[논문]HeLa cell과 MCF-7 cell에 대한 오가피(五加皮)의 apoptosis 효과

김경숙; 이진무; 이창훈; 장준복; 이경섭

doi:10.15204/jkobgy.2011.24.3.014

[국내논문] HeLa cell과 MCF-7 cell에 대한 오가피(五加皮)의 apoptosis 효과
Effects of Acanthopanacis Cortex Radicis on the Apoptosis in HeLa cell and MCF-7 cell 원문보기

大韓韓方婦人科學會誌 = The Journal of Korean obstetrics & gynecology, v.24 no.3, 2011년, pp.14 - 27

김경숙 (경희대학교 한의과대학 한방부인과 교실) , 이진무 (경희대학교 한의과대학 한방부인과 교실) , 이창훈 (경희대학교 한의과대학 한방부인과 교실) , 장준복 (경희대학교 한의과대학 한방부인과 교실) , 이경섭 (경희대학교 한의과대학 한방부인과 교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: This study was designed to investigate the effects of Acanthopanacis Cortex Radicis extract(ACRE) on the apoptosis in HeLa cell and MCF-7 cell. Methods: After treatment with various concentration of ACRE, cell growth was evaluated in HeLa cell and MCF-7 cell. Hoechst 33342 staining was performed to estimate DNA fragment effect of ACRE on the apoptosis in HeLa cell and MCF-7 cell. Annexin V/PI apoptosis assay was used to estimate the effects of ACRE on the early apoptosis in HeLa cell and MCF-7 cell. RT-PCR was used to estimate the apoptosis gene expression effect of ACRE on Hela cell MCF-7 cell. Results: Under $0.1mg/m\ell$ of ACRE, cytotoxic effect was not found per NIH3T3 cell. The viability of HeLa cell and MCF-7 cells was significantly decreased ACRE ($100{\mu}g/m\ell$) in HeLa cell and MCF-7 cell, ACRE ($50{\mu}g/m\ell$) in HeLa cell 3 days after treatment, in MCF-7 cell 1&3 days after treatment (p<0.01). DNA fragmentation was observed 3 days after treatment of cl of ACRE on HeLa cell and MCF-7 cell. In Annexin V/PI apoptosis assay, after treatment of $100{\mu}g/m\ell$ of ACRE, the early apoptotic cell increased both in HeLa cell and MCF-7 cell. In RT-PCR analysis, after treatment of $100{\mu}g/m\ell$ of ACRE, bcl-2 were decreased and bax, caspase-3 were increased both in HeLa cell and MCF-7 cell. Conclusions: ACRE appears to have considerable activity on the apoptosis in HeLa cell and MCF-7 cell.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이에 저자는 자궁경부암 세포주와 유방암 세포주 각각에 대한 五加皮의 apoptosis 효과를 알아보기 위하여 apoptosis와 관련된 bcl-2, bax 및 caspase 3 유전자의 발현을 측정하고, hoechst staining과 flow cytometric analysis를 이용하여 apoptosis 과정을 시간적으로 분석하여 유의한 성적을 얻었기에 보고하는 바이다.
이에 저자는 五加皮 추출물에 의한 HeLa cell과 MCF-7 cell의 apoptosis 효과를 알아보기 위하여 실험 하였다.

제안 방법

HeLa cell과 MCF-7 cell을 96-well plate에 5×103 cells/well이 되도록 seeding 하고 2시간 후에 五加皮 추출물 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖를 첨가하고 1일, 3일 및 5일 동안 배양하였다.
모든 세포주는 1% antibiotics, 10% FBS가 함유된 DMEM에 37℃, 5% CO₂를 유지하면서 배양하였다. 세포 증식 속도에 따라서 2^~3일에 한번 씩 새로운 배지에 이식하였다.
cells/well이 되도록 seeding하였다. 2시간 후 五加皮 추물물 0.01 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖ 및 1 ㎎/㎖를 첨가하고 각각 24시간 및 48시간 동안 배양 하였다. 배지를 제거하고 DPBS로 세척하고 CCK-8 soultion과 free DMEM를 1:20으로 섞은 용액을 100 ㎕씩 첨가하여 2시간 동안 incubation 시킨 후, ELISA microplate reader(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 450 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정 하였다.
5 ㎎/㎖ 및 1 ㎎/㎖를 첨가하고 각각 24시간 및 48시간 동안 배양 하였다. 배지를 제거하고 DPBS로 세척하고 CCK-8 soultion과 free DMEM를 1:20으로 섞은 용액을 100 ㎕씩 첨가하여 2시간 동안 incubation 시킨 후, ELISA microplate reader(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 450 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정 하였다. 세포독성 효과는 시료를 첨가하지 않는 대조군에 대한 백분율(%)로 표시하였고, 정량적인 결과는 평균과 표준편차로 표시하였다.
cells/well이 되도록 seeding 하고 2시간 후에 五加皮 추출물 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖를 첨가하고 1일, 3일 및 5일 동안 배양하였다. 배지를 제거하고 DPBS로 세척하고 CCK-8 solution과 free DMEM를 1:20으로 섞은 용액을 100 ㎕씩 첨가하여 2시간동안 incubation 시킨 후, ELISA microplate reader(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 450 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하여 세포 증식능을 평가하였다. 세포 증식능은 1일 시료를 첨가하지 않는 대조군에 대한 백분율(%)로 표시하였다.
7% formaldehyde을 처리하여 30분 고정한 후, PBS로 세척하고 hoechst 33342 용액을 처리하여 30분 동안 염색하였다. 염색 후 PBS로 세척하고 형광 현미경(Olympus IX71-F32PH)으로 200배에서 관찰하였다. 다른 세포보다 밝게 관찰되는 세포를 DNA 분절 현상이 나타나는 세포로 선택하였다.
Primer 은 bcl-2: 5-GGT CAT GTG TGT GGA GAG CGT-3' (sense)와 5-ACT TCA CTT GTG GCC CAG ATA GGC-3' (antisense), bax: 5-CCA GCT CTG AGC AGA TCA TG-3' (sense)와 5-TCA GCC CAT CTT CTT CCA GA-3' (antisense)이며 caspase-3: 5’-ATT CAT AGT GGC ACC AAA TC-3’ (sense)와 5’-TAA ATC AAA TCC GAT GTT CC-3’ (antisense)이며 GAPDH: 5'-GAC CCC TTC ATT GAC CTC AAC TAC A-3' (sense)와 5'-GGT CTT ACT CCT TGG AGG CCA TGT -3' (antisense)와 같이 제작되었으며 증폭은 94℃ 30초, 52~57℃ 30초, 72℃ 30초로 30회 반응시킨 후 ethidium bromide이 포함된 1% agarose gel에 전기영동을 걸어 분리하여 UV상에서 band를 관찰하였다.
HeLa cell과 MCF-7 cell을 6-well plate에 1×105 cells/well이 되도록 seeding 하고 1일 후 오가피 추출물 100 ㎍/㎖를 각각 처리하여 3일 및 5일 더 배양 후 HeLa cell과 MCF-7 cell을 수집하여 RNA RNeasy kit(Qiagen, Valencia, CA)를 이용하여 총 RNA를 분리하였다.
이것을 다시 원심 분리하여 형성된 세포 덩어리를 annexin V-FITC 와 propidium iodide(PI) 염색용액에 재현탁시켜 암실, 실온에서 15분 동안 반응시켰다. 염색된 세포들은 Flow Cytometry (Beckman coulter, Fullerton, CA)로 분석하고, Cell Quest Pro 소프트웨어로 각사분획의 세포들을 계산하였다. 각 시료당 2×10⁴개의 세포를 사용하였다.
cells/well이 되도록 seeding 하고 1일 후 오가피 추출물 100 ㎍/㎖를 각각 처리하여 3일 및 5일 더 배양 후 HeLa cell과 MCF-7 cell을 수집하여 RNA RNeasy kit(Qiagen, Valencia, CA)를 이용하여 총 RNA를 분리하였다. 추출한 RNA의 1 ㎍을 oligo-dT(Invitrogen, Carlsbad, CA)를 사용하여 cDNA로 합성하였다. 합성된 cDNA를 PCR preMix (Bioneer, DaeJeon, Korea)로 중합효소연쇄반응을 수행하였다.
추출한 RNA의 1 ㎍을 oligo-dT(Invitrogen, Carlsbad, CA)를 사용하여 cDNA로 합성하였다. 합성된 cDNA를 PCR preMix (Bioneer, DaeJeon, Korea)로 중합효소연쇄반응을 수행하였다. 중합효소연쇄반응에 사용된 primer는 apoptosis와 관련된 bcl-2, bax, caspase-3 및 GAPDH 유전자 부분을 주형으로 제작하였다.
합성된 cDNA를 PCR preMix (Bioneer, DaeJeon, Korea)로 중합효소연쇄반응을 수행하였다. 중합효소연쇄반응에 사용된 primer는 apoptosis와 관련된 bcl-2, bax, caspase-3 및 GAPDH 유전자 부분을 주형으로 제작하였다. Primer 은 bcl-2: 5-GGT CAT GTG TGT GGA GAG CGT-3' (sense)와 5-ACT TCA CTT GTG GCC CAG ATA GGC-3' (antisense), bax: 5-CCA GCT CTG AGC AGA TCA TG-3' (sense)와 5-TCA GCC CAT CTT CTT CCA GA-3' (antisense)이며 caspase-3: 5’-ATT CAT AGT GGC ACC AAA TC-3’ (sense)와 5’-TAA ATC AAA TCC GAT GTT CC-3’ (antisense)이며 GAPDH: 5'-GAC CCC TTC ATT GAC CTC AAC TAC A-3' (sense)와 5'-GGT CTT ACT CCT TGG AGG CCA TGT -3' (antisense)와 같이 제작되었으며 증폭은 94℃ 30초, 52^~57℃ 30초, 72℃ 30초로 30회 반응시킨 후 ethidium bromide이 포함된 1% agarose gel에 전기영동을 걸어 분리하여 UV상에서 band를 관찰하였다.
Primer 은 bcl-2: 5-GGT CAT GTG TGT GGA GAG CGT-3' (sense)와 5-ACT TCA CTT GTG GCC CAG ATA GGC-3' (antisense), bax: 5-CCA GCT CTG AGC AGA TCA TG-3' (sense)와 5-TCA GCC CAT CTT CTT CCA GA-3' (antisense)이며 caspase-3: 5’-ATT CAT AGT GGC ACC AAA TC-3’ (sense)와 5’-TAA ATC AAA TCC GAT GTT CC-3’ (antisense)이며 GAPDH: 5'-GAC CCC TTC ATT GAC CTC AAC TAC A-3' (sense)와 5'-GGT CTT ACT CCT TGG AGG CCA TGT -3' (antisense)와 같이 제작되었으며 증폭은 94℃ 30초, 52^~57℃ 30초, 72℃ 30초로 30회 반응시킨 후 ethidium bromide이 포함된 1% agarose gel에 전기영동을 걸어 분리하여 UV상에서 band를 관찰하였다. 관찰된 밴드의 강도를 측정하기 위하여 ImageJ 프로그램을 이용하여 밴드의 강도를 분석하였으며 GAPDH 대비 각 샘플들의 발현정도를 그래프를 나타내었다. 대조군을 1로 정하고 유전자들의 발현량을 상대적인 수치로 나타내었다.
관찰된 밴드의 강도를 측정하기 위하여 ImageJ 프로그램을 이용하여 밴드의 강도를 분석하였으며 GAPDH 대비 각 샘플들의 발현정도를 그래프를 나타내었다. 대조군을 1로 정하고 유전자들의 발현량을 상대적인 수치로 나타내었다.
정상세포 NIH3T3 cell에 五加皮 추물물 0.01 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖ 및 1㎎/㎖를 첨가하고 각각 24시간 및 48시간 동안 배양한 후 세포독성을 관찰한 결과, 0.1 ㎎/㎖ 농도 이하에서 세포독성이 나타나지 않았다(Fig. 1).
1㎎/㎖ 농도 이하에서 세포독성이 없었다. 따라서 실험에서는 五加皮 추출물의 농도를 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖로 하여 시행하였다.
. 측정방법은 annexin V-FITC와 PI 염색상태에 따라 구분한다. 생존 세포는 annexin V와 PI 모두 음성, early apoptosis는 annexin V는 양성, PI는 음성으로 나타나고, late apoptosis는 annexin V와 PI 모두 양성, necrosis는 annexin V 음성 PI 양성으로 나타나 세포의 생존여부를 감별 측정할 수 있다³⁸⁾.
五加皮 추출물에 의한 HeLa cell과 MCF-7 cell의 apoptosis 효과를 알아보고자 apoptosis와 관련된 bcl-2, bax 및 caspase-3 유전자의 발현을 측정하고 hoechst staining으로 DNA 분절 현상을 확인하고, Flow Cytometric Analysis로 apoptosis 정도 시간적으로 알아본 결과 다음과 같은 結論을 얻었다.

대상 데이터

세포주 배양을 위해 Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM), fetal bovine serum(FBS), trypsin-EDTA와 penicillin-streptomycin 및 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline(DPBS)은 Gibco사(Rockville, MD, USA)에서 구입하였다.
五加科(Araliaceae)에 속하는 낙엽관목인 五加皮나무 Acanthopanax sessiliflorus (Ruprecht) Seemann의 根皮(Acanthopanacis Cortex Radicis)를 ethanol로 50℃에서 추출하여 tube에 분주한 후 45℃에서 감압 농축법으로 제조한 한국식물추출물은행의 제품(CA02-079)을 구매하여 멸균된 3차 증류수에 녹인 후, 0.22㎛ 필터 (Millopore Carrigtwohill, Ireland)에 여과하여 4℃에 보관하였으며 용액제조 후 15일 이내에 사용하였다.
세포 성장 분석을 위한 시약으로는 cell count kit(CCK-8)는 Dojindo Co.(Kumamoto, Japan)에서 구입하였으며, annexin V-fluorescein isothiocyanate(FITC) apoptosis detection kit는 BD Biosciences(San Jose, CA, USA) 로부터 구입하였다.
자궁경부암 세포주 HeLa cell, 유방암 세포주 MCF-7 cell과 정상 섬유아세포 NIH3T3 cell은 모두 한국 세포주 은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 공급받았다. 모든 세포주는 1% antibiotics, 10% FBS가 함유된 DMEM에 37℃, 5% CO₂를 유지하면서 배양하였다.
각 시료당 2×104개의 세포를 사용하였다.

데이터처리

배지를 제거하고 DPBS로 세척하고 CCK-8 soultion과 free DMEM를 1:20으로 섞은 용액을 100 ㎕씩 첨가하여 2시간 동안 incubation 시킨 후, ELISA microplate reader(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 450 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정 하였다. 세포독성 효과는 시료를 첨가하지 않는 대조군에 대한 백분율(%)로 표시하였고, 정량적인 결과는 평균과 표준편차로 표시하였다.
세포 증식능은 1일 시료를 첨가하지 않는 대조군에 대한 백분율(%)로 표시하였다. 모두 3번 반복 실험을 하였으며 정량적인 결과는 평균값과 표준편차로 표시하였다.
실험군과 대조군의 비교는 student' t-test를 이용하여 분석하였고, p<0.05 이하인 경우를 유의한 것으로 판정하였다.

성능/효과

HeLa cell에 五加皮 추출물 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖을 처리하고 1일, 3일 및 5일 후 세포증식을 관찰한 결과, 1일 후에는 대조군 99.99±2.47에 비하여 100 ㎍/㎖에서는 81.85±1.98(p<0.01)로 세포증식이 억제되었다.
5일 후에는 대조군 593.60±27.30에 비하여 100 ㎍/㎖에서 202.09±36.92(p<0.01)로 세포증식이 억제되었다(Fig. 6).
5일 후에는 대조군 696.83±20.08에 비하여 100 ㎍/㎖에서 570.15±27.16 (p<0.01)로 세포증식이 억제되었다(Fig. 2).
HeLa cell에 五加皮 추출물 100 ㎍/㎖를 처리 한 후 2일 및 3일 동안 DNA 분절현상을 관찰한 결과, DNA 분절현상이 시간이 지날수록 더욱 확연하게 나타났다(Fig. 3).
HeLa cell에 五加皮 추출물 100 ㎍/㎖를 첨가한 후 apoptosis의 과정을 시간적으로 관찰한 결과, 48시간 후 early apoptosis는 19%, late apotosis는 2%, necrosis는 9%로 나타났고, 72시간 후 early apoptosis는 15%, late apotosis는 7%, necrosis는 12%로 나타나, 시간이 지날수록 apoptosis가 증가하는 것으로 나타났다(Fig. 4)
HeLa cell에 오가피 추출물 100 ㎍/㎖를 처리하여 배양한 후 bcl-2, bax, caspase-3 유전자 발현을 알아본 결과 bcl-2는 대조군에 1에 비해 3일째 0.60, 5일째 0.27로 감소하였다. bax는 3일째 2.
MCF-7 cell에 五加皮 추출물 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖을 처리하고 1일, 3일 및 5일 후 세포증식을 관찰한 결과, 1일 후에는 대조군 99.99±0.67에 비하여 50 ㎍/㎖에서는 90.37±1056, 100 ㎍/㎖에서는 73.45±2.08(p<0.01)로 세포증식이 억제되었다.
MCF-7 cell에 오가피 추출물 100 ㎍/㎖를 처리 한 후 2일 및 3일 동안 DNA 분절현상을 관찰한 결과, 시간이 지날수록 DNA 분절현상이 더욱 확연하게 나타났다(Fig. 7)
MCF-7 cell에 五加皮 추출물 100 ㎍/㎖를 첨가한 후 apoptosis의 과정을 시간적으로 관찰한 결과, 48시간 후 early apoptosis는 10%, late apotosis는 2%, necrosis는 4%로 나타났고, 72시간 후 early apoptosis는 61%, late apotosis는 5%, necrosis는 5%로 나타나, 시간이 지날수록 apoptosis 가 증가하는 것으로 나타났다(Fig. 8)
MCF-7 cell에 오가피 추출물 100 ㎍/㎖를 처리하여 배양한 후 bcl-2, bax, caspase-3유전자 발현을 알아본 결과, bcl-2는 대조군 1에 비해 3일째 0.35, 5일째 0.26으로 감소하였다. bax는 3일째 1.
五加皮의 세포독성을 알아보고자 정상 세포 NIH3T3 cell에 五加皮 추출물 0.01㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖ 및 1 ㎎/㎖를 첨가하고 각각 24시간 및 48시간 동안 배양 후 세포독성을 관찰한 결과, 0.1㎎/㎖ 농도 이하에서 세포독성이 없었다. 따라서 실험에서는 五加皮 추출물의 농도를 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖로 하여 시행하였다.
五加皮 추출물의 HeLa cell에 대한 세포증식 억제 효과를 확인하기 위해 HeLa cell에 각각 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100㎍/㎖의 五加皮 추출물을 처리하고 1일, 3일 및 5일 후 증식을 관찰한 결과, 대조군에 비해 50 ㎍/㎖에서는 3일째, 100 ㎍/㎖에서는 1일, 3일 및 5일째 유의하게 억제되었다.
. HeLa cell에 대한 五加皮 추출물의 apoptosis를 확인하기 위해 hoechst 염색법으로 DNA 분절 현상을 확인한 결과 시간이 지날수록 분절현상이 확연히 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
HeLa cell에 五加皮 추출물 100 ㎍/㎖를 첨가하여 24시간, 48시간 및 72시간 배양 후 apoptosis의 과정을 시간적으로 FACS 기기를 통하여 분석한 결과 48시간 후 early apoptosis는 19 %, late apotosis는 2 %, necrosis는 9 %로 나타났고, 72시간 후 early apoptosis는 15 %, late apotosis는 7 %, necrosis는 12 %로 나타나 시간이 지날수록 apoptosis가 증가하는 것으로 나타났다.
HeLa cell에 오가피 추출물을 처리하여 분석한 결과 apoptosis를 유도하는 유전자인 bax, caspase-3는 각각 3일째 2.19, 5일째 2.32로, 3일째 1.67, 5일째 2.95로 시간이 갈수록 증가하는 것을 확인할 수 있었으며 그 반대로 apoptosis 억제 유전자인 bcl-2는 3일째 0.60, 5일째 0.27로 유전자 발현이 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
五加皮 추출물의 MCF-7 cell에 대한 세포증식 효과를 확인하기 위해 MCF-7 cell에 각각 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 및 100㎍/㎖의 五加皮 추출물을 처리하고 1일, 3일 및 5일 후 증식을 관찰한 결과, 오가피가 70% 내외의 유방암 세포 생육억제 활성을 나타낸다는 보고²⁴⁾와 같이 대조군에 비하여 50 ㎍/㎖에서 1일 및 3일에 유의하게 억제되었고 100 ㎍/㎖에서 1일, 3일 및 5일에 통계적으로 유의하게 억제되었다.
MCF-7 cell에 대한 五加皮 추출물의 apoptosis를 확인하기 위해 hoechst 염색법으로 DNA분절 현상을 확인한 결과 시간이 지날수록 분절현상이 확연히 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
五加皮 추출물에 의한 apoptosis를 확인하기 위해 MCF-7 cell에 五加皮 추출물 100 ㎍/㎖를 첨가하여 24시간 및 48시간 배양 후 apoptosis를 FACS 기기를 통하여 분석한 결과, 48시간 후 early apoptosis는 10%, late apotosis는 2%, necrosis는 4%로 나타났고, 72시간 후 early apoptosis는 61%, late apotosis는 5%, necrosis는 5%로 나타나, 시간이 지날수록 apoptosis가 증가하는 것으로 나타났다.
MCF-7 cell에서는 bax, caspase-3는 각각 3일째 1.97, 5일째 2.91로, 3일째 2.30, 5일째 8.51로 시간이 갈수록 증가하는 것을 확인 할 수 있었으며 그 반대로 apoptosis 억제 유전자인 bcl-2는 3일째 0.35, 5일째 0.26으로 유전자 발현이 감소하는 것을 확인 할 수 있었다. 따라서, 오가피 추출물은 HeLa cell과 MCF-7 cell에서 apoptosis를 통한 암세포 억제 효과를 확인할 수 있었다.
26으로 유전자 발현이 감소하는 것을 확인 할 수 있었다. 따라서, 오가피 추출물은 HeLa cell과 MCF-7 cell에서 apoptosis를 통한 암세포 억제 효과를 확인할 수 있었다.
이상의 실험 결과에서 補血養陰하는 五加皮는 bax, 및 caspase-3 유전자 발현을 증가시키고 bcl-2 유전자 발현을 감소시켜 apoptosis를 유발하여 HeLa cell 과 MCF-7 cell의 세포성장을 억제하는 것으로 사료된다. Apoptosis를 확인하기 위해 hoechst 염색법으로 DNA분절현상이 확인되었고 apoptosis 정도를 측정한 결과 HeLa cell에서 72시간 후 early apoptosis는 15%, late apoptosis는 7%, necrosis는 12%, MCF-7 cell에서는 early apoptosis는 61%, late apotosis는 5%, necrosis는 5%로 나타나 모두 apoptosis 가 확인되었고 특히 MCF-7 cell에 더 효과적이었다.
이상의 실험 결과에서 補血養陰하는 五加皮는 bax, 및 caspase-3 유전자 발현을 증가시키고 bcl-2 유전자 발현을 감소시켜 apoptosis를 유발하여 HeLa cell 과 MCF-7 cell의 세포성장을 억제하는 것으로 사료된다. Apoptosis를 확인하기 위해 hoechst 염색법으로 DNA분절현상이 확인되었고 apoptosis 정도를 측정한 결과 HeLa cell에서 72시간 후 early apoptosis는 15%, late apoptosis는 7%, necrosis는 12%, MCF-7 cell에서는 early apoptosis는 61%, late apotosis는 5%, necrosis는 5%로 나타나 모두 apoptosis 가 확인되었고 특히 MCF-7 cell에 더 효과적이었다.
1. 정상세포 NIH3T3 cell에 五加皮 추출물을 처리한 후 세포 독성을 관찰한 결과, 0.1 ㎎/㎖ 이하에서는 세포독성이 나타나지 않았다.
2. HeLa cell에 五加皮 추출물을 처리하고 세포 증식을 관찰한 결과, 50 ㎍/㎖에서는 3일째, 100 ㎍/㎖에서는 1일, 3일 및 5일째 대조군에 비해 세포증식이 유의하게 억제되었다.
3. MCF-7 cell에 五加皮 추출물을 처리하고 세포 증식을 관찰한 결과, 50 ㎍/㎖에서는 1일과 3일째, 100 ㎍/㎖에서는 1일, 3일 및 5일째 대조군에 비해 세포증식이 유의하게 억제되었다.
4. HeLa cell과 MCF-7 cell에 五加皮 추출물을 처리한 후 DNA 분절 현상을 관찰한 결과, 시간이 지날수록 DNA 분절 현상이 더욱 확연하게 나타났다.
5. HeLa cell과 MCF-7 cell에 五加皮 추출물을 처리한 후 apoptosis를 관찰한결과, 시간이 지날수록 apoptosis가 증가하였다.
6. HeLa cell과 MCF-7 cell에 五加皮 추출물을 처리한 후 apoptosis 유전자 발현을 분석한 결과, 두 세포주 모두에서 bcl-2의 감소와 bax, caspase-3의 증가가 확인되었다.

후속연구

항암치료는 암세포의 성장 및 전이를 직접적으로 억제하는 방법과 인체 면역계를 항진시켜 궁극적으로 암세포를 제거하는 방법으로 대별된다. 현재 주로 사용되고 있는 항암제는 암세포뿐만 아니라 정상적인 세포에도 독성을 일으켜 빈혈, 백혈구 감소, 모발 손상 및 구토 등과 같은 부작용을 야기하므로 암세포에만 선택적으로 작용할 수 있는 치료제의 개발³⁾과 아울러 암의 발생을 예방할 수 있는 방법에 대한 연구가 필요하다. 이에 한약재를 이용한 항암연구가 활발하게 진행되고 있으며, 그 중 여성 생식세포암에 대한 연구도 보고되었다^4-9).

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	五加皮란 무엇인가?	五加皮(Acanthopanacis Cortex Radicis) 는 五加科에 속한 낙엽관목인 오갈피의根皮를 乾燥한 것으로 性은 溫無毒하고 辛苦한 味로 肝腎經으로 歸經한다. 祛風濕하면서 補肝腎, 强筋骨하는 효능으로 風濕痺痛, 四肢拘攣, 腰膝軟弱, 水腫, 脚氣등을 치료하는 것으로 알려져 있고13) 東醫寶鑑에서는 腰脊痛, 男子의 陰痿 와 女子의 陰痒을 다스리면서 五勞와 七傷을 補하고 虛損을 다스린다고 언급하였다14).
	자궁경부암 치료법 중 근치적자궁절제술의 주된 합병증은 무엇인가?	자궁경부암의 치료는 임상적 병기에따라 외과적 절제, 방사선치료, 혹은 동시항암화학방사선요법으로 나뉘는데 근치적자궁절제술의 주된 합병증은 방광기능장애, 요관누공과 림프낭종, 골반 감염과 출혈 등이 나타나며, 방사선 치료 후에도 국소적 재발, 설사, 복통, 오심, 빈뇨 및 장과 방광결막의 출혈 등의 합병증이 있을 수 있다2).
	한방에서 五加皮의 효능은 무엇인가?	五加皮(Acanthopanacis Cortex Radicis) 는 五加科에 속한 낙엽관목인 오갈피의根皮를 乾燥한 것으로 性은 溫無毒하고 辛苦한 味로 肝腎經으로 歸經한다. 祛風濕하면서 補肝腎, 强筋骨하는 효능으로 風濕痺痛, 四肢拘攣, 腰膝軟弱, 水腫, 脚氣등을 치료하는 것으로 알려져 있고13) 東醫寶鑑에서는 腰脊痛, 男子의 陰痿 와 女子의 陰痒을 다스리면서 五勞와 七傷을 補하고 虛損을 다스린다고 언급하였다14).

참고문헌 (47)

중앙암등록본부. 2006-2007년 암발생률, 1993-2007년 암발생자의 암생존률, 2007년 암유병률 통계 참고자료. 2009. Available from: URL:http://www.cancer.go.kr/cms/data/edudata/1363101_1619.html.
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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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