계사 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 정도를 알아보기 위하여 단관백색레그혼종을 대상으로 케이지 사육 및 평사 사육으로 관리 후 이들의 생산 능력과 스트레스 관련 표지를 비교 분석하였다. 개체의 생산 능력에 있어 생존율, 산란 지수, 난중 및 체중은 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 성적을 보였고, 반면 초산 일령 및 난질의 경우 케이지 사육군이 양호한 결과를 나타내었다. 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 관련 표지로 형광접합보인법에 의한 텔로미어 함량 분석 및 comet assay에 의한 DNA 손상율을 비교 분석하였다. 텔로미어 함량 분석 결과, 혈액 세포 및 신장, 비장 세포의 경우 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 텔로미어 함유율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다. DNA 손상율은 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 유의하게 높은 손상율을 나타내어 케이지 사육이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 스트레스 상태임을 알 수 있었다. 따라서 생존율을 포함한 생산 능력과 스트레스 표지 분석 결과, 산란계에 있어 케이지 사육 방식이 평사 사육 방식보다 개체들에게 생리적 스트레스 요인이 상대적으로 큰 것으로 사료된다.
계사 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 정도를 알아보기 위하여 단관백색레그혼종을 대상으로 케이지 사육 및 평사 사육으로 관리 후 이들의 생산 능력과 스트레스 관련 표지를 비교 분석하였다. 개체의 생산 능력에 있어 생존율, 산란 지수, 난중 및 체중은 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 성적을 보였고, 반면 초산 일령 및 난질의 경우 케이지 사육군이 양호한 결과를 나타내었다. 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 관련 표지로 형광접합보인법에 의한 텔로미어 함량 분석 및 comet assay에 의한 DNA 손상율을 비교 분석하였다. 텔로미어 함량 분석 결과, 혈액 세포 및 신장, 비장 세포의 경우 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 텔로미어 함유율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다. DNA 손상율은 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 유의하게 높은 손상율을 나타내어 케이지 사육이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 스트레스 상태임을 알 수 있었다. 따라서 생존율을 포함한 생산 능력과 스트레스 표지 분석 결과, 산란계에 있어 케이지 사육 방식이 평사 사육 방식보다 개체들에게 생리적 스트레스 요인이 상대적으로 큰 것으로 사료된다.
This study was conducted to investigate the effects of housing systems on the productivity and physiological response as stress indicators in White Leghorn chickens. The chickens subjected to the conventional cages had a significantly lower viability, hen-housed egg production, egg weight and body w...
This study was conducted to investigate the effects of housing systems on the productivity and physiological response as stress indicators in White Leghorn chickens. The chickens subjected to the conventional cages had a significantly lower viability, hen-housed egg production, egg weight and body weight compared with those to the floor pens. However, the hens housed in the conventional cages had a shorter day of the first egg and a greater egg quality compared with those housed in the floor pens. In addition, this study was also investigated to identify biological markers for assessing the physiological response of chickens under stress conditions. As biological markers, the amount of telomeric DNA was analyzed by quantitative fluorescent in situ hybridization on the nuclei of cells. The DNA damage rate of lymphocytes was also quantified by the comet assay. The amount of telomeric DNA of the lymphocytes, kidney and spleen was significantly higher in the chickens under floor pens than those under conventional cages. The DNA damage also increased in chickens raised under conventional cages, as compared to the chickens under floor pens. As results, we conclude that the chickens housed in conventional cages have a greater stressful status than those housed in floor pens.
This study was conducted to investigate the effects of housing systems on the productivity and physiological response as stress indicators in White Leghorn chickens. The chickens subjected to the conventional cages had a significantly lower viability, hen-housed egg production, egg weight and body weight compared with those to the floor pens. However, the hens housed in the conventional cages had a shorter day of the first egg and a greater egg quality compared with those housed in the floor pens. In addition, this study was also investigated to identify biological markers for assessing the physiological response of chickens under stress conditions. As biological markers, the amount of telomeric DNA was analyzed by quantitative fluorescent in situ hybridization on the nuclei of cells. The DNA damage rate of lymphocytes was also quantified by the comet assay. The amount of telomeric DNA of the lymphocytes, kidney and spleen was significantly higher in the chickens under floor pens than those under conventional cages. The DNA damage also increased in chickens raised under conventional cages, as compared to the chickens under floor pens. As results, we conclude that the chickens housed in conventional cages have a greater stressful status than those housed in floor pens.
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문제 정의
산란계의 사육 형태가 개체의 생리적 습성 및 본능적 행동을 제한하는 스트레스 요인으로 작용하는지 여부와 이러한 스트레스 요인들이 개체의 생산 능력에 어떠한 영향을 미치는가는 현안이 되고 있는 동물복지관련 사육 형태 설정을 위해 필히 구명되어야 할 과제이다. 따라서 본 연구에서는 계사 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 정도를 알아보기 위하여 단관백색레그혼종을 대상으로 케이지 사육 및 평사 사육으로 관리 후 이들의 생산 능력과 스트레스 관련 표지를 비교 분석 하였다. 개체의 생산 능력은 생존율, 초산 일령, 산란 지수, 난중, 난질 및 체중을 조사하여 사육 형태 간 능력들을 비교 분석하였고, 사육 형태별 스트레스 반응 정도는 조직 내 세포들의 텔로미어 함량과 혈액 세포 내 DNA 손상율을 분석 비교하였다.
제안 방법
케이지 사육 및 평사 사육 형태가 산란계의 스트레스 반응에 미치는 영향을 텔로미어 함량으로 비교 분석하였다. 16주령 이후 사육 형태를 달리하고 40주령 때 각 사육 형태별 20수씩 도살하여 혈액, 간, 심장, 신장, 비장, 정소 및 난소 조직을 채취하여 이들 세포들의 텔로미어 함유율을 분석하였고, 60주령 때는 혈액 세포만을 대상으로 분석하였다.
40주령 및 60주령 레그혼종을 대상으로 케이지 사육 개체와 평사 사육 개체 간의 DNA 손상율을 comet assay법으로 분석하고, 이들 간의 차이를 검토하여 사육 형태가 개체의 스트레스 요인으로 작용하는 가를 살펴보았다.
각 조직들의 텔로미어 함량은 telomeric DNA probe를 이용하여 간기 세포 핵 양적 형광접합보인법(quantitative fluore- scence in situ hybridization on interphase nuclei; IQ-FISH)으로 개체별 100개 이상의 세포에 대해 분석하였고, 백혈구 세포에 대한 대표적 텔로미어의 발현 양상을 Fig. 2에 제시하였다. 분석 결과, 혈액 내 백혈구 세포의 텔로미어 함유율은 16주령 시험 개시시 평균 2.
따라서 본 연구에서는 계사 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 정도를 알아보기 위하여 단관백색레그혼종을 대상으로 케이지 사육 및 평사 사육으로 관리 후 이들의 생산 능력과 스트레스 관련 표지를 비교 분석 하였다. 개체의 생산 능력은 생존율, 초산 일령, 산란 지수, 난중, 난질 및 체중을 조사하여 사육 형태 간 능력들을 비교 분석하였고, 사육 형태별 스트레스 반응 정도는 조직 내 세포들의 텔로미어 함량과 혈액 세포 내 DNA 손상율을 분석 비교하였다.
Ly-sis solution을 제거한 다음 전기영동장치에 electrophoresis buffer(pH>13)를 채우고 10분 정도 침지한 후 25 V, 300 mA로 30분간 전기영동하였다. 건조된 슬라이드는 propidiumiodide로 5분간 염색하고 냉장 초자수로 수세 후 형광현미경으로 관찰하였다. 관측된 상은 디지털카메라로 촬영하고 개체별 20개의 세포를 대상으로 Comet Score software v1.
산란계의 사육 형태가 개체의 생리적 습성 및 본능적 행동을 제한하는 스트레스 요인으로 작용하는지 여부와 이러한 스트레스 요인들이 개체의 생산 능력에 어떠한 영향을 미치는가는 현안이 되고 있는 동물복지관련 사육 형태 설정을 위해 필히 구명되어야 할 과제이다. 따라서 본 연구에서는 계사 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 정도를 알아보기 위하여 단관백색레그혼종을 대상으로 케이지 사육 및 평사 사육으로 관리 후 이들의 생산 능력과 스트레스 관련 표지를 비교 분석 하였다. 개체의 생산 능력은 생존율, 초산 일령, 산란 지수, 난중, 난질 및 체중을 조사하여 사육 형태 간 능력들을 비교 분석하였고, 사육 형태별 스트레스 반응 정도는 조직 내 세포들의 텔로미어 함량과 혈액 세포 내 DNA 손상율을 분석 비교하였다.
9% sodium citrate(Sigma Chem, St Louis, MO, USA)용액을 첨가하여 15분간 저장처리하고, 이후 고정액을 10방울 정도 첨가하여 원심분리시켰다. 고정처리는 methanol과 acetic acid가 3:1로 혼합된 고정액을 이용하고, 이를 3회 반복 처리한 후 세포액을 3~5방울 정도 떨어뜨려 슬라이드 표본을 제작하였다. 혈액세포 표본의 제작은 개체의 날개 정맥으로부터 약 5 mL의 혈액을 채취하여 백혈구만 순수 분리하여 이용하였다.
본 시험에 공시된 시험동물은 경남과학기술대학교 종합농장에서 부화하여 사육중인 단관백색레그혼 순계(Single Comb White Leghorn Pure Line) 496수를 대상으로 하였다. 공시계 들은 케이지 육추 후 16주령부터 개체별 사육 방식을 케이지 사육군(cage) 및 평사 사육군(floor)으로 분리하여 동일 사육 방식으로 사육하였다(Fig. 1). 케이지군은 강제 환기 및 자동 온도 조절 시스템이 완비된 무창 계사 내 2단 4열 케이지 형태로 칸 당 90 cm(W)×90cm(L)×66cm(H)의 철망 배터리형 케이지에 10수씩(♀9:♂1) 혼사하였고(810 cm2/수), 평사군은 펜(pen) 형태의 개방식 계사로서 펜 당 400 cm(W)×700 cm (L)×380 cm(H) 크기의 방에 100수씩(♀90:♂10) 혼사하였다(2,800 cm2/수).
산란율(hen-day egg production)은 초산 후 64주령까지 생존수수 대비 총 산란 수의 비율로 나타내었고, 산란 지수는 동일 기간 동안 최초 입실수수 대비 총 산란수로 계산하였다. 난질은 40주령 산란한 각 군별 100개의 계란을 대상으로 난중, 난각색, 난백 높이, 하우유니트(HU), 난황색, 난각 두께, 난각 무게 및 난각밀도를 조사하였다. 체중은 60주령 암수 각 개체별 체중을 조사하였다.
케이지군은 강제 환기 및 자동 온도 조절 시스템이 완비된 무창 계사 내 2단 4열 케이지 형태로 칸 당 90 cm(W)×90cm(L)×66cm(H)의 철망 배터리형 케이지에 10수씩(♀9:♂1) 혼사하였고(810 cm2/수), 평사군은 펜(pen) 형태의 개방식 계사로서 펜 당 400 cm(W)×700 cm (L)×380 cm(H) 크기의 방에 100수씩(♀90:♂10) 혼사하였다(2,800 cm2/수). 두 사육 방식 모두 자유급이 및 자유급수를 실시하였고, 점등 관리는 케이지사의 경우 점감점증법으로 20주령에 14시간으로 연장 후 매주 20분씩 점증하여 16시간에 이르면 고정하여 점등하고, 평사군은 자연일조 하에 사육하였다. 생산 능력은 16~64주령까지, 각종 시험 분석은 40주령 및 60주령 개체들을 대상으로 도살 후 조직을 채취하였다.
혈액세포 표본의 제작은 개체의 날개 정맥으로부터 약 5 mL의 혈액을 채취하여 백혈구만 순수 분리하여 이용하였다. 백혈구의 분리는 Ficoll(Amer- sham Bioscience, Uppsala, Sweden)을 이용한 분리 방법으로 시행하였고, 분리된 세포는 0.06 M KCl(Sigma Chem)을 이용하여 실온에서 15분간 저장 처리하였다. 저장 처리 후 고정 및 표본 제작은 상기 조직에서와 동일한 방법으로 실시하였다.
분석 항목으로는 tail내 DNA 함유율(% DNA in tail; tail intensity/total comet intensity×100), tail내 DNA 생성률(tail moment; % DNA in tail×tail length) 및 올리브 모먼트(olive moment; tail intensity×total length / total comet intensity)를 조사하였다.
개체의 생산 능력에 있어 생존율, 산란 지수, 난중 및 체중은 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 성적을 보였고, 반면 초산 일령 및 난질의 경우 케이지 사육군이 양호한 결과를 나타내었다. 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 관련 표지로 형광접합보인법에 의한 텔로미어 함량 분석 및 comet assay에 의한 DNA 손상율을 비교 분석하였다. 텔로미어 함량 분석 결과, 혈액 세포 및 신장, 비장 세포의 경우 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 텔로미어 함유율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다.
초산 일령은 각 군별 반복 집단의 산란율이 5%에 도달하는 시점으로 하였다. 산란율(hen-day egg production)은 초산 후 64주령까지 생존수수 대비 총 산란 수의 비율로 나타내었고, 산란 지수는 동일 기간 동안 최초 입실수수 대비 총 산란수로 계산하였다. 난질은 40주령 산란한 각 군별 100개의 계란을 대상으로 난중, 난각색, 난백 높이, 하우유니트(HU), 난황색, 난각 두께, 난각 무게 및 난각밀도를 조사하였다.
생존율은 16주령부터 64주령까지 각 군별 반복 집단의 성계 생존 수수로 분석하였다. 초산 일령은 각 군별 반복 집단의 산란율이 5%에 도달하는 시점으로 하였다.
처리된 슬라이드를 형광현미경으로 관찰한 후 평균 5개의 간기 핵을 한 프레임으로 하여 디지털 카메라(Model DP-70, Olympus)로 촬영하고, 이를 컴퓨터에 저장하였다. 저장된 상은 이미지 분석 프로그램(Image analyzer program, MetaMorphⓇ, UIC, Pennsylvania, USA)을 이용하여 개체별 최소 100개 이상의 세포를 대상으로 핵 대비 telomeric DNA 분포량을 분석하였다.
형광 접합 발현 양상은 적녹 파장대의 필터(WIB filter)를 부착한 형광 현미경(Model AX-70, Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하였다. 처리된 슬라이드를 형광현미경으로 관찰한 후 평균 5개의 간기 핵을 한 프레임으로 하여 디지털 카메라(Model DP-70, Olympus)로 촬영하고, 이를 컴퓨터에 저장하였다. 저장된 상은 이미지 분석 프로그램(Image analyzer program, MetaMorphⓇ, UIC, Pennsylvania, USA)을 이용하여 개체별 최소 100개 이상의 세포를 대상으로 핵 대비 telomeric DNA 분포량을 분석하였다.
케이지 사육 및 평사 사육 형태가 산란계의 스트레스 반응에 미치는 영향을 텔로미어 함량으로 비교 분석하였다. 16주령 이후 사육 형태를 달리하고 40주령 때 각 사육 형태별 20수씩 도살하여 혈액, 간, 심장, 신장, 비장, 정소 및 난소 조직을 채취하여 이들 세포들의 텔로미어 함유율을 분석하였고, 60주령 때는 혈액 세포만을 대상으로 분석하였다.
케이지군은 강제 환기 및 자동 온도 조절 시스템이 완비된 무창 계사 내 2단 4열 케이지 형태로 칸 당 90 cm(W)×90cm(L)×66cm(H)의 철망 배터리형 케이지에 10수씩(♀9:♂1) 혼사하였고(810 cm2/수), 평사군은 펜(pen) 형태의 개방식 계사로서 펜 당 400 cm(W)×700 cm (L)×380 cm(H) 크기의 방에 100수씩(♀90:♂10) 혼사하였다(2,800 cm2/수).
텔로미어의 함량 분석은 혈액, 간, 심장, 신장, 비장, 정소 및 난소 조직을 대상으로 하였으며, 40주령 및 60주령에 채혈 및 도살 후 각 조직들을 떼어 분석하였다. 혈액을 제외한 각 조직들은 D-PBS(Gibco, Invitrogen Corp.
고정처리는 methanol과 acetic acid가 3:1로 혼합된 고정액을 이용하고, 이를 3회 반복 처리한 후 세포액을 3~5방울 정도 떨어뜨려 슬라이드 표본을 제작하였다. 혈액세포 표본의 제작은 개체의 날개 정맥으로부터 약 5 mL의 혈액을 채취하여 백혈구만 순수 분리하여 이용하였다. 백혈구의 분리는 Ficoll(Amer- sham Bioscience, Uppsala, Sweden)을 이용한 분리 방법으로 시행하였고, 분리된 세포는 0.
대상 데이터
16주령부터 64주령까지 레그혼종을 케이지 및 평사로 사육 후 생존율, 초산 일령, 산란 지수 및 체중을 조사하고 사육 형태 간 이들의 평균값을 Table 1에 제시하였다. 또한 사육 형태에 따른 난질을 비교 분석하고자 40주령 산란한 각 100개의 계란을 분석하고 분석 결과를 Table 2에 나타내었다.
건조된 슬라이드는 propidiumiodide로 5분간 염색하고 냉장 초자수로 수세 후 형광현미경으로 관찰하였다. 관측된 상은 디지털카메라로 촬영하고 개체별 20개의 세포를 대상으로 Comet Score software v1.5(Tri-Tek Corp. Sumerduck, VA, USA)로 분석하였다. 분석 항목으로는 tail내 DNA 함유율(% DNA in tail; tail intensity/total comet intensity×100), tail내 DNA 생성률(tail moment; % DNA in tail×tail length) 및 올리브 모먼트(olive moment; tail intensity×total length / total comet intensity)를 조사하였다.
본 시험에 공시된 시험동물은 경남과학기술대학교 종합농장에서 부화하여 사육중인 단관백색레그혼 순계(Single Comb White Leghorn Pure Line) 496수를 대상으로 하였다. 공시계 들은 케이지 육추 후 16주령부터 개체별 사육 방식을 케이지 사육군(cage) 및 평사 사육군(floor)으로 분리하여 동일 사육 방식으로 사육하였다(Fig.
두 사육 방식 모두 자유급이 및 자유급수를 실시하였고, 점등 관리는 케이지사의 경우 점감점증법으로 20주령에 14시간으로 연장 후 매주 20분씩 점증하여 16시간에 이르면 고정하여 점등하고, 평사군은 자연일조 하에 사육하였다. 생산 능력은 16~64주령까지, 각종 시험 분석은 40주령 및 60주령 개체들을 대상으로 도살 후 조직을 채취하였다. 세부적인 사양 관리 방법은 본 대학교 산란계 사육 관리 지침에 따랐으며, 동물의 관리 및 취급은 본 대학 동물실험윤리위원회(IACUC)의 규정을 준수하고 승인을 받았다.
난질은 40주령 산란한 각 군별 100개의 계란을 대상으로 난중, 난각색, 난백 높이, 하우유니트(HU), 난황색, 난각 두께, 난각 무게 및 난각밀도를 조사하였다. 체중은 60주령 암수 각 개체별 체중을 조사하였다.
배경 염색을 위해 propidium iodide solution(Sigma Chem)을 떨어뜨린 후 암소에서 건조시켰다. 형광 접합 발현 양상은 적녹 파장대의 필터(WIB filter)를 부착한 형광 현미경(Model AX-70, Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하였다. 처리된 슬라이드를 형광현미경으로 관찰한 후 평균 5개의 간기 핵을 한 프레임으로 하여 디지털 카메라(Model DP-70, Olympus)로 촬영하고, 이를 컴퓨터에 저장하였다.
데이터처리
사육 형태 간 생산 능력, telomeric DNA 함량 및 DNA 손상율의 비교 분석은 SAS 통계 패키지(SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)를 이용하여 t-test로 처리 평균간 유의성을 검정하였다.
이론/모형
Telomeric DNA의 함량 분석을 위하여 chicken telomeric DNA probe를 이용한 형광접합보인법(Fluorescence in situ Hybridization; FISH)을 실시하였다. 슬라이드 표본을 RNase(Boe- hringer Mannheim, Indianapolis, IN, USA)로 RNA를 제거한 후 초자수로 세척하고 에탄올로 탈수 건조시켰다.
성능/효과
텔로미어 함량 분석 결과, 혈액 세포 및 신장, 비장 세포의 경우 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 텔로미어 함유율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다. DNA 손상율은 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 유의하게 높은 손상율을 나타내어 케이지 사육이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 스트레스 상태임을 알 수 있었다. 따라서 생존율을 포함한 생산 능력과 스트레스 표지 분석 결과, 산란계에 있어 케이지 사육 방식이 평사 사육 방식보다 개체들에게 생리적 스트레스 요인이 상대적으로 큰 것으로 사료된다.
계사 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 정도를 알아보기 위하여 단관백색레그혼종을 대상으로 케이지 사육 및 평사 사육으로 관리 후 이들의 생산 능력과 스트레스 관련 표지를 비교 분석하였다. 개체의 생산 능력에 있어 생존율, 산란 지수, 난중 및 체중은 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 성적을 보였고, 반면 초산 일령 및 난질의 경우 케이지 사육군이 양호한 결과를 나타내었다. 사육 형태에 따른 닭의 스트레스 관련 표지로 형광접합보인법에 의한 텔로미어 함량 분석 및 comet assay에 의한 DNA 손상율을 비교 분석하였다.
, 2009). 그러나 본 연구에서 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 훨씬 높은 산란 지수를 나타내었는데, 이는 케이지 사육군에서 초기 폐사수가 많음으로 인해 지수에 큰 영향을 미친 것으로 생각되고, 또한 케이지 사육 형태가 개체의 산란 능력에 직접적인 스트레스 요인으로 작용한 것으로 사료된다.
58%로서 연령이 증가함에 따라 두 사육 형태 공히 텔로미어 함유율이 감소함을 보였다. 그러나 혈액 세포의 경우, 케이지 사육 개체들의 텔로미어 함량이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 감소율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다 (Table 3). 한편, 40주령 개체들의 간, 심장, 신장, 비장, 정소 및 난소 조직의 텔로미어 함유율은 사육 형태에 따라 신장과 비장을 제외하고는 큰 차이를 보이지 않았다(Table 4).
05). 난중을 포함한 난각색, 난황색의 경우 평사 계군에서 생산된 계란이 케이지 사육군으로부터 생산된 계란에 비해 훨씬 양호한 결과를 보인 반면, 난백고, 하우유니트와 같은 내부 난질과 난각 두께, 난각 무게, 난각 밀도와 같은 난각질에서는 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 월등히 나은 결과를 나타내었다. 이러한 결과는 산란 능력과 연관된 난중이나 사료 이용성과 결부된 난각색 및 난황색 등은 평사 사육 계란이 우수하였고, 산란된 계란의 관리요인에 의해 주로 영향을 받는 내부 난질이나 난각질의 경우 케이지 사육군의 계란이 보다 나은 양상을 보였다.
, 2007). 따라서 in vitro 실험에서 나타난 결과와 같이 생체에 있어서도 환경적 스트레스 요인이 DNA 손상을 촉진한다는 것을 본 연구에서 직접적으로 시사하고 있다. 이러한 결과들은 닭에 있어 케이지 사육 개체들이 평사 사육 개체들에 비해 세포의 apoptosis가 현저히 높아진다는 것을 의미하는 것으로 닭의 사육 형태가 개체들에게 중요한 스트레스 요인임을 시사한다.
, 2010). 따라서 계사 형태와 같은 사육 환경이 닭에 있어 개체의 스트레스 요인으로 작용함을 생리적 지표로서 확인하였다.
DNA 손상율은 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 유의하게 높은 손상율을 나타내어 케이지 사육이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 스트레스 상태임을 알 수 있었다. 따라서 생존율을 포함한 생산 능력과 스트레스 표지 분석 결과, 산란계에 있어 케이지 사육 방식이 평사 사육 방식보다 개체들에게 생리적 스트레스 요인이 상대적으로 큰 것으로 사료된다.
즉, 백혈구 세포는 면역과 직접적 관련이 있는 것으로 스트레스와 같은 외적 요인에 보다 민감하게 반응하기 때문인 것으로 사료된다. 또한 증식성 세포인 신장의 경우와 면역 물질 분비기관인 비장의 경우 혈액세포와 마찬가지로 사육 형태에 따라 텔로미어 함량의 차이를 보임으로서 환경적 스트레스가 텔로미어 함량에 직접적 영향을 미치는 요인임을 알 수 있었다. 이러한 현상은 브로일러의 사육 밀도와 텔로미어 함량간의 관계에서도 동일한 결과를 나타내었는데, 고밀도 사육군의 경우 저밀도 사육군에 비해 현저한 텔로미어의 감축을 나타내어 텔로미어가 환경적 스트레스 지표로서 유효함을 시사한다(Beloor et al.
분석된 모든 항목에서 연령이 증가함에 따라 분석 값이 높아지는 것으로 나타나, 텔로미어 함유율과 같이 DNA 손상율도 연령에 따라 큰 영향을 받는 것으로 보여지는데, 연령이 증가함에 따라 스트레스의 민감도가 더욱 증가하는 것으로 나타난다. 본 연구에서 텔로미어 함유율과 % DNA intail간에는 -0.24의 부(負)의 상관이 존재하는 것으로 분석되었다. 한편, 정상적 생리 조건하에서 세포 내 DNA 손실은 자연스러운 현상인데, genomic DNA의 130,000 base당 최소 1 base 정도가 손상을 입는 것으로 알려져 있다(Richter et al.
분석 결과, 생존율에 있어 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 생존율을 나타내었다(p<0.01).
2에 제시하였다. 분석 결과, 혈액 내 백혈구 세포의 텔로미어 함유율은 16주령 시험 개시시 평균 2.58%로서 연령이 증가함에 따라 두 사육 형태 공히 텔로미어 함유율이 감소함을 보였다. 그러나 혈액 세포의 경우, 케이지 사육 개체들의 텔로미어 함량이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 감소율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다 (Table 3).
사육 형태별 comet score 분석 결과, 케이지 사육 개체들이 평사 사육 개체들에 비해 대부분의 분석 값에서 높은 DNA 손상율을 나타내고 있으며, 40주령에 비해 60주령에서 이러한 차이가 보다 현저하게 나타났다(Table 5, Table 6). 분석된 모든 항목에서 연령이 증가함에 따라 분석 값이 높아지는 것으로 나타나, 텔로미어 함유율과 같이 DNA 손상율도 연령에 따라 큰 영향을 받는 것으로 보여지는데, 연령이 증가함에 따라 스트레스의 민감도가 더욱 증가하는 것으로 나타난다. 본 연구에서 텔로미어 함유율과 % DNA intail간에는 -0.
그림에서 나타난 바와 같이 DNA 손상(fragmentation) 정도가 (a), (b)가 현저히 다름을 알 수 있는데, 파손된 DNA 함유율 (% DNA in tail)이 (a)의 경우 34% 정도이고, (b)는 20% 정도이다. 사육 형태별 comet score 분석 결과, 케이지 사육 개체들이 평사 사육 개체들에 비해 대부분의 분석 값에서 높은 DNA 손상율을 나타내고 있으며, 40주령에 비해 60주령에서 이러한 차이가 보다 현저하게 나타났다(Table 5, Table 6). 분석된 모든 항목에서 연령이 증가함에 따라 분석 값이 높아지는 것으로 나타나, 텔로미어 함유율과 같이 DNA 손상율도 연령에 따라 큰 영향을 받는 것으로 보여지는데, 연령이 증가함에 따라 스트레스의 민감도가 더욱 증가하는 것으로 나타난다.
산란 능력에 있어 초산시부터 64주령까지 산란 지수(henhoused egg production)를 조사한 결과, 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높게 나타났다(p<0.01).
01). 생존율은 동물 복지 지표 중 가장 중요한 요소로서, 본 시험 결과 산란기 동안 케이지 사육 개체들이 평사 사육 개체들에 비해 훨씬 높은 폐사를 보여 사육 형태 간 현저한 생존율의 차이를 나타내었다. 이는 여러 복합적 원인이 있겠으나, 케이지 사육 형태가 닭들에게 생리적으로 매우 큰 스트레스 요인으로 작용하는 것을 의미한다.
난중을 포함한 난각색, 난황색의 경우 평사 계군에서 생산된 계란이 케이지 사육군으로부터 생산된 계란에 비해 훨씬 양호한 결과를 보인 반면, 난백고, 하우유니트와 같은 내부 난질과 난각 두께, 난각 무게, 난각 밀도와 같은 난각질에서는 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 월등히 나은 결과를 나타내었다. 이러한 결과는 산란 능력과 연관된 난중이나 사료 이용성과 결부된 난각색 및 난황색 등은 평사 사육 계란이 우수하였고, 산란된 계란의 관리요인에 의해 주로 영향을 받는 내부 난질이나 난각질의 경우 케이지 사육군의 계란이 보다 나은 양상을 보였다. 평사와 케이지 사육 형태에 따른 난질의 비교 연구에서 난중 및 난황색은 평사 사육군이 좋았고, 난백고 등 내부 난질은 케이지 사육군이 양호하였다고 보고하여(Anderson and Adams, 1994; Singh et al.
한편, 40주령 개체들의 간, 심장, 신장, 비장, 정소 및 난소 조직의 텔로미어 함유율은 사육 형태에 따라 신장과 비장을 제외하고는 큰 차이를 보이지 않았다(Table 4). 이러한 결과들로부터 백혈구 세포들의 텔로미어 함량은 다른 조직과 달리 스트레스에 매우 민감하게 작용하는 것으로 나타나, 사육 형태와 같은 스트레스 요인에 큰 영향을 받는 것으로 여겨진다. 즉, 백혈구 세포는 면역과 직접적 관련이 있는 것으로 스트레스와 같은 외적 요인에 보다 민감하게 반응하기 때문인 것으로 사료된다.
사육 형태에 따른 닭의 스트레스 관련 표지로 형광접합보인법에 의한 텔로미어 함량 분석 및 comet assay에 의한 DNA 손상율을 비교 분석하였다. 텔로미어 함량 분석 결과, 혈액 세포 및 신장, 비장 세포의 경우 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 유의하게 높은 텔로미어 함유율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다. DNA 손상율은 케이지 사육군이 평사 사육군에 비해 유의하게 높은 손상율을 나타내어 케이지 사육이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 스트레스 상태임을 알 수 있었다.
평사 사육 개체와 케이지 사육 개체에 대한 60주령 개체별 체중을 측정한 결과, 암수 모두 평사 사육군이 케이지 사육군에 비해 훨씬 높은 체중을 보였다(p<0.01).
평사 사육 및 케이지 사육으로부터 생산된 계란의 난질을 비교 분석한 결과, 난중을 포함한 모든 난질 지표에 사육 형태 간 유의한 차이를 나타내었다(p<0.05).
01). 평사군은 산란 peak가 40주령이 되어 도달하고 약 60%의 평균 산란율을 보인 반면, 케이지군은 33주령시 peak 산란율을 보이고 평균 산란율이 40% 정도로서 산란 지수가 70개 이상의 차이를 보였다. 이러한 산란 능력은 일반 실용산란계에 비해 매우 저조한 성적인데 이는 본 시험에 공시한 공시계 종이 근친계통(inbred line)으로서 잡종 강세를 극대화한 실용 산란계와 생산 능력에서 많은 차이가 날 수밖에 없다.
그러나 혈액 세포의 경우, 케이지 사육 개체들의 텔로미어 함량이 평사 사육에 비해 훨씬 높은 감소율을 보이고, 연령이 증가함에 따라 이의 차이는 더욱 커지는 것으로 나타났다 (Table 3). 한편, 40주령 개체들의 간, 심장, 신장, 비장, 정소 및 난소 조직의 텔로미어 함유율은 사육 형태에 따라 신장과 비장을 제외하고는 큰 차이를 보이지 않았다(Table 4). 이러한 결과들로부터 백혈구 세포들의 텔로미어 함량은 다른 조직과 달리 스트레스에 매우 민감하게 작용하는 것으로 나타나, 사육 형태와 같은 스트레스 요인에 큰 영향을 받는 것으로 여겨진다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
동물복지의 기본 원칙은 무엇인가?
한편으로 동물복지에 대한 정의와 기준에 대해서도 많은 논란이 있었으나, 최근 유럽은 가금의 복지기준(EU FP6 Welfare QualityⓇ)을 설정하고 이를 평가 기준으로 하고 있다. 동물복지의 기본 원칙은 개체들이 양호한 사양 급이를 받아야 하고(feeding), 좋은 사육 시설에서 사육되며(housing), 최적의 건강을 유지하도록 하고(health), 습성에 따른 적절한 행동을 할 수 있어야 한다(behavior). 이러한 기본 원칙에 대한 제한은 궁극적으로 개체에게 스트레스를 가하게 되어 동물 복지를 저해하게 된다(Butterworth, 2009).
동물의 스트레스 반응 정도를 분석하기 위한 대표적인 지표는 무엇인가?
동물의 스트레스 반응 정도를 분석하기 위한 다양한 생리적 표지들이 소개되고 있는데, 대표적으로 혈액생화학적 지표와 혈장 코티코스테론(corticosterone) 농도가 스트레스 표지로 널리 알려져 있고(Mashaly et al., 1984; Thaxton et al.
동물의 스트레스 반응 정도를 개체의 DNA 손상률로 파악할 수 있는 원리는 무엇인가?
최근 세포 내 텔로미어 (telomere)의 함량이나 DNA 손상율과 같은 DNA 관련 biomarker들이 개체의 스트레스 정도를 가늠할 수 있는 새로운 표지로 대두되고 있다. 염색체의 양 말단부를 지칭하는 텔로미어는 세포 분열이 거듭됨에 따라 길이가 짧아지는데, 이러한 텔로미어의 감축 양상이 노화의 지표뿐만 아니라 개체의 생리적 표지로 알려져 있다(Meeker and Coffey, 1997; Cottliar and Slavutsky, 2001). 텔로미어의 감소가 세포의 노화에 따라 나타나는 것이기는 하나, 이의 감축 정도가 제반 환경적 요인에 의해서 많은 영향을 받는 것으로 나타난다. 이러한 환경 요인들 중 특히 산화적 스트레스가 텔로미어 유실을 가속화 시킨다고 밝혀졌다(Von Zglinicki, 2002; Richter and Proctor, 2007). 한편, 살아있는 동물들에 있어 일정량의 DNA 소실과 손상은 정상적 생리 상태 하에서 극히 자연스러운 현상이나 이들에 스트레스 요인을 가하게 되면 세포의 세포사(apoptosis)가 촉진되어 DNA 파손(fragmentation) 정도가 급격히 증가된다(Chen et al., 2007).
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