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제안 방법
- 8h). 기내 조직배양 시 계대배양은 한 달에 한번씩 수행하였고, 순화 후 약 7~10일에 한번 씩 관수하였다.
- 미리 준비된 유전자가 코팅된 gold를 사용하여 실험을 수행하였으며 (Fig. 9b), 유전자총 실험은 biolistic particle delivery system (PDS-1000/He, Bio-rad, USA)을 사용하여 사출거리 6 cm, 1회 shooting 한 후 3주간 PPT-free 배지에서 선발배지에서 배양 하기 전 지연기간을 거쳤다(Fig. 9c, g, h).
- 아그로박테리움 실험에서는 심비디움 PLB를 사용하여 Agrobacterium 접종 2일 전에 식물체를 준비하여 HCa배지에서 배양한 후, 실험 당일 침봉 처리를 수행하였다(Fig. 9d). 침봉 처리를 완료하고, 접종 용액에 20분 접종한 후, (Fig.
- 이때 얻은 rhizome은 100 mg/l kanamycin이 들어간 배지에서 선발하여 살아남은 rhizome을 nptⅡ 유전자가 도입된 형질전환체로 추정하였다.
- 실생계통 가운데 생육 및 개화특성이 우수한 개체를 선발하면 이 개체의 생육 및 개화특성이 균일하게 발현되는지 그리고 병해 등 환경적응성이 강한 개체 그리고 형질이 균일하게 발현여부를 검정하기 위해 일정량의 동일한 개체를 조직배양하여 증식한 다음 생육특성과 개화특성을 조사하여야 하는데 이를 특성검정이라 한다. 이러한 특성검정은 선발을 포함해 3회에 걸쳐 실시하며 최종적으로 우수한 계통은 선발하여 품종화 한다 (Fig. 4).
- 9m, n). 이와 같은 연구결과를 토대로 수립된 형질전환체계를 이용하여 수량 증대 및 환경 복합 저항성을 가진 형질전환 심비디움 식물체를 제조하여 그 특성을 분석하고 있다. 그러나 형질전환 심비디움 식물체 개발 관련 학술지 발표는 최근 20년간 5편 내외로 미미한 결과를 보이고 있기 때문에, 보다 안정적인 형질전환 방법을 확립하고자 더 많은 연구가 필요할 것으로 판단된다.
- 9c, g, h). 이후 PPT 5 mg/l가 첨가되어 있는 HCa 선발배지에서 약 8-10주간 선발하였고 (Fig. 9i), 5 mg/l PPT에서 살아남은 식물체만 골라낸 후 (Fig. 9j), 항생제가 없는 HCa 배지로 옮겨 재분화를 유도하였다 (Fig. 9k). 이후 화분으로 옮겨 심어 순화시켰고 (Fig.
- 9f, g, h). 이후 유전자 총을 이용한 실험에서와 같이 5 mg/l PPT가 함유된 HCa 배지에서 약 8-10주간 배양하면서 살아남은 식물체를 선발하였고 (Fig. 9i), 선발된 식물체는 cefotaxime 200mg/l만 들어있는 HCa 배지로 옮겨 재분화를 유도하였다(Fig. 9j, k). 각각에 사용된 배지 조성은 Table 4에서 언급하였다.
- 침봉 처리를 완료하고, 접종 용액에 20분 접종한 후, (Fig. 9e), AS 100 µM이 첨가되어 있는 HCa 배지에서 3일간 공동배양 시킨 후 수세하였고 PPT-free 배지에서 3주간 지연선발기간을 주었다 (Fig. 9f, g, h).
- 한편, 본 연구진은 PLB를 사용하여 유전자 총 실험과 Agrobacterium을 이용한 실험을 수행하였다.
대상 데이터
- 따라서 본 연구진은 PLB를 사용하여 조직배양 실험을 수행하였고, 사용 배지는 기본 HCa 배지를 사용하였다(Table 4).
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