Liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS)에 의한 당유자 과실의 리모노이드 함량 분석 Analysis of the Limonoid Contents of Dangyuja (Citrus spp.) by Liquid Chromatography-mass Spectrometry (LC-MS)원문보기
Limonoid계 화합물인 limonin, nomilin, limonin glucoside의 함량을 당유자 과실의 성숙시기별 조직부위별로 liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS)를 이용하여 정량하였다. Nomilin과 limonin의 함량은 6월 미성숙기부터 증가하였으며 nomilin은 10월 성숙기, limonin은 12월 성숙후기에서 그 함량이 최고치를 나타냈으며, 두 가지 화합물 모두 3월 완숙후기에는 함량이 현저하게 감소하였다. 이와 대조적으로 limonin glucoside 함량은 10월 성숙기부터 완숙 후기에 이르기까지 지속적으로 증가하였다. 세 가지 성분 모두 과실이 완숙함에 따라 peel에서의 함량은 감소하는 경향을 보인 반면, juice sac에서의 함량은 증가하는 경향을 보였다. 완숙후기에 채취한 당유자 과실의 조직부위별 limonin, nomilin 및 limonin glucoside의 함량을 분석한 결과, limonin과 nomilin은 씨앗에서 함량이 가장 높게 나타났고, 다음으로는 segment membrane가 높게 나타났다. 반면 limonin glucoside는 segment membrane에서 함량이 가장 높은 것으로 확인되었으며, 그 다음은 juice sac에서 함량이 높게 나타났다.
Limonoid계 화합물인 limonin, nomilin, limonin glucoside의 함량을 당유자 과실의 성숙시기별 조직부위별로 liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS)를 이용하여 정량하였다. Nomilin과 limonin의 함량은 6월 미성숙기부터 증가하였으며 nomilin은 10월 성숙기, limonin은 12월 성숙후기에서 그 함량이 최고치를 나타냈으며, 두 가지 화합물 모두 3월 완숙후기에는 함량이 현저하게 감소하였다. 이와 대조적으로 limonin glucoside 함량은 10월 성숙기부터 완숙 후기에 이르기까지 지속적으로 증가하였다. 세 가지 성분 모두 과실이 완숙함에 따라 peel에서의 함량은 감소하는 경향을 보인 반면, juice sac에서의 함량은 증가하는 경향을 보였다. 완숙후기에 채취한 당유자 과실의 조직부위별 limonin, nomilin 및 limonin glucoside의 함량을 분석한 결과, limonin과 nomilin은 씨앗에서 함량이 가장 높게 나타났고, 다음으로는 segment membrane가 높게 나타났다. 반면 limonin glucoside는 segment membrane에서 함량이 가장 높은 것으로 확인되었으며, 그 다음은 juice sac에서 함량이 높게 나타났다.
The contents of limonin, nomilin and limonin glucoside in different tissues of dangyuja (Citrus spp.) were measured during fruit growth and maturation by liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS). Both nomilin and limonin contents increased from June, peaked in October and in December, respecti...
The contents of limonin, nomilin and limonin glucoside in different tissues of dangyuja (Citrus spp.) were measured during fruit growth and maturation by liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS). Both nomilin and limonin contents increased from June, peaked in October and in December, respectively, and then decreased afterwards. In contrast, the content of limonin glucoside increased from October and remained at high levels throughout the maturation. The contents of limonin, nomilin and limonin glucoside in peel decreased gradually throughout the growth and the trends of changes were similar to each other. However, all three limonoid contents in juice sac increased dramatically at the end of fruit maturation. The highest concentration of limonin and nomilin was observed in seed, followed by segment membrane, whereas the highest limonin glucoside concentration was observed in segment membrane, followed by juice sac.
The contents of limonin, nomilin and limonin glucoside in different tissues of dangyuja (Citrus spp.) were measured during fruit growth and maturation by liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS). Both nomilin and limonin contents increased from June, peaked in October and in December, respectively, and then decreased afterwards. In contrast, the content of limonin glucoside increased from October and remained at high levels throughout the maturation. The contents of limonin, nomilin and limonin glucoside in peel decreased gradually throughout the growth and the trends of changes were similar to each other. However, all three limonoid contents in juice sac increased dramatically at the end of fruit maturation. The highest concentration of limonin and nomilin was observed in seed, followed by segment membrane, whereas the highest limonin glucoside concentration was observed in segment membrane, followed by juice sac.
Limonoid 화합물의 HPLC/MS 분석. Limonin과 nomilin의혼합표준품 및 당유자 과실 추출물을 HPLC/MS로 분석하였을 때의 chromatogram은 Fig.
2). 각시 기별 과실은 슬라이스 하였고, 성숙후기 및 완숙기 과실은 peel과 juice sac로 별도 분리하였으며, 완숙후기(3월) 과실은 조직부위별로 flavedo, albedo, segment membrane, juice sac, seed로 분리하여 동걸건조 한 후 -8(TC에 보관하면서 분석 시료로 이용하였다.
으로 확인되었다. 당유자 과실 주줄물에서도 표준품의 머무름 시간과 동일한 시간대에 m/z 4기과 515 peak가 확인되어 이 두 peak를기준으로 정량분석 하였다.
표준품은 limonin과 nomilin의 경우 acetonitrile에 녹인 후 각각의 농도가 0.1, 0.5, 1.0, 5.0 및 10.0jig/m/이 되도록 혼합제조 하였으며, limonin glucoside의 경우 물에 녹인 후 농도가 0.1, 0.5, 1.0, 5.0 및 10.0 ug/m/이 되도록 제조하여 김량선 작성에 사용하였다.
대상 데이터
시료. 본 실험에 사용된 당유자 과실은 제주시내에 위치한 제 주 득 산사의 농장에서 미숙기(6월), 성숙초기(10월), 성숙후기(12 월), 완숙초기(2월) 및 완숙후기(3월)에 채취되었다(Fig. 2). 각시 기별 과실은 슬라이스 하였고, 성숙후기 및 완숙기 과실은 peel과 juice sac로 별도 분리하였으며, 완숙후기(3월) 과실은 조직부위별로 flavedo, albedo, segment membrane, juice sac, seed로 분리하여 동걸건조 한 후 -8(TC에 보관하면서 분석 시료로 이용하였다.
분석에 사용된 HPLC/MS는 Mitei사의 2690 XE HPLC가 부착된 ZQ 4000 모델을 사용하였다. 본 실험에서는 limonin과 nomilin을 같은 조건에서 동시분석 하였는데, 이때 HXLC의 column은 Spherical CiS column(3.9 mm I.D.X 15 cm)을- 사용하였고, 이동상은 A: acetonitrile, B: watei를 사용하였다. 이동상구배는 A: 10%, B: 90%로 시직하여 50분에 A: 60%, B: 40%, 55분에 A: 90%, B: 10%, 65분에 A: 90%, B: 10%, 70분에 A: 10%, B: 90%, 75분에 A: 10%, B: 90%로 분석하였다.
분석. 분석에 사용된 HPLC/MS는 Mitei사의 2690 XE HPLC가 부착된 ZQ 4000 모델을 사용하였다. 본 실험에서는 limonin과 nomilin을 같은 조건에서 동시분석 하였는데, 이때 HXLC의 column은 Spherical CiS column(3.
표준품. 분석에 사용한 표준품 중 limonin과 nomilin은 Sigma사(St, Louis, USA)로부터 구입하였고, limonin glucoside 는 LKT Laboratories 사(St. Paul, MN, USA)로부터 구입하여사용하였다.
성능/효과
1 jig/ 이었으며, 이는 완숙초기 juice sac에서의 함량보다도 10배 이상 증가된 깃이었다. Limonin 잉ucoside의 경우도 성숙 후기에는 peel에서의 함량이 juice sac에서의 함량보다 높았으나, 완숙후기에는 juice sac에서으] 함량이 peel에서의 함량보다 6배가량 높은 1373.0 jig/g(DW)으로 나타났으며 , 완숙초기 juice sac에서의 함량보다도 6배가량 증가된 것이었다. 뿐만 아니라 성숙 후기와 완숙기의 limonin glucoside 함량은 peel과 juice sac 모두에서 limonin이나 nomilin의 함량보다 높은 것으로 확인되었으며, 완숙후기에는 20배 이상 높은 것으로 확인되었다.
6에 나타낸 깃과 같이 세 가지 성분 모두 과실이 완숙함에 따라 peel에서의 함량은 감소하는 경향을 보인 반면, juice sac에서의 함량은 증가하는 경향을 보였다. Limonin의 경우 성숙후기인 12월에는 peel에서의 함량이 juice sac에서의 함량보다 다소 높았으나, 완숙기에 들어서는 juice sac 에서의 함량이 peel에서의 함량보다 높아진 깃을 알 수 있었으며, 완숙후기의 juice sac에서의 함량은 성숙후기의 juice sac에서의 함량에 비해 4배 이상 증가한 70.6 jig/g(DW>으로 나타났다. Nomilin의 경우는 성숙후기와 완숙초기에는 peel에서의 함량이 juice sac에서의 함량보다 높았으나, 완숙후기에는 juice sac에서의 함량이 peel에서의 함량보다 10배가량 높은 46.
당유자 과실을 성숙후기인 12월과 완숙기인 2월 및 3월에 채취한 후 peel 및 juice sac의 limonin, nomilin 및 limonin glucoside함량을 분석한 걸과, Fig. 6에 나타낸 깃과 같이 세 가지 성분 모두 과실이 완숙함에 따라 peel에서의 함량은 감소하는 경향을 보인 반면, juice sac에서의 함량은 증가하는 경향을 보였다. Limonin의 경우 성숙후기인 12월에는 peel에서의 함량이 juice sac에서의 함량보다 다소 높았으나, 완숙기에 들어서는 juice sac 에서의 함량이 peel에서의 함량보다 높아진 깃을 알 수 있었으며, 완숙후기의 juice sac에서의 함량은 성숙후기의 juice sac에서의 함량에 비해 4배 이상 증가한 70.
7jig/g(DW)으로 높게 나타났다. 반면 limonin glucoside^ segment membmne에서의 함량이 1829.0 jig/g(DW) 으로 가장 높은 것으로 확인되었으며, 그 다음은 juice sac에서의 함량이 1373.0 ugg(DW)으로 높게 나타났다(Table 1). 이러한 결괴는 Savitree jungsakulrujirek 등이 c.
0 jig/g(DW)으로 나타났으며 , 완숙초기 juice sac에서의 함량보다도 6배가량 증가된 것이었다. 뿐만 아니라 성숙 후기와 완숙기의 limonin glucoside 함량은 peel과 juice sac 모두에서 limonin이나 nomilin의 함량보다 높은 것으로 확인되었으며, 완숙후기에는 20배 이상 높은 것으로 확인되었다.
상기 걸과들을 종합해 볼 때, 당유자 과실의 성숙초기인 10 월까지는 ag]yCOne 형태인 limonin과 nomilin의 함량이 glucoside 형태인 limonin glucoside] 함량 보다 높은 깃으로 나타났지만, 완숙기인 2월과 3월에는 과실 내 limonin glucoside 함량이 limonin과 nomilin의 함량보다 높아지는 깃을 알 수 있었다. 이는 완숙기 당유자 과실에서 aglycone 형태의 화합물이이ucoside 형태의 화합물로 전환되어 나타나는 결과라고 사료되며, limonin glucoside의 생합성에 있어서 상위 선구물질인 nomilin과 직선 선구물질인 limonin의 함량의 감소시기 또한 이를 뒷받침 해주는 결과라 생각된다.
완숙후기인 3월에 채취한 당유자 과실의 조직부위별 limonin, nomilin 및 limonin glucoside의 함량을 분석한 결과, limonin과 nomilin은 씨앗의 함량이 각각 606.0과 1179.0 jig/g(DW)으로가장 높게 나타났고, 다음으로는 segment membrane이 각각 166.8과 163.7jig/g(DW)으로 높게 나타났다. 반면 limonin glucoside^ segment membmne에서의 함량이 1829.
이러한 결과들로 미루어 볼 때, 완숙기 당유자 과실에서 limonin, nomilin 및 limonin glucoside 생합성 또는 축적은 과피보다 과육에서 더 활발히 진행되는 것으로 판단되었으며, 특히 완숙후기 과육에서는 limonin glucoside의 생합성이 아주 활발해 지는 것으로 사료되었다. Limonin과 nomilin의 경우 성숙 시기별로 다소의 차이는 있었으나 완숙후기를 제외한 모든 시기에서 peel과 juice sac에서의 함량을 합한 값이 같은 시기 통과에서의 함량보다 낮게 나타났다.
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