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문제 정의
- 수삼과 상황버섯은 면역활성 및 항암활성 등이 널리 알려진 원료로서 그 자체 또는 추출물의 형태로 식품(또는 기능성식품) 등에 이용되고 있으나, 최근 소비자들의 홍삼 선호 및 버섯가공성과 가격으로 인한 식품가공에서 수삼과 버섯의 이용성 감소와 함께 홍삼가공 공정 도입에 따른 재정적 부담이 문제가 되고 있다. 따라서 본 연구에서는 홍삼을 대체할 수 있는 기능성소재로서의 부가가치를 창출하고 식품가공에서의 이용성과 경제성 등을 확보하기 위한 방안으로 수삼에 대한 상황버섯 균사체의 생물학적 전환기법(발효)을 이용하고자 하였다. 즉, 수삼 원료에 상황버섯균사체가 생육한다면 발효과정에서 수삼 기질로부터 다양한 영양성분을 얻기 위하여 균사체가 수삼에 작용할 것이며 이는 수삼의 다양한 활성성분에도 관여하여 생리활성에도 영향을 줄 수 있을 것이기 때문이다.
- 05%)보다 유의적으로 증가하였는데, 이러한 수율의 증가는 균체량 증가와 함께 균사체로부터 amylase, protease 또는 polygalacturonase 등의 세포벽 또는 세포막의 다당류와 단백다당류를 붕괴시킬 수 있는 분해효소의 분비가 증가되고 이로 인해 기질로부터 고분자물질의 추출이 촉진될 수 있다는 보고(31)와도 일치하는 것으로 보인다. 또한, 수삼-상황버섯 균사체 발효물이 수삼에 균사체가 단순하게 배양된 것이 아니고 본 연구의 목적에서 언급한 균사체의 생물학적 전환과정으로 형성된 발효물인지를 확인하기 위해서 시료대조군과 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 조다당획분의 구성분을 분석하고자 하였다. 열수추출물로부터 EtOH 침전에 의해 분획된 조다당획분은 주로 다당류 또는 단백다당의 고분자물질로 구성되어 있으므로(21), 조다당획분의 구성분으로서 중성당, 산성당 및 단백질을 분석하였다(4회 반복).
- 따라서 수삼-상황버섯 균사체 발효물에 함유된 다당류는 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 다당류보다 활성이 증강되었음을 보여주고 있는데, 이러한 원인이 수삼의 상황균사체 단순배양이 아닌 발효과정에서의 생물학적 전환에 의한 것임을 명백히 하기 위하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물과 시료대조군 동일획분간의 구성분과 구성당 특성을 비교분석하였다. 본 논문에서는 3개의 활성 다당획분 중, 특히 측정한 면역활성 3종류에 모두 높은 활성을 나타낸 0.2 M NaCl에서 분획된 WG-PL-CP-III와 마이토젠과 장관면역 활성에서 높은 활성을 나타낸 WG-CP-IV의 2종류 활성 다당획분을 시료대조군 동일획분(WG-CP-III와 IV 및 PL-CP-III와 IV)과 비교함으로써 발효과정에 따른 다당류의 변화와 활성에 미치는 영향에 관하여 밝히고자 하였다. 먼저, 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 분획된 활성 다당획분의 구성분 분석결과, WG-PLCP-III와 IV는 중성당이 73.
- 1). 이러한 column profile의 차이는 고체배양 중 균사체로부터 유래된 고분자 물질(다당류 또는 단백다당류 등)에 기인할 수도 있으나 발효과정 중 배양된 균사체로부터 생산된 효소 등의 다양한 수식에 의해 수삼의 고분자 물질이 전환될 수 있는 가능성도 제시하고 있기 때문에, 분획된 획분의 활성비교와 함께 구성분 및 구성당을 분석하여 고체 배양을 통한 수삼-상황버섯 균사체 발효물이 수삼에 대한 상황균 사체의 단순배양이 아니고 균사체의 생물학적 전환에 의한 것인지의 여부를 확인하고자 하였다.
- 즉, 수삼 원료에 상황버섯균사체가 생육한다면 발효과정에서 수삼 기질로부터 다양한 영양성분을 얻기 위하여 균사체가 수삼에 작용할 것이며 이는 수삼의 다양한 활성성분에도 관여하여 생리활성에도 영향을 줄 수 있을 것이기 때문이다. 이에 본 논문에서는 고체배양을 통한 수삼의 상황버섯 균사체 발효물을 조제하고 면역활성에 관여하는 다당류에 초점을 맞추어 다양한 획분을 분획한 후, 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물 획분과의 면역활성 비교를 통한 면역활성 증강여부와 구성분 및 구성당 분석으로 발효 중 생물학적 전환여부를 확인함으로써 기능성소재로서 가능성을 제시하고자 하였다.
- 05) 통계학적인 유의성은 없었으나 중성당은 감소하면서 상대적으로 산성당이 증가된 결과를 보여주었고, 단백질은 일정한 양상을 보이지 않았다. 특히, 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당획분의 구성분 분석 중 다당류의 주성분인 중성당과 산성당 함량에서의 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물과의 차이는 균사체 발효를 통한 수삼성분의 생물학적 전환 가능성을 보여주는 것으로 사료되므로 면역활성 다당획분의 분획과정에 따른 발효물 활성획분과 시료대조군 획분의 구성분과 구성당 분석을 통하여 다당류의 물질전환을 확인하고자 하였다.
제안 방법
- BALB/C 마우스(6-8주령, female)를 경구탈추시킨 후 멸균적으로 비장(spleen)을 적출하여 마쇄하고 0.2% NaCl과 금속망(200)을 이용하여 적혈구와 이물질을 제거시킨 후 splenocyte를 회수하였다. 회수한 비장세포는 1% penicillin-streptomycin, 0.
- C3H/He 마우스(6-8주령, female) 복부를 절개하여 소장벽 위에 존재하는 Peyer’s patch를 조심스럽게 적출한 후 HBSS 용액이 담겨진 petridish에서 옮겨 마쇄하고 0.2% NaCl과 금속망(# 200)을 이용하여 적혈구와 이물질을 제거시킨 후 Peyer’s patch 세포액으로 조제하였다.
- 고체배양으로 조제한 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 조다당획분(WG-PL-CP)을 물에 녹여 증류수로 평형화시킨 DEAESepharose CL-6B(Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden)가 충진된 column(Cl− form, 4.0×30.0 cm)에 loading한 후 증류수와 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1.0 및 2.0 M NaCl 용액으로 차례로 용출시키고 각 획분을 투석, 농축 및 동결건조하여 증류수 용출획분(WG-PL-CP-I)과 0.1-1.0 M NaCl 농도별 용출획분인 WG-PL-CPII(0.1 M), III(0.2 M), IV(0.3 M), V(0.4 M), VI(0.5 M)과 VII(1.0 M)의 7개의 획분을 얻었다.
- linteus) 균주는 충청북도 농업기술원(Cheongwon, Korea)으로부터 분양 받았다. 고체배양의 상황버섯 종균을 조제하기 위하여 mushroom complete medium(MCM) 액체배지에 위에서 언급한 수삼의 열수추출로부터 조제된 수삼추출물(고형분 65%)이 5% 농도가 되도록 첨가하여 진탕배양기(SI-4100R, Jeio Tech, Daejeon, Korea)에서 30℃로 배양하였다. 한편, 상황버섯 균사체의 고체배양에 의한 수삼발효물(수삼-상황버섯 균사체 발효물)은 수삼을 수세한 후 실온에서 3-4일간 건조시켜 수분함량을 조절하고 조직을 연화시킨 후 현미분말을 10% 첨가하여 121℃에서 20분 멸균시킨 수삼에 상황버섯 종균을 10% 접종하고 30일간 30℃에서 배양(Multi Room Incubator, Vision Scientific, Bucheon, Korea)하고 동결건조하여 제조하였다.
- 다음으로 (CH2CO)2O(Sigma-Aldrich Co.)를 첨가하여 alditol acetate 유도체로 전환시킨 후 SP-2380 column(0.2 µm film, 0.25 mm i.d×30 m, Supelco, Bellefonte, PA, USA)이 장착된 gas chromatography(Young Lin Co. Ltd., Anyang, Korea)로 구성당을 분석하였다.
- 다음으로 상등액을 제거하고 10% FBS가 함유된 RPMI 1640-FBS로 3회 세척하여 non-adherent cell을 제거시킨 후 세척된 각 well에 RPMI 1640-FBS 180 µL와 20 µL의 시료를 분주하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하면서 마크로파지를 자극하였다.
- 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당획분의 음이온교환수지로 분획된 다양한 획분 중 WG-PL-CP-II, III와 IV는 10% 이상의 높은 수율과 함께 측정한 면역활성의 종류에 따라 특정 획분이 시료대조군의 동일획분뿐만 아니라 모든 획분들과의 비교에서도 가장 높은 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 수삼-상황버섯 균사체 발효물에 함유된 다당류는 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 다당류보다 활성이 증강되었음을 보여주고 있는데, 이러한 원인이 수삼의 상황균사체 단순배양이 아닌 발효과정에서의 생물학적 전환에 의한 것임을 명백히 하기 위하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물과 시료대조군 동일획분간의 구성분과 구성당 특성을 비교분석하였다. 본 논문에서는 3개의 활성 다당획분 중, 특히 측정한 면역활성 3종류에 모두 높은 활성을 나타낸 0.
- 또한, 열수추출물보다 고분자물질이 주성분인 조다당획분으로 분획하였을 때 모든 시료에서 활성이 증가하고 있어 활성에 관여하는 성분이 다당류 또는 단백다당 등의 고분자물질임을 나타내었다. 따라서 조다당획분의 분획은 시료대조군보다 활성이 증강된 기능성소재로서의 면역활성 다당류를 얻을 수 있을 것으로 사료되어 조다당획분의 DEAE-Sepharose CL-6B를 통한 분획을 진행하였다.
- 3 M 분획획분(WG-PL-CP-IV)에서는 시료대조군 모두(WG-CP-IV와 PLCP-IV)와 유의적인 차이를 보여주었다. 또한 단백질 구성 비율에 있어서도 WG-CP-IV를 제외하고는 각각의 동일획분에서 유의적인 차이를 보여줌으로써 수삼의 상황버섯 균사체 발효과정에서 원료의 구성 다당류에 전환이 일어나고 있음을 제시하고 있으므로 활성 다당획분과 시료대조군 동일획분간의 구조적 특성을 살펴보기 위하여 시료의 alditol acetate 유도체를 조제한 후 GC로 구성당을 분석하였다.
- 1A). 또한 시료대조군으로서 발효하지 않은 수삼 조다당(WG-CP)도 동일 column에서 분획하여 WG-CP-I(DIW 용출 획분, 수율 21.2%), WG-CP-II(0.1 M, 수율 4.7%), WG-CP-III(0.2 M, 수율 2.4%) 및 0.3 M 용출획분(WG-CP-IV, 수율 4.4%)으로 분획하였으며(Fig. 1B), 상황균사체 일반발효물 조다당획분(PL-CP)도 6개의 획분으로 분획되었다(PLCP-I~VI; 수율 1.1-16.8%, Fig. 1C). DEAE-Sepharose CL-6B column에 의한 시료대조군과 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당의 분획결과, 특히 0.
- 0 M)의 7개의 획분을 얻었다. 또한 시료대조군으로서 수삼 조다당 획분은 동일 column에 분획하여 증류수(WG-CP-I), 0.1 M NaCl(WG-CP-II), 0.2 M(WG-CP-III)과 0.3 M NaCl(WG-CP-IV)의 4개의 획분으로 조제하였으며, 상황균사체 일반발효물도 분획하여 PL-CP-I(증류수 용출)과 PL-CP-II-VI(0.1-0.5 M NaCl 용출)의 6개의 획분으로 분획하였다.
- 먼저, 동결건조시킨 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물을 조제하기 위하여 발효물에 소량의 증류수를 첨가하여 homogenizer(Ultra-turrax T-50; Janke & Kunkel GmbH & Co., KG-IKA-Labortechnik, Staufen, Germany)로 5,000 rpm에서 10분간 분쇄한 후 20배의 증류수를 가하여 열수추출하였다.
- 면역활성이 증강된 홍삼대체의 고부가가치 새로운 형태의 수삼소재를 개발하기 위하여 수삼의 상황버섯 균사체 고체배양을 이용한 발효물을 조제하였으며 decoction 처리 및 EtOH 침전과정을 거쳐 열수추출물(WG-PL-HW) 및 조다당획분(WG-PL-CP)으로 분획하였다. 한편, 시료대조군으로서 발효하지 않은 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 열수추출물(WG-HW, PL-HW) 및 조다당획분(WG-CP, PL-CP)도 동일한 방법으로 조제하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 시료대조군으로 사용하였다.
- 세포현탁액은 RPMI 1640-FBS(5% FBS 함유)로 세척하여 2×106 cells/mL의 세포농도로 조정한 후 96 well plate에 180 µL씩 분주하고 적당한 농도로 희석한 시료를 20 µL씩 첨가하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 5일간 배양하고 상등액만을 회수하여 골수세포 증식실험에 사용하였다.
- 수삼의 상황버섯 균사체 고체배양을 이용한 생물전환기법으로 수삼발효물을 조제하고 시료대조군과의 면역활성 증진여부를 확인하고 새로운 형태의 기능성소재 활용가능성을 검토하기 위하여 열수추출물과 조다당획분을 조제하였다. 먼저, 동결건조시킨 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물을 조제하기 위하여 발효물에 소량의 증류수를 첨가하여 homogenizer(Ultra-turrax T-50; Janke & Kunkel GmbH & Co.
- 시료대조군인 발효하지 않은 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 조다당획분보다 면역활성이 증강된 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 조다당획분, WG-PL-CP에 대해 DEAE-Sepharose CL-6B(Cl− form)를 이용한 anion-exchange column chromatography를 실시하여 1개의 비흡착 획분(WG-PL-CP-I, DEAE loading 양 대비 수율 16.4%)과 6개의 흡착 획분(0.1 M NaCl 용출 획분; WG-PLCP-II, 수율 13.6%, 0.2 M; WG-PL-CP-III, 수율 13.0%, 0.3 M; WG-PL-CP-IV, 수율 12.0%, 0.4 M; WG-PL-CP-V, 수율 9.6%, 0.5 M; WG-PL-CP-VI, 수율 5.0% 및 1.0 M 용출 획분; WG-PLCP-VII, 수율 4.2%)을 분획하였다(Fig. 1A).
- 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물(WG-CP와 PLCP)과 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당획분인 WG-PL-CP로부터 DEAE에 의해 분획된 모든 시료획분의 다양한 면역활성을 검토하였다. Fig.
- GC 온도조건은 injector 250℃, detector 250℃이었고, column은 60℃에서 1분경과 후 30℃/분의 속도로 220℃까지 상승시켜 12분간 유지하고 다시 8℃/분의 속도로 250℃까지 상승시켜 15분을 유지하였다. 시료의 구성당은 표준당의 retention time과 비교하여 분석하였고 구성당 mole percentage(mol %)는 각 peak들의 면적비와 구성당 alditol acetate 유도체의 분자량으로 계산한 후 정량화 하고 구성당 비율은 molar ratio로 표시하였다(26).
- 시료의 마이토젠 활성은 CCK-8 kit 용액을 10 µL 첨가하여 4시간 배양한 후 450 nm에서 흡광도(Sunrise, TECAN, Grödingen, Austria)를 측정하여 saline 대조군의 비장세포 증식도에 대한 relative activity(%)로 나타내었다(27).
- 또한, 수삼-상황버섯 균사체 발효물이 수삼에 균사체가 단순하게 배양된 것이 아니고 본 연구의 목적에서 언급한 균사체의 생물학적 전환과정으로 형성된 발효물인지를 확인하기 위해서 시료대조군과 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 조다당획분의 구성분을 분석하고자 하였다. 열수추출물로부터 EtOH 침전에 의해 분획된 조다당획분은 주로 다당류 또는 단백다당의 고분자물질로 구성되어 있으므로(21), 조다당획분의 구성분으로서 중성당, 산성당 및 단백질을 분석하였다(4회 반복). 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 조제된 조다당획분(WG-PL-CP)은 83.
- 추출액을 여과하여 여과액을 회수하고 농축, 원심분리(7,600×g, 30분) 및 동결건조하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물로 조제하였다(WG-PL-HW, 동결건조된 수삼발효물 원료 대비 수율 45.0%).
- 한편, 골수세포는 동일 마우스의 대퇴부 뼈로부터 회수한 뒤 여과, 세척하고 세포수를 2.5×105 cells/mL RPMI 1640-FBS로 조정하여 100 µL씩 96-well plate의 각 well에 분주하고 시료와 Peyer’s patch 세포의 배양에서 회수한 상등액과 RPMI 1640-FBS를 각각 50 µL씩 첨가하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 6일간 재배양하였다(28).
- 고체배양의 상황버섯 종균을 조제하기 위하여 mushroom complete medium(MCM) 액체배지에 위에서 언급한 수삼의 열수추출로부터 조제된 수삼추출물(고형분 65%)이 5% 농도가 되도록 첨가하여 진탕배양기(SI-4100R, Jeio Tech, Daejeon, Korea)에서 30℃로 배양하였다. 한편, 상황버섯 균사체의 고체배양에 의한 수삼발효물(수삼-상황버섯 균사체 발효물)은 수삼을 수세한 후 실온에서 3-4일간 건조시켜 수분함량을 조절하고 조직을 연화시킨 후 현미분말을 10% 첨가하여 121℃에서 20분 멸균시킨 수삼에 상황버섯 종균을 10% 접종하고 30일간 30℃에서 배양(Multi Room Incubator, Vision Scientific, Bucheon, Korea)하고 동결건조하여 제조하였다.
- 면역활성이 증강된 홍삼대체의 고부가가치 새로운 형태의 수삼소재를 개발하기 위하여 수삼의 상황버섯 균사체 고체배양을 이용한 발효물을 조제하였으며 decoction 처리 및 EtOH 침전과정을 거쳐 열수추출물(WG-PL-HW) 및 조다당획분(WG-PL-CP)으로 분획하였다. 한편, 시료대조군으로서 발효하지 않은 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 열수추출물(WG-HW, PL-HW) 및 조다당획분(WG-CP, PL-CP)도 동일한 방법으로 조제하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 시료대조군으로 사용하였다. 먼저, 비장세포의 마이토젠 활성을 비교한 결과(Table 1), 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물(WG-PL-HW, saline 대조군의 1.
- 8%)으로 조제하였다. 한편, 시료대조군인 발효하지 않은 동결건조 수삼 및 상황균 사체만의 발효물(일반발효물)도 동일한 방법으로 처리하여 수삼(WG-HW, 동결건조 수삼 원료대비 수율 46.3%) 및 상황균사체 일반발효물의 열수추출물(PL-HW, 수율 39.5%)과 수삼(WG-CP, 수율 7.9%) 및 상황균사체 일반발효물의 조다당획분(PL-CP, 수율 5.3%)으로 조제하고 수삼-상황버섯 균사체 발효물과의 각종 면역활성 실험 및 성분분석에서의 시료대조군 획분으로 사용하였다.
- 0%). 한편, 열수추출물에는 저분자와 고분자의 다양한 화합물이 포함되어 있으나(20), 본 연구에서는 사포닌 등의 저분자 ginsenoside보다는 면역활성을 갖는 비사포닌 계열의 고분자 물질에 초점을 맞추었기 때문에 회수한 WG-PL-HW는 다시 소량의 증류수에 용해하고 5배의 에탄올을 가하여 침전물을 조제하였다. 회수한 EtOH 침전물은 일반적으로 고분자 물질(특히, 다당류 또는 단백다당)이 다량 함유되어져 있는 것으로 보고(21)되고 있으므로 침전물을 투석(Spectra/ Por 4, MWCO 12-14,000, Spectrum Laboratories Inc.
- 한편, 열수추출물에는 저분자와 고분자의 다양한 화합물이 포함되어 있으나(20), 본 연구에서는 사포닌 등의 저분자 ginsenoside보다는 면역활성을 갖는 비사포닌 계열의 고분자 물질에 초점을 맞추었기 때문에 회수한 WG-PL-HW는 다시 소량의 증류수에 용해하고 5배의 에탄올을 가하여 침전물을 조제하였다. 회수한 EtOH 침전물은 일반적으로 고분자 물질(특히, 다당류 또는 단백다당)이 다량 함유되어져 있는 것으로 보고(21)되고 있으므로 침전물을 투석(Spectra/ Por 4, MWCO 12-14,000, Spectrum Laboratories Inc., Rancho Dominguez, CA, USA)하고 농축, 원심분리하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 조다당획분(WG-PL-CP, 수율 8.8%)으로 조제하였다. 한편, 시료대조군인 발효하지 않은 동결건조 수삼 및 상황균 사체만의 발효물(일반발효물)도 동일한 방법으로 처리하여 수삼(WG-HW, 동결건조 수삼 원료대비 수율 46.
대상 데이터
- 면역활성 측정의 동물세포 배양을 위한 RPMI 1640 medium과 Hank's balanced salt solution(HBSS)은 Gibco-BRL Co.(Grand Island, NY, USA)로부터 구입하였다. 또한 fetal bovine serum(FBS)은 Cell Culture Laboratories(Cleveland, OH, USA)에서 penicillin, streptomycin 및 amphotericin B는 Flow Laboratories(Irvine, Scotland)에서 입수하였다.
- 본 연구에서 천연배지로 사용한 수삼은 충북 증평군에서 2007년도에 수확한 4-5년근 수삼을 증평영농조합인삼연구회(Jeungpyeong-gun, Chungbuk, Korea)로부터 구입한 후 품질저하를 방지하기 위하여 −5℃ 냉동실에 보관하면서 사용하였다. 또한 본 연구에 사용한 상황버섯(P. linteus) 균주는 충청북도 농업기술원(Cheongwon, Korea)으로부터 분양 받았다. 고체배양의 상황버섯 종균을 조제하기 위하여 mushroom complete medium(MCM) 액체배지에 위에서 언급한 수삼의 열수추출로부터 조제된 수삼추출물(고형분 65%)이 5% 농도가 되도록 첨가하여 진탕배양기(SI-4100R, Jeio Tech, Daejeon, Korea)에서 30℃로 배양하였다.
- 마크로파지 활성은 마크로파지 lysosomal phosphatase의 활성도로 측정하였는데, BKW mouse(6주령, female) 복강에 3% thioglycollate medium(Sigma-Aldrich Co.)을 2 mL 주입하고 48-72시간이 경과된 후에 유도된 복강 마크로파지를 회수하여 사용하였다. 회수한 마크로파지는 RPMI-1640 medium으로 세척하고 세포수가 1×106 cells/mL이 되도록 RPMI-1640 medium에 재분산시킨 후 96-well plate의 각 well에 200 µL씩 분주하고 2시간 동안 배양하여 well의 기벽에 macrophage monolayer를 형성시켰다(29).
- 본 연구에서 천연배지로 사용한 수삼은 충북 증평군에서 2007년도에 수확한 4-5년근 수삼을 증평영농조합인삼연구회(Jeungpyeong-gun, Chungbuk, Korea)로부터 구입한 후 품질저하를 방지하기 위하여 −5℃ 냉동실에 보관하면서 사용하였다.
- 생후 6주령의 자성 C3H/He, BALB/c 또는 BKW 마우스를 (주)오리엔트바이오(Seongnam, Korea) 및 (주)나라바이오텍(Pyeongtaek, Korea)에서 구입한 후, 사육조에 5마리씩 넣고 정수된 물과 실험 동물용 펠렛사료(Samyang Co., Incheon, Korea)를 자유공급하였으며 스트레스를 받지 않도록 주의하여 사육하였다. 면역활성 측정의 동물세포 배양을 위한 RPMI 1640 medium과 Hank's balanced salt solution(HBSS)은 Gibco-BRL Co.
- 또한 fetal bovine serum(FBS)은 Cell Culture Laboratories(Cleveland, OH, USA)에서 penicillin, streptomycin 및 amphotericin B는 Flow Laboratories(Irvine, Scotland)에서 입수하였다. 한편, 마이토젠 활성의 비장세포 및 장관면역 활성의 골수 세포 증식을 측정하기 위한 Cell Counting Kit-8(CCK-8)은 Dojindo Laboratories(Kumamoto, Japan)로부터 구입하였다.
데이터처리
- Each value is presented as the mean±SD (n=4), and all values are significantly different against the saline control by Student’s t-test.
- 실험결과들은 4개 군에 대한 실험을 통하여 평균치±SD(standard deviation)로 나타내었고 Student’s t-test를 이용, p<0.05 수준에서 saline 대조군과 시료 및 시료대조군과 시료들간의 유의성을 검정함으로써 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 분획한 시료의 면역활성으로 나타내었다.
이론/모형
- 수삼-상황버섯 균사체 발효물과 시료대조군의 면역활성 다당획분의 구성분을 비교분석하기 위하여 총당, 산성당 및 단백질은 glucose, galacturonic acid와 bovine serum albumin(BSA)을 각각 표준물질로 사용하여 phenol-sulfuric acid법(22), m-hydroxydiphenyl법(23)과 Bio-Rad dye(Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA)를 이용한 Bradford법(24)으로 정량하였다. 한편 활성 다당 획분의 구성당은 Jones와 Albersheim(25)의 방법으로 분석하였는데, 먼저 시료를 2.
- , Hercules, CA, USA)를 이용한 Bradford법(24)으로 정량하였다. 한편 활성 다당 획분의 구성당은 Jones와 Albersheim(25)의 방법으로 분석하였는데, 먼저 시료를 2.0 M TFA(trifluoroacetic acid, Sigma-Aldrich Co., St. Luis, MO, USA)로 121℃에서 1.5시간 가열하여 가수분해시킨 후 NaBH4(Sigma-Aldrich Co.)를 이용하여 각각의 구성당을 alditol로 환원시켰다. 다음으로 (CH2CO)2O(Sigma-Aldrich Co.
성능/효과
- 1C). DEAE-Sepharose CL-6B column에 의한 시료대조군과 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당의 분획결과, 특히 0.2 M과 0.3 M NaCl에서 용출된 획분(WG-PLCP-III와 IV)은 동일농도에서 분획된 시료대조군인 WG-CP-III/IV 또는 PL-CP-III/IV보다 산성당 검출이 많은 profile을 보여주고 있으며, 1.0 M NaCl 농도에서도 단백질이 주로 검출되는 peak가 용출되어 시료대조군과는 차이가 있는 DEAE profile의 물질로 구성되어 있는 특징을 보여주었다(Fig. 1). 이러한 column profile의 차이는 고체배양 중 균사체로부터 유래된 고분자 물질(다당류 또는 단백다당류 등)에 기인할 수도 있으나 발효과정 중 배양된 균사체로부터 생산된 효소 등의 다양한 수식에 의해 수삼의 고분자 물질이 전환될 수 있는 가능성도 제시하고 있기 때문에, 분획된 획분의 활성비교와 함께 구성분 및 구성당을 분석하여 고체 배양을 통한 수삼-상황버섯 균사체 발효물이 수삼에 대한 상황균 사체의 단순배양이 아니고 균사체의 생물학적 전환에 의한 것인지의 여부를 확인하고자 하였다.
- 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물(WG-CP와 PLCP)과 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당획분인 WG-PL-CP로부터 DEAE에 의해 분획된 모든 시료획분의 다양한 면역활성을 검토하였다. Fig. 2에서 나타낸 바와 같이 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당으로부터 분획된 0.2 M NaCl 용출획분인 WG-PLCP-III는 saline 대조군보다 유의적으로 가장 높은 1.98배의 마이토젠 활성을 나타내었으며, 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물에서 동일 농도로 분획된 WG-CP-III(1.60배)와 PL-CPIII(1.65배) 및 시료대조군의 모든 획분 중 가장 높은 PL-CP-IV(1.71배)보다도 유의적으로 높은 활성을 나타내어 고체배양을 통한 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 WG-PL-CP-III는 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 동일 획분보다 마이토젠 활성이 유의적으로 증가되었음을 알 수 있었다(Fig. 2). 마크로파지 활성에서도 WG-PL-CP로부터 DEAE-Sepharose CL-6B를 통하여 분획한 7개 획분 중에서 WG-PL-CP-II(0.
- 28)를 나타내었다(Table 2B). 구성당 분석결과, WG-PL-CP-IV의 경우에도 동일 NaCl 농도에서 분획된 시료대조군 획분과는 다당류 구성당 분포와 비율이 다름을 알 수 있었으며, WG-PL-CP-III와는 달리 WG-PL-CP-IV(Glc 8.44 mol % 함유)의 경우에는 glucan-유사 다당류보다는 pectic polysaccharide가 면역활성에 주로 관여하고 있는 것으로 생각된다. 또한 WG-PL-CPIV의 pectic polysaccharide는 WG-PL-CP-III와는 다른 구성당 비율을 나타내었는데, 산성당과 Rha의 비율이 높은 것으로부터 주쇄인 RG-I이 더 많이 존재하는 것으로 보이며 중성당 측쇄에서도 Ara, Gal 이외에 Xyl 등의 비율이 증가하고 있음을 알 수 있었다(Table 2B).
- 따라서 고체배양 후 얻은 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 WG-PL-CP는 시료대조군인 WG-CP 또는 PL-CP과 비교하여, PL-CP 산성당을 제외하고는(p<0.05) 통계학적인 유의성은 없었으나 중성당은 감소하면서 상대적으로 산성당이 증가된 결과를 보여주었고, 단백질은 일정한 양상을 보이지 않았다.
- 또한 인삼의 다당류는 전분-유사 다당류와 pectin 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있으며, 전분-유사 다당류는 주로 3-branched-α-(1,6)-glucan과 6-branchedα-(1,4)-glucan으로 구성되어 있고 펙틴은 GalA, Gal과 Ara를 주로 함유한다고 보고되었다(36). 따라서 다양한 면역활성을 갖는 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 분획된 WG-PL-CP-III는 uronic acid와 Rha가 주요 구성당으로 함유되어 있고 Ara와 Gal의 중성당이 분포하고 있는 결과로부터, 수삼 유래의 pectic polysaccharide인 것으로 생각되며 arabinan, galactan 또는 arabinogalactan 등이 펙틴 주쇄에 측쇄로 결합되어 있을 가능성을 보여주는 것으로 생각된다. 또한 WG-PL-CP-III는 중성당인 Glc가 주성분을 이루고 있고(28.
- 따라서 이러한 다양한 면역활성의 결과로부터 고체배양을 통한 수삼-상황버섯 균사체 발효물 및 조다당획분의 조제와 음이온교환수지를 통한 분획은 동일조건에서 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 조다당으로부터 분획된 동일농도의 NaCl 용출획분 또는 그 외의 활성을 갖는 획분들보다도 면역활성이 증강된 획분을 얻을 수 있음을 나타내는 것으로 면역활성에 미치는 수삼에 대한 균사체 고체배양의 중요한 의의를 확인할 수 있었다.
- 3). 또한 WG-PL-CP-II 와 III는 시료대조군 중 NaCl 동일농도에서 분획된 WG-CP-II(1.73배)와 WG-CP-III(1.66배) 또는 PL-CP-II(1.79배, 시료대조군 획분 중 가장 높음)와 PL-CP-III(1.72배)보다 유의적으로 증가된 마크로파지 활성을 보여, 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 활성 다당류와 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체의 활성 다당류가 구조적인 차이를 가지고 있을 가능성을 제시하여 주었다(Fig. 3). 한편, Peyer’s patch를 매개로 한 장관면역 활성을 측정한 결과에서는 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 DEAE 획분 중 0.
- 따라서 다양한 면역활성을 갖는 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 분획된 WG-PL-CP-III는 uronic acid와 Rha가 주요 구성당으로 함유되어 있고 Ara와 Gal의 중성당이 분포하고 있는 결과로부터, 수삼 유래의 pectic polysaccharide인 것으로 생각되며 arabinan, galactan 또는 arabinogalactan 등이 펙틴 주쇄에 측쇄로 결합되어 있을 가능성을 보여주는 것으로 생각된다. 또한 WG-PL-CP-III는 중성당인 Glc가 주성분을 이루고 있고(28.80 mol %) Gal과 Man(12.21과 6.07 mol %)도 상당량 포함되어 있으며, 시료대조군인 상황균사체 일반발효물의 PL-CPIII 획분에서도 Glc와 Man(54.81 및 16.65 mol %)가 주요 구성당으로 분포하고 있음을 알 수 있었는데(Table 2B), 이러한 결과는 WG-PL-CP-III의 구성 다당류로서 위에서 언급한 펙틴 다당류 이외에도 중성다당류가 관여할 수 있는 가능성을 보여주는 것으로 생각된다. 즉, 이러한 중성다당류는 수삼에서의 균사체 발효과정중 수삼의 전분-유사 다당류 또는 수삼에 생육한 균사체에서 생산되는 glucan 또는 glycan 다당류로부터 그 자체로 또는 균사체의 계속적인 변화과정을 통하여 기인된 다당류로 생각된다(37,38).
- 44 mol % 함유)의 경우에는 glucan-유사 다당류보다는 pectic polysaccharide가 면역활성에 주로 관여하고 있는 것으로 생각된다. 또한 WG-PL-CPIV의 pectic polysaccharide는 WG-PL-CP-III와는 다른 구성당 비율을 나타내었는데, 산성당과 Rha의 비율이 높은 것으로부터 주쇄인 RG-I이 더 많이 존재하는 것으로 보이며 중성당 측쇄에서도 Ara, Gal 이외에 Xyl 등의 비율이 증가하고 있음을 알 수 있었다(Table 2B).
- 27배)보다는 유의적으로 증가된 활성을 나타내었다(Table 1). 또한, 복강에서 회수한 마크로파지 활성의 결과에서도 Table 1에 제시한 바와 같이 시료대조군 WG-HW와 PL-HW은 각각 saline 대조군의 1.55배와 1.54배의 활성을 보였으나, WGPL-HW는 1.77배의 유의적으로 증가된 활성을 나타내었다. 조다 당획분에서도 WG-PL-CP가 1.
- 이러한 결과로부터 수삼의 상황버섯 고체배양을 통하여 조제된 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물 또는 조다당획분의 면역활성은 측정항목에 따른 활성의 차이는 있었으나, 시료대조군인 발효하지 않은 수삼 또는 상황균사체의 일반발효물보다 증강되었음을 알 수 있었다. 또한, 열수추출물보다 고분자물질이 주성분인 조다당획분으로 분획하였을 때 모든 시료에서 활성이 증가하고 있어 활성에 관여하는 성분이 다당류 또는 단백다당 등의 고분자물질임을 나타내었다. 따라서 조다당획분의 분획은 시료대조군보다 활성이 증강된 기능성소재로서의 면역활성 다당류를 얻을 수 있을 것으로 사료되어 조다당획분의 DEAE-Sepharose CL-6B를 통한 분획을 진행하였다.
- 한편, 시료대조군으로서 발효하지 않은 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 열수추출물(WG-HW, PL-HW) 및 조다당획분(WG-CP, PL-CP)도 동일한 방법으로 조제하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 시료대조군으로 사용하였다. 먼저, 비장세포의 마이토젠 활성을 비교한 결과(Table 1), 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물(WG-PL-HW, saline 대조군의 1.09배)은 시료대조군인 발효하지 않은 수삼의 열수추출물(WG-HW, 1.05배)과는 유의적인 활성의 차이를 보이지 않았으나 상황균사체 일반 발효물 열수추출물(PL-HW, 1.03배)보다는 유의적으로 약간 증가된 활성을 나타내었다. 열수추출물로부터 분획된 조다당획분의 경우에서도 수삼-상황버섯 균사체 발효물(WG-PL-CP)의 경우에는 1.
- 2 M NaCl에서 분획된 WG-PL-CP-III와 마이토젠과 장관면역 활성에서 높은 활성을 나타낸 WG-CP-IV의 2종류 활성 다당획분을 시료대조군 동일획분(WG-CP-III와 IV 및 PL-CP-III와 IV)과 비교함으로써 발효과정에 따른 다당류의 변화와 활성에 미치는 영향에 관하여 밝히고자 하였다. 먼저, 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 분획된 활성 다당획분의 구성분 분석결과, WG-PLCP-III와 IV는 중성당이 73.5%와 67.3%, 산성당이 23.2%와 24.6% 및 소량의 단백질(3.3%와 8.1%)이 함유되어 있어 중성당과 산성당이 주성분임을 확인할 수 있었다(Table 2A). 한편, 동일 NaCl 농도에서 분획된 시료대조군 중 수삼의 WG-CP-III와 IV는 중성당(III; 65.
- 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당획분의 음이온교환수지로 분획된 다양한 획분 중 WG-PL-CP-II, III와 IV는 10% 이상의 높은 수율과 함께 측정한 면역활성의 종류에 따라 특정 획분이 시료대조군의 동일획분뿐만 아니라 모든 획분들과의 비교에서도 가장 높은 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 수삼-상황버섯 균사체 발효물에 함유된 다당류는 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 다당류보다 활성이 증강되었음을 보여주고 있는데, 이러한 원인이 수삼의 상황균사체 단순배양이 아닌 발효과정에서의 생물학적 전환에 의한 것임을 명백히 하기 위하여 수삼-상황버섯 균사체 발효물과 시료대조군 동일획분간의 구성분과 구성당 특성을 비교분석하였다.
- 열수추출물로부터 EtOH 침전에 의해 분획된 조다당획분은 주로 다당류 또는 단백다당의 고분자물질로 구성되어 있으므로(21), 조다당획분의 구성분으로서 중성당, 산성당 및 단백질을 분석하였다(4회 반복). 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 조제된 조다당획분(WG-PL-CP)은 83.5%의 중성당과 13.3%의 산성당 및 3.2%의 단백질로 구성되어 있는 반면, 시료대조군인 수삼(WG-CP)과 상황균사체 일반발효물의 조다당획분(PL-CP)은 85.2% 및 87.6%의 중성당과 산성당(12.4%와 7.9%) 및 단백질(2.4%와 4.5%)을 소량 함유하고 있음을 확인할 수 있었다(Table 2A). 따라서 고체배양 후 얻은 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 WG-PL-CP는 시료대조군인 WG-CP 또는 PL-CP과 비교하여, PL-CP 산성당을 제외하고는(p<0.
- 00)와 중성당 구성 비율(특히 Glc, Rha와 Xyl)에서 큰 차이를 나타냄으로써 2개의 활성획분이 다른 다당류일 가능성을 보여주었다. 시료대조군과의 비교에서도 0.3 M NaCl의 동일 농도에서 분획된 수삼의 WG-CP-IV는 활성획분인 WG-PL-CP-IV보다 산성당 및 중성당에서 Ara의 비율이 매우 높았고 Xyl와 Glc는 감소한 구성당 비율을 나타내었으며(uronic acid:Ara:Rha:Gal=1.00:0.91:0.45:0.36), 상황균사체 일반발효물 PL-CP-III와는 전혀 다른 구성당 분포(uronic acid:Glc :Gal=0.37:1.00:0.28)를 나타내었다(Table 2B). 구성당 분석결과, WG-PL-CP-IV의 경우에도 동일 NaCl 농도에서 분획된 시료대조군 획분과는 다당류 구성당 분포와 비율이 다름을 알 수 있었으며, WG-PL-CP-III와는 달리 WG-PL-CP-IV(Glc 8.
- 시료대조군인 수삼 또는 상황균사체 일반발효물의 분획물보다 측정한 3가지의 면역활성에서 모두 높은 활성을 나타낸 WG-PLCP-III의 경우에는 uronic acid(GalA와 GlcA 등의 산성당)와 Glc, Ara, Gal 및 Rha 등의 중성당이 주요 구성당으로 함유되어 있었다(molar ratio; uronic acid:Glc:Ara:Gal:Rha=0.81:1.00:0.49:0.42:0.28, Table 2B). 한편 WG-PL-CP-III와 동일한 0.
- 03배)보다는 유의적으로 약간 증가된 활성을 나타내었다. 열수추출물로부터 분획된 조다당획분의 경우에서도 수삼-상황버섯 균사체 발효물(WG-PL-CP)의 경우에는 1.40배의 활성을 나타내어 시료대조군인 수삼 조다당획분(WGCP, 1.35배)과는 유의차가 없었으나 상황균사체 일반발효물 조다당획분(PL-CP, 1.27배)보다는 유의적으로 증가된 활성을 나타내었다(Table 1). 또한, 복강에서 회수한 마크로파지 활성의 결과에서도 Table 1에 제시한 바와 같이 시료대조군 WG-HW와 PL-HW은 각각 saline 대조군의 1.
- 56배로 가장 높은 활성을 나타내었다. 이러한 WG-PL-CP-IV의 장관면역 활성은 동일한 농도(0.3 M NaCl)에서 분획된 시료대조군(WG-CP-IV; 1.12배, PL-CP-IV; 1.23배)보다 유의적으로 현저히 높을 뿐만 아니라, 각각의 시료대조군 중 가장 높은 활성을 보인 WG-CP-III(1.36배) 또는 PL-CP-II(1.38배)와 통계학적인 유의성은 없었으나 높은 활성으로 고체배양으로 조제된 수삼-상황버섯 균사체 발효물로부터 분획된 면역활성 다당획분이 시료대조군보다 활성이 증진되었음을 보여주었다(Fig. 4).
- 15배)와는 유의적인 차이를 보이지는 않았다(Table 1). 이러한 결과로부터 수삼의 상황버섯 고체배양을 통하여 조제된 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물 또는 조다당획분의 면역활성은 측정항목에 따른 활성의 차이는 있었으나, 시료대조군인 발효하지 않은 수삼 또는 상황균사체의 일반발효물보다 증강되었음을 알 수 있었다. 또한, 열수추출물보다 고분자물질이 주성분인 조다당획분으로 분획하였을 때 모든 시료에서 활성이 증가하고 있어 활성에 관여하는 성분이 다당류 또는 단백다당 등의 고분자물질임을 나타내었다.
- 77배의 유의적으로 증가된 활성을 나타내었다. 조다 당획분에서도 WG-PL-CP가 1.83배의 활성을 나타내어 시료대조군인 WG-CP(1.69배)와 PL-CP(1.62배)보다 수삼-상황버섯 균사체 발효물 조다당획분의 활성이 유의적으로 높아지고 있음을 보여주었다(Table 1). 한편, Peyer’s patch를 경유한 장관면역 활성에서는 시료대조군 열수추출물인 WG-HW와 PL-HW는 각각 saline 대조군의 1.
- 5%를 포함하는 획분임을 알 수 있었다(Table 2A). 특히, 다당류 주 구성분인 중성당에서 WG-PL-CP-III와 IV는 시료대조군인 PL-CPIII 및 IV와는 유의적인 차이가 없었으나, WG-CP-III 및 IV와는 각각 유의적으로 차이를 보였고, 산성당에서는 0.2 M 획분(WGPL-CP-III)은 PL-CP-III와만 유의적인 차이를 보였으나 0.3 M 분획획분(WG-PL-CP-IV)에서는 시료대조군 모두(WG-CP-IV와 PLCP-IV)와 유의적인 차이를 보여주었다. 또한 단백질 구성 비율에 있어서도 WG-CP-IV를 제외하고는 각각의 동일획분에서 유의적인 차이를 보여줌으로써 수삼의 상황버섯 균사체 발효과정에서 원료의 구성 다당류에 전환이 일어나고 있음을 제시하고 있으므로 활성 다당획분과 시료대조군 동일획분간의 구조적 특성을 살펴보기 위하여 시료의 alditol acetate 유도체를 조제한 후 GC로 구성당을 분석하였다.
- 28, Table 2B). 한편 WG-PL-CP-III와 동일한 0.2 M NaCl 농도에서 분획된 시료대조군인 WG-CP-III는 WG-PL-CP-III와 산성당의 구성 비율은 유사하였으나 중성당의 주요 구성당 분포와 그 molar ratio에 있어서는 크게 차이를 보였으며(molar ratio; uronic acid:Ara:Glc:Gal:Rha=0.73:1.00:0.34:0.31:0.22), PL-CP-III와는 전혀 다른 구성당 분포(molar ratio; uronic acid:Glc:Man:Xyl=0.26:1.00:0.30:0.19)를 나타내고 있음을 확인할 수 있었다(Table 2B). 한편, pectic polysaccharide는 일반적으로 rhamnogalacturonan(RG-I, ramified region)과 homogalacturonan 영역으로 구성되어 있으며 종류에 따라 RG-II 영역을 갖고 있다고 보고되고 있다(32,33).
- 한편, Peyer’s patch를 경유한 장관면역 활성에서 시료대조군보다 유의적으로 가장 높은 활성을 나타내었으며 마이토젠 활성도 높았던 수삼-상황버섯 균사체 발효물 WG-PL-CP-IV의 구성당을 분석한 결과(molar ratio; uronic acid:Ara:Rha:Gal:Xyl:Glc=1.00:0.75:0.69:0.63:0.42:0.34, Table 2B), 위에서 언급한 대부분 면역활성에서 공통적으로 높았던 WG-PL-CP-III(uronic acid:Ara:Rha: Gal:Xyl:Glc=0.81:0.49:0.28:0.42:0.20:1.00)와 중성당 구성 비율(특히 Glc, Rha와 Xyl)에서 큰 차이를 나타냄으로써 2개의 활성획분이 다른 다당류일 가능성을 보여주었다.
- 한편, Peyer’s patch를 경유한 장관면역 활성에서는 시료대조군 열수추출물인 WG-HW와 PL-HW는 각각 saline 대조군의 1.05배와 1.09배를, 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 열수추출물(WG-PL-HW) 경우에도 1.12배의 낮은 활성을 나타내었으나, 조다당획분의 경우에는 WG-PL-CP가 1.19배의 활성으로 WGCP(1.10배)보다 유의적으로 증가된 활성을 보였으나 PL-CP(1.15배)와는 유의적인 차이를 보이지는 않았다(Table 1).
- 한편, Peyer’s patch를 매개로 한 장관면역 활성을 측정한 결과에서는 수삼-상황버섯 균사체 발효물의 DEAE 획분 중 0.3 M NaCl에서 분획된 WG-PL-CP-IV가 시료대조군을 포함한 모든 획분 중에서 saline 대조군의 1.56배로 가장 높은 활성을 나타내었다.
- 1%)이 함유되어 있어 중성당과 산성당이 주성분임을 확인할 수 있었다(Table 2A). 한편, 동일 NaCl 농도에서 분획된 시료대조군 중 수삼의 WG-CP-III와 IV는 중성당(III; 65.5%, IV; 56.2%)과 산성당(III; 26.0%, IV; 34.8%) 및 단백질(III; 8.5%, IV; 9.0%)을, PL-CP-III와 IV는 중성당 77.5%와 64.9%, 산성당 14.5%와 19.6% 및 단백질 8.0%와 15.5%를 포함하는 획분임을 알 수 있었다(Table 2A). 특히, 다당류 주 구성분인 중성당에서 WG-PL-CP-III와 IV는 시료대조군인 PL-CPIII 및 IV와는 유의적인 차이가 없었으나, WG-CP-III 및 IV와는 각각 유의적으로 차이를 보였고, 산성당에서는 0.
후속연구
- 이와 같이 수삼-상황버섯 균사체 발효물부터 음이온교환수지를 이용하여 분획된 활성획분과 NaCl 동일 농도에서 분획된 시료대조군 획분의 구성분 및 구성당을 비교분석한 결과, 수삼에 대한 상황버섯 균사체의 발효과정은 수삼에 상황균사체가 단순하게 배양된 것이 아닌 수삼 또는 상황균사체 유래 다당류에 대한 균사체의 생물학적 전환가능성을 높여주고 있는 것으로 사료되므로 향후 이를 보다 명확히 밝히기 위해서 활성 다당류의 완전정제 및 결합양식 등의 구조적 규명과정이 필요할 것으로 사료된다.
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