Licorice(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) is recorded as the root of Glycyrrhiza uralensis Fischer or Glycyrrhiza glabra Linne or Glycyrrhiza inflata Bat.(Leguminosae) in Korean Pharmacopoeia $9^{th}$ edition (KP9) and Chinese Pharmacopoeia 2005(CP2005), Glycyrrhiza uralensis Fischer or Gly...
Licorice(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) is recorded as the root of Glycyrrhiza uralensis Fischer or Glycyrrhiza glabra Linne or Glycyrrhiza inflata Bat.(Leguminosae) in Korean Pharmacopoeia $9^{th}$ edition (KP9) and Chinese Pharmacopoeia 2005(CP2005), Glycyrrhiza uralensis Fischer or Glycyrrhiza glabra Linne in Japanese Pharmacopoeia 2005(JP2005). It is established the content standard of Glycyrrhizin 2.5 % and liquiritin 1% in KP9 and CP2005. But, according to the reports, all Licorice species were not sufficient for content standard of liquiritin 1.0% for licorice in KP9 and CP2005. It shows different content of liquiritin among G. uralensis, G. glabra and G. inflata. Also, it was reported liquiritin, liquiritin apioside are transformed into liquiritigenin by human internal flora. Therefore, we have studied for the pre-treatment condition and analytical method of liquiritigenin; It was good efficinet in 2M HCl reflux(1 hr) for hydrolysis and in methylene chloride for solvent fractionation. And 1% acetic acid in DW(A) and acetonitrile(B) with gradient condition as a mobile phase was most effective in HPLC analytical condition. According to these experimental methods, we have anlayzed content of liquiritigenin about 77 Licorice sample. In this research, it was also examined the content of liquiritin and liquiritigenin for Glycyrrhizae Radix related growing area. According to the results, we suggested the content standard of glycyrrhizin more than 2.5%, liquiritigenin more than 0.7%(after hydrolysis) of licorice.
Licorice(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) is recorded as the root of Glycyrrhiza uralensis Fischer or Glycyrrhiza glabra Linne or Glycyrrhiza inflata Bat.(Leguminosae) in Korean Pharmacopoeia $9^{th}$ edition (KP9) and Chinese Pharmacopoeia 2005(CP2005), Glycyrrhiza uralensis Fischer or Glycyrrhiza glabra Linne in Japanese Pharmacopoeia 2005(JP2005). It is established the content standard of Glycyrrhizin 2.5 % and liquiritin 1% in KP9 and CP2005. But, according to the reports, all Licorice species were not sufficient for content standard of liquiritin 1.0% for licorice in KP9 and CP2005. It shows different content of liquiritin among G. uralensis, G. glabra and G. inflata. Also, it was reported liquiritin, liquiritin apioside are transformed into liquiritigenin by human internal flora. Therefore, we have studied for the pre-treatment condition and analytical method of liquiritigenin; It was good efficinet in 2M HCl reflux(1 hr) for hydrolysis and in methylene chloride for solvent fractionation. And 1% acetic acid in DW(A) and acetonitrile(B) with gradient condition as a mobile phase was most effective in HPLC analytical condition. According to these experimental methods, we have anlayzed content of liquiritigenin about 77 Licorice sample. In this research, it was also examined the content of liquiritin and liquiritigenin for Glycyrrhizae Radix related growing area. According to the results, we suggested the content standard of glycyrrhizin more than 2.5%, liquiritigenin more than 0.7%(after hydrolysis) of licorice.
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제안 방법
감초 중 리퀴리틴은 함량이 낮고, 체내에서 리퀴리티게닌으로 전환되므로, 가수분해를 통한 리퀴리티게닌으로의 전환 후 정량하는 연구를 수행하였다. 감초 중 리퀴리티게닌 정량을 위한 가수분해 조건 검토결과, 감초 검체를 2M 염산으로 1시간 환류추출하는 것이 가장 효율적이었다.
5 % 초산용액(B)를 기울기용리를 통해 분석하였다. 기울기용리는 다음과 같다; 0분 A : B = 75 : 25, 20분 A : B = 75 : 25, 30분 A : B = 65 : 35, 45분 A : B = 75 : 25, 유량은 1.0 mL/분으로 하였으며, 검출파장은 276 nm로 하여 분석하였다.
)를 가수분해하여 리퀴리티게닌의 함량 분석을 실시하였다. 또한, 리퀴리티게닌의 분석을 위한 가수분해 조건, 분석법 밸리데이션 등을 수행하였으며, 개발한 분석법으로 감초 검체 77개에 대해 리퀴리티게닌 함량을 분석하여 함량기준(안)을 도출하였다.
분석전처리 및 분석법 밸리데이션 - 가수분해 영향을 미치는 용매, 산 농도, 추출시간 등을 검토하였으며, 분석시 직선성, 범위, 검출한계, 정량한계, 특이성, 재현성, 완건성(컬럼, 유기첨가제)에 따른 밸리데이션을 수행하였다.
분석조건 − 이동상 아세토니트릴(A), 0.5 % 초산용액(B)를 기울기용리를 통해 분석하였다.
실험방법 - 감초 검체를 가수분해 처리 후 HPLC-UV를 이용하여 리퀴리티게닌을 분석하고 정량하였다.
이에 본 연구에서는 감초에 함유된 리퀴리틴류(리퀴리틴, 리퀴리티게닌, 리퀴리틴 아피오사이드)(Fig. 1.)를 가수분해하여 리퀴리티게닌의 함량 분석을 실시하였다. 또한, 리퀴리티게닌의 분석을 위한 가수분해 조건, 분석법 밸리데이션 등을 수행하였으며, 개발한 분석법으로 감초 검체 77개에 대해 리퀴리티게닌 함량을 분석하여 함량기준(안)을 도출하였다.
또한, 리퀴리티게닌의 HPLC 분석을 위한 이동상 조건으로 1% 아세트산(A)과 아세토니트릴(B) 용매를 기울기용리로 하였을 때 효과적이었다. 함량 모니터링 연구 결과를 통해 대한 약전 9개정에 수재된 감초의 함량기준을 글리시리진산 2.5% 이상, 리퀴리티게닌 0.7% 이상으로 수정·제안하였다.
함량모니터링 − 개발된 분석법을 이용하여 감초 검체 77건에 대해 리퀴리틴, 리퀴리티게닌 함량 분석 및 가수분해 후 리퀴리티게닌 함량 모니터링을 실시하였다.
대상 데이터
기기 및 시약 - 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)는 Agilent 1100 Series System을 사용하였으며, Autosampler, 컬럼 오븐 및 Photodiode Array Detector(PDA)를 사용하였다.
소프트웨어는 Chemstation을 사용하였다. 시료 추출에 사용된 환류추출기는 다솔과학 DS-27S4D 추출항온수조, 감압농축기는 EYELA JP/CVE-2000를 사용하였다. 분석에 사용된 컬럼은 Supelco C18(5 µm, 4.
실험에 사용된 시약은 염산(Wako 083-03435), 디클로로메탄(Wako 135-02446), 황산(Wako 195-04706), 초산(Wako 014-00266), 인산(Wako 167-02166), 아세토니트릴(HPLC용, Merck 1.00030.4000), 물(3차 증류수,)을 사용하였다. 실험에 사용된 표준품은 리퀴리티게닌(한약재과학화연구 결과물질)을 사용하였다.
4000), 물(3차 증류수,)을 사용하였다. 실험에 사용된 표준품은 리퀴리티게닌(한약재과학화연구 결과물질)을 사용하였다.
실험재료 - 감초의 국내 유통품은 서울·경기, 경상도, 전라도, 충청도 및 강원도 각 지역별로 분산하여 한약재도매업소에서 규격품을 구입하였고, 일부는 중국에서 감초를 직접 수입하는 업체를 통해 구입하거나, 채취한 것을 구해 실험하였다.
이론/모형
실험방법 - 감초 검체를 가수분해 처리 후 HPLC-UV를 이용하여 리퀴리티게닌을 분석하고 정량하였다.(가수분해 및 HPLC 분석법은 밸리데이션 후 적용하였다.)수분해 및 HPLC 분석법은 밸리데이션 후 적용하였다.)
성능/효과
0% 이상으로, 기준을 충족하지 못하는 검체가 36건이었다.(부적합률 47%) 따라서, 감초의 유효성분인 리퀴리티게닌을 감초 가수분해를 통해 정량하였으며, 모든 감초에서 리퀴리티게닌을 정량할 수 있었다.(Table II) 감초 가수분해 후 리퀴리티게닌 함량 평균(m)은 0.
가수분해 - 리퀴리틴류(리퀴리틴, 리퀴리틴 아피오사이드, 리퀴리티게닌)의 가수분해시 리퀴리티게닌으로 변환됨을 HPLC-UV 및 LC/MS/MS를 통하여 확인하였으며 (Fig. 2), 가수분해시 2M 염산을 가하여 1시간 동안 환류추출하는 조건이 리퀴리틴, 리퀴리틴 아피오사이드가 리퀴리티게닌으로 전환되는데 가장 효율적이었다.
감초 중 리퀴리틴은 함량이 낮고, 체내에서 리퀴리티게닌으로 전환되므로, 가수분해를 통한 리퀴리티게닌으로의 전환 후 정량하는 연구를 수행하였다. 감초 중 리퀴리티게닌 정량을 위한 가수분해 조건 검토결과, 감초 검체를 2M 염산으로 1시간 환류추출하는 것이 가장 효율적이었다. 또한, 리퀴리티게닌의 HPLC 분석을 위한 이동상 조건으로 1% 아세트산(A)과 아세토니트릴(B) 용매를 기울기용리로 하였을 때 효과적이었다.
완건성 (Robustness) − 컬럼 및 유기첨가제의 변화 등의 변화에 따른 분석결과, 4가지 컬럼 종류를 사용하였을 때, 머무름시간은 조금씩 차이가 있었지만, 리퀴리티게닌은 완전히 분리 분석됨을 알 수 있었다. 또한, 3가지 산(인산, 초산, 개미산) 및 각 산의 농도 변화에 따른 분석결과 모두 리퀴리티게닌이 완전히 분리분석되었으며, 이중 0.5% 초산의 경우 가장 양호한 분석결과를 보였다. (Fig.
감초 중 리퀴리티게닌 정량을 위한 가수분해 조건 검토결과, 감초 검체를 2M 염산으로 1시간 환류추출하는 것이 가장 효율적이었다. 또한, 리퀴리티게닌의 HPLC 분석을 위한 이동상 조건으로 1% 아세트산(A)과 아세토니트릴(B) 용매를 기울기용리로 하였을 때 효과적이었다. 함량 모니터링 연구 결과를 통해 대한 약전 9개정에 수재된 감초의 함량기준을 글리시리진산 2.
완건성 (Robustness) − 컬럼 및 유기첨가제의 변화 등의 변화에 따른 분석결과, 4가지 컬럼 종류를 사용하였을 때, 머무름시간은 조금씩 차이가 있었지만, 리퀴리티게닌은 완전히 분리 분석됨을 알 수 있었다.
12였다. 이러한 결과를 바탕으로, 가수분해 후 리퀴리티게닌의 함량을 0.7% 이상으로 제안할 경우, 감초 77개 검체 중 6개의 검체만 0.7% 이하로 나타났다.(부적합률 7.
재현성 (Repeatability) − 리퀴리티게닌 표준품(0.5 mg/mL)을 3번 연속 분석하였을 때, 피크 면적의 측정 재현성은 상대표준편차(RSD) 0.45% 로 우수하였으며, 머무름시간의 재현성도 상대표준편차(RSD) 1.78%로 우수하였다.
함량모니터링 − 개발된 분석법을 이용하여 감초 검체 77건에 대해 리퀴리틴, 리퀴리티게닌 함량 분석 및 가수분해 후 리퀴리티게닌 함량 모니터링을 실시하였다. 함량 모니터링 결과, 리퀴리틴 0~3.55%, 리퀴리티게닌 0~1.84%, 가수분해 후 리퀴리티게닌 0.58~1.73%의 함량을 보였다. 그러나, 현행 대한약전 9개정 감초의 기준은 리퀴리틴 1.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
감초란?
감초(Licorice, Glycyrrhizae Radix et Rhizoma)는 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer), 광과감초(Glycyrrhiza glabra Linne), 창과감초(Glycyrrhiza inflata Batal.)의 뿌리 및 뿌리줄기로서 그대로 또는 주피를 제거한 것이다.1) 감초는 콩과(Leguminosae)에 속하며, 한의학적으로 청열해독(淸熱解毒), 윤폐지해(潤肺止咳), 보비익기(補裨益氣), 조화제약(調和諸藥)의 효능이 있다.
감초의 성분은?
2) 또한, 항염증 작용, 항암작용, 해독작용, 항산화작용, 순환계 작용, 항미생물 작용 등이 보고되었다.3-7) 감초의 성분은 글리시리진, 리퀴리틴, 이소리퀴리틴, 리퀴리티게닌, 이소리퀴리티게닌, 글리시롤 등 14종의 화합물이 분리·보고되었다.8,9) 이러한 물질 중 감초의 주성분은 글리시리진, 리퀴리틴, 리퀴리틴 아피오사이드, 이소리퀴리틴, 이소리퀴리틴 아피오사이드, 리퀴리티게닌 6개라고 보고되었다.
감초의 성분인 리퀴리티게닌의 장점은?
0% 이상으로 기준을 설정하였다.1)그러나, 리퀴리틴의 경우 체내에 흡수되면 비당체 형태인 리퀴리티게닌으로 전환되고, 11) 리퀴리티게닌의 다양한 활성(간보호 활성,12) tyrosinase 활성 억제를 통한 멜라민 생성 억제,13) 진해효과,14) 신경보호활성15), 항염증 활성,16) estrogenic 활성,17) 등)이 보고되어있다. 또한, 산재성 칸디다증 억제활성 및 카드뮴 유래 세포 사멸억제의 경우 리퀴리틴은 활성이 없지만, 리퀴리티게닌은 활성이 있음이 보고되어있다.
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