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문제 정의
- 본 시험은 국내외에서 수집한 꽃송이버섯균 8 균주에 대하여 균의 배양적 특성 및 균사체 대량배양 조건을 밝히고자 몇 가지 실험을 하였다. 꽃송이버섯균의 고체배양 시 HBA(벌꿀바나나추출배지)에서 53.
- 우리나라에서는 김(1993)에 의한 균의 생태적 특성, Shim 등(1998), Chang and Choi(2004), 서 등(2005)에 의한 균의 배양적 특성, 그리고 김(2000)에 의한 ribosomal DNA분석에 관한 연구 보고가 있다. 본 시험은 국내외에서 수집한 꽃송이버섯균에 대하여 배양적특성 및 균사체의 대량배양 조건을 밝히고자 수행하였다.
제안 방법
- 탄소원으로는 glucose 둥 13 종, 질소원으로는 asparagine 등 15종을 공시하였다(Table 6, 7). 250 ml 삼각플라스크에 공시배지 100 ml를 넣고 살균하여 23℃로 조절된 배양실에서 30일간 배양한 후 여과하여 균사체의 80℃, 24시간 건조무게를 비교하였다.
- 0으로 조절하였다. 공기의 주입은 1분당 300 #로 조절하였으며, 15일간 배양한 다음 건조법(80℃, 24시간)에 의하여 각 처리간의 균사체 무게를 비교하였다.
- 균의 증식 및 보존을 위한 최적배지를 선발하고자 Table 2와 같이 PDA 등 9종의 배지를 조제하여 균총의 생장직경과 밀도를 조사하였다.
- 그리고 위의 5℃ 간격으로 시험한 결과는 25℃에서 균이 잘 자랐으나, 좀더 정확한 균사생장 최적 온도를 구명하고자 처리온도를 2℃ 간격으로 좁혀 19, 21, 23, 25, 27℃로 각각 조절하고 HBA배지에 20일간 배양한 후 균총의 직경을 비교하였다.
- 따라서 본 시험은 꽃송이버섯의 균사체 고체배양을 위하여 현미, 밀, 보리를 배지재료로 선정하였다. 그리고 재료의 수분조절 방법으로 1일간의 침수처리와 물로 삶는 방법을 공시하였다. 현미는 1일간 침수 처리에서 균사체 생장이 잘 되었으며 밀과 보리는 삶는 방법이 좋았다.
- 꽃송이버섯 균의 생육을 위한 탄소원 및 질소원을 구명하기 위하여 GA배지를 기본배지로 사용하였다. 탄소 원으로 glucose 등 단당류 5종, lactose 등 이당류 3종, dextrin 등 다당류 5종을 공시하여 균사체 건조무게를 비교한 결과 fructose에서 13.
- 꽃송이버섯균의 균사체 증식이 빠른 균주를 선발하기 위 하여 250 ml 삼각플라스크에 벌꿀바나나추출액 체배지(벌꿀 20 g, 번]나나 20 g, peptone 1.5 g, yeast extract 3 g, DW 1,000 ml) 50 ml를 넣고 살균한 후 ASI150001 등 8 균주의 균총을 5 mm 크기로 떼어 접종하여 25℃의 항온기에서 28일간 배양한 후 여과하여 균사체의 건조무게를 비교하였다.
- 고체배양용 배지재료 선발. 대량배양을 통하여 생산한 균사체와 더불어 식용이 가능한 고체배지재료를 선발하기 위하여 현미, 밀, 보리를 공시하였다. 배지재료의 수분조절 방법은 [일간 물에 담가두는 처리와 스팀으로 쪄내는 처리로 구분하였다.
- 0이 되도록 1 N-HC1 과 1 N-NaOH를 사용하여 조정하고 액체배지 1 /당 한천분말을 20 g 기준으로 넣고 121℃에서 20분간 멸균한 후 각각 일회용 배양접시에 20 ml씩 분주하였다. 미리 HBA 배지에 20일간 배양한 균총을 5 mm 크기로 떼어 접종하여 25℃의 항온기에서 20일간 배양한 후 균총의 직경을 비교하였다.
- 배양온도에 따른 꽃송이버섯의 균사생장 정도를 비교하기 위하여 HBA 배지에 직경 5 mm 균총을 접종하고 온도를 15, 20, 25, 30, 35℃로 조절한 항온기에서 20일간 배양하였다. 그리고 위의 5℃ 간격으로 시험한 결과는 25℃에서 균이 잘 자랐으나, 좀더 정확한 균사생장 최적 온도를 구명하고자 처리온도를 2℃ 간격으로 좁혀 19, 21, 23, 25, 27℃로 각각 조절하고 HBA배지에 20일간 배양한 후 균총의 직경을 비교하였다.
- 배지의 pH에 따른 꽃송이버섯의 균사생장 정도를 비교하기 위하여 균증식용 배지로 선발한 HBA(Honey Banana extract Agar)의 액체배지를 pH가 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0이 되도록 1 N-HC1 과 1 N-NaOH를 사용하여 조정하고 액체배지 1 /당 한천분말을 20 g 기준으로 넣고 121℃에서 20분간 멸균한 후 각각 일회용 배양접시에 20 ml씩 분주하였다. 미리 HBA 배지에 20일간 배양한 균총을 5 mm 크기로 떼어 접종하여 25℃의 항온기에서 20일간 배양한 후 균총의 직경을 비교하였다.
- 균사체 대량배양용 염가배지를 선발하고자 배지재료는 값이 저렴한 농산물가공 부산물로써 대두박, 당밀, 미강, 감자 (대조)를 사용하였다. 배지의 처리방법은 물 1 J당 5, 10, 15, 20 g의 비율로 열수추출한 후 각각 설탕 20 g, KH2PO4 1 g. MgSO4-7H2O 0.
- 대량배양을 통하여 생산한 균사체와 더불어 식용이 가능한 고체배지재료를 선발하기 위하여 현미, 밀, 보리를 공시하였다. 배지재료의 수분조절 방법은 [일간 물에 담가두는 처리와 스팀으로 쪄내는 처리로 구분하였다. 수분조절한 각 처리는 건조무게로 환산하여 200 #가 되도록 버섯 종균생산용 PP(Poly Propylene)병에 넣고 121℃에서 60분간 살균하였다.
- 수집균주들 중 균사체 대량배양을 위한 균주를 선발하기 위하여 1 /들이 Vial(Duran Scott) 로제작한 통기식액체배양병을 이용하였다(정 등, 1996). 액체배지로는 벌꿀바나나추출배지(HB)를 변형한 HB-M (Honey Banana extract Modified; 감자 100 g, 설탕 20 g, 바나나 5 g, 벌꿀 5 g, peptone 0.4 g, yeast extract 0.8 g, D.W. 1,000 ml. pH 4.0) 배지를 이용하였다. 종균은 삼각플라스크에 30일간 정치 배양하여 균질기(호모게나이저: Nissei, AM-7)로 12,000 rpm에서 15초간 균사체를 절단하고 20 ml#씩 접종하였다.
- 수분조절한 각 처리는 건조무게로 환산하여 200 #가 되도록 버섯 종균생산용 PP(Poly Propylene)병에 넣고 121℃에서 60분간 살균하였다. 종균으로는 국내에서 수집된 ASI15006 균주를 사용하여 통기식 액체종균병에서 15일간 배양한 액체종균을 병당 10 ml 씩 접종하였다.
대상 데이터
- 고체배양용 배지재료. 기능성버섯으로 알려진 상황버섯이나 동충하초는 자실체의 생산은 물론 현미 등 식용 가능한 곡물을 이용한 균사체 배양으로 균사체와 곡물을 직접 식용하기도 한다.
- 공시균주의 영양원 선발을 위하여 Glucose Asparagine (GA)배지 (glucose 20 g, asparagine 2 g, KH2PO4 1 g, MgSO4*7H2O 0.5 g, ferrous citrate 5 mg, ZnSO4-7H2O 4.4 mg, MnSO4-4H2O 5 mg, CaCl2-2H2O 55.5 mg, vitamin B[ 10 mg, nicotinic acid 10 mg, D.W. 1000 ml, pH 5.0) 를 기본배지로 이용하였다. 탄소원으로는 glucose 둥 13 종, 질소원으로는 asparagine 등 15종을 공시하였다(Table 6, 7).
- 균사체 대량배양은 통 기식 액체배양법(정 등, 1996, 2003)에 준하여 시험하였다. 균사체 대량배양용 염가배지를 선발하고자 배지재료는 값이 저렴한 농산물가공 부산물로써 대두박, 당밀, 미강, 감자 (대조)를 사용하였다. 배지의 처리방법은 물 1 J당 5, 10, 15, 20 g의 비율로 열수추출한 후 각각 설탕 20 g, KH2PO4 1 g.
- 우수균주 선발. 꽃송이버섯균의 균사체 대량배양을 위한 균주 선발을 위하여 통기식 액체배양에 의한 균사체무게를 조사한 결과, 균사생장량이 많은 ASI5001Q을 본시험의 균사체 대량배양용 균주로 선발하였다(Table 9).
- 0이었고, 탄소원으로 fructose, 질소원은 glutamine을 잘 이용하였다. 꽃송이버섯균의 균사체 대량배양을 위한 균주로는 통기식 액체배양시 균사체 생산량이 많은 ASI150010 을 선발하였다. 액체배양용 추출배지 재료인 대두박 추출 배지 (15 g.
- 기능성버섯으로 알려진 상황버섯이나 동충하초는 자실체의 생산은 물론 현미 등 식용 가능한 곡물을 이용한 균사체 배양으로 균사체와 곡물을 직접 식용하기도 한다. 따라서 본 시험은 꽃송이버섯의 균사체 고체배양을 위하여 현미, 밀, 보리를 배지재료로 선정하였다. 그리고 재료의 수분조절 방법으로 1일간의 침수처리와 물로 삶는 방법을 공시하였다.
- 본 시험에 사용한 균주는 농업과학기술원 응용 미생물 과에 보존 중인 꽃송이버섯균 ASI150001 등 8균주를 분양받아 25±0.5℃에서 계대배양하면서 4±0.5℃의 항온기에 저장하여 두고 사용하였다.
- 0) 를 기본배지로 이용하였다. 탄소원으로는 glucose 둥 13 종, 질소원으로는 asparagine 등 15종을 공시하였다(Table 6, 7). 250 ml 삼각플라스크에 공시배지 100 ml를 넣고 살균하여 23℃로 조절된 배양실에서 30일간 배양한 후 여과하여 균사체의 80℃, 24시간 건조무게를 비교하였다.
이론/모형
- 액체배양용 염가배지 선발. 균사체 대량배양은 통 기식 액체배양법(정 등, 1996, 2003)에 준하여 시험하였다. 균사체 대량배양용 염가배지를 선발하고자 배지재료는 값이 저렴한 농산물가공 부산물로써 대두박, 당밀, 미강, 감자 (대조)를 사용하였다.
- 우수균주 선발. 수집균주들 중 균사체 대량배양을 위한 균주를 선발하기 위하여 1 /들이 Vial(Duran Scott) 로제작한 통기식액체배양병을 이용하였다(정 등, 1996). 액체배지로는 벌꿀바나나추출배지(HB)를 변형한 HB-M (Honey Banana extract Modified; 감자 100 g, 설탕 20 g, 바나나 5 g, 벌꿀 5 g, peptone 0.
성능/효과
- 05 g보다 L7배가 많았다. 곡물을 이용한 꽃송이버섯 균사체 배양시 수분조절 방법으로 현미는 1일간 침수 처리에서 균사체 생장이 빨랐으며, 밀과 보리는 삶는 방법이 좋았다. 그리고 밀은 보리보다 균 배양이 빨라서 좋았다.
- 따라서 균사체의 생장을 촉진시킬 수 있는 액체배양 기술을 적용하여 균사체의 이용성을 검토해볼 필요가 있다고 본다. 균사체 대량배양을 위한 값싼 배지재료를 선발하고자 시험한 결과 ASI150010 균주는 대두박 15 g// 추출시 균사량이 1.85g・30일■ 감자 200 g7 추출시 1.05g・30일t로써 대두박과 감자는 균사체배양용 배지의 추출재료로 이용이 가능하였다(Table10).
- 꽃송이버섯균의 균사생장에 적합한 환경조건을 구명하기 위하여 배양온도와 pH에 관하여 시험한 결과, 균 생장이 잘되는 배양온도는 20~25℃의 범위였고, 온도 범위를 좁혀서 확인한 결과 최적배양온도는 23℃이었으며(Table 5, Fig. i), HBA배지의 pH 6.0에서 균사생장 속도가 빨랐다(Table 6), Shim 둥(1998)이 보고한 최적배양온도 25℃, PDA배지에서 최적 pH 4, 0, Chang과 Choi(2004)7> 보고한 MEF 배지에서 pH 5.0, 그리고 서 등(2005)이 보고한 최적배양온도 25℃, PBA배지에서 최적 pH 5.0과 본 시험은 차이가 있었는데 이는 균주간 또는 시험방법의 차이로 인한 것으로 사료된다. 즉, 온도시험에서 본 시험은 15, 20, 25, 30, 35℃와 최적온도 구명을 위하여 19, 21, 23, 25, 27℃에서 시험하였는데, 다른 보고에서는 15, 20, 25, 30, 35℃에서만 시험한 결과이다.
- 꽃송이버섯균의 균사체 증식이 빠른 균주를 선발하기 위하여 HB(벌꿀바니나추출)액체배지 50ml에 AS1150001 등 8균주를 접종하여 25℃의 항온기에서 28일간 배양하고 균사체량을 비교한 결과(Table 3), ASI150010 균주가 51.0mg・50 #으로 균사체건조량이 가장 많았고, 다음이 ASI150002(48.7mg), 150001(42.3 mg), 150006(41.0 mg), 150003(38.0mg)의 순이었다. 그리고 ASI150008。53 mg), 150009(26.
- 2 mg) 균주는 잘 자라지 않는 경향이었다. 따라서 이후의 시험에는 삼각플라스크를 이용한 액체배양에서 균사체량이 가장 많았던 ASI150010 균주를 이용하였는데, 이 균주는 6개월 이상 경과된 시험관에서 꽃송이버섯 자실체가 형성된 것이 확인되었다.
- 그리고 pH는 본 시험이 HBA배지였으나, Shim 등(1998), Chang과 Choi(2004), 서 등(2005)은 각각 PDA, MEF, PBA 배지로 차이가 있었다. 또한 ASI150010 균주의 통기식 액체배양시 균사체 증식은 접종후 2일부터 12일까지 급신장하였고 배지의 pH 변화는 5일까지 상승하다가 이후 점차 낮아져 13일째에는 35 이하가 되는 경향을 보-이고 있었다(Fig. 2). 이것은 배지 양분의 소모 및 균생장에 따른 유기산의 축적에 의한 것으로 보.
- 증식용 배지를 선발하기 위하여 곰팡이나 버섯균의 증식용 배지로 이미 개발된 몇 가지 배지들과 벌꿀 바나나 추출 한천배지(HBA)를 공시한 결과 꽃송이버섯균은 HBA 배지에서 균생장 속도와 균총밀도가 가장 양호하였다. 그러나 MCM(Mushroom Complete Medium)배지와 Lilly 배지에서는 생육이 저조하였으며 Czapek-Dox 배지에서는 균이 전혀 자라지 못하였다(Table 4).
- 0 mg・50#로 가장 많았으며, starch, inuline, dextrin, mannitol 등 다당류는 잘 이용하지 못하였다(Tab 足 7). 질소원으로 ammonium nitrate 등 15종을 공시한 결과 읺utamine에서 28.0 mg, 50 #로 균사체 건조량이 가장 많았다(Table 8). Shim 둥(1998)이 탄소 원으로 maltose, 질소원으로 glycine이 가장 좋았다고 보고한 것과 약간의 차이가 있었다.
- 3111111・15일「'로균사생장이 빨랐다. 최적배양온도는 23℃이었으며 pH는 6.0이었고, 탄소원으로 fructose, 질소원은 glutamine을 잘 이용하였다. 꽃송이버섯균의 균사체 대량배양을 위한 균주로는 통기식 액체배양시 균사체 생산량이 많은 ASI150010 을 선발하였다.
- 탄소 원으로 glucose 등 단당류 5종, lactose 등 이당류 3종, dextrin 등 다당류 5종을 공시하여 균사체 건조무게를 비교한 결과 fructose에서 13.0 mg・50#로 가장 많았으며, starch, inuline, dextrin, mannitol 등 다당류는 잘 이용하지 못하였다(Tab 足 7). 질소원으로 ammonium nitrate 등 15종을 공시한 결과 읺utamine에서 28.
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