선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 깻잎 재배농장의 공기에 의한 깻잎으로의 교차오염 여부를 판단하기 위하여 위생지표세균, 병원성 미생물(E. coli O157:H7, L. monocytogens, Salmonella spp., S. aureus 및 B. cereus) 및 곰팡이를 대상으로 공중낙하균을 조사하였다. 깻잎이 재배되고 있는 각 농장의 필지에 각 미생물에 대한 선택배지의 뚜껑을 열고 15분간 방치한 후 배지의 뚜껑을 닫고 parafilm으로 밀봉하여 37℃에서 48시간(단, 곰팡이는 28℃, 72시간) 배양하였다.
- 따라서 본 연구에서는 안전성이 확보된 깻잎 생산을 위한 GAP 모델 확립을 위해 수확단계의 작물, 재배환경 및 개인위생을 대상으로 미생물의 오염실태를 조사하여 깻잎 수확단계에서 미생물학적 위해요소 파악의 기초자료로 제공하고자 한다.
제안 방법
- monocytogens, Salmonella spp., S. aureus 및 B. cereus 를 대상으로 식품공전에 기술된 실험방법에 준하여 증균, 분리배양 및 확인시험 과정을 거쳐 오염여부를 확인하였다12). 먼저, E.
- monocytogenes), Salmonella spp., Staphylococcus aureus(S. aureus), Bacillus cereus(B. cereus) 및 곰팡이를 대상으로 미생물학적 위해요소를 분석하였고, 채취된 모든 시료는 교차오염 인자를 차단하기 위해 clean bench에서 무균적으로 처리되었다. 먼저, 깻잎, 줄기 및 토양은 stomacher pack에 10 g을 취하여 멸균된 0.
- Detection Kit(KOGENEBIOTECH)를 이용하여 다음 Table 2와 같은 온도조건에서 PCR증폭기(GeneAmp PCR System 2400; Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA)로 반응을 시킨 후 1% agarose gel에서 전기영동을 실시하여 UV-visible spectrophotometer (SHIMADZU, Japan)로1차 확인하였고, 양성으로 의심되는 시료만을 선택적으로 API Kit(bioMérieux)를 이용하여 재확인하였다.
- 깻잎의 수확단계에 대한 전반적인 미생물 오염도 조사를 위하여 전처리된 시료를 대상으로 위생지표세균인 일반세균, 대장균군 및 E. coli를 검사하였다. 먼저 일반세균과 대장균군의 측정방법은 전처리된 시료 1 ml를 취하여 9 ml의 멸균된 0.
- 깻잎이 재배되고 있는 각 농장의 필지에 각 미생물에 대한 선택배지의 뚜껑을 열고 15분간 방치한 후 배지의 뚜껑을 닫고 parafilm으로 밀봉하여 37oC에서 48시간(단, 곰팡이는 28oC, 72시간) 배양하였다.
- 배양된 시료 중 녹색의 금속성 광택을 띄는 집락만을 선택적으로 tryptic soy agar(Difco) 에서 배양시킨 후 다시 API 20E(bioMérieux®SA, Marcy ÍEtoile, France)를 이용하여 재확인하였다. 또한 곰팡이도 앞선 일반세균 및 대장균군 측정방법과 동일하게 전처리된 시료 1 ml를 멸균된 0.85% 생리식염수를 이용하여 10진 희석법으로 희석한 후 각 희석농도에서 0.1 및 1 ml를 취하여 rose bengal agar(Difco)에 도말하여 28℃에서 72시간 배양한 후 특정 colony를 계수하였으며 모든 세균수는 log10CFU 값으로 환산하여 나타내었다.
- coli를 검사하였다. 먼저 일반세균과 대장균군의 측정방법은 전처리된 시료 1 ml를 취하여 9 ml의 멸균된 0.85% 생리식염수를 이용하여 10진 희석법으로 희석한 후 각 희석농도에서 1 ml를 취하여 2개의 petridish에 분주하였다. 분주 후 일반세균수 측정을 위해서는 plate count agar(Difco, Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA), 대장균군수 측정을 위해서는 deoxycholate lactose agar(Difco)를 각각 15 ml 정도 분주하고 시료와 배지를 잘 혼합하여 굳힌 다음 37℃에서 48시간 배양한 후 일반세균은 흰색 colony, 대장균군은 붉은색 colony를 계수 하였다.
- cereus) 및 곰팡이를 대상으로 미생물학적 위해요소를 분석하였고, 채취된 모든 시료는 교차오염 인자를 차단하기 위해 clean bench에서 무균적으로 처리되었다. 먼저, 깻잎, 줄기 및 토양은 stomacher pack에 10 g을 취하여 멸균된 0.85% 생리식염수 90 ml를 이용하여 균질화 시켜 분석에 사용하였으며 관개용수, 작업자 손, 장갑 및 작업복은 별다른 전처리 과정 없이 30초 동안 강하게 혼탁하여 분석에 사용하였다.
- 먼저, 깻잎과 줄기는 방사형 채취방법을 적용하여 깻잎은 20장, 줄기는 500 g씩 각각 수집하였으며, 재배환경인 관개용수는 멸균 채수병(Medi-land, Korea)을 이용하여 각 농가에서 사용하고 있는 지하수를 대상으로 약 1 L 채수하였다. 토양은 농산물우수관리제도 분석기준에 준하여 각 필지당 임의의 지점을 선정하여 지그재그 형으로 10개 지점 토양의 표토(0~20 cm)를 대상으로 채집하여 혼합한 후, 각 시료당 약 3 kg이 되도록 멸균된 시료채취용 팩에 수집하였다9).
- cereus는 식품공전에 기술된 실험방법에 준하여 정량분석을 실시하였다. 먼저, 전처리된 시료 1 ml 를 취해 멸균된 0.85% 생리식염수를 이용하여 10진 단계희석법으로 희석한 후 0.1 및 1 ml씩을 취하여 S. aureus와 B. cereus 분석을 위해 사용되는 baird-parker agar(Difco)와 mannitol-egg yolk-polymyxin agar(Difco)에 각각 분주한 후도말하여 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양된 집락을 대상으로 제조사의 메뉴얼에서 제시한 특정 집락을 각각 계수하였고, 계수한 각 평판에서 5개의 전형적인 집락을 선별하여 TSA에 접종한 후 37℃에서 48시간 동안 배양한 다음 PCR PreMix Kit(i-StarTaq)를 이용하여 다음 Table 2와 같은 온도조건에서 PCR증폭기(Applied Biosystems)로 반응을 시킨 후 1% agarose gel에서 전기영동을 실시하여 UV-visible spectrophotometer(SHIMADZU)로 1차 확인하였다.
- 배양된 시료 중 녹색의 금속성 광택을 띄는 집락만을 선택적으로 tryptic soy agar(Difco) 에서 배양시킨 후 다시 API 20E(bioMérieux®SA, Marcy ÍEtoile, France)를 이용하여 재확인하였다.
- 배양된 집락을 대상으로 제조사의 메뉴얼에서 제시한 특정 집락을 각각 계수하였고, 계수한 각 평판에서 5개의 전형적인 집락을 선별하여 TSA에 접종한 후 37oC에서 48시간 동안 배양한 다음 PCR PreMix Kit(i-StarTaq)를 이용하여 다음 Table 2와 같은 온도조건에서 PCR증폭기(Applied Biosystems)로 반응을 시킨 후 1% agarose gel에서 전기영동을 실시하여 UV-visible spectrophotometer(SHIMADZU)로 1차 확인하였다.
- 85% 생리식염수를 이용하여 10진 희석법으로 희석한 후 각 희석농도에서 1 ml를 취하여 2개의 petridish에 분주하였다. 분주 후 일반세균수 측정을 위해서는 plate count agar(Difco, Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA), 대장균군수 측정을 위해서는 deoxycholate lactose agar(Difco)를 각각 15 ml 정도 분주하고 시료와 배지를 잘 혼합하여 굳힌 다음 37℃에서 48시간 배양한 후 일반세균은 흰색 colony, 대장균군은 붉은색 colony를 계수 하였다. E.
- 85% 생리식염수를 붓고 손을 씻어서 검액을 채취하는 glove juice법10)으로 시료를 채취하였다. 수집된 시료는 얼음을 채운 시료보관용 아이스박스에 담아 4시간이내에 본 연구실로 냉장 운반하여 식품공전에 기술된 실험방법에 준하여 실험을 실시하였다11).
- 양성으로 의심되는 시료만을 선택적으로 API Staph(bioMérieux)와 API 50CHB(bioMérieux)를 각각 적용 하여 오염여부를 재확인하여 계수하였다.
- 작업자 개인위생인 장갑과 작업복은 표면검체의 형태에 따라 채취 가능한 면적 또는 10 × 10 cm의 면적대를 사용하여 Swab kit(3M e·swab, 3M China Ltd., Shanghai, China)로 swabbing하였고 작업자 손은 멸균 샘플팩에 50 ml 의 멸균된 0.85% 생리식염수를 붓고 손을 씻어서 검액을 채취하는 glove juice법10)으로 시료를 채취하였다.
대상 데이터
- 본 연구를 위하여 경상남도에 소재한 깻잎 재배농장(약 2,000 m2규모) 3곳을 선정하여 미생물 오염도를 조사하기 위해 작물(깻잎, 줄기), 재배환경(관개용수, 토양, 공기) 및 개인위생(손, 장갑, 작업복)을 대상으로 2차례에 걸쳐 2회 반복씩 총 96점의 시료를 다음과 같이 채취하였다(Table 1).
- 먼저, 깻잎과 줄기는 방사형 채취방법을 적용하여 깻잎은 20장, 줄기는 500 g씩 각각 수집하였으며, 재배환경인 관개용수는 멸균 채수병(Medi-land, Korea)을 이용하여 각 농가에서 사용하고 있는 지하수를 대상으로 약 1 L 채수하였다. 토양은 농산물우수관리제도 분석기준에 준하여 각 필지당 임의의 지점을 선정하여 지그재그 형으로 10개 지점 토양의 표토(0~20 cm)를 대상으로 채집하여 혼합한 후, 각 시료당 약 3 kg이 되도록 멸균된 시료채취용 팩에 수집하였다9). 작업자 개인위생인 장갑과 작업복은 표면검체의 형태에 따라 채취 가능한 면적 또는 10 × 10 cm의 면적대를 사용하여 Swab kit(3M e·swab, 3M China Ltd.
이론/모형
- S. aureus 및 B. cereus는 식품공전에 기술된 실험방법에 준하여 정량분석을 실시하였다. 먼저, 전처리된 시료 1 ml 를 취해 멸균된 0.
성능/효과
- 각 재배농장에 대한 곰팡이의 분석결과는 Table 3에서 보는 바와 같이 관개용수를 제외한 깻잎, 줄기 및 토양에서 4.1~4.4, 3.8~4.0 및 4.4~4.9 log CFU/g, 개인위생인 손에서는 3.4~4.4 log CFU/hand, 장갑과 작업복에서는 3.3~3.6 및 3.1~3.6 log CFU/100 cm2수준으로 검출되었고 특히, 깻잎에서 최대 4.4 log CFU/g 수준으로 확인되었다. 배 등19)의 신선편이 채소류의 미생물 오염도 조사에서는 곰팡이가 검출되지 않은 것으로 보고되고 있고, 곰팡이가 생산하는 2차 대사산물인 곰팡이 독소에 의해 소비자가 건강상의 위해를 입을 수 있으므로 재배시설 내 공기정화 관리 및 습도조절을 통해 곰팡이의 생육을 억제해야 할 것으로 판단 된다.
- 깻잎 재배농장의 수확단계에서 공중낙하균을 분석한 결과, Table 5에서 보는 바와 같이 세 농장에서 위생지표세균인 일반세균(1.9~2.6 log CFU/plate), 병원성 미생물인 B. cereus(0.5~0.8 log CFU/plate), 그리고 곰팡이(1.4~2.1 log CFU/ plate)를 제외한 모든 병원균과 대장균은 음성으로 나타나 공중낙하균에 의한 오염도는 비교적 낮은 것으로 판단되며 깻잎 재배농장 내의 공기정화가 잘 이루어지고 있는 것으로 확인되었다. 하지만 온도와 습도의 영향을 많이 받는 공중낙하균의 특성상 언제든지 오염도가 높아질 우려가 있으므로 주기적인 공기순환을 통해 생육을 억제하는 한편, 재배농장 내부 및 주변관리를 철저히 하여 오염원이 발생하지 않도록 주의해야 할 것이다.
- 깻잎 재배농장의 수확단계에서 수집된 작물, 재배환경 및 개인위생에 대한 위생지표세균의 오염도를 분석한 결과 Table 3에서 보는 바와 같이 일반세균의 경우, 작물인 깻잎과 줄기에서 4.4~5.2 및 5.5~6.7 log CFU/g, 재배환경인 관개용수에서는 3.3~3.8 log CFU/ml, 토양에서는 6.5~6.7 log CFU/g, 그리고 작업자 개인위생인 손에서는 4.9~5.6 log CFU/hand, 장갑과 작업복에서는 3.7~4.1 및 3.7~4.6 log CFU/100 cm2 수준으로 각각 검출되었다. 먼저, 깻잎의 경우 A농장이 B, C 농장에 비해 오염도가 다소 높았으나, 전반적으로 이 등13) 이 보고한 5.
- monocytogens 및 Salmonella spp.는 모든 시료에서 불검출 되었으나, S. aureus는 작업자의 손에서 3.4 log CFU/hand, B. cereus는 깻잎과 줄기에서 2.0~2.4 및 1.4~2.1 log CFU/g, 관개용수 0.7 log CFU/ml, 토양 4.2~5.0 log CFU/g, 개인위생인 손에서는 3.0 log CFU/hand, 장갑과 작업복에서는 2.1~2.4 및 1.5~2.8 log CFU/100 cm2 수준으로 수확단계 대부분의 시료에서 비교적 오염수준이 높은 것으로 나타났다(Table 4). 개인위생과 가장 밀접한 병원성 미생물인 S.
- 6 log CFU/100 cm2 수준으로 각각 검출되었다. 먼저, 깻잎의 경우 A농장이 B, C 농장에 비해 오염도가 다소 높았으나, 전반적으로 이 등13) 이 보고한 5.5 log CFU/g 수준보다는 다소 낮게 검출되었다. 하지만 대부분 생식으로 섭취하므로 깻잎의 안전성을 확보하기 위해 수확 후 관리단계에서 세척 등의 위생적인 관리가 요구된다.
- 깻잎이 재배되고 있는 각 농장의 필지에 각 미생물에 대한 선택배지의 뚜껑을 열고 15분간 방치한 후 배지의 뚜껑을 닫고 parafilm으로 밀봉하여 37℃에서 48시간(단, 곰팡이는 28℃, 72시간) 배양하였다. 특히, E. coli와 병원성미생물의 경우 배양된 colony 중 앞서 설명한 바와 같은 특정 집락을 대상으로 PCR 및 API Kit로 재확인하였으며, 모든 세균수는 log10CFU 값으로 환산하여 나타내었다.
후속연구
- monocytogens 및 Salmonella spp.가 검출되지는 않았지만 농산물과 관련된 대부분의 식중독 사고는 작물을 오염시킨 병원성 미생물에 의해 발생하므로 농산물의 안전성을 확보할 수 있는 체계적이고 과학적인 연구와 재배농장 환경 및 작업자에 대한 위생적인 관리가 필요할 것으로 판단된다.
- 47 log CFU/g 수준과 비교했을 때 높은 오염수준임을 알 수 있다. 또한, 과채류의 미생물 오염은 주로 토양에서 기인한다고 보고되고 있는 만큼 주기적인 확인과 관리를 통해 안전성을 확보해 나가야 할 것이다.
- 작업자 개인위생 중 특히 손의 경우, 평균 5.4 ±0.4 log CFU/hand 수준으로 모든 농장에서 비교적 높은 오염도를 나타내었으며 미국식품의약품안전청(Food and Drug Administration, FDA)16)에서 과일과 채소류의 섭취로 식중독을 일으키는 미생물 경로 중 작업자에 의한 교차오염이 상당부분을 차지한다고 지적하고 있는 만큼 작업자의 지속적인 위생교육과 관리를 통해 위생개념을 향상시키고 장갑과 작업복 등의 세척·소독 주기 및 방법을 설정하여 올바른 관리방안을 모색해야 한다고 판단된다.
- 토양 상재균인 B. cereus는 특히 재배환경인 토양에서 4.2~5.0 log CFU/g 수준으로 높게 확인되어 깻잎으로의 교차오염이 우려되었고, 최근 가축분 퇴비와 유기질 비료의 병원성 미생물을 조사한 정 등21)의 연구결과에 따르면 가축분 퇴비에서 B. cereus가 검출된 것으로 보고되어 재배 과정에 있어서 가축퇴비의 사용을 지양하고, 사용하더라도 수확 후 관리시설에서 이들 미생물에 대한 집중적인 관리가 모색되어야 할 것으로 판단된다. 작물인 깻잎은 일반적으로 보고되고 있는 오염수준 1~3 log CFU/g22)과 식품공전에서 제시하는 즉석섭취·편의식품류의 기준 규격23)인3 log CFU/g 이하와 비교하였을 때 2.
- 4 log CFU/g 수준으로 검출되어 대체로 양호한 것으로 판단된다. 하지만 개인위생인 손에서 3.0 log CFU/hand, 장갑과 작업복에서 각각 2.1~2.3 및 1.5~2.8 log CFU/100 cm2 수준의 오염도가 확인되어 개인위생 불량으로 인한 깻잎으로 교차오염이 발생할 수 있으므로 작업자 개인의 위생적인 관리도 수반되어야 할 것이다.
- 1 log CFU/ plate)를 제외한 모든 병원균과 대장균은 음성으로 나타나 공중낙하균에 의한 오염도는 비교적 낮은 것으로 판단되며 깻잎 재배농장 내의 공기정화가 잘 이루어지고 있는 것으로 확인되었다. 하지만 온도와 습도의 영향을 많이 받는 공중낙하균의 특성상 언제든지 오염도가 높아질 우려가 있으므로 주기적인 공기순환을 통해 생육을 억제하는 한편, 재배농장 내부 및 주변관리를 철저히 하여 오염원이 발생하지 않도록 주의해야 할 것이다.
- 유럽연합(European Union; EU)은 일찍이 안전하고 위생적인 신선과일·채소류를 생산하기 위한 GAP를 개발하고 GlobalGAP를 국제적 인증기준으로 활용하고 있으며, 중국은 농업의 영세성과 지역간 농업의 특성차이를 고려해 1급·2급 인증으로 나누어 기준을 설정하였으며, 1급 GAP는 2009년 2월에 GlobalGAP와 MOU 체결을 통해 동등성 인정을 획득하였다. 하지만 현재 우리나라에서는 미생물학적 위해요소 관리를 포함한 GAP 시스템 관련 연구논문이나 적용모델 등이 거의 없는 상황이므로 보다 체계적이고 활발한 연구를 통해 안전한 농산물을 생산할 수 있는 적용 가능한 GAP 모델들이 많이 제시되어야 할 것이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.