[논문]율무 추출물의 마우스 비장세포와 대식세포 활성 효과

류혜숙

[국내논문] 율무 추출물의 마우스 비장세포와 대식세포 활성 효과
Effects of Job's Tears(Yul-Moo) Extracts on Mouse Splenocyte and Macrophage Cell Activation 원문보기

한국식품영양학회지 = The Korean journal of food and nutrition, v.21 no.1, 2008년, pp.1 - 6

Abstract ▼ AI-Helper

Job's Tears(Yul-Moo) is a grass crop long-used as a traditional medicine; it is also a nourishing food. There are reports of its anti-inflammatory, stomachic, antiallergic activity, and antispastic effects and Job's Tears has been used in China to treat rheumatism, and neuralgia although its warts, rheumanism remains unclear. Thus, the present study was performed to investigate the in vitro effect of Job's Tears extracts on immune function. Here mouse splenocyte proliferation and cytokine production$(IL-1{\beta},\;IL-6,\;TNF-{\alpha})$ by peritoneal macrophages cultured with ethanol and water extracts of Job's Tears were examined. splenocytes proliferation increased with Job's Tears water extracts supplement at concentrations investigated The cytokine production$(IL-1{\beta},\;IL-6,\;TNF-{\alpha})$ by ELISA using a cytokine kit And $IL-1{\beta}$, IL-6 and $TNF-{\alpha}$ production increased water extracts supplementation. This in vitro study suggests that supplementation with Job's Tears water extracts may enhance immune function by regulating the splenocyte proliferation and enhancing cytokine production of activated macrophages.

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문제 정의

본 연구에서는 면역 증진능을 갖는 천연 식품 소재로서의 율무의 면역 세포 활성 효과를 검증하여 율무의 면역 증진 식품으로서의 이용 가능성을 확인하고자, in vitro 실험을 통해 율무의 물 추출물과 에탄올 추출물 첨가에 의한 마우스 비장 세포 증식능과 복강 대식세포에서 분비되는 cytokine (IL-1β, IL-6, TNF-a) 생성량을 측정하였다. 따라서 본 연구는 추출 조건을 달리한 율무 추출물이 마우스 비장세포에 직접 작용하여 면역 세포를 증식시키는 활성이 있는지 검토하였고, 동시에 복강 대식세포에서 분비되는 cytokine(IL-1β, IL-6, TNF-a) 생성 량을 측정함으로써 면역 세포의 활성화 기구에 관여함을 조사함으로써 면역 증진능을 갖는 천연 식품소재로서의 율무의 면역 증진 식품으로서의 가능성을 확인하고자 실시하였다.
IL-6, TNF-a) 생성량을 측정하였다. 따라서 본 연구는 추출 조건을 달리한 율무 추출물이 마우스 비장세포에 직접 작용하여 면역 세포를 증식시키는 활성이 있는지 검토하였고, 동시에 복강 대식세포에서 분비되는 cytokine(IL-1β, IL-6, TNF-a) 생성 량을 측정함으로써 면역 세포의 활성화 기구에 관여함을 조사함으로써 면역 증진능을 갖는 천연 식품소재로서의 율무의 면역 증진 식품으로서의 가능성을 확인하고자 실시하였다.

제안 방법

2)와 증류수에 현탁시 켜 5분간 처 리하여 적혈구를 제거하였다. 적혈구가 제거된 비장세포는 다시 RPMI medium 1640 용액에 분산시켜, trypan blue solution으로 염색한 후 hemocytometer를 이용하여 그 세포수를 측정하였다. 세포 농도 5.
2)와 증류수에 현탁시켜 5분간 처리하여 적혈구를 제거하고 RPMI 1640 용액으로 2회 원심 세척하였다. 모아진 대식세포를 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액에 분산시켜, trypan blue solution으로 염색한 후 hemocytometer를 이용하여 그 세포수를 측정하였다. 세포 수를 1시06 cell/mℓ의 농도로 희석하여 24-well plate에 분주 후 37℃, 5 % COz incubator에서 배양하였다.
2시간 후 각 well의 상층 액을 걷어 비부착 세포(non-adherent cells)는 제거하고 부착 세포(adherent cells)만을 사용하였다. 사이토카인(H, l 6, L6, TNF-<?) 분비량을 측정은 비부착성 세포는 제거하고 부착성 마우스 복강 대식세포에 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액을 900 μℓ 넣고 최종농도가 10 μg/mℓ와 100 μg/mℓ, 가 되도록 생강 추출물을 각 100 μℓ씩 분주한 다음 37℃, 5% CO2 incubator(Sanyo, Louis, MO, USA)에서 48시, 간 배양하였다. 배양액을 분리하여 IL-13, IL-6, TW-a의 분비량을 ELISA 사이토카인 kit(R&D system, NY, USA)를 이용하여 측정하였다.
사이토카인(H, l 6, L6, TNF-<?) 분비량을 측정은 비부착성 세포는 제거하고 부착성 마우스 복강 대식세포에 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액을 900 μℓ 넣고 최종농도가 10 μg/mℓ와 100 μg/mℓ, 가 되도록 생강 추출물을 각 100 μℓ씩 분주한 다음 37℃, 5% CO2 incubator(Sanyo, Louis, MO, USA)에서 48시, 간 배양하였다. 배양액을 분리하여 IL-13, IL-6, TW-a의 분비량을 ELISA 사이토카인 kit(R&D system, NY, USA)를 이용하여 측정하였다.
그 중에서도 특히 IL-1, IL-6, TNF-a 는 활성화된 대식 세포로부터 생성되는 대표적인 사이 토카인으로 초기 염 증반응에서 세포간 신호전달을 수행함으로써 면역 반응에 중요한 역할을 담당한다고 알려져 있다20). 본 실험에서는 활성화된 대식세포가 생성해 낸 IL-1β, IL-6, TW-a의 분비량을 측정하였고, 각 군별 양성 대조군으로는 LPS(15 mg/mℓ로 자극한 대식세포로부터 분비된 cytokine을 측정함으로써 대식세포의 활성화에 대한 지표로 삼았다.
2에 나타내었다. 율무 추출물을 첨가하지 않은 대조군은 1066.58±58 pg/mℓ IL-1 β를 생성하였고, 율무 물 추출물 10, 100 μg/mℓ 농도 첨가 시 각각 1,395.35±35, 2,946.51±51 pg/mℓ로 대조군(1, 066.58±58 pg/mC)에 비해 유의적으로 높은 L16 를 생성하였고, 100 μg/mℓ 농도에서 가장 높은 IL-1β를 생성하였다SQ05). 율무 에탄올 추출물 10, 100 iig/ral 농도첨가 시 각각 1,971.

대상 데이터

동결 건조된 시료를 증류수 또는 에탄올로 환류 냉각시키면서 80 ℃ 수욕상에서 3시간씩 3회 반복 추출한 후 감압 농축하여 물 추출물과 에탄올 추출물을 얻었다 본 연구에 사용된 동물은 7~8주령된 암컷 Balb/c mouse를 (주)대한 실험동물센터로부터 공급받아 고형 사료와 물을 자유로이 공급하면서 7~8일 정도 실험 동물실에서 적응시킨 후 체중이 15 g 내외인 마우스를 실험에 사용하였다. 실험 동물실 온도는 22±2℃, 습도는 40~60%로 유지하였고, 명 암주기(light and dark cycle)는 12시간 단위로 조절하였다.
본 연구에 사용된 배지는 GIBCO BRL(Grand Island, NY, USA) 제품의 RPMI medium 1640를 사용하였고, fetal bovine serum(FBS), lipopolysaccharide(LPS), thioglycollate, sodium bicarbonate, ammonium chloride, TRIZMA®base, TRIZMA®hy- drochloride, trypan blue solution(0.4%), DMSO(dimethyl sulfide), 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bro- mide(MTI) 등의 시약은 Sigma(St. Louis, MO, USA) 제품을 사용하였다.
4에 나타내었다. 대조군은 147.7H1.00 pg/mℓ의 TNF-a를 생성하였고, 미토젠인 LPS(15 μg/mℓ)를 첨가한 경우에 470.92±0.33 pg/mℓ의 TNF-a를 생성하여 대조군에 비해 유의적으로 높은 TNF-a 을 생성하였다(p<0.05). 율무 물 추출물 10, 100 μg/mℓ 농도를 첨가한 경우, 각각 2326.

데이터처리

모든 연구 결과의 자료는 통계 프로그램인 SAS package(ver. 12.0)를 이용하여 평균 및 표준편차를 계산하였으며, 군간의 비교에서 각각의 요인은 분산분석(Analysis of Variance, ANOVA)을 사용하였고, Duncan's multiple range test로 p=0.05 수준에서 유의성을 검정하였다.

이론/모형

마우스 비장세포 분리는 Mishell18)의 방법에 의해 시행되었다. 경추 탈골법으로 희생시킨 마우스로부터 비장을 무균적으로 적출하여 RPMI 1640 배양액으로 씻은 후 멸균 유리 봉으로 가볍게 분쇄하여 세포를 유리시켰다.

성능/효과

05). 특히 100 μg/mℓ 농도의 물 추출물을 첨가한 경우에서 미토젠인 LPS를 첨가하여 배양한 양의 대조군 15, 843.64±24 pg/M보다 높은 IL-1/9 생성량을 보여, 이는 외부 항원의 자극 시 율무 물 추출물이 면역 반응을 증진시킬 가능성이 있음을 보여주는 결과로 사료된다. 본 실험 결과 에탄올 추출물보다는 물 추출물에서 높은 IL- 1B 생성 량을 보였으며, 물 추출물 100 μg/mℓ 농도에서 가장 높은 IL-1B을 생성하였다.
64±24 pg/M보다 높은 IL-1/9 생성량을 보여, 이는 외부 항원의 자극 시 율무 물 추출물이 면역 반응을 증진시킬 가능성이 있음을 보여주는 결과로 사료된다. 본 실험 결과 에탄올 추출물보다는 물 추출물에서 높은 IL- 1B 생성 량을 보였으며, 물 추출물 100 μg/mℓ 농도에서 가장 높은 IL-1B을 생성하였다.
3에 나타내었다. 대조군은 44.72±0.00 pg/mℓ로 IL-6 를 생성하였고, 미토젠인 LPS를 첨가한 경우에는 167.58±0.40 pg/mℓ로 IL-6를 생성하여 대조군에 비해 IL-6 생성 량이 유의적으로 상승된 것으로 나타났다(p<0.05). 율무 물 추출물 10,100μg/mℓ 농도 첨가시 각각 264.
05). 본 실험 결과 물 추출물 10, 100 μg/mℓ 농도 모두에서 대조군보다 높은 IL-6 생성 량을 보였고 특히, 물 추출물을 첨가한 10 μg/mℓ, 100 μg/mℓ 농도에서는 미토젠인 LPS로 배양한 양의 대조군보다 유의적으로 높은 IL-6 생성 량을 나타내었다. 또한, 모든 농도에서 에탄올 추출물보다 물 추출물 첨가시 높은 Ⅱ.
-6 생성량을 보였다. 따라서 율무 물 추출물이 B 림프구를 분화 시켜 항체 생성을 유도하는 IL-6의 생성 량을 증가시켜 율무추출물이 B 세포를 활성화시킬 가능성이 있을 것으로 사료된다.
96 pg/mC로 대조군(38L0M00 pg/mC)보다 유의적으로 높은 TNF- a 생성을 보인 결과와도 유사한 경향을 보여주었다21). 본 실험결과 율무 물과 에탄올 추출물 첨가가대조군보다 높은 TNF- a 생성 량을 보였으며, 특히 물 주줄 물에서는 미토젠인 LPS로 배양한 양의 대조군보다 유의적으로 높은 TNF-tf 생성 량을 보였다0x0.05). 이상의 본 연구결과를 종합해 보면 율무 추출물을 첨가한 마우스 복강대식세포의 배양액에 축적된 IL-1 6의 경우, 물 추출물 100 μg/mℓ 농도에서 가장 높은 생성량을 보여 주었고, IL-6의 경우, 물 추출물 10, 100 μg/mℓ 두 농도 모두에서 LPS 수준의 생성량을 나타내었다.
05). 이상의 본 연구결과를 종합해 보면 율무 추출물을 첨가한 마우스 복강대식세포의 배양액에 축적된 IL-1 6의 경우, 물 추출물 100 μg/mℓ 농도에서 가장 높은 생성량을 보여 주었고, IL-6의 경우, 물 추출물 10, 100 μg/mℓ 두 농도 모두에서 LPS 수준의 생성량을 나타내었다. TNF-a의 경우 물 추출물을 첨가한 10, 100 μg/mℓ 두 농도 모두에서 미토젠인 LPS 수준의 생성량을 보여주어, 이는 선행 연구22,25)에서 검색된 ex vivo 50 ㎎/㎏ B.
In vitro 실험을 통한 율무 주줄물 첨가가 마우스의 면역 세포 활성에 미치는 영향에 대해 검색한 결과, 물 추출물의 10 μg/mℓ의 농도와 500 μg/mℓ의 농도를 첨가했을 때 비장세포 증식 능을 촉진하는 효과가 있는 것으로 보여진다. 복강대식세포에서 생성되는 IL-1/3, IL-6, TNF-a 사이토카인 생성량을 측정한 결과, 율무 물 추출물과 에탄올 추출물 10, 100 μg/mℓ 농도에서 생성된 IL-16, IL-6, TNF-q 사이토카인은 대조군 보다 높은 생성량을 보였다 특히 에탄올 추출물보다는 물 추출물에서 높은 생성량을 보였고, IL-1β, IL-6와 TNF-a 사이 토카인 모두 100 μg/mℓ의 농도에서 높은 생성량을 나타내었다.
복강대식세포에서 생성되는 IL-1/3, IL-6, TNF-a 사이토카인 생성량을 측정한 결과, 율무 물 추출물과 에탄올 추출물 10, 100 μg/mℓ 농도에서 생성된 IL-16, IL-6, TNF-q 사이토카인은 대조군 보다 높은 생성량을 보였다 특히 에탄올 추출물보다는 물 추출물에서 높은 생성량을 보였고, IL-1β, IL-6와 TNF-a 사이 토카인 모두 100 μg/mℓ의 농도에서 높은 생성량을 나타내었다.
이상의 결과에 의하면 율무 물 추출물 및 에탄올 추출물은 비장 세포 증식능과 비장세포와 사이토카인 생성량을 증가시킴으로서 면역 기관의 주요 기능을 증진시킬 가능성이 있을 것으로 사료된다. 따라서 이와 같은 마우스 실험을 근거로 임상실험을 통한 기능성 식품의 개발의 근거자료로 활용될 수 있기를 기대한다.

후속연구

사료된다. 따라서 이와 같은 마우스 실험을 근거로 임상실험을 통한 기능성 식품의 개발의 근거자료로 활용될 수 있기를 기대한다.

참고문헌 (25)

Ji, WD, Jeong, HC, Lee, SJ and Chun, YG. Antimicrobial activity and distilled components of garlic and ginger. J. Agric. Chem. Biotechnol. 40:514-518. 1997
Pyo, MY and Su, MH. Effects of Phellinus linteus extracts on the humoral immune response in normal and cyclophosphamide-treated mice. J. Applied Phamcol. 9:194-200. 2001
Park, JS and Chyun, JH. Effects of low fat diet and saturated fat supplementation on the immune status of BALB/c mouse. Kor. J. Nutr. 26:578-585. 1993
Wagner, H. Search for plant derived natural products with immunostimulatory activity. Pure & Appl. Chem. 7:1271-2178. 1990
Kim, GH and Sunwoo, YK. Effects of small water dropwort extract on cellular immune response of mice. J. Bacteriolo. Virol. 28:419-430. 1993
Park, HA. Enhancing effect of Ixeris sonchifolia Hance Oenanthe javanica, and Fagopyrum escluentum Moench on mouse immune cell activation. MS. Thesis, Sookmyung Women's Uni., Seoul. Korea. 2003
Ryu, HS and Kim, HS. Effects of job's tear extracts on mouse immune cell ativation. J. Kor. Diet Assoc. 11:44-50. 2005
Park, KY and Rhee, SH. The antitumor effect in Sarcoma-180 tumor cell of mice of mice administered with Japanese apricot, garlic ginger doenjang. J. Kor. Food. Cookery Sci. 21:599-606. 2005
Yun, HJ. Effect of Hizikia fusiforme water extracts on mouse immune cell activation. MS. Thesis, Sookmyung Women's Uni., Seoul. Korea. 2003
Ko, MS, Shin, KM and Lee, MY. Effects of Hizikia fusiforme ethanol extract on antioxidative enzymes in ethanol induced hepatotoxicity of rat liver. J. Kor. Soc. Food. Sci. Nutr. 31:87-91. 2002

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Yoo, TJ. Sikpoombogam, pp.288-290. Moonundang. Seoul. Korea. 1998
Tanimura, A. Studies on the antitumor component in the seeds of Coix lachryma jobi l. var. mayuen Stapf. II. The structure of coixenolide, Chem. Phar. Bull. 9:47-53. 1961

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Numata, MA, Yamamoto, M and Yamada, H. Antitumor components isolated from the Chinese herbal medicine Coix lachryma-jabi L. Planta Med. 60:356-359. 1994

상세보기
Kond, YK, Nonno, C and Hikino, H. Isolation of ovulatory-active substances from crops of Job's tears(Coix lachryma jobi L. var. ma-yuen Stapf). Che. Pharm. Bull. 36:3147-3152. 1998
Takahashi, M and Konno, CH. Isolation and hypoglycemic activity of coixans A, B and C glycans of Coix lachryma-jobi L. var. mayuen Stapf seeds. Planta Med. Fed. 1:64-65. 1986
Park, Y, Suzuki, H and Lee, YS. Effect of coxi on plasma, liver and fecal lipid components in the rat fed on lard or soybean oil-cholesterol diet. Biochem. Med. Metab. Biol. 39:7-1. 1988
Ary, MB, Richardson, M and Shewry, PR. Purification and characterization of an insect alpha-amylase inhibitor/endochitinase from seeds of Job's tears. Biochem. Biophys. Acta. 999:260-266. 1988
Mishell, BB and Shiigi, SM. Selected methods in cellular immunology, 1st ed, pp.4-27. WHFreeman and Co, Sanfrancisco. USA. 1980
Kim, HP, Son, KH, and Kang, SS. Anti-inflammatory plant flavonoids and cellular action mechanisms. J. Pharmacological Sci. 96:229-245. 2004

상세보기
Barnes, PJ and Liew, FY. Nitric oxide and asthmatic inflammation. Immunology Today. 16:128-130. 1995

상세보기
Kim, J. Enhancing effect of Paeonia japonica, Houttuynia cordata, and Aster scaber extracts on the immunoreactivity in vivo in mice. Ph.D. Thesis, Sookmyung Women's Uni., Seoul. Korea. 2003
Ryu, HS, Kim, J and Kim, HS. Enhancing effect of Sorghum bicolor L. Moench(Sorghum, su-su) extracts on mouse spleen and macrophage cell activation. Kor. J. Food & Nutr. 19:176-182. 2006
Balkwill, FR, Maylor, MS and Malik S. Tumor necrosis factor as an anticancer agent. Eur. J. Cancer. 26:641-644. 1990

상세보기
Chao, CC, Hu, S, Molitor, TW, Brosnan, CF and Berman, JW. Cytokine prodution by human fetal microglia and astrocytes. J. Immunol. 150:2659-2660. 1998
Lee, YS, Ryu, HS and Kim, HS. Effects of elm bark(Ulmus davidiana var. japonica) extracts on modulation of immunocompetence in mice. J. Medicinal Food. 10:118-125. 2006

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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