[논문]감잎(柿葉) 추출물의 채취시기에 따른 항산화 활성 변화 및 아토피성 피부염 개선효과

정우영; 정종문

doi:10.6116/kjh.2012.27.1.41

감잎(柿葉) 추출물의 채취시기에 따른 항산화 활성 변화 및 아토피성 피부염 개선효과
Change of Antioxidative Activity at Different Harvest Time and Improvement of Atopic Dermatitis Effects for Persimmon Leaf Extract 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.27 no.1, 2012년, pp.41 - 49

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Objectives : The purpose of this study was to investigate the anti-oxidative and anti-atopic dermatitis effects of persimmon leaf extract obtained from Cheongdo-gun, where more than 60% of Korean persimmon is produced. Methods : Anti-oxidative effects of the crude persimmon leaf extract harvested monthly between May and November were determined by in vitro assay using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and superoxide dismutase (SOD)-like reaction. Anti-atopic dermatitis effects of the crude persimmon leaf extract were determined by using collagenase type I inhibition assay and by quantitative assays including serum histamine, prostaglandin E metabolite and leukotriene $B_4$ levels in animal model of atopic dermatitis using Balb/c mice. Results : Persimmon leaf extract harvested in May had higher levels of total phenolic compounds (182.24 mg/g) and flavonoids (23.05 mg/g) than the ones of different month extract. Also, persimmon leaf extract harvested in May showed the most effective extract scavenging activities of DPPH free radical ($13.39{\pm}0.21\;{\mu}g/ml$) and superoxide anion radical ($40.52{\pm}2.32\;{\mu}g/ml$), leading to use the persimmon leaf extract harvested in May for the experiments hereafter. Persimmon leaf extract showed $326.71{\pm}4.6\;{\mu}g/ml$ of 50% inhibitory concentration ($IC_{50}$) for collagenase type I which is responsible for the degradation of extracellular matrix. In addition, persimmon leaf extract application group could decrease serum levels of histamine, prostaglandin E metabolite and leukotriene $B_4$ compared to the negative control in animal model of atopic dermatitis. Especially, persimmon leaf extract showed a significantly decreased serum leukotriene $B_4$ level relative to the levels of histamine and prostaglandin E metabolite. Conclusions : Persimmon leaf extract showed anti-oxidative and anti-atopic dermatitis effects in vitro and in vivo. These results suggest that persimmon leaf extract may have immunoregulatory function for alleviating atopic dermatitis by decreasing collagenase activity and mast cell activation.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

그 중 가장 높은 함량과 효과를 나타낸 추출물을 선별하여 collagenase type Ⅰ(MMP-1)저해 활성을 확인하였다. 또한 항아토피성 피부염 효능을 측정하기 위하여 2,4- dinitrochlorobenzene(DNCB)로 아토피성 피부염이 유도된 Balb/c mouse에 柿葉 추출물을 투여시킨 후 혈청 내 염증 매개 물질들의 수치를 측정하여 柿葉의 아토피성 피부염 증상 완화 및 개선의 가능성을 살펴보고자 하였다.

제안 방법

이를 60% ethanol과 1：7의 무게 비율로 혼합하여 추출기에 넣고 30℃에서 2시간 교반 추출하였다. 2시간 후 추출물을 여과지(Whatman No. 2)를 사용하여 여과한 후 60℃에서 감압농축(Rotavapor rotary evapo-rators, Bṻchi, Switzerland)하여 추출분말 상태로 제조하였다. 이를 진공 포장하여 서늘한 암실에 보관하여 실험에 사용하였다.
DNCB를 이용한 아토피성 피부염 유발 실험은 Dezan 등³⁶⁾과 Kwon 등³⁷⁾의 문헌을 변형하여 실험하였다. 실험동물(Balb/c 마우스)은 총 40마리를 사용하였으며 AOO 도포군(AOO군), 음성대조군, 양성대조군 그리고 시료군으로 나누어 각 10마리씩 배정하였다.
柿葉 추출물의 DPPH 라디칼 포착능을 확인하기 위하여 Yasushi 등³³⁾의 문헌을 변형하여 실험하였다. 0.
柿葉 추출물의 collagenase type Ⅰ저해활성 측정은 Wűsch 등³⁵⁾의 방법을 변형하여 측정하였다. 기질액(0.
柿葉 추출물의 총 페놀성 화합물의 함량은 Gutfinger³¹⁾의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, 시료 1 mL에 2%(w/v) sodium carbonate 용액 1 mL를 가하여 3분간 상온에서 반응시킨 후, 50%(v/v) Folin-Ciocalteu 시약 0.
柿葉 추출물의 항아토피성 피부염 효과는 피부에서 인위적으로 아토피성 피부염을 유발하는 hapten을 형성하는 물질로 알려진 DNCB를 이용하여 실험하였다. 柿葉 추출물의 항아토피성 피부염 효과는 1% DNCB 도포, 증류수 또는 시료들 경구 투여 그리고 0.2% DNCB 도포를 각 일주일씩 실시하는 방법으로 실험하였다. AOO군 마우스들의 등 피부에는 어떠한 병변이나 증상도 나타나지 않았으나(Figure 1A), 음성대조군의 등 피부에서는 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 다양한 아토피 증상이 뚜렷하게 나타났으며(Figure 1B), promethazine hydrochloride(1 mg/kg body wight)을 투여한 양성대조군 마우스들의 등 피부에서는 음성대조군 마우스들에 비교하면 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 증상이 확연히 억제된 것을 확인하였다(Figure 1D).
알레르기 피부염 중의 하나인 아토피성 피부염은 주로 면역학적 기전에 의해서 발생되는 피부 질환이다. 柿葉 추출물의 항아토피성 피부염 효과는 피부에서 인위적으로 아토피성 피부염을 유발하는 hapten을 형성하는 물질로 알려진 DNCB를 이용하여 실험하였다. 柿葉 추출물의 항아토피성 피부염 효과는 1% DNCB 도포, 증류수 또는 시료들 경구 투여 그리고 0.
따라서 본 연구에서는 우리나라 감 생산량의 약 60%를 차지하는 국내 최대 감 생산지 하나인 청도의 柿葉을 시기별(5월~11월)로 채취하고 추출하여 그 추출물들의 총 페놀성 화합물, 플라보노이드 함량 및 항산화 효과(DPPH 라디칼 포착 효능, superoxide dismutase 유사 활성효능)를 확인하였다. 그 중 가장 높은 함량과 효과를 나타낸 추출물을 선별하여 collagenase type Ⅰ(MMP-1)저해 활성을 확인하였다. 또한 항아토피성 피부염 효능을 측정하기 위하여 2,4- dinitrochlorobenzene(DNCB)로 아토피성 피부염이 유도된 Balb/c mouse에 柿葉 추출물을 투여시킨 후 혈청 내 염증 매개 물질들의 수치를 측정하여 柿葉의 아토피성 피부염 증상 완화 및 개선의 가능성을 살펴보고자 하였다.
현재까지의 柿葉 연구에서는 柿葉 추출물의 항산화 효과에 대해 다수의 연구가 진행되어 있으나 항알레르기 효과, 특히 아토피성 피부염 개선에 관한 연구가 미흡하다. 따라서 본 연구에서는 우리나라 감 생산량의 약 60%를 차지하는 국내 최대 감 생산지 하나인 청도의 柿葉을 시기별(5월~11월)로 채취하고 추출하여 그 추출물들의 총 페놀성 화합물, 플라보노이드 함량 및 항산화 효과(DPPH 라디칼 포착 효능, superoxide dismutase 유사 활성효능)를 확인하였다. 그 중 가장 높은 함량과 효과를 나타낸 추출물을 선별하여 collagenase type Ⅰ(MMP-1)저해 활성을 확인하였다.
이러한 이유로 혈액 내의 histamine, prostaglandin E metabolite 그리고 leukotriene B₄수준은 알레르기성 질환의 중요한 지표가 된다. 본 실험에서는 competitive ELISA 방식을 이용하여 대표적인 알레르기성 질환인 아토피성 피부염 마우스 모델의 혈청 내의 histamine, prostaglandin metabolite 그리고 leukotriene B₄의 수치를 측정하였고, 그 결과 Table 5와 같이 나타났다. 첫 번째로 histamine 수치는 정상군인 AOO군에서 28.
2% DNCB를 음성대조군, 양성대조군, 시료군에 100 µL씩 처리하고 AOO군에는 동량의 AOO를 2일 간격으로 3회 등 부위에 도포하여 아토피성 피부염을 재유발시키고 외형 관찰 후 희생부검 하였다. 아토피성 피부염에 대한 柿葉 추출물의 효과는 항히스타민제로 잘 알려진 promethazine hydrochloride를 양성대조군으로 하여 비교하였다.
우선 1% DNCB는 음성대조군, 양성대조군, 시료군에 각각 100 µL씩 일주일에 2일 간격으로 3회 등 부위에 도포하여 아토피성 피부염을 유발시켰고 AOO군에 동량의 AOO를 동일한 방법으로 처리하였다. 아토피성 피부염이 유발됨을 확인 후 일주일 동안 시료군에는 柿葉 추출물(50 mg/kg body weight)을, 양성대조군에는 promethazine hydrochloride(1 mg/kg body weight)를 그리고 AOO군과 음성대조군에는 증류수를 1일 1회씩 경구투여 하였다. 일주일간의 경구투여가 종료된 후 다음 일주일 동안 0.
획득한 혈청을 competitive ELISA 방식의 kit을 이용하여 혈청 내 염증 매개물질들(histamine, prostaglandin E metabolite and leukotriene B₄)의 농도를 측정하였다. 염증 매개물질들 가운 데 PGE₂는 혈액 내에서 구조가 쉽게 변하는 특성을 가지기 때문에 prostaglandin E metabolite 측정하는 것으로 이를 대신하였다. 이때 각각의 실험 방법은 ELISA kit의 제조사에서 공급한 방법을 사용하였다.
우선 1% DNCB는 음성대조군, 양성대조군, 시료군에 각각 100 µL씩 일주일에 2일 간격으로 3회 등 부위에 도포하여 아토피성 피부염을 유발시켰고 AOO군에 동량의 AOO를 동일한 방법으로 처리하였다.
이러한 collagen을 손상시켜 피부조직의 불균형을 초래하여 피부 염증이나 피부 노화를 일으키는 collagenase type Ⅰ(MMP-1)의 저해 효능을 통해 柿葉 추출물의 피부보호 효과를 측정하였다. 이는 collagenase type Ⅰ이 아미노산 서열 Pro와 Gly 사이를 결합을 분해하는 성질을 이용하여 유사 펩타이드(4- Phenylazobenzoxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)를 기질로 삼아 발색시키는 방법을 이용하였다. 이전 실험들에서 가장 높은 효과를 보인 5월 柿葉 추출물을 선택하여 실험을 진행하였으며, 柿葉 추출물의 collagenase type Ⅰ의 억제효과는 Table 3과 같이 나타났다.
Collagen의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합 조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포의 접착 지탱, 세포 분할과 분화의 유도 등이 알려져 있다^44-46). 이러한 collagen을 손상시켜 피부조직의 불균형을 초래하여 피부 염증이나 피부 노화를 일으키는 collagenase type Ⅰ(MMP-1)의 저해 효능을 통해 柿葉 추출물의 피부보호 효과를 측정하였다. 이는 collagenase type Ⅰ이 아미노산 서열 Pro와 Gly 사이를 결합을 분해하는 성질을 이용하여 유사 펩타이드(4- Phenylazobenzoxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)를 기질로 삼아 발색시키는 방법을 이용하였다.
5 cm² 크기로 면도기를 사용하여 제모 후 24시간 동안 안정화 시켰다. 이후 DNCB를 용매 물질(AOO, acetone ： olive oil = 4 ： 1 혼합)을 사용하여 1% 또는 0.2%가 되도록 제조하였다. 우선 1% DNCB는 음성대조군, 양성대조군, 시료군에 각각 100 µL씩 일주일에 2일 간격으로 3회 등 부위에 도포하여 아토피성 피부염을 유발시켰고 AOO군에 동량의 AOO를 동일한 방법으로 처리하였다.
일주일간의 경구투여가 종료된 후 다음 일주일 동안 0.2% DNCB를 음성대조군, 양성대조군, 시료군에 100 µL씩 처리하고 AOO군에는 동량의 AOO를 2일 간격으로 3회 등 부위에 도포하여 아토피성 피부염을 재유발시키고 외형 관찰 후 희생부검 하였다.
희생 부검한 동물의 심장에서 채혈하여 실온에서 5800☓g로 20분간 원심 분리하여 혈청을 획득하였다. 획득한 혈청을 competitive ELISA 방식의 kit을 이용하여 혈청 내 염증 매개물질들(histamine, prostaglandin E metabolite and leukotriene B₄)의 농도를 측정하였다. 염증 매개물질들 가운 데 PGE₂는 혈액 내에서 구조가 쉽게 변하는 특성을 가지기 때문에 prostaglandin E metabolite 측정하는 것으로 이를 대신하였다.
희생 부검한 동물의 심장에서 채혈하여 실온에서 5800☓g로 20분간 원심 분리하여 혈청을 획득하였다. 획득한 혈청을 competitive ELISA 방식의 kit을 이용하여 혈청 내 염증 매개물질들(histamine, prostaglandin E metabolite and leukotriene B₄)의 농도를 측정하였다.

대상 데이터

1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH), xanthine, xanthine oxidase, catechin hydrate, collagenase type Ⅰ, from clostridium histolyticum, promethazaine hydrochloride, 4-phenyl-azobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg, 2,4-Dinitrochlorobenzene(DNCB)는 Sigma사(St. Louis, USA)에서 구입하였다.
Balb/c계 마우스(수컷, 6주령)는 (주) 오리엔트 바이오(Gyeonggi-do, Gapyeong)에서 구입하였고, 본 실험실의 사육실에서 1주간 적응시킨 뒤 실험에 사용하였다. 모든 동물군에는 자유로운 식이와 식수를 제공하였다.
Prostaglandin E metabolite EIA kit, Leukotriene B₄ EIA kit는 Cayman사(Ann Arbor, USA)에서 구입하여 사용 하였고, Histamine ELISA kit는 Neogen사(Lexington, KY. USA)에서 구입하여 사용하였다. UV-VIS 분광광도계는 Spectronic Genesys 5(Miton Roy Co.
의 문헌을 변형하여 실험하였다. 실험동물(Balb/c 마우스)은 총 40마리를 사용하였으며 AOO 도포군(AOO군), 음성대조군, 양성대조군 그리고 시료군으로 나누어 각 10마리씩 배정하였다. 유사 아토피성 피부염을 유발하기 전 Balb/c 마우스의 등 부위를 1.
6 µg/ml으로 나타났다. 양성대조군으로 플라보노이드 계열의 물질인 quercetin을 사용하였다. Quercetin의 collagenase type Ⅰ IC₅₀값은 32.
양성대조군으로는 항산화 활성이 우수한 녹차 카테킨중 하나인 epigallocatechin gallate(EGCG)를 사용 하였으며, SC50값은 4.4±0.4 µg/ml로 나타났다.
, Sunnyvale, USA) 모델을 사용하였다. 추출기와 반응조는 Extraction Water Bath와 일반 반응조(CHOJALAB Co., Hwaseng, Gyeonggi-do)를 사용하였다. 추출에 이용된 柿葉은 잎의 형태를 갖추기 시작한 5월부터 낙엽이 지기 직전인 11월까지 청도군 소재의 청도 감 클러스터 사업단으로부터 매월 1회씩 신선한 상태로 제공받아 사용하였다.
, Hwaseng, Gyeonggi-do)를 사용하였다. 추출에 이용된 柿葉은 잎의 형태를 갖추기 시작한 5월부터 낙엽이 지기 직전인 11월까지 청도군 소재의 청도 감 클러스터 사업단으로부터 매월 1회씩 신선한 상태로 제공받아 사용하였다. 그 외의 시약은 1급 또는 특급을 사용하였다.

데이터처리

실험결과는 3회 반복하여 평균±표준오차(mean±SEM)로 나타냈으며, 각 실험군 간의 유의성 검정은 p<0.05에서 student's t-test로 검정하였다.

이론/모형

USA)에서 구입하여 사용하였다. UV-VIS 분광광도계는 Spectronic Genesys 5(Miton Roy Co., Ivyland, USA) 모델, ELISA autoreader는 VERSA max(Molecular devices Co., Sunnyvale, USA) 모델을 사용하였다. 추출기와 반응조는 Extraction Water Bath와 일반 반응조(CHOJALAB Co.
柿葉 추출물의 SOD 유사 활성효능을 확인하기 위하여 Kim 등³⁴⁾의 방법으로 측정하였다. 시료 0.
柿葉 추출물의 총 플라보노이드 함량은 Kim 등³²⁾의 방법으로 측정하였다. 시료 0.
염증 매개물질들 가운 데 PGE₂는 혈액 내에서 구조가 쉽게 변하는 특성을 가지기 때문에 prostaglandin E metabolite 측정하는 것으로 이를 대신하였다. 이때 각각의 실험 방법은 ELISA kit의 제조사에서 공급한 방법을 사용하였다.

성능/효과

1. 5월부터 11월까지 채취한 柿葉의 추출물 중 잎이 가장 왕성한 성장을 하는 5월에서 7월, 그중에서도 5월에 채취한 柿葉 추출물에서 총 페놀성 화합물과 플라보노이드류의 함량이 가장 높게 나타났다.
2. 5월부터 11월까지의 채취한 柿葉의 추출물 중에서 5월에 채취한 柿葉 추출물에서 비교적 높은 DPPH라디칼 포착 효능과 superoxide anion radical 소거활성을 보여 항산화 활성이 우수하게 나타났다.
3. 앞선 실험을 통해 생리활성 물질들의 함량이 높고 우수한 항산화 효능을 나타낸 5월에 채취한 柿葉 추출물이 collagenase type Ⅰ 저해 실험을 통하여 피부장벽 손상 방지로 인한 아토피성 피부염 증상 개선의 가능성을 입증하였다.
4. 아토피성 피부염 질환 동물모델을 통하여 5월에 채취한 柿葉 추출물이 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 아토피성 피부염 증상 개선 효과를 육안으로 확인하였다.
5. 아토피성 피부염 개선효과에 따른 외형적 변화 이외에 혈청 내 염증 매개물질들인 histamine, prostaglandine E metabolite 그리고 leukotriene B₄의 농도가 감소되는 경향을 보였으며 이중 leukotriene B₄의 농도는 다른 물질과 비교할 때 감소폭이 크게 나타나 염증 매개물질의 감소 로 인한 아토피성 피부염 증상 개선의 가능성을 확인하였다.
AOO군 마우스들의 등 피부에는 어떠한 병변이나 증상도 나타나지 않았으나(Figure 1A), 음성대조군의 등 피부에서는 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 다양한 아토피 증상이 뚜렷하게 나타났으며(Figure 1B), promethazine hydrochloride(1 mg/kg body wight)을 투여한 양성대조군 마우스들의 등 피부에서는 음성대조군 마우스들에 비교하면 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 증상이 확연히 억제된 것을 확인하였다(Figure 1D). 柿葉 추출물 50 mg/kg body weight을 투여한 시료군 마우스의 등 피부 역시 음성대조군 마우스들 보다 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 증상이 확연히 억제된 것이 확인되어졌으며(Figure 1C), 또 10명의 전문 연구원들이 각 군의 등 피부를 비교 관찰한 결과(Table 4) 시료군의 등 피부에서 양성대조군의 등 피부보다 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 증상이 더 개선된 것으로 관찰되었다. 피부 병변의 개선은 아토피성 피부염 치료의 중요한 지표 중의 하나로서, 柿葉 추출물을 투여한 마우스의 피부 상태가 음성대조군의 피부 상태보다 확실히 호전된 것을 육안으로 볼 수 있었으며, 柿葉 추출물을 투여한 마우스의 피부 상태가 시중에 널리 이용되는 항염증제제인 promethazine hydrochloride을 투여한 양성대조군의 피부 상태보다 더욱 호전된 것을 확인할 수 있었다.
柿葉 추출물의 SC50값이 5월부터 11월까지 각각 13.39±0.21, 19.35±3.29, 24.22±0.12, 22.14±1.93, 28.56±2.64, 26.51±0.12 그리고 41.14±0.18 µg/ml으로 5월 柿葉 추출물이 가장 높은 DPPH 라디칼 포착 효능을 나타났다.
柿葉 추출물의 SC50값이 5월부터 11월까지 각각 40.59±0.4, 40.52±2.32, 39.58±1.38, 42.5±3.41, 48.9±0.26, 60.2±2.68 그리고 80.87±2.96 µg/ml으로 柿葉의 채취시기가 지날수록 효능이 떨어지는 것으로 나타났다.
4 µg/ml로 나타났다. 가장 높은 DPPH 라디칼 포착 효능을 나타낸 5월 柿葉 추출물이 EGCG 보다 약 3배 떨어지는 효능을 나타났다. 하지만 柿葉 추출물이 정제된 단일물질이 아니라는 것을 감안하면 우수한 DPPH 라디칼 포착 효능을 가지는 것으로 사료된다.
Collagenase type Ⅰ 저해 활성(%)은 [1-{(시료를 첨가한 반 응군의 흡광도-시료의 흡광도)/시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도}]☓100 식으로부터 구하였다. 그 결과는 collagenase type Ⅰ 50% 저해 활성일 때의 농도를 50% inhibition activity concentration(IC₅₀) 값으로 나타내었다.
두 번째로 prostaglandin E metabolite수치는 AOO군과 음성대조군에서 각각 6.5±1, 109.94±21.35 pg/ml로 나타나 DNCB 처리에 의해 혈청 내 prostaglandin E metabolite농도가 급격하게 증가하는 것을 확인하였다.
하지만 quercetin이 플라보노이드 계열 중 collagenase 억제 효능이 높다고 알려진 물질임을 감안할 때 柿葉 추출물은 collagenase type Ⅰ 저해에 상당한 효과를 가지는 것으로 사료된다. 따라서 柿葉 추출물은 아토피성 피부염 발생 시 피부장벽의 파괴를 일으키는 초기 염증인자인 collagenase type Ⅰ을 효과적으로 저해하여 피부 상태의 개선 또는 증상을 완화시키는 유용한 효과를 가질 것으로 사료된다.
또 시료군과 양성대조군은 각각 80.27±34.47, 69.58±43.73 pg/ml로 시료군이 다소 낮은 효능을 보였다.
하지만 柿葉 추출물이 정제된 단일물질이 아니라는 것을 감안할 때 비교적 우수한 SOD 유사활성 효능을 가지는 것으로 사료된다. 또한 SOD 유사활성 효능 역시 柿葉 추출물들의 총 페놀성 화합물 함량에 비례하여 증가되는 결과를 확인하였다.
하지만 柿葉 추출물이 정제된 단일물질이 아니라는 것을 감안하면 우수한 DPPH 라디칼 포착 효능을 가지는 것으로 사료된다. 또한 柿葉의 추출물들이 총 페놀성 화합물 함량에 비례하여 DPPH 라디칼 포착 효능이 증가하는 결과를 보였다. 이는 페놀성 화합물의 함량에 비례하여 DPPH 라디칼 포착 효능이 증가한다고 보고 된 연구들과 동일한 결과를 보였다⁴³⁾.
또한 시료군과 양성대조군은 각각 48.09±15.21, 40.04±7.68 pg/ml로 나타났으며, 柿葉 추출물을 투여한 시료군의 혈청 내 histamine농도가 음성대조군보다 감소되는 결과가 나타났고 양성대조군보다는 낮은 효능이 나타났다.
또한 시료군과 양성대조군은 각각 94.56±12.52, 77.93±12.93 pg/ml로 시료군이 약 2배 낮은 효능을 보였다.
마지막으로 leukotriene B4농도는 AOO군과 음성대조군에서 각각 54.11±34.28, 140.58± 42.46 pg/ml로 나타나 DNCB 처리에 의해 확연히 혈청 내 leukotriene B4 농도가 급증하는 것을 확인하였다.
양성대조군인 EGCG의 SC50값은 5.8±0.2 µg/ml으로 나타났으며, 가장 높은 SOD 유사활성 효능을 가지는 5월~7월 柿葉 추출물이 EGCG보다 약 7배 떨어지는 효능을 나타났다.
이러한 결과들을 종합하여 볼 때 柿葉은 우수한 항산화 효능을 바탕으로 collagenase typeⅠ 저해 효능과 아토피성 피부염이 유발된 혈청 내에서 염증 매개 물질들의 수치를 낮췄다. 이는 柿葉의 아토피성 피부염 예방 및 개선제로서의 가능성을 시사하는 것으로 사료되며 예방 의학적인 측면을 강화하기 위하여 柿葉에 대한 지속적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
피부 병변의 개선은 아토피성 피부염 치료의 중요한 지표 중의 하나로서, 柿葉 추출물을 투여한 마우스의 피부 상태가 음성대조군의 피부 상태보다 확실히 호전된 것을 육안으로 볼 수 있었으며, 柿葉 추출물을 투여한 마우스의 피부 상태가 시중에 널리 이용되는 항염증제제인 promethazine hydrochloride을 투여한 양성대조군의 피부 상태보다 더욱 호전된 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 비추어 볼 때 柿葉 추출물이 우수한 항 아토피성 피부염 효과를 가지는 것으로 사료된다.
73 pg/ml로 시료군이 다소 낮은 효능을 보였다. 이렇게 histamine, prostaglandin E metabolite와 leukotriene B₄의 혈청 내 수치 감소 효과에서 시료군은 음성대조군보다 실험한 모든 염증 매개물질들의 혈청 내 수치가 감소하였지만 양성대조군보다는 다소 낮은 감소 효과를 보였다. 하지만 양성대조군에 사용된 promethazine hydrochloride는 항히스타민제이고 柿葉 추출물이 정제되지 않은 단순 추출물이라는 것을 감안할 때 柿葉 추출물은 체내에서 충분히 histamine, prostaglandin E metabolite와 leukotriene B₄의 혈청 내 수치 감소 효과를 가지는 것으로 사료된다.
첫 번째로 histamine 수치는 정상군인 AOO군에서 28.05±11.88 pg/ml 그리고 DNCB를 처리하여 아토피성 피부염이 유발된 음성대조군에서 52.31±16.14 pg/ml로 나타나 DNCB 처리에 의해 혈청 내 histamine농도가 확연히 증가하는 것을 확인하였다.
36 mg/g으로 나타났다. 총 페 놀성 화합물와 플라보노이드의 함량 모두 5월 柿葉 추출물에서 가장 높은 함량이 나타났다. 이러한 결과는 柿葉이 채취시기에 따라 성분의 변화가 심한데 개화 시기인 5월 중순부터 6월 초순이 비타민 및 페놀성 화합물이 함량 면에서 가장 높으며, 이는 柿葉이 성장하면서 점차 양이 감소하는 것으로 보고된 Jeng 등⁴²⁾ 이전의 실험들과 유사한 결과를 나타내었다.
총 페놀성 화합물 함량은 5월부터 11월까지 각각 182.24±0.71, 179.85±0.92, 178.50±5.86, 150.76±5.14, 136.95± 2.39, 143.53±4.53 그리고 105.67±0.01 mg/g으로 나타냈으며, 총 플라보노이드 함량은 각각 23.05±0.36, 18.66±2.66, 9.2±0.36, 11.41±0.47, 11.35±1.51, 17.2±0.18 그리고 7.67±0.36 mg/g으로 나타났다.
시기별로(5~11월) 채취한 柿葉 추출물의 총 페놀성 화합물과 플라보노이드 함량 그리고 추출 수율을 측정한 결과 Table 1과 같이 나타났다. 추출물들의 수율은 5월부터 11월까지 각각 14.74, 17.02, 13.55, 15.44, 16.11, 21.28 그리고 20.04%로 10월과 11월의 추출물이 다소 높은 수율을 보였다. 총 페놀성 화합물 함량은 5월부터 11월까지 각각 182.
柿葉 추출물 50 mg/kg body weight을 투여한 시료군 마우스의 등 피부 역시 음성대조군 마우스들 보다 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 증상이 확연히 억제된 것이 확인되어졌으며(Figure 1C), 또 10명의 전문 연구원들이 각 군의 등 피부를 비교 관찰한 결과(Table 4) 시료군의 등 피부에서 양성대조군의 등 피부보다 紅斑, 浮腫, 脫毛 등의 증상이 더 개선된 것으로 관찰되었다. 피부 병변의 개선은 아토피성 피부염 치료의 중요한 지표 중의 하나로서, 柿葉 추출물을 투여한 마우스의 피부 상태가 음성대조군의 피부 상태보다 확실히 호전된 것을 육안으로 볼 수 있었으며, 柿葉 추출물을 투여한 마우스의 피부 상태가 시중에 널리 이용되는 항염증제제인 promethazine hydrochloride을 투여한 양성대조군의 피부 상태보다 더욱 호전된 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 비추어 볼 때 柿葉 추출물이 우수한 항 아토피성 피부염 효과를 가지는 것으로 사료된다.

후속연구

항히스타민제는 일시적인 진정작용이 있지만, 염증 완화에 근본적인 치료제로서는 부적합한 것으로 보고되고 있다^25-27). 따라서 PGE₂(prostaglandin E₂), LTB₄(leukotriene B₄) 그리고 히스타민 등의 혈액 내의 방출에 대한 억제 활성을 갖는 천연 물질들은 제 Ⅰ형 알레르기(비염, 아토피성 피부염, 기관지 천식) 예방 및 개선제로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
이러한 결과들을 종합하여 볼 때 柿葉은 우수한 항산화 효능을 바탕으로 collagenase typeⅠ 저해 효능과 아토피성 피부염이 유발된 혈청 내에서 염증 매개 물질들의 수치를 낮췄다. 이는 柿葉의 아토피성 피부염 예방 및 개선제로서의 가능성을 시사하는 것으로 사료되며 예방 의학적인 측면을 강화하기 위하여 柿葉에 대한 지속적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	柿葉에는 어떤 물질이 함유되어 있는가?	그 중에서도 특히 柿葉은 주로 차로 이용되어 동의보감에 혈관 질환의 예방, 치료와 함께 자반증(혈관염증)에도 효과가 있다고 기록되어있다1). 柿葉에는 비타민 C, 아미노산, 핵산, 페놀성 화합물, 유리당 등 여러 물질들이 다양하게 함유되어 있다2). 柿葉은 총 페놀성 화합물 함량이 0.
	柿葉 추출물은 혈청 내 어떤 인자의 농도를 감소시켜 아토피성 피부염 증상을 개선하는가?	5. 아토피성 피부염 개선효과에 따른 외형적 변화 이외에 혈청 내 염증 매개물질들인 histamine, prostaglandine E metabolite 그리고 leukotriene B4의 농도가 감소되는 경향을 보였으며 이중 leukotriene B4의 농도는 다른 물질과 비교할 때 감소폭이 크게 나타나 염증 매개물질의 감소 로 인한 아토피성 피부염 증상 개선의 가능성을 확인하였 다.
	아토피성 피부염 발생 및 증상 악화에 중요한 역할을 하는 염증 인자는 무엇인가?	또한 아토피성 피부염 환자에게는 매트릭스 구조 단백질(Matrix metalloprotein) 중의 하나인 콜라겐 (collagen)이 콜라게나아제(collagenase)에 의해 분해되어 피 부장벽이 손상되고 이는 피부 감염과 염증에 대한 감수성을 높이게 된다28). 이 때 eicosanoid 생합성 효소와 매트릭스 구조 단백질 분해 효소(Matrix metalloproteinases, MMPs) 등과 같은 초기 염증 인자들이 아토피성 피부염 발생 및 증상 악화에 중요한 역할을 하며29-30), 이러한 이유로 피부장벽 기 능 손상은 아토피성 피부염의 중요한 지표가 될 수 있으며 초 기 염증 인자인 MMPs를 억제하면 피부 질환을 감소시키는 효과를 기대할 수 있다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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