호박잎에서 Paraquat 활성 억제 물질의 분리, 동정 및 특성 구명 Isolation, Identification and Characterization of Paraquat Activity-Inhibiting Substances in Squash (Cucurbita moschata Duchesne ex Poiret) Leaves원문보기
선행연구를 통해 18종의 호박 품종에 대한 엽위별 paraquat에 대한 내성 반응을 조사한 결과, 1엽<2엽<3엽<4엽 순이었다. 이들 품종 중에서 엽령간 뚜렷한 내성차이가 있는 중앙애호박의 경우 4엽은 1엽에 비해 paraquat에 대해 3배 이상의 높은 내성을 보였다. 또한 이들 4엽의 물 추출물과 paraquat를 혼용하여 옥수수 경엽에 처리시 paraquat 약해를 경감시켰다. 따라서 본 연구는 paraquat 약해를 경감시키는 물질이 어린 호박잎에 존재하는지를 알아보기 위하여 수행하였다. MeOH 추출물보다 물 추출물에서 paraquat 활성경감이 더 높아서 물 추출물을 실리카겔과 Sephadex LH-20 칼럼크로마토그래피와 TLC, HPLC를 이용하여 paraquat 활성 경감 효과를 보이는 순수물질을 얻어 NMR을 통해 분석한 결과 malic acid로 추정되었다. 따라서 malic acid가 paraquat 활성경감 물질여부를 확인하기 위하여 malic acid와 paraquat를 옥수수에 동시 처리하였다. 처리 후 1일째 $100{\mu}M$ paraquat를 단독으로 처리한 경우 옥수수 잎 피해가 62% 발생하였으나 $100{\mu}M$ paraquat에 malic acid를 각각 0.1, 0.3, 0.5 및 1% 혼용처리한 경우 잎 피해가 전혀 발생하지 않았다.
선행연구를 통해 18종의 호박 품종에 대한 엽위별 paraquat에 대한 내성 반응을 조사한 결과, 1엽<2엽<3엽<4엽 순이었다. 이들 품종 중에서 엽령간 뚜렷한 내성차이가 있는 중앙애호박의 경우 4엽은 1엽에 비해 paraquat에 대해 3배 이상의 높은 내성을 보였다. 또한 이들 4엽의 물 추출물과 paraquat를 혼용하여 옥수수 경엽에 처리시 paraquat 약해를 경감시켰다. 따라서 본 연구는 paraquat 약해를 경감시키는 물질이 어린 호박잎에 존재하는지를 알아보기 위하여 수행하였다. MeOH 추출물보다 물 추출물에서 paraquat 활성경감이 더 높아서 물 추출물을 실리카겔과 Sephadex LH-20 칼럼크로마토그래피와 TLC, HPLC를 이용하여 paraquat 활성 경감 효과를 보이는 순수물질을 얻어 NMR을 통해 분석한 결과 malic acid로 추정되었다. 따라서 malic acid가 paraquat 활성경감 물질여부를 확인하기 위하여 malic acid와 paraquat를 옥수수에 동시 처리하였다. 처리 후 1일째 $100{\mu}M$ paraquat를 단독으로 처리한 경우 옥수수 잎 피해가 62% 발생하였으나 $100{\mu}M$ paraquat에 malic acid를 각각 0.1, 0.3, 0.5 및 1% 혼용처리한 경우 잎 피해가 전혀 발생하지 않았다.
The fourth leaves (younger leaves) amongst extended 4-upper leaves in 18 squash cultivar were the highest tolerance to the paraquat application, followed by third, the second, and the first leaves (older leaves). The forth leaves in Joongangaehobak showed more than three times higher tolerance to th...
The fourth leaves (younger leaves) amongst extended 4-upper leaves in 18 squash cultivar were the highest tolerance to the paraquat application, followed by third, the second, and the first leaves (older leaves). The forth leaves in Joongangaehobak showed more than three times higher tolerance to the paraquat application than did the first leaves. When the combining of water extract from the fourth leaves with paraquat were applied to the leaves and stems of maize, the paraquat phytotoxicity in maize was reduced compared to the paraquat application alone. Therefore, this study continued to investigate if the phytotoxicity inhibitor exist in the fourth leaves. The water extract in the fourth leaves were isolated by silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, TLC, and HPLC, and the substance in the extract was speculated as a malic acid by identifying through NMR. The mixture malic acid and paraquat were applied to the maize to verify the application effect of malic acid on paraquat toxicity. The 100 ${\mu}M$ of paraquat application alone showed 62% of paraquat toxicity to the corn leaves, while the combined application of 100 ${\mu}M$ paraquat with malic acid at 0.1, 0.3, 0.5, and 1.0% did not show the symptom.
The fourth leaves (younger leaves) amongst extended 4-upper leaves in 18 squash cultivar were the highest tolerance to the paraquat application, followed by third, the second, and the first leaves (older leaves). The forth leaves in Joongangaehobak showed more than three times higher tolerance to the paraquat application than did the first leaves. When the combining of water extract from the fourth leaves with paraquat were applied to the leaves and stems of maize, the paraquat phytotoxicity in maize was reduced compared to the paraquat application alone. Therefore, this study continued to investigate if the phytotoxicity inhibitor exist in the fourth leaves. The water extract in the fourth leaves were isolated by silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, TLC, and HPLC, and the substance in the extract was speculated as a malic acid by identifying through NMR. The mixture malic acid and paraquat were applied to the maize to verify the application effect of malic acid on paraquat toxicity. The 100 ${\mu}M$ of paraquat application alone showed 62% of paraquat toxicity to the corn leaves, while the combined application of 100 ${\mu}M$ paraquat with malic acid at 0.1, 0.3, 0.5, and 1.0% did not show the symptom.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
또한 본 연구팀의 선행연구(Lee 등 2012)에 의하면 호박잎 추출물에 의해 paraquat 활성이 경감되는 결과를 도출하였다. 따라서 본 연구는 paraquat 내성물질이 호박 어린엽에 존재하는지 알아보기 위하여 수행하였다.
또한 이들 4엽의 물 추출물과 paraquat를 혼용하여 옥수수 경엽에 처리시 paraquat 약해를 경감시켰다. 따라서 본 연구는 paraquat 약해를 경감시키는 물질이 어린 호박잎에 존재하는지를 알아보기 위하여 수행하였다. MeOH 추출물보다 물 추출물에서 paraquat 활성경감이 더 높아서 물 추출물을 실리카겔과 Sephadex LH-20 칼럼크로마토그래피와 TLC, HPLC를 이용하여 paraquat 활성 경감 효과를 보이는 순수물질을 얻어 NMR 을 통해 분석한 결과 malic acid로 추정되었다.
이들 품종 중에서 엽령간 뚜렷한 내성차이가 있는 중앙애호박의 경우 4엽은 1엽에 비해 paraquat에 대해 3배 이상의 높은 내성을 보였다. 따라서 이들 엽령간 내성차이가 4엽에 존재하는 내성 물질에 의해서 기인되는지를 알아보기 위하여 내성물질을 분리 동정하고자 하였다.
제안 방법
4엽이 전개된 호박잎 중에, 제 4엽만을 1kg 수확하여 7 × 7mm크기로 자른 후, 8L의 MeOH을 넣고 환류 냉각하면서 비등 후 20분간 추출 하고, 여과하여 잔사를 재추출하는 과정을 총 3회 실시하였으며, MeOH로 추출한 잔사에 다시 물 8L를 넣고 비등 후 20분간 추출 후 여과하고 잔사를 재추출하는 과정을 총 3회 실시하였다.
Chemical shift(화학적 이동)는 δ(ppm) 단위로 기록하여 구조분석을 하였다.
Chromatogram에 나타난 바와 같이, 물을 사용한 HPLC의 결과보다는 분리능이 향상되었음을 확인 할 수 있었으며, paraquat활성 결과, RT 3∼4분, 17∼18분, 19∼20분 그리고 25∼26분에서 인정되었으며, paraquat활성 경감물질에 대한 정보를 더욱 얻고자 NMR 분석을 실시하였다.
Gel 100g을 물로 12시간 동안 팽윤시킨 후, column(3.0 × 70cm)을 제작하고 물로 용출하면서 40ml씩 분취하고 얻어진 획분에 대해 paraquat 활성경감 정도를 조사하였다.
MeOH 및 물 추출물에 대해 HPLC를 실시하면서 검출에 적합한 UV 파장을 선정하였고, 분리효율을 높이기 위하여 0.1% 인산완충용액, 물, 0.1% 초산용액을 사용하여 HPLC를 실시하고 각 획분에 대해 paraquat 활성경감 정도를 조사하였다. 이중 분리효율이 좋은 0.
MeOH 및 물 추출물에 대해 검출에 적합한 UV 파장을 선정하기 위해 HPLC를 실시하였다(자료 미제시). MeOH추출물의 경우에는 220nm에 비해 254nm 에서 많은 수의 peak가 검출되어 254nm에서 더 높은 검출효과를 나타내었으며, 물 추출물의 경우에는 220nm, 254nm 모두 비슷한 경향을 나타내었다.
MeOH, 물 추출물의 용매분획에서 얻어진 4개의 획분 중, paraquat 활성경감 효과가 높은 수용성 획분에 대해 silica gel column chromatography를 실시하였다. Silica gel(70~230 mesh, Merck사) 250g으로 column (3.
NMR 스펙트럼은 AVNCE-400 FT-NMR(400 MHz, Bruker, Germany)으로 측정하였다. 핵자기 공명 분석을 위한 용매로는 D2O를 이용하였으며, 분리 정제된 시료의 대략적인 탄소의 수와 탄소의 종류를 관찰하기 위하여 1H-NMR, 13C-NMR 및 DEPT NMR spectrum 을 분석하였다.
Paraquat 활성은 호박잎 생체중량 5, 10g 상당량이 되도록 추출물을 조제 하여 이들 추출물에 0.1% tween 20이 첨가된 100µM paraquat 농도가 되도록 조제하여 3엽기 옥수수 잎에 소형분무기를 사용하여 5ml를 처리하고 처리 후 24시간에 달관평가(0~100%, 0:완전고사, 100:피해없음)에 의해 잎 피해율을 조사하였다.
온실 조건은 주/야 온도가 30±2/20±3°C, 광주기는 주/야 14/10시간, 상대습도는 70%, 광량은 500µmol/m2/sec 이었다. Paraqut 활성 경감정도를 알아보기 위하여 옥수수(장원찰 1호) 종자를 24시간 증류수에 침종하고 위의 호박실험과 동일한 육묘용 상자에 파종하여 1엽기까지 생육한 후 지름 7cm의 소형포트에 이식하여 3엽이 전개되었을 때 paraquat를 처리하였다.
Sephadex LH-20 column chromatography에서 paraquat 활성 경감이 인정된 획분을 모아서 농축하고, 그 일부를 사용하여 TLC(Merck사, G-60)를 실시하였다. Plate는 10 × 10cm로 잘라서 사용하였고, 용매계는 다음 3가지를 사용하였다.
Silica gel column chromatography에서 paraquat 활성 경감이 인정된 획분을 모아 농축한 후, Sephadex LH-20 column chromatography를 실시하였다. Gel 100g을 물로 12시간 동안 팽윤시킨 후, column(3.
Silica gel(70~230 mesh, Merck사) 250g으로 column (3.4 × 75cm)을 제작하고, 시료를 silica gel 20g에 넣고 감압농축한 후 흡착시켜 column 상단에 charge하고, 용매로 용출하면서 250ml씩 분취한 후, paraquat 활성경감 정도를 조사하였다.
각각의 MeOH, 물 추출물에 대해 용매분획을 실시하였다. n-Hexane, ethylacetate 그리고 chloroform을 각각 500ml씩 가하여 용매분획을 실시하고, 얻어진 nhexane, ethylacetate, chloroform 그리고 수용성 획분에 대해 paraquat 활성을 조사하였다. Paraquat 활성은 호박잎 생체중량 5, 10g 상당량이 되도록 추출물을 조제 하여 이들 추출물에 0.
각각의 MeOH, 물 추출물에 대해 용매분획을 실시하였다. n-Hexane, ethylacetate 그리고 chloroform을 각각 500ml씩 가하여 용매분획을 실시하고, 얻어진 nhexane, ethylacetate, chloroform 그리고 수용성 획분에 대해 paraquat 활성을 조사하였다.
물을 사용하여 HPLC를 실시하고 각 획분에 대해 paraquat활성 경감을 조사하였다(자료 미제시). 단, 획분은 처음은 2분, 그 후 1분씩 10분까지 분획하고, 5분씩 25분까지 분획, 10분간 분획, 15분간 분획하여 총 14개 획분을 얻었으며, 이를 대상으로 paraquat활성 경감을 검정하였다. 생물활성은 2∼5 그리고 9, 10번 획분에서 paraquat활성 경감이 인정되었으나, chromatogram에 나타난 바와 같이, retention time(이하 RT) 12 분부터 20분까지 tailing현상이 심하여 물질의 분리가 효과적이라고 판단하기는 어려웠다.
MeOH 추출물보다 물 추출물에서 paraquat 활성경감이 더 높아서 물 추출물을 실리카겔과 Sephadex LH-20 칼럼크로마토그래피와 TLC, HPLC를 이용하여 paraquat 활성 경감 효과를 보이는 순수물질을 얻어 NMR 을 통해 분석한 결과 malic acid로 추정되었다. 따라서 malic acid가 paraquat 활성경감 물질여부를 확인하기 위하여 malic acid와 paraquat를 옥수수에 동시 처리하였다. 처리 후 1일째 100µM paraquat를 단독으로 처리한 경우 옥수수 잎 피해가 62% 발생하였으나 100µM paraquat에 malic acid를 각각 0.
본 연구에 의해 분리, 정제된 물질은 NMR분석에 의해 malic acid로 추정되었다. 따라서 malic acid와 paraquat를 옥수수에 동시 처리 후 paraquat 활성경감 효과를 조사하였다(표 3). 처리 후 1일째 100µM paraquat를 단독으로 처리한 경우 62% 옥수수 잎피해가 발생하였으나 100µM paraquat에 malic acid를 각각 0.
1% tween 20이 첨가된 100µM paraquat를 단독으로 처리하였다. 또한 0.1% tween 20을 증류수에 첨가하여 각 옥수수 식물체당 5ml를 처리 하여 tween 20에 대한 효과 유무를 조사하였다.
사용한 용매계는 chlo개 form내 MeOH 농도를 0, 5, 10, 15, 20, 30, 100%로 증가시키면서 각각 1L씩 용출하고, 그 후, MeOH내의 물의 농도를 20, 50, 100%로 증가시키면서 각각 1L씩 용출하였다. 물 추출물의 경우는 용매계를 변경하여 silica gel column chromatography를 실시하였다. 변경한 용매계는 MeOH내에 물 농도를 0, 10, 20, 30, 50%까지 각각 1L씩, 그 후 물 3L로 용출하면서 500ml씩 용출분획하고 얻어진 획분에 대해 paraquat 활성경감 정도를 조사하였다.
물을 사용하여 HPLC를 실시하고 각 획분에 대해 paraquat활성 경감을 조사하였다(자료 미제시). 단, 획분은 처음은 2분, 그 후 1분씩 10분까지 분획하고, 5분씩 25분까지 분획, 10분간 분획, 15분간 분획하여 총 14개 획분을 얻었으며, 이를 대상으로 paraquat활성 경감을 검정하였다.
물 추출물의 경우는 용매계를 변경하여 silica gel column chromatography를 실시하였다. 변경한 용매계는 MeOH내에 물 농도를 0, 10, 20, 30, 50%까지 각각 1L씩, 그 후 물 3L로 용출하면서 500ml씩 용출분획하고 얻어진 획분에 대해 paraquat 활성경감 정도를 조사하였다. Paraquat 활성경감 검정은 위의 용매분획별 paraquat 활성실험과 동일하게 수행하였다.
본 연구에서 최종 분리, 동정된 물질은 malic acid로 추측되어 이 malic acid와 paraquat을 위의 paraquat 활성경감 검정법과 동일한 방법으로 옥수수에 처리하고 paraquat 활성경감 효과를 조사하였다. 이때 malic acid 농도는 0.
인산 완충용액을 이용한 HPLC 분리
분리효율을 높이기 위하여 0.1% 인산완충용액을 사용하여 HPLC를 실시하여 얻어진 각 획분에 대해 제초활성 경감에 대한 검정을 실시하여 얻은 chromatogram과 paraquat 활성 경감을 조사하였다(자료 미제시).
4 × 75cm)을 제작하고, 시료를 silica gel 20g에 넣고 감압농축한 후 흡착시켜 column 상단에 charge하고, 용매로 용출하면서 250ml씩 분취한 후, paraquat 활성경감 정도를 조사하였다. 사용한 용매계는 chlo개 form내 MeOH 농도를 0, 5, 10, 15, 20, 30, 100%로 증가시키면서 각각 1L씩 용출하고, 그 후, MeOH내의 물의 농도를 20, 50, 100%로 증가시키면서 각각 1L씩 용출하였다. 물 추출물의 경우는 용매계를 변경하여 silica gel column chromatography를 실시하였다.
이 호박종자를 24시간 동안 증류수에 침지 후 육묘용 상자(50 × 30 × 7cm)에 파종하여 온실에 두었다.
이때 추출물에 의한 paraquat 활성경감 정도를 비교하기 위하여 추출물이 포함되지 않은 0.1% tween 20이 첨가된 100µM paraquat를 단독으로 처리하였다.
NMR 스펙트럼은 AVNCE-400 FT-NMR(400 MHz, Bruker, Germany)으로 측정하였다. 핵자기 공명 분석을 위한 용매로는 D2O를 이용하였으며, 분리 정제된 시료의 대략적인 탄소의 수와 탄소의 종류를 관찰하기 위하여 1H-NMR, 13C-NMR 및 DEPT NMR spectrum 을 분석하였다. Chemical shift(화학적 이동)는 δ(ppm) 단위로 기록하여 구조분석을 하였다.
대상 데이터
본 연구에 의해 분리, 정제된 물질은 NMR분석에 의해 malic acid로 추정되었다. 따라서 malic acid와 paraquat를 옥수수에 동시 처리 후 paraquat 활성경감 효과를 조사하였다(표 3).
본 연구팀의 선행 연구(Yoon 등 2011)에서 다양한 18개 호박 품종 중에서 엽령별로 paraquat에 내성차이가 뚜렷한 중앙애호박 품종을 선발하였다. 이 호박종자를 24시간 동안 증류수에 침지 후 육묘용 상자(50 × 30 × 7cm)에 파종하여 온실에 두었다.
1% 초산용액을 사용하여 HPLC를 실시하고 각 획분에 대해 paraquat 활성경감 정도를 조사하였다. 이중 분리효율이 좋은 0.1% 초산용액을 선발하였고, HPLC 조건은 표 1과 같다. Paraquat 활성경감 검정은 위의 용매분획별 paraquat 활성 실험과 동일하게 수행하였다.
데이터처리
2)Means within a column followed by the same letters are not significantly different at 5% level according to Duncan's multiple range test.
본 연구결과로부터 얻은 자료는 LSD 통계분석을 SAS(2005) 프로그램을 이용하여 분석하였다.
성능/효과
HPLC의 제초활성경감 획분인 RT 3∼4분, 17∼18분, 19∼20분 그리고 25∼26분에 대해 NMR을 실시한 결과, RT 3∼4분, 17∼18분에서는 peak가 나타났으나, RT 19∼20분, 25∼26분에서는 peak가 나타나지 않았다.
따라서 본 연구는 paraquat 약해를 경감시키는 물질이 어린 호박잎에 존재하는지를 알아보기 위하여 수행하였다. MeOH 추출물보다 물 추출물에서 paraquat 활성경감이 더 높아서 물 추출물을 실리카겔과 Sephadex LH-20 칼럼크로마토그래피와 TLC, HPLC를 이용하여 paraquat 활성 경감 효과를 보이는 순수물질을 얻어 NMR 을 통해 분석한 결과 malic acid로 추정되었다. 따라서 malic acid가 paraquat 활성경감 물질여부를 확인하기 위하여 malic acid와 paraquat를 옥수수에 동시 처리하였다.
MeOH 추출물의 경우는 bed volume에 대한 elution volume의 비(이하 Ve/Vt) 0.4∼1.0의 범위에서 활성이 인정되었고, 물 추출물의 경우는 Ve/Vt 0.3∼1.1의 범위에서 활성이 인정되어, MeOH과 물 추출물 활성본 체의 분자량이 유사함을 확인하였다.
용매분획에서 활성이 인정된 methanol 추출물과 물추출물의 수용액 획분에 대해 silica gel column chromatography를 실시하고 paraquat 활성 경감을 검정한 결과는 그림 2와 같다. MeOH추출물의 경우에 제초활성 경감이 인정된 획분은 20, 50, 100% MeOH 용출획 분에서 paraquat 활성 경감이 인정되었으며, 물 추출물의 경우는 30, 50% MeOH 용출획분과 물 용출획분 초반에서 paraquat 활성 경감이 인정되었다.
추가적으로 Ca2+, Mg2+와 K+와 같은 무기양이 온은 paraquat 저항성 및 감수성 망초(Conyza bonariensis) 생태형의 엽절편에서 paraquat 활성을 경감시켰다(Norman과 Fuerst 1997). 결론적으로 본 연구를 통하여 호박 어린엽이 paraquat에 내성이었던 것은 어린 엽에 상대적으로 많은 malic acid를 함유하고 있고, 이들 malic acid와 paraquat의 상호작용에 의해 paraquat 활성을 경감시키는 것으로 사료된다.
이들 25∼30, 30∼35, 35∼40분 획분은 HPLC 용매계 중에서 상대적으로 acetonitrile의 함량이 많고, 인산완충 용액의 함량이 적은 부분이다. 따라서 paraquat 활성 경감에 인산화합물이 영향을 끼치는지를 확인하기 위해 용매계로 사용한 인산완충용액을 대상으로 제초활성 경감을 검정한 결과, 0.1% 인산완충용액이 paraquat의 약해를 경감시키는 것을 확인하고 HPLC 용매 계를 인산완충용액 대신 물로 변경하여 HPLC를 실시하였다.
MeOH추출물의 경우에는 220nm에 비해 254nm 에서 많은 수의 peak가 검출되어 254nm에서 더 높은 검출효과를 나타내었으며, 물 추출물의 경우에는 220nm, 254nm 모두 비슷한 경향을 나타내었다. 또, MeOH추출물에 비해 물 추출물에 더 많은 종류의 화합물이 존재함을 알 수 있었다. 이상의 결과로부터 254nm를 최종 검출파장으로 선정하였다.
또한 물 추출물의 경우 n-hexane, ethylacetate 및 chloroform은 대조구와 피해 정도(52∼68%)가 유사하였고 수용성 획분(14%)에서는 대조구(62%)에 비해 피해정도가 적게 나타나, MeOH 추출물보다 물 추출물에서 paraquat 활성경감이 더 높게 나타났다.
Sephadex LH-20 Column Chromatography에서 paraquat활성 경감이 인정된 획분을 모아서 농축한 다음, 단일물질 여부 및 활성본체의 유사성을 확인하기 위하여 용매계를 달리하여 TLC를 실시하고 요오드 증기를 사용하여 발색한 결과는 그림 4와 같다. 용매계 A로 전개한 결과, MeOH과 물 추출물의 전개양상이 거의 동일하여 두 추출물의 활성본체가 거의 유사함을 확인 하였다. 용매계 B와 C를 사용하여 전개한 경우는 spot 의 정확한 판독이 어려웠다.
또, MeOH추출물에 비해 물 추출물에 더 많은 종류의 화합물이 존재함을 알 수 있었다. 이상의 결과로부터 254nm를 최종 검출파장으로 선정하였다.
이상의 1D-NMR spectra로부터 이 화합물은 malic acid일가능성이 강하게 시사되었다. 이어 HMQC 분석에 의해 proton-carbon 간의 상관관계를 확인하였으며, HMBC 분석에 의해 proton-carbon 간의 long range correlation들을 검토한 결과, 이 화합물의 구조는 malic acid인 것으로 시사되었다. 특히 화합물 HPLC 3-4의 1H-NMR spectrum은 다양한 과실쥬스로부터 동정된 malic acid의 그것과 일치하였다(표 2).
인산완충용액을 사용하여 분리한 결과, 분리능은 향상되었으나, paraquat 활성 경감 결과에 나타난 바와 같이 25∼30, 30∼35, 35∼40, 40∼45분 획분을 제외한 전 획분에서 paraquat 활성 경감이 인정되었다.
즉 anomeric carbon 에 해당하는 1종의 signal(δ 104.4), non-anomeric carbon에 해당하는 5종의 signal들(δ 77.7-60.7), 그리고 methyl carbon signal(δ 52.9)을 포함한 총 7종의 carbon이 관찰되었다.
즉, 4엽이 전개된 오이 잎에 paraquat를 처리했을 때 엽위별 내성정도는 4엽(신엽)>3엽>2엽>1엽 순이었고, 특히 최상위 엽은 고농도 paraquat 처리에 의해서도 전혀 외형적인 증상을 보이지 않았다.
처리 후 1일째 100µM paraquat를 단독으로 처리한 경우 옥수수 잎 피해가 62% 발생하였으나 100µM paraquat에 malic acid를 각각 0.1, 0.3, 0.5 및 1% 혼용 처리한 경우 잎 피해가 전혀 발생하지 않았다.
처리 후 2, 3일째 경우에도 100µM paraquat 단독처리에 비해 malic acid와 paraquat를 혼용처리한 경우에 비해 잎 피해 정도가 적었다. 하지만 처리 후 3일째 조사한 생체중에서는 paraquat 단독처리와 malic acid와 혼용 처리간에 유의적인 차이는 없었다. 이와 같은 연구결과로 볼 때 호박잎에 존재하는 malic acid가 활성산소를 소거시켜 paraquat 활성을 억제시켰을 것으로 생각되며 특히 어린엽 일수록 malic acid의 양이 상대적으로 많기 때문에 paraquat에 대한 내성이 증가하는 것으로 사료된다(자료 미제시).
후속연구
이상의 1D-NMR spectra로부터 이 화합물은 methyl group이 결합된 당화합물로 시사 되었다. 이 화합물의 보다 정확한 구조해석을 위해서 추가적인 분석이 필요한 것으로 사료된다.
한편, Sephadex LH-20 column chromatography와 HPLC의 결과에서 나타난 바와 같이 MeOH과 물 추출물의 분자량이 유사하고, HPLC chromatogram에서 나타난 바와 같이 MeOH추출물의 peak가 물 추출물의 peak와 완전히 겹쳐서 나타나며 물 추출물에 더 많은 수의 화합물이 존재하는 것으로 강하게 시사되어, 추후 실험은 물 추출물을 대상으로 실시하였다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
paraquat란?
Bipyridinium계 제초제 paraquat는 1958년 영국 ICI에서 제초제로 개발된 이래 세계 100여개 국가의 농경지 및 비농경지에 사용되고 있는 효과가 탁월한 비선택성 제초제이다(Dodge 1971; Herbicide Handbook 1994). Paraquat는 photosystem I로부터 전자를 받아들여 안정한 자유 radical을 형성한다.
지금까지 개발된 제초제 중 약효발현속도가 가장 빠른 제초제는 무엇인가?
이러한 작용기작을 갖고 있는 paraquat는 지금까지 개발된 제초제 중에서 약효발현속도가 가장 빠른 제초제이다. 또한 이러한 장점과 더불어 폭넓은 잡초스펙 트럼을 갖고 있어 농경지 및 비농경지에 발생하는 잡초의 효율적인 방제를 위하여 중요한 농업자재 중의 하나이다.
paraquat 제초제의 단점은?
또한 이러한 장점과 더불어 폭넓은 잡초스펙 트럼을 갖고 있어 농경지 및 비농경지에 발생하는 잡초의 효율적인 방제를 위하여 중요한 농업자재 중의 하나이다. 그러나 동일 작용기작을 가진 제초제를 매년 같은 포장에 계속하여 사용함으로써 특정 잡초종으로의 천이와 함께 특정계통의 제초제에 대한 저항성 잡초종의 출현을 야기시키고 있다. 제초제 저항성 잡초에 대한 국제적인 조사결과에 의하면 세계적으로 393여종의 제초제 저항성 잡초가 출현하였다고 보고되었다(Heap 2012).
참고문헌 (20)
Amsellem, Z. M., J. A. Dreisenaar, and J. Gressel. 1993. Developmental variability of photooxidative stress tolerance in paraquat-resistant Conyza. Plant Physiol. 103:1097-1106.
Casano, L. M., M. Martin, and B. Sabater. 1994. Sensitivity of superoxide dismutase transcript levels and activities to oxidative stress is lower mature-senescent than in young barley leaves. Plant Physiol. 106:1033-1039.
Chun, J. C., J. Kim, I. T. Hwang, and S. E. Kim. 2002. Acteoside from Rehmannia glutinosa nullifies paraquat activity in Cucumis sativus. Pesticide Biochem. Physiol. 72:153-159.
Chun, J. C., S. Y. Ma, S. E. Kim, and H. J. Lee. 1997. Physiological response of Rehmannia glutinosa to paraquat and its tolerance mechanisms. Pestic. Biochem. Physiol. 59:51-63.
Donahue, J. L., C. M. Okpodu, C. L. Cramer, E. A. Grabau, and R. G. Alscher. 1997. Responses of antioxidants to paraquat in pea leaves:Relationships to resistance. Plant Physiol. 113:249-257.
Farrington, J.A., M. Ebert, E. J. Land, and K. Fletcher. 1973. Bipyridylium quaternary salts and related compounds. V. Pulse radiolysis studies of the reaction of paraquat radical with oxygen. Implications for the mode of action of bipyridylium herbicides. Biochem. Biophys. Acta, 314:372-381.
Herbicide Handbook. 1994. Weed Science Society of America. Seventh Edition. 352 p.
Heap, I. M. 2012. International survey of herbicideresistant weeds, available at www.weedscience.com.
Kim, J. S., and J. C. Chun. 1992. Resistance of the medicinal plant Jiwhang (Rehmania glutinosa) on paraquat. Korean J. Weed Sci. 12(4):374-379.
Kim, S., and K. K. Hatzios. 1993. Differential response of two soybean cultivars to paraquat. Z. Naturdorsch. 48c:379-384.
Kuk, Y. I., J. S. Shin, H. I. Jung, J. O. Guh, S. Jung, and N. R. Burgos. 2006. Mechanism of tolerance to paraquat in cucumber leaves of various ages. Weed Sci. 54:6-15.
Lee, S. B., J. Y. Yoon, H. J. Jung, D. J. Lee, D. Y. Shin, K. H. Hyun, and Y. I. Kuk. 2012. Ameliorative effects of squash (Cucurbita moschata Duchesne ex Poiret) leaf extracts on oxidative stress. Plant Growth Regul. 67:9-17.
Norman, M. A., and E. P. Fuerst. 1997. Interaction of cations with paraquat in leaf sections of resistant and sensitive biotypes of Conyza bonariensis. Pestic. Biochem. Physiol. 57:181-190.
Ohe, M. Rapolu M., Mieda T., Miyagawa Y., Yabuta Y., Yoshimura K., and Shigeoka S. 2005. Decline in leaf photooxidative-stress tolerance with age in tobacco. Plant Sci. 168:1487-1493.
Rabinowitch, H. D., and I. Fridovich. 1983. Superoxide radicals, superoxide dismutases,and oxygen toxicity in plants. Photochem. Photobiol. 37:679-690.
SAS Statistical Analysis System. 2005. SA/STAT User's Guide, Version 7, Statistical Analysis System Institute, Electronic Version Cary, NC.
Yoon, J. Y., J. S. Shin, D. Y. Shin, K. H. Hyun, N. R. Burgos, S. B. Lee, and Y. I. Kuk. 2011. Tolerance to paraquat-mediated oxidative and environmental stress in squash (Cucurbia spp.) leaves of various ages. Pestic. Biochem. Physiol. 99:65-76.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.