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문제 정의
- 본 연구에서는 두충나무, 황벽나무의 등을 포함하는 수목 추출물에서 항산화효과시험, 항균력 및 항 아토피 효과시험을 실시하여 화장품 및 피부질환 치료제로서의 가능성을 조사하고자 하였다.
- 본 연구에서는 황벽나무, 두충나무 등이 함유된 수목추출물의 화장품 및 피부질환 치료용 소재로서의 사용가능성을 검토하였다. DPPH 자유라디칼 소거법으로 측정한 항산화력 시험결과, 복합추출물의 항산화력은 저농도에서는 비교적 낮았으나 1,000 μg/ml의 고농도에서는 비타민 C와 유사한 활성을 보여주었다.
제안 방법
- 결정된 농도의 접종된 배지를 500 μ씩 평판 배지 에 도말한 후 표면을 건조시 키고, 멸균한 paper disc(① 6 mm, Whatman, England)에 수목추출물 30 μl 씩을 분주하여 용매를 말린 후 평판 배지 위에 고착시켰다. 37 oC에서 24시간 배양한 후 디스크 주변에 형성된 억제 환 (clear zone) 지름을 측정하여 항균 활성을 확인하였다. 대조군으로는 80% 에탄올을 사용하였다.
- 아세톤 처리군은 유발군과 대조군에 적용한 물질과 동량으로 아세톤 만을 처리하였다. 그 후 실험군과 대조군의 피부에 200 μl의 0.5% DNCB 용액을 매일 4주간 도포하여 피부염증을 유발하였다. 유발 물질 도포 29일부터 실험군에 수목 추출물을 200 pl 씩 매일 14일간 도포하였고, 대조군은 기제 (물)를 동량 도포하였다.
- epidermidis는 TSB (Tryptic Soy Agar, Sigma, USA) 배지에 접종하여 배양하였다. 배양이 끝난 배지를 1/10, 1/20, 1/50, 1/100으로 희석하여 평판 배지에 각각 도말하고 배양한 후 균의 배양 정도를 육안 판정하여 배양농도를 결정하였다. 결정된 농도의 접종된 배지를 500 μ씩 평판 배지 에 도말한 후 표면을 건조시 키고, 멸균한 paper disc(① 6 mm, Whatman, England)에 수목추출물 30 μl 씩을 분주하여 용매를 말린 후 평판 배지 위에 고착시켰다.
- 생후 5주령의 무모생쥐 (hairless mouse, 중앙실험동물) 40마리를 구입하여 무처리군, 대조군, 실험군 각각 3군으로 분류하고 아토피 유발 시약의 기제인 아세톤을 사용했을 시 실험값을 보정하기 위해 아세톤 처리군을 4마리 분류하였다. 모든 무모생쥐는 실험 환경에 적응하도록 1주일간 적응시켰다.
- 유발 물질 도포 29일부터 실험군에 수목 추출물을 200 pl 씩 매일 14일간 도포하였고, 대조군은 기제 (물)를 동량 도포하였다. 수목추출물 도포 시작일과 도포 14일에 실험군과 대조군, 무처리군을 에틸에테르로 마취한 후 복부 대동맥에서 채혈하여 혈청을 분리하고, Mouse IgE ELISA KIT(SHIBAYAGI, Japan)를 이용하여 혈청 내 항체 IgE의 농도를 측정하였다.
- 수목추출물의 항 아토피 효과를 측정하기 위해, DNCB 희석액을 무모 생쥐의 피부에 29일간 도포하여 염증을 유발하였다. 29일째 (Day 0)부터 무모생쥐의 피부에 수목추출물을 도포하였으며, 도포 14일에는 외관상 거의 정상적인 피부상태를 회복하였다 (Fig.
- 모든 무모생쥐는 실험 환경에 적응하도록 1주일간 적응시켰다. 실험군과 대조군 총 24마리의 무모 생쥐의 피부에 1% DNCB(2, 4-dinitrochlorobenzene) 용액 200 pl 를 도포하여 일주일간 감작시켰다. 아세톤 처리군은 유발군과 대조군에 적용한 물질과 동량으로 아세톤 만을 처리하였다.
- 실험군과 대조군 총 24마리의 무모 생쥐의 피부에 1% DNCB(2, 4-dinitrochlorobenzene) 용액 200 pl 를 도포하여 일주일간 감작시켰다. 아세톤 처리군은 유발군과 대조군에 적용한 물질과 동량으로 아세톤 만을 처리하였다. 그 후 실험군과 대조군의 피부에 200 μl의 0.
- 5% DNCB 용액을 매일 4주간 도포하여 피부염증을 유발하였다. 유발 물질 도포 29일부터 실험군에 수목 추출물을 200 pl 씩 매일 14일간 도포하였고, 대조군은 기제 (물)를 동량 도포하였다. 수목추출물 도포 시작일과 도포 14일에 실험군과 대조군, 무처리군을 에틸에테르로 마취한 후 복부 대동맥에서 채혈하여 혈청을 분리하고, Mouse IgE ELISA KIT(SHIBAYAGI, Japan)를 이용하여 혈청 내 항체 IgE의 농도를 측정하였다.
대상 데이터
- 37 oC에서 24시간 배양한 후 디스크 주변에 형성된 억제 환 (clear zone) 지름을 측정하여 항균 활성을 확인하였다. 대조군으로는 80% 에탄올을 사용하였다.
- 본 연구에서 사용한 수목추출물은 바이오메틱스에 의해 제공되었으며 두충나무, 황벽나무 등의 껍질을 건조시킨 후, 분쇄, 열수 추출 및 숙성의 과정을 거쳐 제조되었다. 항산화력 시험은 DPPH 자유라디칼 소거법을 사용하여 측정하였다[10].
- 사용하였다[11]. 실험 균주인 Staphylococcus epidermidis 와 Propionibacterium acne(한국생명공학연구원 생물자원센터)를 1 백금이 취하여 P. acne는 혐기성 단지 (GasPak Jar, Sigma)를 이용한 GAM 당분해용 반유동배지 (Sigma, USA)에, S. epidermidis는 TSB (Tryptic Soy Agar, Sigma, USA) 배지에 접종하여 배양하였다. 배양이 끝난 배지를 1/10, 1/20, 1/50, 1/100으로 희석하여 평판 배지에 각각 도말하고 배양한 후 균의 배양 정도를 육안 판정하여 배양농도를 결정하였다.
이론/모형
- 수목추출물의 항산화효과는 DPPH 자유라디칼 소거 법으로 측정되었으며 그 결과가 Fig. 1에 나타나 있다. 추출물의 농도는 전체 부피 중 수목추출물의 건조질량으로 계산되었다.
- 항균력 시험은 피부상재균인 Staphylococcus epidermidis와 여드름 유발 균인 Propionibacterium acne를 이용한 원판확산법 (disc diffusion method)을 사용하였다[11]. 실험 균주인 Staphylococcus epidermidis 와 Propionibacterium acne(한국생명공학연구원 생물자원센터)를 1 백금이 취하여 P.
- 및 숙성의 과정을 거쳐 제조되었다. 항산화력 시험은 DPPH 자유라디칼 소거법을 사용하여 측정하였다[10]. 100 μl의 0.
성능/효과
- 29일째 (Day 0)부터 무모생쥐의 피부에 수목추출물을 도포하였으며, 도포 14일에는 외관상 거의 정상적인 피부상태를 회복하였다 (Fig. 3).
- 검토하였다. DPPH 자유라디칼 소거법으로 측정한 항산화력 시험결과, 복합추출물의 항산화력은 저농도에서는 비교적 낮았으나 1,000 μg/ml의 고농도에서는 비타민 C와 유사한 활성을 보여주었다. 수목추출물은 피부 상재균인 Staphylococcus epidermidis에 대해서는 항균력이 적은 반면, 여드름 유발균인 Propionibacterium acne에 대해 특히 우수한 항균력을 보여주는 선택적 항균력을 보유하여 항 여드름 소재로서 매우 뛰어난 특성을 나타내었다.
- 24 μg/m로 대조군에 비해 16%가 낮았다. 따라서 수목추출물은 우수한 항여드름효과 및 항아토피 효과를 나타내어, 화장품 및 피부질환 치료용 소재로서 높은 가능성을 보여주었다.
- [15]. 따라서 수목추출물의 이러한 약리성분이 본 연구에서 항여드름 및 항아토피 효과를 발휘하는 것으로 추측된다.
- 수목추출물은 피부 상재균인 Staphylococcus epidermidis에 대해서는 항균력이 적은 반면, 여드름 유발균인 Propionibacterium acne에 대해 특히 우수한 항균력을 보여주는 선택적 항균력을 보유하여 항 여드름 소재로서 매우 뛰어난 특성을 나타내었다. 무모생쥐를 이용한 항아토피 시험 결과, DNCB 에 의해 유도된 피부염증을 수목추출물 도포 14일에 거의 정상적인 피부상태를 회복하게 하였으며, 혈액의 IgE 측정 결과 IgE의 농도는 1.24 μg/m로 대조군에 비해 16%가 낮았다. 따라서 수목추출물은 우수한 항여드름효과 및 항아토피 효과를 나타내어, 화장품 및 피부질환 치료용 소재로서 높은 가능성을 보여주었다.
- 무모생쥐의 항체 IgE의 농도변화는 무처리군의 경우 농도가 0.02 μ g/ml로 수목추출물의 도포전과 거의 변화가 없었으며, 염증 유발 후 기제 (물) 만을 14일 바른 대조군의 경우 IgE의 농도가 1.47 曲/ml인 반면 수목추출물을 바른 실험군의 경우 IgE의 농도가 1.24 μg/m로 나타났다 (Fig. 4). 수목추출물을 사용한 경우에는 기제 만을 바른 경우에 비해 IgE가 16% 감소하였으며, t-test 결과 유의성이 있는 것으로 나타났다.
- 따라서 수목추출물을 도포한 경우 항체의 농도가 감소했다는 사실은 항 아토피 효과가 있음을 의미한다. 본 실험 결과 수목 추출물을 도포한 무모생쥐는 14일 경에는 피부의 상태가 거의 정상 상태를 회복하였고, IgE의 농도 또한 대조군에 비해 낮아져서, 수목 추출물은 항 아토피 소재로서 가능성이 높음을 알 수 있었다.
- DPPH 자유라디칼 소거법으로 측정한 항산화력 시험결과, 복합추출물의 항산화력은 저농도에서는 비교적 낮았으나 1,000 μg/ml의 고농도에서는 비타민 C와 유사한 활성을 보여주었다. 수목추출물은 피부 상재균인 Staphylococcus epidermidis에 대해서는 항균력이 적은 반면, 여드름 유발균인 Propionibacterium acne에 대해 특히 우수한 항균력을 보여주는 선택적 항균력을 보유하여 항 여드름 소재로서 매우 뛰어난 특성을 나타내었다. 무모생쥐를 이용한 항아토피 시험 결과, DNCB 에 의해 유도된 피부염증을 수목추출물 도포 14일에 거의 정상적인 피부상태를 회복하게 하였으며, 혈액의 IgE 측정 결과 IgE의 농도는 1.
- 4). 수목추출물을 사용한 경우에는 기제 만을 바른 경우에 비해 IgE가 16% 감소하였으며, t-test 결과 유의성이 있는 것으로 나타났다.
- 추출물이 우수한 항여드름소재가 되기 위해서는 일반 피부 상재균에는 항균력이 적은 반면, 여드름 균인 Propionibacterium acne 에 대한 선택적 향균성이 특히 중요하다 [9]. 수목추출은 피부 상재균인 Staphylococcus epidermidis에 대해서는 낮은 항균력을 보이지만, 여드름 유발균인 Propionibacterium acne에 대해서는 높은 항균력을 보여주어, 항여드름소재로서 매우 우수한 특성을 보여주었다.
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