재료인 sodium citrate, Tween 80, Span 80, soybean oile 균의 활성에 별다른 영향을 주지 않는 것으로 나타났다. 또한 microcapsule과 macrocapsule을 제조하여 각각의 캡슐의 내산성과 저장성을 비교한 결과, 내산성은 microcapsule이 가장 우수한 것으로 나타났고, 저장성은 WC에서는 microcapsule, 25"C에서는 macrocapsule에서의 생균제 활성이좋은 것으로 확인되었다.
- 캡슐의 피막성분인 sodium alginate가 균체의 활성에 미치는 영향을 조사한 결과, 초기 5.2X10° CFU/mL이던 균수가 시간이 경과됨에 따라 서서히 감소하여 60분이 경과 후에는 2.7X10" CFU/ mL로 나타내었다. 이는 sodium alginate는 캡슐의 주원료로서 항균성을 나타내어 균수가 감소한다는 보고와 일치한 결과를 나타 내었다(11).
- fermentum YL-3 균체, microcapsule, 그리고 macrocapsule을 각각 4℃와 25℃에서 10일간 저장하면서 일별로 생균수를 측정하여 저장성을 비교하였다. 그 결과 Fig 6에서와 같이 25<,C에서는 macrocapsule0] 가장 좋은 활성을 나타낸 반면, microcapsule 은 생균체보다 더 낮은 활성을 보였다. 또한 microcapsulee 25℃ 에서 저장한지 3일째부터 캡슐의 분해가 시작되어 10일째에는 캡슐의 형태를 관찰할 수 없었다.
- 이는 수용성인 5% NT-alginate 용액에 균체를 혼합시킨 뒤 HCl을 가하면 HCl의 H 이온과 sodium alginate의 Na- 이온이 서로 치환되면서 W/O상의 alginate 혼합물이 경화되어 균체가 포집된 캡슐을 이루게 되는데, pH 4 에서는 pH 2에 비하여 HCl에 의한 H*이온의 첨가량이 적어져 W/O상의 sodium alginate의 Na * 이온과 치환되는 H* 이온의 수가 모자라서 캡슐이 온전하게 형성되지 못하고 흩어짐 또는 덩어리짐이 일어나는 것으로 생각된다. 그리고 각각의 pH에서 생균수를 측정한 결과 pH 2, 3, 4에서 각각 1.2X 107, 8.1 X 107, 1.1 XIO8 CFU/mL을 나타내어 pH가 높을수록 캡슐의 견고성은 떨어지지만 캡슐내에 생존하는 균수가 많음을 알 수 있었고, 이는 상대적으로 pH에 의한 H* 이온의 영향을 덜 받기 때문으로 생각된다. 따라서 pH 2에서 제조된 미세캡슐이 생존율은 상대적으로 낮지만 견고한 캡슐형태를 나타내기 때문에 활용가치면에서 볼 때 가장 적합할 것으로 사료된다.
- fermentum YL-3를 이용하여 microcapsule 을 pH 2, 3, 4에서 제조하여 CLSM으로 각각의 캡슐을 측정한 결과 pH 2, 3, 4에서 각각 !2O-I26nm, 444-486 401-463 pim의 캡슐이 제조되었다(Table 1). 그리고 균체와 캡슐을 서로 다른 형광염색액으로 염색하여 CLSM으로 관찰한 결과 캡슐내에 균체가 포집되어 있음을 확인할 수 있었다(Fig. 1). 또한 pH 4에서 제조된 캡슐은 그 견고성이 떨어져 일정한 크기와 형태를 유지하지 못하고 풀어짐과 덩어리짐을 보이며 pH 2에서 제조한 캡슐은 작지만 매우 견고한 상태로 생성됨을 확인할 수 있었다(Fig.
- 그리고 미세캡슐 제조에 사용되는 soybean oil이 균체에 미치는 영향을 시간대별로 조사한 결과, 최초 균수인 2.9X10° CFU/ 이와 최종 균수인 2.7X109 CFU/mLe 큰 차이가 없는 것으로 나타났다. 이로 미루어 볼 때 미세캡슐 제조시 W/O상을 형성하기 위해 사용되는 oil의 균체에 대한 영향은 거의 없는 것으로 판단되었다.
- 반면, 캡슐 후의 생균제의 생존율은 pH가 증가할수록 높게 나타났다. 그리고 캡슐제조시 사용되는 재료가 균체에 미치는 영향을 조사한 결과 캡슐의 주재료인 sodium alginate와 CaCl2는 균의 활성을 떨어뜨리는 것으로 조사되었고 그 외의 재료인 sodium citrate, Tween 80, Span 80, soybean oile 균의 활성에 별다른 영향을 주지 않는 것으로 나타났다. 또한 microcapsule과 macrocapsule을 제조하여 각각의 캡슐의 내산성과 저장성을 비교한 결과, 내산성은 microcapsule이 가장 우수한 것으로 나타났고, 저장성은 WC에서는 microcapsule, 25"C에서는 macrocapsule에서의 생균제 활성이좋은 것으로 확인되었다.
- 의 첨가는 매우 중요한 과정 중 하나이다. 따라서 캡슐 제조시 첨가되는 CaCl2가 생균제에 미치는 영향을 살펴볼 필요가 있는데, 초기 5.7X108 CFU/mL 에서 10분민에 1.3X108 CFU/mL로 감소하였으며, 최종 60분 후에는 9.0X10, CFU/mL정도로 감소되었다. 이는 CaC,가 해리되면서 생성되는 Cl-이온 때문으로 사료되며, 이는 캡슐제조시 유 산균의 생존율을 감소시키는 직접적인 원인으로 추정된다.
- 1). 또한 pH 4에서 제조된 캡슐은 그 견고성이 떨어져 일정한 크기와 형태를 유지하지 못하고 풀어짐과 덩어리짐을 보이며 pH 2에서 제조한 캡슐은 작지만 매우 견고한 상태로 생성됨을 확인할 수 있었다(Fig. 2). 종합적으로 볼 때, pH가 낮을수록 작지만 견고한 캡슐이 제조되고 pH가 올라갈수록 캡슐의 크기가 커지지만 pH 3 이상이 되면 캡슐의 견고성이 떨어져 크기를 형성하지 못하고 상대적으로 작아지는 현상을 나타내었다.
- 4X107 CFU/mL 로 나타나 캡슐제조 과정 중 두 물질에 대한 노출이 유산균의 활성에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 사료된다. 또한, 불용성의 calcium alginate 캡슐을 Na 이온으로 재치환시켜 수용성의 sodium alginate를 형성함으로써 캡슐 내에 유산균의 활성을 확인할 수가 있는데, 이러한 sodium citrate가 균체에 미치는 영향을 조사한 결과(Fig. 4)는 초기 1.2X109 CFU/mL에서 최종 1.1X10° CFU/mL로 균체에 별다른 영향을 나타내지 않음을 알 수 있었다.
- 5와 같다. 먼저, 무처리 균 체는 pH 2에서 방치한지 I시간이 지난 후 균수가 60% 이상 감소했고, 4시간 후에는 75% 이상 사멸하여 유산균을 구강 섭취할 경우 대부분의 균들이 사멸하여 장내까지 도달하지 못하고 생균 제로서의 기능을 발휘하지 못할 것으로 생각된다. 그리고 macrocapsuled 경우 처음 1시간 동안은 96% 이상 균의 활성을 나타내었으나, 4시간 후에는 약 40% 정도의 균수가 사멸되었다.
- 그리고 제조된 캡슐의 내산성과 저장성을 조사하여 유산균의 내산성과 저장능의 증진에 적합한 캡슐의 제조 및 보존 방법을 연구하였다. 먼저, 인체에 무독성인 sodium alginate를 캡슐의 원료로 선택하여 microcapsule을 제조한 결과 생균제가 alginate 캡슐에 포집되어 존재하는 것을 확인할 수 있었고, pH 2에서 120-126 pim 크기의 견고한 캡슐을 제조하였으며, pH가 증가할수록 크기가 커지지만 pH 3 이상에서는 견고성이 너무 떨어져 캡슐의 형성이 어려워 오히려 pH 3에서의 캡슐보다 작은 형태를 나타내었다. 반면, 캡슐 후의 생균제의 생존율은 pH가 증가할수록 높게 나타났다.
- 먼저, 인체에 무독성인 sodium alginate를 캡슐의 원료로 선택하여 microcapsule을 제조한 결과 생균제가 alginate 캡슐에 포집되어 존재하는 것을 확인할 수 있었고, pH 2에서 120-126 pim 크기의 견고한 캡슐을 제조하였으며, pH가 증가할수록 크기가 커지지만 pH 3 이상에서는 견고성이 너무 떨어져 캡슐의 형성이 어려워 오히려 pH 3에서의 캡슐보다 작은 형태를 나타내었다. 반면, 캡슐 후의 생균제의 생존율은 pH가 증가할수록 높게 나타났다. 그리고 캡슐제조시 사용되는 재료가 균체에 미치는 영향을 조사한 결과 캡슐의 주재료인 sodium alginate와 CaCl2는 균의 활성을 떨어뜨리는 것으로 조사되었고 그 외의 재료인 sodium citrate, Tween 80, Span 80, soybean oile 균의 활성에 별다른 영향을 주지 않는 것으로 나타났다.
- 7X109 CFU/mLe 큰 차이가 없는 것으로 나타났다. 이로 미루어 볼 때 미세캡슐 제조시 W/O상을 형성하기 위해 사용되는 oil의 균체에 대한 영향은 거의 없는 것으로 판단되었다.
- 2). 종합적으로 볼 때, pH가 낮을수록 작지만 견고한 캡슐이 제조되고 pH가 올라갈수록 캡슐의 크기가 커지지만 pH 3 이상이 되면 캡슐의 견고성이 떨어져 크기를 형성하지 못하고 상대적으로 작아지는 현상을 나타내었다. 이는 수용성인 5% NT-alginate 용액에 균체를 혼합시킨 뒤 HCl을 가하면 HCl의 H 이온과 sodium alginate의 Na- 이온이 서로 치환되면서 W/O상의 alginate 혼합물이 경화되어 균체가 포집된 캡슐을 이루게 되는데, pH 4 에서는 pH 2에 비하여 HCl에 의한 H*이온의 첨가량이 적어져 W/O상의 sodium alginate의 Na * 이온과 치환되는 H* 이온의 수가 모자라서 캡슐이 온전하게 형성되지 못하고 흩어짐 또는 덩어리짐이 일어나는 것으로 생각된다.
후속연구
- 그리고, Kim 등(11)의 방법을 이용하여 제조한 macrocapsulee 캡슐 1 g당의 생존균수는 10" CFU/mL 수준으로 microcapsule의 1 mL당 평균 IO, CFU/mL보다 높게 나타나 유산균의 생존율은 좋았지만 크기가 1-2 mm로 식품에 적용하기에는 제한적이기 때문에, 비록 macrocapsule보다는 낮은 생존율이지만 다양한 식품에 적용이 가능한 미세캡슐의 활용가치가 더 좋을 것으로 생각된다.
- 이와 같은 결과로 미루어볼 때 microcapsulee 액상의 경우 유산균발효유의 후첨가와 같은 산성식품에 한정되는 반면, 건조방법을 이용하여 분말화가 가능하다면 캡슐내의 수소이온의 유지된 미세한 캡슐의 형태로 건조식품 및 제과 • 제빵 분야와 같은 식품뿐만 아니라 동물 사료와 같은 다양한 고형상태의 분야에서 적용이 가능할 것으로 생각되어진다. 따라서 미세캡슐이 macrocapsule보다 생존율은 낮지만 크기가 작아 다양한 범위에서 사용이 가능하며, 내산성도 높아 다양한 장내 유용활성을 나타내는 생균제를 보다 안전하게 장까지 도달시킬 수 있을 것으로 생각된다. 그리고 이러한 미세 캡슐 및 미세캡슐 적용 식품은 4℃와 같은 냉장온도에서 보관하여야 생균제의 활성이 유지될 것으로 사료된다.
- 이는 캡슐 제조시 이용된 수소 이온의 온도에 따른 해리정도 차이에 의한 것으로 생각된다. 이와 같은 결과로 미루어볼 때 microcapsulee 액상의 경우 유산균발효유의 후첨가와 같은 산성식품에 한정되는 반면, 건조방법을 이용하여 분말화가 가능하다면 캡슐내의 수소이온의 유지된 미세한 캡슐의 형태로 건조식품 및 제과 • 제빵 분야와 같은 식품뿐만 아니라 동물 사료와 같은 다양한 고형상태의 분야에서 적용이 가능할 것으로 생각되어진다. 따라서 미세캡슐이 macrocapsule보다 생존율은 낮지만 크기가 작아 다양한 범위에서 사용이 가능하며, 내산성도 높아 다양한 장내 유용활성을 나타내는 생균제를 보다 안전하게 장까지 도달시킬 수 있을 것으로 생각된다.
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