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문제 정의
- 본 연구에서는 KPC(제3개정 추보1)에 수재되어 있는 ‘복방서양산사60%에탄올엑스·은행엽엑스· 마늘유캡슐’의 기준 및 시험방법 중 정량법를 재검토하고자 하였다.
- 그러나, 은행엽엑스와 서양산사60%에탄올엑스 중 플라 보노이드가 특이한 별개성분이 아닌 유사한 물질로 이루어져 있어, 각각의 확인과 함량시험법 설정이 무의미한 실정이다. 이에 따라 제제의 특징적인 확인시험법과 함량시험법을 재설정하여 안정적인 품질관리를 돕는데 목적을 두었다.
제안 방법
- 가) 플라보노이드: quercetin, kaempferol 및 isorhamnetin 표준품을 메탄올에 넣어 각각 0.125 mg/mL, 0.125 mg/mL 및 0.03 mg/mL의 농도로 맞추어 사용하였다.
- 나) 테르펜락톤: bilobalide, ginkgolide A, B 및 C를 메탄 올에 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 mg/ml의 농도로 맞추어 사용하였다.
- 동 제제에 함유된 은행엽엑스의 테르펜락톤의 분석법 적합성을 검토하였다. 기존 KPC 추보 1에 수재되어 있는 은행엽엑스의 테르펜락톤 분석법에 따라 실험한 결과 Fig.
- 2 mL이었다. 크로마토그램은 자외부흡광광도계(측정파장 257 nm)를 이용하여 검출하였다. 표준액과 검액을 가지고 함량결과를 계산한 식은 다음과 같다.
- 크로마토그램은 증기화 관산란 검출기 (ELSD ALLTECH 2000ES, USA)를 이용하여 draft tube의 온도는 95°C이며, 기체유속은 2.5 mL/min에서 검출하였다.
대상 데이터
- 1) Flavonoid: 사용한 HPLC장치는 Agilent alliance 1200(Agilent technology, USA)이었으며, 컬럼은 Capcellpack C18(Shiseido, UG120 5 µm, 4.6×250 mm, Japan)을 사용하였다.
- 2) Terpene lactone: 사용한 HPLC장치는 Agilent alliance 1200 (Agilent technology, USA)이었으며, 컬럼은 Capcellpack C18(Shiseido, UG120 5 µm, 4.6×250 mm, Japan)을 사용하였다.
- Evaporative Light Scattering Detector는 Alltech Associates (미국)의 ELSD2000ES를 사용하였다.
- HPLC 분석을 위한 용매는 Merk 사의 HPLC급 용매를 사용하였고 그 외 시료 추출과 분석을 위한 시약은 분석용 특급 또는 1급 시약을 사용하였다. HPLC system은 Agilent technology(USA)의 automated sampler injector (G1319A), Waters allience 1200, photodiode array detector (G1315D) 및 Pump-G1312ABIN로 구성되었다.
- 시약 및 기기 − Ginkgo flavonoid 표준품인 quercetin, kaempferol, isorhamnetin과 terpene lactone 표준품인 bilobalide, ginkgolide A, B, C는 Sigma사(USA)을 사용하였다. HPLC 분석을 위한 용매는 Merk 사의 HPLC급 용매를 사용하였고 그 외 시료 추출과 분석을 위한 시약은 분석용 특급 또는 1급 시약을 사용하였다. HPLC system은 Agilent technology(USA)의 automated sampler injector (G1319A), Waters allience 1200, photodiode array detector (G1315D) 및 Pump-G1312ABIN로 구성되었다.
- 시약 및 기기 − Ginkgo flavonoid 표준품인 quercetin, kaempferol, isorhamnetin과 terpene lactone 표준품인 bilobalide, ginkgolide A, B, C는 Sigma사(USA)을 사용하였다.
- 실험재료 − 본 연구에 사용한 서양산사엑스, 은행엽엑스는 국내에 유통되고 최종 의약품에서 실제 사용되는 원료 의약품을 해당 제조사로부터 확보하여 사용하였다.
- 실험재료로 국내에서 유통되고 있는 복방서양산사60%에탄올엑 스·은행엽엑스·마늘유캡슐 5 품목을 시장에서 구입하여 사용하였다.
- 이동상은 메탄올·물·인산 (100 : 100 : 1)을 사용 하였으며, 전개온도는 실온이었으며 유속은 분당 1.2 mL이었다.
- 6×250 mm, Japan)을 사용하였다. 이동상은 메탄올을 사용하였으며, 전개온도는 실온이었으며 유속은 분당 1.0 mL이었다. 크로마토그램은 증기화 관산란 검출기 (ELSD ALLTECH 2000ES, USA)를 이용하여 draft tube의 온도는 95°C이며, 기체유속은 2.
성능/효과
- 5.)에서는 총테르펜락톤(빌로발라이드, 깅콜라이드 A, 깅콜라이드 B, 깅콜라이드 C의 총량)피크가 분리가 잘되는 것을 알 수 있으나, 복방서양산사60%에탄올엑스·은행엽엑스·마늘유제제에서는 KPC에 수재된 시험법에 따라서 실험한 결과 terpene lactone 피크들이 정확하게 분리되지 않음을 알 수 있다.
- )에서도 동 분석법에 따라 관찰되었다. 따라서 복합제제에서는 quercetin, kaemperol and isorahmnetin를 기준으로 플라보노이드를 규격화할 때 서양 산사엑스 중에 함유된 양도 고려하지 않는다면 현재 함량 기준치인 22.0~27.0%를 초과하는 결과가 나타남을 알 수 있었다. 따라서, 서양산사60%에탄올엑스와 은행엽엑스 함유 플라보노이드 함량을 총량으로 관리하는 기준안 마련이 타당한 것으로 사료된다.
- 0%를 초과하는 결과가 나타남을 알 수 있었다. 따라서, 서양산사60%에탄올엑스와 은행엽엑스 함유 플라보노이드 함량을 총량으로 관리하는 기준안 마련이 타당한 것으로 사료된다. 본 연구를 통해 확립된 복방서양산사60%에탄올엑스·은행엽엑스·마늘유캡슐의 분석법 및 함량규격은 국내에서 사용되는 동 제제에 대한 기준 및 시험법 및 규격으로 활용됨으로써 효율적인 품질관리에 기여할 것으로 기대된다.
- 이러한 제제에 따른 확인시험 결과를 규격시험에 적용하면 기존의 방법보다 명확하고 간단하게 실험할 수 있으며, 패턴이 표준액 및 각 엑스와 동일함을 확인할 수 있었다.
- 이와 같은 결과로부터, 서양산사60%에탄올엑스·은행엽 엑스·마늘유캡슐에서는 빌로발라이드를 제외한, 깅콜라이드 A, B, C는 피크가 분리되지 않아, 은행엽엑스의 ‘총테 르펜락톤의 량’으로 기준을 적용할 수 없다고 판단된다.
- 이는 복합제제의 타 성분들 즉, 서양산사 엑스 및 멜리사엽엑스 등이 빌로발라이드외 깅콜라이드 A, B, C 피크에 간섭현상을 일으키는 것으로 사료된다. 한편동 제제의 은행엽엑스의 분량이 매우 낮아 검체를 90 캡슐 이상 취해야 하는 문제가 있음을 확인하였다. 따라서 복합 제제 중 terpene lactone을 개별적으로 정량하는 것은 차후시험법 등의 개선이 필요할 것으로 사료된다.
후속연구
- 한편동 제제의 은행엽엑스의 분량이 매우 낮아 검체를 90 캡슐 이상 취해야 하는 문제가 있음을 확인하였다. 따라서 복합 제제 중 terpene lactone을 개별적으로 정량하는 것은 차후시험법 등의 개선이 필요할 것으로 사료된다.
- 본 연구를 통해 확립된 복방서양산사60%에탄올엑스·은행엽엑스·마늘유캡슐의 분석법 및 함량규격은 국내에서 사용되는 동 제제에 대한 기준 및 시험법 및 규격으로 활용됨으로써 효율적인 품질관리에 기여할 것으로 기대된다.
- 특히 은행엽엑스와 서양산사60%에탄올엑스 중 flavonoid는 Fig. 1.과 같이 유사한 물질들이 함유되어 있어 제제의 특징에 맞는 분석법으로 품질관리를 할 경우 중복 실험을 지양할 수 있으리라 사료된다.
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