목 적: 반복적 유산 또는 반복적 착상실패 환자의 T 림프구의 Th1 면역반응 정도를 알아보고, T 림프구 활성 정도를 분석하고자 하였다. 연구방법: 반복적 유산 및 반복적 착상실패를 경험한 37명의 환자를 연구군으로 설정하고, 유산이나 불임의 병력이 없이 정상분만의 경력이 있는 11명의 가임 여성을 대조군으로 모집하였다. 유세포분석기를 이용하여, 이들의 말초혈액 중 T helper 세포 내 TNF-$\alpha$와 INF-$\gamma$ 및 IL-10의 발현도를 측정하고 Th1/Th2 세포 비율 (TNF-$\alpha$/IL-10 및 INF-$gamma$/IL-10 발현도)을 계산하여 Th1 면역반응의 우세 정도 및 T 림프구의 활성도를 분석하였으며, 활성 표지자인 CD154와 CD69 발현 정도를 비교하였다. 결 과: 연구군의 평균연령은 $35.3{\pm}4.3$세였으며, 이들에서 T helper cell 내 TNF-$\alpha$/IL-10의 발현 비율이 대조군에 비해 유의하게 높았고 ($42.1{\pm}2.3$ vs. $28.7{\pm}2.7$, p=0.002), CD154와 CD69의 발현율 또한 대조군에 비해 전반적으로 높았다. CD154의 경우, T helper cell ($1.7{\pm}0.5$ vs. $0.3{\pm}0.2$, p=0.038)과 T suppressor cell ($0.6{\pm}0.2$ vs. $0.1{\pm}0.0$, p=0.024) 모두에서 유의하게 높은 발현을 보인 반면, CD69의 경우, 전체 T 림프구 ($5.6{\pm}1.9$ vs. $1.3{\pm}5.4$, p=0.046)와 T suppressor cell ($4.8{\pm}1.3$ vs. $1.8{\pm}0.2$, p=0.035)에서 통계적으로 높은 발현을 확인할 수 있었다. 결 론: 반복적 유산 및 반복적 착상실패를 보이는 여성에서 T 림프구의 활성도와 Th1 면역반응이 증가하였으며 이는, 이들 여성에서 활성화된 T 림프구가 Th1 면역반응을 유도하여 초기 임신의 유지와 착상에 좋지 않은 영향을 미치기 때문으로 생각된다.
목 적: 반복적 유산 또는 반복적 착상실패 환자의 T 림프구의 Th1 면역반응 정도를 알아보고, T 림프구 활성 정도를 분석하고자 하였다. 연구방법: 반복적 유산 및 반복적 착상실패를 경험한 37명의 환자를 연구군으로 설정하고, 유산이나 불임의 병력이 없이 정상분만의 경력이 있는 11명의 가임 여성을 대조군으로 모집하였다. 유세포분석기를 이용하여, 이들의 말초혈액 중 T helper 세포 내 TNF-$\alpha$와 INF-$\gamma$ 및 IL-10의 발현도를 측정하고 Th1/Th2 세포 비율 (TNF-$\alpha$/IL-10 및 INF-$gamma$/IL-10 발현도)을 계산하여 Th1 면역반응의 우세 정도 및 T 림프구의 활성도를 분석하였으며, 활성 표지자인 CD154와 CD69 발현 정도를 비교하였다. 결 과: 연구군의 평균연령은 $35.3{\pm}4.3$세였으며, 이들에서 T helper cell 내 TNF-$\alpha$/IL-10의 발현 비율이 대조군에 비해 유의하게 높았고 ($42.1{\pm}2.3$ vs. $28.7{\pm}2.7$, p=0.002), CD154와 CD69의 발현율 또한 대조군에 비해 전반적으로 높았다. CD154의 경우, T helper cell ($1.7{\pm}0.5$ vs. $0.3{\pm}0.2$, p=0.038)과 T suppressor cell ($0.6{\pm}0.2$ vs. $0.1{\pm}0.0$, p=0.024) 모두에서 유의하게 높은 발현을 보인 반면, CD69의 경우, 전체 T 림프구 ($5.6{\pm}1.9$ vs. $1.3{\pm}5.4$, p=0.046)와 T suppressor cell ($4.8{\pm}1.3$ vs. $1.8{\pm}0.2$, p=0.035)에서 통계적으로 높은 발현을 확인할 수 있었다. 결 론: 반복적 유산 및 반복적 착상실패를 보이는 여성에서 T 림프구의 활성도와 Th1 면역반응이 증가하였으며 이는, 이들 여성에서 활성화된 T 림프구가 Th1 면역반응을 유도하여 초기 임신의 유지와 착상에 좋지 않은 영향을 미치기 때문으로 생각된다.
Objective: To evaluate whether T helper 1 (Th1) immune response is predominant in women with reproductive failures (recurrent spontaneous abortion and recurrent implantation failure) and the activation of T cell is related to Th1 propensity. Methods: Women with a history of recurrent implantation fa...
Objective: To evaluate whether T helper 1 (Th1) immune response is predominant in women with reproductive failures (recurrent spontaneous abortion and recurrent implantation failure) and the activation of T cell is related to Th1 propensity. Methods: Women with a history of recurrent implantation failure or recurrent spontaneous abortion comprise the study group (n=37). Controls are normal fertile women without a history of infertility or pregnancy losses (n=11). Th1/Th2 ratios of interferon (INF)-$\gamma$/interleukin (IL)-10 and tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$/IL-10 expression on $CD3^+/4^+$ cells, CD154, and CD69 expression on T cells are measured by flow cytometric analysis. Results: The ratios of TNF-$\alpha$ to IL-10 expressing on $CD3^+/4^+$ cells (Th1/Th2 cell ratios) are significantly higher in study group ($42.1{\pm}2.3$) as compared with that of controls ($28.7{\pm}2.7$) (p=0.002). The overall trend of CD154 and CD69 expression on T cells are elevated in study group than those of controls. The proportion (%) of $CD3^+/4^+/154^+$ cells ($1.7{\pm}0.5$ vs. $0.3{\pm}0.2$, p=0.038) and the % of $CD3^+/8^+/154^+$ cells ($0.6{\pm}0.2$ vs. $0.1{\pm}0.0$, p=0.024) are significantly higher in study group. The % of $CD3^+/69^+$ cells ($5.6{\pm}1.9$ vs. $1.3{\pm}5.4$, p=0.046) and % of $CD3^+/8^+/69^+$ cells ($4.8{\pm}1.3$ vs. $1.8{\pm}0.2$, p=0.035) among $CD3^+/8^+$ cells are significantly increased in study group. Conclusion: Women with reproductive failures have Th1 propensity with increased T cell activation. These finding means that activated T cell has a harmful effect on early pregnancy and implantation by induction of Th1 immunity.
Objective: To evaluate whether T helper 1 (Th1) immune response is predominant in women with reproductive failures (recurrent spontaneous abortion and recurrent implantation failure) and the activation of T cell is related to Th1 propensity. Methods: Women with a history of recurrent implantation failure or recurrent spontaneous abortion comprise the study group (n=37). Controls are normal fertile women without a history of infertility or pregnancy losses (n=11). Th1/Th2 ratios of interferon (INF)-$\gamma$/interleukin (IL)-10 and tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$/IL-10 expression on $CD3^+/4^+$ cells, CD154, and CD69 expression on T cells are measured by flow cytometric analysis. Results: The ratios of TNF-$\alpha$ to IL-10 expressing on $CD3^+/4^+$ cells (Th1/Th2 cell ratios) are significantly higher in study group ($42.1{\pm}2.3$) as compared with that of controls ($28.7{\pm}2.7$) (p=0.002). The overall trend of CD154 and CD69 expression on T cells are elevated in study group than those of controls. The proportion (%) of $CD3^+/4^+/154^+$ cells ($1.7{\pm}0.5$ vs. $0.3{\pm}0.2$, p=0.038) and the % of $CD3^+/8^+/154^+$ cells ($0.6{\pm}0.2$ vs. $0.1{\pm}0.0$, p=0.024) are significantly higher in study group. The % of $CD3^+/69^+$ cells ($5.6{\pm}1.9$ vs. $1.3{\pm}5.4$, p=0.046) and % of $CD3^+/8^+/69^+$ cells ($4.8{\pm}1.3$ vs. $1.8{\pm}0.2$, p=0.035) among $CD3^+/8^+$ cells are significantly increased in study group. Conclusion: Women with reproductive failures have Th1 propensity with increased T cell activation. These finding means that activated T cell has a harmful effect on early pregnancy and implantation by induction of Th1 immunity.
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문제 정의
이에 본 연구는 Th cell의 세포 내 사이토카인 발현을 분석함으로써 RSA와 RIF 환자에서 Th1 면역반응의 우세 현상을 규명하는 한편, CD154와 CD69와 같은 T 림프구 활성화 표지자의 발현 양상이 Th1 면역반응에 미치는 영향에 대해 알아보고자 하였다.
제안 방법
cell 중 활성화된 세포 분율로 정의하였다. CD3가 발현된 세포 중 CD3와 CD4가 함께 발현된 세포구역을 제외한 나머지 부분을 CD3+/8+ 세포로 정의하고 이들 중 활성화된 세포 분율을 구하기 위해 CD154와 CD69를 이용하여 위와 같은 방법을 시행하였다.
각각의 검체 내 Th cell의 분화 방향, 즉 Th1 및 Th2 반응을 보기 위해 Th1 세포에서 분비되는 사이토카인으로 알려진 TNF-α와 INF-γ, Th2 사이토카인으로 알려진 IL-10에 대한 형광-항체를 이용하여 CD3+/4+ 세포 중 각 사이토카인이 발현된 세포의 분율을 구하였다.
그래프 상 CD3와 CD4가 함께 발현된 세포구역을 설정하여 해당 구역 내 CD154가 발현된 세포의 분율을 구하고 같은 방법으로 CD69가 발현된 세포 분율을 구하여 각각 CD3+/4+ cell 중 활성화된 세포 분율로 정의하였다. CD3가 발현된 세포 중 CD3와 CD4가 함께 발현된 세포구역을 제외한 나머지 부분을 CD3+/8+ 세포로 정의하고 이들 중 활성화된 세포 분율을 구하기 위해 CD154와 CD69를 이용하여 위와 같은 방법을 시행하였다.
세포 내 사이토카인 (cytokine)을 측정하기 위해 250 μL의 cytofix/cytoperm 용액 (Pharminogen, San Diego, CA, USA)을 이용하여 세포의 고정 및 침투를 시행하였다.
염색된 검체를 유세포분석기 (Coulter XL flow cytometer, Beckman-Coulter, Becton Dickinson, San Jose, CA, USA)와 그 분석 프로그램 (XL software) 이용하여 특정 세포표면항원 및 세포 내 특정 사이토카인을 발현하는 세포의 분율을 구하였다.
해당 치료를 시작하기 전의 대조군과 연구군의 혈액을 헤파린으로 처리한 시험관에 채취하여, 원심분리기 (Ficoll-Hypaue, Biotech, Sweden)와 완충용액 (phosphate-buffered saline, PBS)을 이용하여 말초 혈액 내 단핵세포 (peripheral blood mononuclear cells, PBMC)를 분리하였다. 분리된 PBMC를 완충용액(PBS with 1% heat-inactivated fetal bovine serum and 0.
대상 데이터
2009년 1월부터 2009년 6월까지, 반복적 유산(RSA) 또는 반복적 착상실패 (RIF) 환자를 대상으로 전향적 연구를 시행하였다. 재태연령 20주 이전에 2회 이상의 원인불명의 자연 유산을 반복적 유산으로 정의하고, 2회 이상의 보조 생식술 (reproductive technology [ART], i.
IVF-ET)을 시행했으나 임신에 실패한 경우를 반복적 착상실패로 정의하였다. 45세 이상의 고령 여성이나 난소자극에 낮은 반응을 보이는 군 (저반응군 - 채취된 난자 수가 3개 이하인 경우, 또는 기저 난포자극호르몬 수치가 20 IU/mL 이상인 경우), 현재 자가면역질환을 앓고 있거나 자가면역질환의 병력을 가진 경우 및 난자공여 주기 등은 제외하고, 총 18명의 반복 유산 환자와 19명의 반복적 착상실패 환자를 연구군으로 하였으며, 불임이나 유산의 기왕력이 없으며 정상아의 분만력을 가진 건강한 여성 11명을 대조군으로 수집하였다.
T 림프구를 분리하기 위해 항-CD3와 항-CD4 항체를 사용하였고, 이들 세포의 활성화 표지자로 항-CD154와 항-CD69 항체를 사용하였다. 세포 내 사이토카인 (cytokine)을 측정하기 위해 250 μL의 cytofix/cytoperm 용액 (Pharminogen, San Diego, CA, USA)을 이용하여 세포의 고정 및 침투를 시행하였다.
데이터처리
통계학적인 분석은 SPSS ver. 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용하여, 평균값의 비교를 위해 Student's t-test를, 상관관계 확인을 위해 Pearson's correlation 분석을 시행하였으며, p-value<0.05일 경우에 통계적으로 유의하다고 판단하였다.
성능/효과
Th cell 내 TNF-α/IL-10의 발현 비율은, 대조군에 비해 연구군에서 유의하게 높은 (42.1±2.3 vs. 28.7±2.7, p=0.002) 결과를 보였다.
대조군에 비해 연구군에서 CD154와 CD69가 발현된 세포의 분율이 전반적으로 높았다. CD154의 경우, Th cell과 Tc cell 모두에서 유의하게 높은 발현을 보였으며, CD69의 경우, 전체 T 림프구와 Tc cell에서 통계적으로 높은 발현을 확인할 수 있었다(Table 1, Figure 2).
본 연구는 RIF 및 RSA 환자에서 CD4+ 세포질 내 TNF-α와 INF-γ와 같은 Th1 사이토카인과 IL-10과 같은 Th2 사이토카인의 발현도를 측정하여 연구군에서 Th1 면역반응이 항진되어 있음을 확인하였으며, 이들 환자군에서 말초혈액 내 CD154 또는 CD69의 발현으로 표현되는 T 림프구의 활성 또한 유의하게 증가함을 확인하였다.
후속연구
이는 RSA를 주대상으로 T 림프구의 활성과 Th1 면역반응의 우세를 연구한 기존의 연구들에 부합하는 결과로, RIF 환자들에서도 같은 병리를 확인하였다는 의의가있으나, 연구군 규모의 문제로 RIF 환자들로만 소그룹 분석을 따로 시행하지 못한 한계가 있다. 향후 좀 더 많은 환자를 대상으로 실험하여 동일한 결과가 도출되는가에 대한 추가 연구가 필요하며, RIF 환자들에서 T 림프구의 활성화를 억제하거나, TNF-α의 분비를 조절함으로써 좋은 임신결과를 얻을 수 있는가에 대한 연구 또한 필요할 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
임신중 과도한 면역반응이 유도될 결우 발생하는 결과는?
착상과 임신의 유지를 위해서는 태아의 동종항원에 대한 모체의 면역반응의 균형이 필수적이며, 이러한 균형에 문제가 생겨 과도한 면역반응이 유도될 경우, 태반의 성장에 심각한 장애를 초래하여 착상부전 (recurrent implantation failure, RIF)이나 반복적 유산 (recurrent spontaneous abortion, RSA), 전자간증과 같은 생식부전 (reproductive failure)의 원인이 될 수 있다.1 이에 임신과 관련된 면역반응에 대해 다양한 연구들이 진행되어, 탈락막 내의 증가된 helper T (Th) cell의 활성이 자연 유산의 원인으로 제시된 바 있으며,2 RSA 및 전자간증이 Th1 면역반응의 증가와 관련있는 것으로 보고된 바 있다.
착상과 임신의 유지를 위해서 필수적인 것은?
착상과 임신의 유지를 위해서는 태아의 동종항원에 대한 모체의 면역반응의 균형이 필수적이며, 이러한 균형에 문제가 생겨 과도한 면역반응이 유도될 경우, 태반의 성장에 심각한 장애를 초래하여 착상부전 (recurrent implantation failure, RIF)이나 반복적 유산 (recurrent spontaneous abortion, RSA), 전자간증과 같은 생식부전 (reproductive failure)의 원인이 될 수 있다.1 이에 임신과 관련된 면역반응에 대해 다양한 연구들이 진행되어, 탈락막 내의 증가된 helper T (Th) cell의 활성이 자연 유산의 원인으로 제시된 바 있으며,2 RSA 및 전자간증이 Th1 면역반응의 증가와 관련있는 것으로 보고된 바 있다.
T cell receptors 단백질의 구성성분에 따라 T cell은 어떻게 구분되나?
T cell은 전체 림프구의 약 70%를 차지하며 T cell receptors (TCR)로 불리는 T cell 고유의 수용체및 CD3 세포표면항체의 발현으로 특징지어진다. 이들은 TCR 단백질의 구성성분에 따라 Tαβ cell에 속하는 Th cell 및 Tc cell, Memory T cell, Regulatory T (Treg) cell, Natural killer T (NKT) cell과 Tγδ cell로 구분된다. 이 중 Th cell은 다른 여러 백혈구들의 면역반응을 조력하여 helper T cell이라 명명되며, CD4 세포표면항체를 발현하여 CD4+ cell로도 불린다.
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