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제안 방법
- 전자공여능 측정은 Blois의 방법 1에 따라 in vitro에서 각 추출물의 DPPH (l,Ldiphenyl-2-picrylhydrazyl)에 대한 수소공여 효과로 측정하였다. 해조류 1 g당 에탄올 10 ml의 비율로 추출한 시료를 DMSO에 녹여 각각 4, 20, 40 μl와 1.5X10"4 M DPPH용액 160 M을 섞은 다음, 최종 volume이 200 μl이 되도록 증류수를 첨가하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donation ability: EDA)은 EDA(%)=(대조구 흡광도-시료 첨가구 흡광도)/대조구 흡광 도X100으로 계산하였다.
- 시료 10 g에 70% EtOH 50 ml을 혼합하여 초음파 추출하였다. 2z000x g로 20분간 원심분리한 후, 상등액을 취하여 감압 상태에서 완전히 건조시킨 후 0.5 ml loading buffer에 녹여 여과한 다음, 적량을 아미노산 자동 분석기(Biochrom 30, Biochrom, England)로 분석하였다.
- coli)에 의하여 생성된 bacterial lipopolysacharise (LPS)를 대식세포에 처리하여 NO를 유도시킨 다음, 다시마 추출물을 처리하여 NO 합성에 미치는 영향을 조사하였다 (Table 7). LPS에 의하여 유도된 NO 합성은 다시마 methanol 추출물을 처리함으로서 NO 합성이 200 μg/ml농도에서 기장 및 완도 다시마의 NO 합성을 각각 21.4%와 32.6%로 저해하였다. 이러한 결과는 다시마 methanol 추출물이 면역기능과 밀접한 관계가 있음을 보여주는 것이다.
- 본 실험에 사용한 건 다시마는 2006년 1M2월 사이에 완제품 형태로 대형 할인점과 백화점에서 구입하여 사용하였다. 구입한 건 다시마는 원산지에 따라 기장 및 완도 다시마로 구분하였으며, 기장 지역 4개사(G사 S사, C사, N사)와 완도 지역 3개사(C사, S사, K사)의 다시마제품을 사용하여 무기성분과 생 리활성을 분석하였다. 다시마는 구입 후, grinder 로 분쇄한 다음 60 mesh를 통과한 분말을 사용하였으며, 실험 전까지 -20℃에 보관하였다.
- 대장균(E. coli)에 의하여 생성된 bacterial lipopolysacharise (LPS)를 대식세포에 처리하여 NO를 유도시킨 다음, 다시마 추출물을 처리하여 NO 합성에 미치는 영향을 조사하였다 (Table 7). LPS에 의하여 유도된 NO 합성은 다시마 methanol 추출물을 처리함으로서 NO 합성이 200 μg/ml농도에서 기장 및 완도 다시마의 NO 합성을 각각 21.
- 본 연구에서는 시판되는 기장 및 완도 다시마제품을 구입하여 산지별 다시마의 일반성분, 무기성분, 유리아미노산, 알긴산 함량, 항산화력 및 RAW264.7 cell을 이용하여 nitric oxide 합성 저해 등의 생리활성을 조사하였다.
- 수분, 회분, 조단백질, 조지방, 탄수화물, 열량은 Korea Food and Drug Administration (KFDA)의 방법에 따라 분석하였다 19 . 수분은 상압가열건조법에 따라 양을 측정하였고, 조회분은 회화로(F6010, Thermolyne, USA)에 옮겨 550℃에서 8시간 가열하여 얻은 회화의 양을 측정하였다. 조단백질과 조지방은 세미마이크로킬달법을 적용한 분석기기인 Auto kjeldahl system (K-370/424/414, Buchiz Switzerland)과 에테르 추출법을 적용한 분석기기, Auto Soxhl아 System (B-811/ B411, Buchi, Switzerland)를 각각 이용하여 측정하였다.
- 전자공여능(Electron donation ability: EDA)은 EDA(%)=(대조구 흡광도-시료 첨가구 흡광도)/대조구 흡광 도X100으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 프리라디칼의 제거활성을 백분율로 계 산하였다.
- NO의 생성은 비색법으로 세포 상등액에 축적되는 nitrite 양을 측정하였다, RAW 264.7 celldmf 24-well plate에 5xl05 cells/w아!의 세포가 되도록 재부유하여, 최종농도가 200 μg/ ml가 되도록 추출물을 처리한 다음, 1 hr 후에 LPS의 자극 하에 24시간 배양하고 그 배양 상등액 내의 NO를 Griess 시약과 반응시켜 측정하였다. 100 μl의 세포배양 상등액을 취하여 동량의 Griess 시약(1% sulfanilamide (30% acetic acid)와 0.
- 5X10"4 M DPPH용액 160 M을 섞은 다음, 최종 volume이 200 μl이 되도록 증류수를 첨가하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donation ability: EDA)은 EDA(%)=(대조구 흡광도-시료 첨가구 흡광도)/대조구 흡광 도X100으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 프리라디칼의 제거활성을 백분율로 계 산하였다.
- 혼합물을 원심분리하여 얻은 상등 액에 95% 메탄올을 가하여 침전시킨 후, 다시 원심분리하여 침전물을 회수하였다. 침전물을 중류수로 용해한 다음 메탄올을 가하여 침전시키는 조작을 2회 반복하여 정제한 후, 동결 건조하여 얻어진 알긴산 분말의 무게를 측정하여 알긴산 함량을 구하였다.
- 이러한 항산화 물질들은 활성산소를 비롯한 다른 라디칼에 대한 소거활성을 기대할 수 있으며, 인체 내에서 free radical 에 의한 노화를 억제하는 척도로 이용할 수 있다. 항산화 활성은 DPPH radical scavenging 활성을 측정하여 기장 및 완도 다시마 제품의 DPPH 라디칼 소거능을 분석하였다 (Table 5). 기장 및 완도 다시마의 메탄올 추출물 40 pg/ml 농도에서 각각 34.
대상 데이터
- 구입한 건 다시마는 원산지에 따라 기장 및 완도 다시마로 구분하였으며, 기장 지역 4개사(G사 S사, C사, N사)와 완도 지역 3개사(C사, S사, K사)의 다시마제품을 사용하여 무기성분과 생 리활성을 분석하였다. 다시마는 구입 후, grinder 로 분쇄한 다음 60 mesh를 통과한 분말을 사용하였으며, 실험 전까지 -20℃에 보관하였다.
- 본 실험에 사용한 건 다시마는 2006년 1M2월 사이에 완제품 형태로 대형 할인점과 백화점에서 구입하여 사용하였다. 구입한 건 다시마는 원산지에 따라 기장 및 완도 다시마로 구분하였으며, 기장 지역 4개사(G사 S사, C사, N사)와 완도 지역 3개사(C사, S사, K사)의 다시마제품을 사용하여 무기성분과 생 리활성을 분석하였다.
이론/모형
- KFDA에 따라 분석하였으며 , 전처리는 제조사의 manual에 따라 조제하였다. 시료 10 g에 70% EtOH 50 ml을 혼합하여 초음파 추출하였다.
- You 등 29의 방법에 따라 다시마의 알긴산 함량을 측정하였다. 분쇄한 시료 10.
- 무기 염류 중, Na, K, Ca, Fe, Zn, Mg 그리고 P는 KFDA의 미량영양성분시험법의 건식분해법 19 에 따라 시료 5 g를 회화용기에 취하여 예비 탄화시킨 후 55℃의 온도에서 가열하여 얻은 회백색의 회분을 시험용액으로 만들어 ICP (Optima 5300 DVZ Perkin Elmer, England)를 사용하여 분석하였다.
- 세포독성은 MTT assay법으로 측정하였다 24 . 24-well microtiter plate (Nunc, Vangaard, Neptune, NJ)에 RAW 264.
- 수분, 회분, 조단백질, 조지방, 탄수화물, 열량은 Korea Food and Drug Administration (KFDA)의 방법에 따라 분석하였다 19 . 수분은 상압가열건조법에 따라 양을 측정하였고, 조회분은 회화로(F6010, Thermolyne, USA)에 옮겨 550℃에서 8시간 가열하여 얻은 회화의 양을 측정하였다.
- 전자공여능 측정은 Blois의 방법 1에 따라 in vitro에서 각 추출물의 DPPH (l,Ldiphenyl-2-picrylhydrazyl)에 대한 수소공여 효과로 측정하였다. 해조류 1 g당 에탄올 10 ml의 비율로 추출한 시료를 DMSO에 녹여 각각 4, 20, 40 μl와 1.
- 수분은 상압가열건조법에 따라 양을 측정하였고, 조회분은 회화로(F6010, Thermolyne, USA)에 옮겨 550℃에서 8시간 가열하여 얻은 회화의 양을 측정하였다. 조단백질과 조지방은 세미마이크로킬달법을 적용한 분석기기인 Auto kjeldahl system (K-370/424/414, Buchiz Switzerland)과 에테르 추출법을 적용한 분석기기, Auto Soxhl아 System (B-811/ B411, Buchi, Switzerland)를 각각 이용하여 측정하였다. 탄수화물은 시료 100 g 중에서 수분, 조단백질, 조지방, 조섬유 및 회분의 양을 감하여 얻은 양으로서 표시하고 일반성분의 시험 결과는 백분율로 표시하였다.
- 추출물의 SOD 유사활성은 Markhind와 Marklund의 방법 2이에 따라 과산화수소(H2O2)로 전환시키는 반응을 촉매 하는 pyrogallol의 생성량을 측정하여 SOD 유사활성으로 나타내었다. 각 추출시료를 DMSO에 녹여 농도별로 희석하여, 시료 1, 5/ 10 μl에 Tris-HCl buffer (50mM Tris hydroxymethyl aminomethane, 10 mM EDTA, pH 8.
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