[논문]Helicobacter pylori 의 생육억제에 대한 유산균, 난황항체 및 목이버섯의 상승효과

유혜림; 이영덕; 한복경; 최혁준; 박종현

doi:10.9799/ksfan.2013.26.1.035

[국내논문] Helicobacter pylori 의 생육억제에 대한 유산균, 난황항체 및 목이버섯의 상승효과
Synergistic Inhibition of IgY, Auricularia auricula, and Lactic Acid Bacteria from Kimchi and Tarak on Helicobacter pylori 원문보기

한국식품영양학회지 = The Korean journal of food and nutrition, v.26 no.1, 2013년, pp.35 - 43

유혜림 (가천대학교 식품생물공학과) , 이영덕 (가천대학교 식품생물공학과) , 한복경 ((주)비케이바이오) , 최혁준 ((주)비케이바이오) , 박종현 (가천대학교 식품생물공학과)

초록
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소화성 질환의 중요 인자인 Helicobacter pylori를 저해하는 IgY, 목이버섯, 김치와 타락 유산균을 이용하여 생육 저해 상승 효과를 분석하고자 하였다. 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 다양한 효소 처리 결과, 지질 분해 효소를 제외하고는 활성을 나타냈다. GC 분석을 통해 유산균 동결건조액의 지방산 조성은 undecanoic acid($C_{11:0}$), palmitic acid($C_{16:0}$), steraic acid($C_{18:0}$), oleic acid($C_{18:1}$)가 L. mensenteroides LABKW5와 S. thermophilus LAB KW15에서 모두 확인되었으며, eicosadienoic acid($C_{20:2}$)는 LAB KW5에서만 나타났다. 또한 유산균 동결건조액은 다른 식중독균에서도 spot assay의 결과, 그람 음성균 중에서 특히 E. coli O157:H7, E. coli, C. sakazakii 등에서 생육 저해능이 확인되었다. 목이버섯 추출물은 열수 추출과 ethanol를 이용해 분리하였으며, HPLC를 이용하여 목이버섯 추출 다당체를 분석한 결과, glucurono-xylomannan 혹은 glucomannan이 ${\beta}$-glucan과 함께 존재하는 혼합물일 것으로 되었다. 또한, 면역란은 1차 접종 후 11일째부터 주마다 2회씩 회수하여 IgY를 분리, 정제하였다. 실험을 통해 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액을 혼합 배양하여 배양시간에 따른 생육 저해력의 변화를 확인한 결과, 유산균에 의해 H. pylori의 저해 효과가 있었으며, IgY와 목이버섯의 혼합 시 추가 억제 효과가 있는 것으로 나타났다. 그러므로 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액의 복합처리는 H. pylori를 제어하는데 효과적인 것으로 보인다.

Abstract ▼ AI-Helper

The substances of lactic acid bacteria (LAB) isolated feom Kimchi and Tarak, L. mesenteriodes LAB kw5, and S. thermophilus LAB KW15 were investigated for growth effect of Helicobacter pylori with IgY and Auricularia auricula. Inhibition of H. pylori was confirmed at LAB KW5 and KW15 supernatants. Interestingly, anti-H. pylori substance in LAB KW5 and KW15 supernatants were sensitive to lipase, but insensitive to protein hydrolase and carbohydrate hydrolase. The inhibition zone toward H. pylori was not shown with the lipase-treated supernatants. Therefore, there seemed to be lipid-like substances in the cultures. By the analyses with gas chromatography, undecanoic acid ($C_{11:0}$), palmitic acid ($C_{16:0}$), stearic acid ($C_{18:0}$), and oleic acid ($C_{18:1}$) were detected at the culture substances from L. mesenteroides LAB KW5 and S. thermophilus LAB KW15, and more eicosadienoic acid ($C_{20:2}$) from L. mesenteroides LAB KW5. Anti-H. pylori substances of LAB with IgY and A. auricula extract were analyzed for inhibition effect of H. pylori. The inhibition increased more by the range from 57% to 86% by the mixture. The substances with IgY and A. auricula extract showed more effective inhibition of H. pylori than single or double trials.

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문제 정의

α-Amylase, β-glucanase, protease, trypsin, chymotrypsin(Sigmaaldrich, USA), lipase, pectin hydrolase(Novozyme, Bagsvaerd, Denmark)의 효소 처리를 통한 항균 물질의 특성을 확인하고자 하였다.
따라서 여태까지 유산균, IgY, 목이버섯과의 혼합을 통해 생육 억제 상승효과에 대해 보고된 바 없지만, 이번 실험을 통해 연구하고자 한다. 또한 분리한 유산균, IgY와 목이버섯에 존재하는 H.
따라서 여태까지 유산균, IgY, 목이버섯과의 혼합을 통해 생육 억제 상승효과에 대해 보고된 바 없지만, 이번 실험을 통해 연구하고자 한다. 또한 분리한 유산균, IgY와 목이버섯에 존재하는 H. pylori 성장 억제 물질을 확인하여 H. pylori와 관련된 위장질환 예방 및 치료에 이용될 수 있는 기능성 식품 소재로 활용하고자 하였다.
목이버섯 추출액과 IgY, 동결 건조된 유산균 배양 상징액들을 혼합하여 H. pylori에 대한 혼합에 따른 저해 상승 효과를 확인하고자 하였다. H.
소화성 질환의 중요 인자인 Helicobacter pylori를 저해하는 IgY, 목이버섯, 김치와 타락 유산균을 이용하여 생육 저해 상승 효과를 분석하고자 하였다. 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 다양한 효소 처리 결과, 지질 분해 효소를 제외하고는 활성을 나타냈다.

제안 방법

pylori 52, 26695, 1061는 경상대학교 의과대학에서 분양받아 수행하였다. 김치와 타락으로부터 분리한 유산균의 배양은 0.05% L-cystein 을 첨가하여 만든 Lactobacilli MRS broth 또는 agar(Difco Laboratory, MI, USA)에서 37℃, 24시간 동안 배양하였으며, H. pylori는 10% fetal bovine serum(FBS)(Invitrogen, CA, USA)이 첨가된 Brucella broth 또는 agar(Difco Laboratory, Detroit, MI, US)에 접종 후 37℃에서 microaerobic chamber(Ruskin Technologies, Jouan, France)나 10% CO₂ 항온배양기(Sanyo, Osaka, Japan)에서 48시간 동안 배양하였다.
, Dongducheon, Korea)에서 vacuum gauge 5 mTorr, －70℃에서 72시간 동안 동결 건조하였다. 그리고 생육실험을 위해 동결 건조 분말을 멸균 증류수에 녹여 100 ㎎/㎖ 농도로 재수화하여 사용하였다.
각각의 효소 용액(α-amylase: 150∼250 units/㎎, protease: >30 units/㎎, trypsin: 1,000∼2,000 units/㎎, chymotrypsin: ≥40 units/㎎, β-glucanase: ∼1 units/㎎, lipase: ∼50 units/㎎, pectin hydrolase: ≥5 units/㎎)을 넣고, 37℃에서 3시간 동안 반응시켰으며, 48시간 배양된 H. pylori를 10% FBS가 첨가된 Brucella agar에 도말한 후 효소 처리된 유산균 배양 상징액을 spot assay를 통해 활성을 확인하였다.
칼럼은 SUGAR KS-803 column(8×300 ㎜)(Shodex Co. Ltd., Japan)을 사용하였고, eluent(이동상)은 50 mM ammonium formate buffer(pH 5.5)으로 분석하였다.
열수 추출하고 원심 분리(8,000×g, 20 min)한 후 상징액을 회수하여 상징액에 4배의 ethanol을 가하여 다당을 침전시키고, 동일한 조건으로 원심 분리하여 침전된 다당을 회수한 후 투석을 통해 저분자 불순물을 제거(MW cut off 2,000, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA)하였다.
분석조건 중 유속은 분당 0.75 ㎖, 시료 주입량은 1.0 ㎕, 칼럼은 SPTM-2560(100 m×0.25 ㎜×0.20 ㎛)으로 분석하였다.
4. 항균물질의 지방산 분석

분리된 항균 물질에 대해 포화 지방산과 불포화 지방산의 조성을 확인하기 위해 gas chromatography(GC) 분석을 통해 수행하였으며, GC 분석기기는 Agilent 7890 GC system을 사용하였다. 분석조건 중 유속은 분당 0.
20 ㎛)으로 분석하였다. 오븐의 온도 조건은 100℃에서 4분간 유지하고, 240℃까지 3℃/min으로 승온한 후, 15분간 유지하여 분석하였다. 시료 주입은 주입구 온도를 225℃로 유지한 상태에서 split ratio를 200:1로 하였으며, He 운반 기체 하에서 질량분석 검출기를 이용하여 스펙트럼을 얻었다.
오븐의 온도 조건은 100℃에서 4분간 유지하고, 240℃까지 3℃/min으로 승온한 후, 15분간 유지하여 분석하였다. 시료 주입은 주입구 온도를 225℃로 유지한 상태에서 split ratio를 200:1로 하였으며, He 운반 기체 하에서 질량분석 검출기를 이용하여 스펙트럼을 얻었다. 검출기는 Flame ionization detector(FID)을 이용하고, 검출 온도는 285℃으로 유지하였다.
시료 주입은 주입구 온도를 225℃로 유지한 상태에서 split ratio를 200:1로 하였으며, He 운반 기체 하에서 질량분석 검출기를 이용하여 스펙트럼을 얻었다. 검출기는 Flame ionization detector(FID)을 이용하고, 검출 온도는 285℃으로 유지하였다.
유산균 배양 상징액의 H. pylori에 대한 항균 활성 여부를 확인하였다. 10% FBS가 첨가된 Brucella broth에서 48시간 배양된 100 ㎕의 H.
pylori에 대한 항균 활성 여부를 확인하였다. 10% FBS가 첨가된 Brucella broth에서 48시간 배양된 100 ㎕의 H. pylori를 10% FBS가 첨가된 Brucella agar에 도말한 후 10 ㎕의 L. mesenteroides LAB KW5와 S. thermophilus LAB KW15의 동결 건조된 배양 상징액을 각각 분주하였다. 그리고 37℃에서 미호기성 상태에서 48시간 배양한 후 생육 상태를 확인하였다.
thermophilus LAB KW15의 동결 건조된 배양 상징액을 각각 분주하였다. 그리고 37℃에서 미호기성 상태에서 48시간 배양한 후 생육 상태를 확인하였다. 아울러 Escherichia coli 27, 28, Escherichia coli O157:H7 NCTC 12079, Cronobacter sakazakii KCTC 2949, Yersinia enterocolitica ATCC 23715, Staphylococcus aureus KCCM 12103, Enterococcus feacalis KCTC 2011, Enterococcus faecium KCCM 12118, Bacillus cereus KCTC 1094의 식중독 세균에 대한 항균 활성을 측정하였다.
그리고 37℃에서 미호기성 상태에서 48시간 배양한 후 생육 상태를 확인하였다. 아울러 Escherichia coli 27, 28, Escherichia coli O157:H7 NCTC 12079, Cronobacter sakazakii KCTC 2949, Yersinia enterocolitica ATCC 23715, Staphylococcus aureus KCCM 12103, Enterococcus feacalis KCTC 2011, Enterococcus faecium KCCM 12118, Bacillus cereus KCTC 1094의 식중독 세균에 대한 항균 활성을 측정하였다.
목이버섯을 blender를 이용하여 마쇄한 후 마쇄된 목이버섯 100 g에 증류수 2,000 ㎖를 넣어 교반, 침지하고, 95℃ 이상에서 3시간 가열하여 열수 추출을 하였다. 열수 추출하고 원심 분리(8,000×g, 20 min)한 후 상징액을 회수하여 상징액에 4배의 ethanol을 가하여 다당을 침전시키고, 동일한 조건으로 원심 분리하여 침전된 다당을 회수한 후 투석을 통해 저분자 불순물을 제거(MW cut off 2,000, Sigma-Aldrich, St.
목이버섯 추출 다당의 분자량 측정을 위하여 시료를 1 ㎎/㎖의 농도로 증류수에 녹여 high performance liquid chromato-graphy(HPLC)를 행하였다. HPLC는 YL9110(YOUNG-LIN Co.
5)으로 분석하였다. 분자량 측정은 표준 물질 pullulan series(P-50, 20, 10 및 5)를 이용하여 retention time을 측정한 후 각 분자량에 대해 표준곡선으로부터 환산하였다.
면역란은 1차 접종 후 11일째부터 주마다 2회씩 회수하여 13주까지 수거하였다. 면역란으로부터 IgY의 분리는 난황을 난백과 분리한 후 난황의 질량을 측정하고, 증류수를 7배 혼합하였다.
면역란은 1차 접종 후 11일째부터 주마다 2회씩 회수하여 13주까지 수거하였다. 면역란으로부터 IgY의 분리는 난황을 난백과 분리한 후 난황의 질량을 측정하고, 증류수를 7배 혼합하였다. 실온에서 30분간 교반한 후 원심분리(10,000×g, 10min)하고 상징액을 회수하여 －20℃에서 냉동 보관하였다.
pylori에 대한 혼합에 따른 저해 상승 효과를 확인하고자 하였다. H. pylori에 대한 생육 억제 상승 효과 실험을 위해, 확인된 각각의 최소 저해 농도를 기준으로 하여 목이버섯은 0.10 ㎎/㎖, IgY는 1.00 ㎎/㎖, 동결 건조된 유산균 배양 상징액은 0.78 ㎎/㎖로 설정하여 각각에 대해 혼합한 후 tissue culture test plate에 200 ㎕씩 분주하였다. 그리고 CO₂ incubator에 배양하면서 시간에 따라 H.
78 ㎎/㎖로 설정하여 각각에 대해 혼합한 후 tissue culture test plate에 200 ㎕씩 분주하였다. 그리고 CO₂ incubator에 배양하면서 시간에 따라 H. pylori의 생육 억제 정도를 흡광도(620 nm)와 생균수를 측정하여 생육 억제 상승 효과를 확인하였다.
다양한 proteolytic enzyme, lipase, carbohydrate hydrolase를 처리하여 H. pylori 생육을 저해하는 항균 물질에 대한 특성을 확인하였다(Fig. 1). 지질 분해 효소인 lipase 이외에 단백질 분해 효소인 protease, trypsin, chymotrysin, 탄수화물 분해효소인 amylase, β-glucanase, pectin hydrolase을 처리한 동결건조된 유산균 배양 상징액은 H.
동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액을 혼합 배양하여 배양시간에 따른 생육 저해력의 변화를 흡광도와 생균수를 측정하여 확인하였다(Fig. 5, 6). IgY, 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 낮은 생육 저해력을 보였지만, 동결 건조된 유산균 배양 상징액의 단독 처리, IgY 또는 목이버섯을 혼합하여 처리한 경우 비교적 높은 생육 저해력을 나타냈다.
목이버섯 추출물은 열수 추출과 ethanol를 이용해 분리하였으며, HPLC를 이용하여 목이버섯 추출 다당체를 분석한 결과, glucuronoxylomannan 혹은 glucomannan이 β-glucan과 함께 존재하는 혼합물일 것으로 되었다. 또한, 면역란은 1차 접종 후 11일 째부터 주마다 2회씩 회수하여 IgY를 분리, 정제하였다. 실험을 통해 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액을 혼합 배양하여 배양시간에 따른 생육 저해력의 변화를 확인한 결과, 유산균에 의해 H.

대상 데이터

본 실험에 사용된 Helicobacter pylori KCTC 12083을 생명자원센터에서 분양 받았으며, 야생형의 H. pylori 52, 26695, 1061는 경상대학교 의과대학에서 분양받아 수행하였다. 김치와 타락으로부터 분리한 유산균의 배양은 0.
김치와 타락으로부터 분리된 유산균 Streptococcus thermophilus LAB KW 15, Leuconostoc mesenteroides LAB KW5(Lee 등 2010)을 사용하였다. 24시간 동안 Lactobacilli MRS broth에서 배양된 배양액을 원심 분리(10,000×g, 5 min)한 후 상징액을 취해 pH 7.
목이버섯 추출 다당의 분자량 측정을 위하여 시료를 1 ㎎/㎖의 농도로 증류수에 녹여 high performance liquid chromato-graphy(HPLC)를 행하였다. HPLC는 YL9110(YOUNG-LIN Co. Ltd., Korea)을 사용하였으며, 분석조건 중 유속은 분당 0.5 ㎖, 컬럼의 온도는 50℃, 시료 주입량을 20 ㎕로 제한하여 사용하였다. 칼럼은 SUGAR KS-803 column(8×300 ㎜)(Shodex Co.

이론/모형

IgY의 정제는 IgY purification kit(Thermo, Illinois, USA)를 이용하여 수행하였다. 면역란으로부터 IgY 역가를 측정하기 위하여 효소면역측정법(Enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA) 을 수행하였다(Roe 등 2002). 즉, 항원을 tissue culture test plate(SPL Life Sciences, Namyanju, Korea)에 넣고 4℃에서 하룻밤 동안 코팅하였다.

성능/효과

지질 분해 효소인 lipase 이외에 단백질 분해 효소인 protease, trypsin, chymotrysin, 탄수화물 분해효소인 amylase, β-glucanase, pectin hydrolase을 처리한 동결건조된 유산균 배양 상징액은 H. pylori의 생육 억제능이 확인되어 당이나 단백질 등의 물질은 아니라는 것을 알 수 있었다.
2와 같다. 동결 건조된 유산균 배양 상징액의 지방산 조성은 undecanoic acid(C_11:0), palmitic acid(C_16:0), steraic acid(C_18:0), oleic acid(C_18:1)가 L. mensenteroides LAB KW5와 S. thermophilus LAB KW15에서 모두 확인되었으며, eicosadienoic acid(C_20:2)는 LAB KW5에서만 나타났다. 최근 다양한 유리지방산에 그람 음성, 그람 양성 세균에 대한 생육 억제, 항곰팡이, 항바이러스 등 다양한 미생물에 대하여 생육 억제의 효과가 보고되고 있으며, 지방산의 소수성 부분 길이가 늘어남에 따라 그 효과가 높아지는 것으로 알려져 있다(Desbois 2010).
동결 건조된 유산균 배양 상징액을 H. pylori에 생육 억제를 확인하기 위해 spot assay를 수행하였으며, 그 결과 H. pylori에 대한 생육 저해능이 확인되었다(Table 1). 다른 식중독균에서도 spot assay를 수행한 결과, 그람 음성 세균 중에서 특히 E.
pylori에 대한 생육 저해능이 확인되었다(Table 1). 다른 식중독균에서도 spot assay를 수행한 결과, 그람 음성 세균 중에서 특히 E. coli O157:H7, E. coli, C. sakazakii 등에서 생육 저해능이 확인되었고, E. coli O157:H7, E. coli는 H. pylori와 저해 양상이 흡사하게 나타났다. 또한 이와 비슷한 연구에 의하면 H.
목이버섯으로부터 획득한 활성 다당체의 구성당 분석을 HPLC를 통해 수행한 결과, glucose(38.9%)와 mannose(26.2%) 의 함량이 높았으며, 그 외에도 galactose(14.26%), xylose(11.06%) 및 fucose(7.31%) 등의 usual sugar가 다양하게 존재하고 있음이 확인되었다 (Fig. 3). 일반적으로 Auricularia 속 버섯류의 다당체는 β-glucan, glucurono-xylomannan 및 glucomannan이 알려져 있다(Peng 등 2010).
따라서 처음 접종 후 5∼7주차 계란을 수거하는 것이 효율적이라고 사료되었다.
IgY와 동결 건조된 유산균 배양 상징액 혼합액, 목이버섯과 동결 건조된 유산균 배양 상징액 혼합액을 첨가한 경우에는 96.3±1.3%, 3 가지를 모두 혼합한 경우는 98.2±0.6%의 H. pylori 생육 감소율을 보여 3가지 혼합액을 첨가하였을 때 가장 효과가 있는 것으로 나타났다.
또한, IgY, 목이버섯, 동결 건조된 유산균 배양 상징액 혼합액의 경우의 생육 저해율(85.2±1.1%)이 가장 효과가 우수하였다.
IgY와 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 첨가한 경우의 저해율은 70.1±3.3%, 목이버섯과 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 첨가한 경우는 62.8±5.4%으로 확인되었다.
4와 같다. 1차 접종 후 7주째까지는 항체 역가가 상승곡선을 나타내다가 그 이후로 감소하는 추세를 보였고, 10주째 booster 면역을 한 결과 10주 이후부터는 다시 상승하는 모습을 보였다. 5∼7주째에 항체 역가가 가장 높게 나타나는 반면, 10주째에는 가장 낮은 역가를 보였다.
5, 6). IgY, 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 낮은 생육 저해력을 보였지만, 동결 건조된 유산균 배양 상징액의 단독 처리, IgY 또는 목이버섯을 혼합하여 처리한 경우 비교적 높은 생육 저해력을 나타냈다. 흡광도 측정 결과에서 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 제외한 IgY와 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 저해율이 각각 23.
IgY, 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 낮은 생육 저해력을 보였지만, 동결 건조된 유산균 배양 상징액의 단독 처리, IgY 또는 목이버섯을 혼합하여 처리한 경우 비교적 높은 생육 저해력을 나타냈다. 흡광도 측정 결과에서 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 제외한 IgY와 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 저해율이 각각 23.6%, 9.0%인 반면, LAB KW5과 LAB KW15 동결건조액의 단독 처리는 각각 57.4%, 55.6%의 생육 저해율을 나타내었다. IgY와 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 첨가한 경우의 저해율은 70.
1%)이 가장 효과가 우수하였다. 또한, 혼합액을 첨가한 배지에서는 L. mensenteroides LAB KW5와 S. thermophilus LAB KW15의 동결건조액을 단독으로 첨가한 결과, 각각 96.9%, 96.0%로 높은 H. pylori의 저해율을 나타났지만, IgY와 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 각각 62.6%, 34.2%의 생육 저해율을 보였다. IgY와 동결 건조된 유산균 배양 상징액 혼합액, 목이버섯과 동결 건조된 유산균 배양 상징액 혼합액을 첨가한 경우에는 96.
pylori 생육 감소율을 보여 3가지 혼합액을 첨가하였을 때 가장 효과가 있는 것으로 나타났다. 전반적으로 IgY, 목이버섯을 단독으로 첨가한 경우 낮은 생육 저해력을 보였지만 동결 건조된 유산균 배양 상징액의 단독 처리, IgY 또는 목이버섯을 혼합하여 처리한 경우 비교적 높은 생육 저해력을 나타냈다. Bergsson 등(2002)의 연구에 따르면 지방산 monocaprin(C_10:0), monolaurin(C_12:0), palmitoleic acid(C_16:1) 등의 지질이 세포막을 파괴하여 H.
pylori 제어에 효과가 있다고 하였다. 결과적으로 유산균에 의해 H. pylori의 저해 효과가 제일 크고, IgY와 목이버섯의 혼합 시 상승효과가 있는 것으로 나타났다. Bae 등(2003)의 연구에 따르면 IgY의 위염(또는 위궤양) 치료 효과에 대한 임상실험을 통해 H.
에 대한 항균활성이 있다고 하였다. 그러므로 복합 처리는 동결 건조된 유산균 배양 상징액이 H. pylori를 제균하는 동시에 IgY와 목이버섯이 추가 억제함으로써 H. pylori의 저해효과를 상승하는 것으로 보인다.
소화성 질환의 중요 인자인 Helicobacter pylori를 저해하는 IgY, 목이버섯, 김치와 타락 유산균을 이용하여 생육 저해 상승 효과를 분석하고자 하였다. 동결 건조된 유산균 배양 상징액을 다양한 효소 처리 결과, 지질 분해 효소를 제외하고는 활성을 나타냈다. GC 분석을 통해 유산균 동결건조액의 지방산 조성은 undecanoic acid(C_11:0), palmitic acid(C_16:0), steraic acid(C_18:0), oleic acid(C_18:1)가 L.
동결 건조된 유산균 배양 상징액을 다양한 효소 처리 결과, 지질 분해 효소를 제외하고는 활성을 나타냈다. GC 분석을 통해 유산균 동결건조액의 지방산 조성은 undecanoic acid(C_11:0), palmitic acid(C_16:0), steraic acid(C_18:0), oleic acid(C_18:1)가 L. mensenteroides LAB KW5와 S. thermophilus LAB KW15에서 모두 확인되었으며, eicosadienoic acid(C_20:2)는 LAB KW5에서만 나타났다. 또한 유산균 동결건조액은 다른 식중독균에서도 spot assay의 결과, 그람 음성균 중에서 특히 E.
thermophilus LAB KW15에서 모두 확인되었으며, eicosadienoic acid(C_20:2)는 LAB KW5에서만 나타났다. 또한 유산균 동결건조액은 다른 식중독균에서도 spot assay의 결과, 그람 음성균 중에서 특히 E. coli O157:H7, E. coli, C. sakazakii 등에서 생육 저해능이 확인되었다. 목이버섯 추출물은 열수 추출과 ethanol를 이용해 분리하였으며, HPLC를 이용하여 목이버섯 추출 다당체를 분석한 결과, glucuronoxylomannan 혹은 glucomannan이 β-glucan과 함께 존재하는 혼합물일 것으로 되었다.
또한, 면역란은 1차 접종 후 11일 째부터 주마다 2회씩 회수하여 IgY를 분리, 정제하였다. 실험을 통해 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액을 혼합 배양하여 배양시간에 따른 생육 저해력의 변화를 확인한 결과, 유산균에 의해 H. pylori의 저해 효과가 있었으며, IgY와 목이버섯의 혼합 시 추가 억제 효과가 있는 것으로 나타났다. 그러므로 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액의 복합처리는 H.
pylori의 저해 효과가 있었으며, IgY와 목이버섯의 혼합 시 추가 억제 효과가 있는 것으로 나타났다. 그러므로 동결 건조된 유산균 배양 상징액, IgY, 목이버섯 추출액의 복합처리는 H. pylori를 제어하는데 효과적인 것으로 보인다.
목이버섯 추출물은 열수 추출과 ethanol를 이용해 분리하였으며, HPLC를 이용하여 목이버섯 추출 다당체를 분석한 결과, glucuronoxylomannan 혹은 glucomannan이 β-glucan과 함께 존재하는 혼합물일 것으로 되었다.
일반적으로 박테리오신의 특성에 따라 효소활성에 의한 약간 차이가 있었지만, 공통적으로 proteolytic enzyme에 의해 항균활성이 나타나지 않았다고 하였다. 그러므로 H. pylori의 생육을 저해하는 유산균 배양 상징액 중의 항균 활성 물질이 지질을 함유할 것으로 추측되었다.

후속연구

그리고 보고된 그람 음성 세균에 항균 활성을 나타내는 유리 지방산들은 capric acid(C_10:0), lauric acid(C_12:0), myristic acid(C_14:0), palmitoleic acid(C_16:1), pentadecanoic acid (C_15:0), palmitic acid(C_16:0), heptadecanoic acid(C_17:0), straric acid (C_18:0), oleic acid(C_18:1), octadecatetraenoic acid(C_18:4), arachidonic acid(C_20:4), eicosapentaenoic acis(C_20:5), behenic acid(C_22:0), doco- satetraenoic acid(C_22:4), docosapentaenoic acid(C_22:5)들이 알려져 있으며(Bergsson 등 1999; Benkendorff 등 2005), 다른 그람 양성 세균에도 효과적인 것으로 보고되었다(Kabara 등 1972; Feldlaufer 등 1993). 이는 H. pylori의 저해능뿐만 아니라 다른 유해 세균에 대해서 강한 항균 활성을 보여 식품안전을 위해 사용될 수 있는 특성으로 기대된다.
현재 유리지방산의 항미생물 효과에 대한 명확한 기작이 알려져 있지는 않지만, 지금까지 보고에서는 미생물의 electron transport chain의 파괴, 영양분 흡수 저해, 효소 활성 억제, 세포내 지방산 합성 저해, autolysis 유발, 대사산물의 유출, 산화적 인산화의 간섭 등에 의한 것으로 알려져 있다(Andrew 등 2010). 따라서 H. pylori에 대해 본 연구진이 분리한 S. thermophilus LAB KW 15와 L. mesenteroides LAB KW5가 생산하는 배양 상징액 중의 지방산 성분에 의해 생육 억제 효과가 나타난 것으로 사료되며, 이러한 결과를 바탕으로 유산균들이 생산하는 다양한 지방산들의 분리, 농축, 정제 등을 통해 H. pylori에 생육 억제를 위한 상업적 응용이 용이할 것으로 판단된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	Helicobacter pylori의 인식은?	Helicobacter pylori는 위염, 위궤양, 십이지장궤양, 위암 및 위림프종과 같은 소화성 질환의 중요 인자로 인식되고 있으며(Marshall 등 1984, 1988), 세계보건기구(WHO) 산하 국제 종양연구국(IARC)의 실행위원회에서 H. pylori는 발암 유발원 제1군이라고 정의하였다(WHO 1994).
	세계보건기구에서 정의한 Helicobacter pylori는?	Helicobacter pylori는 위염, 위궤양, 십이지장궤양, 위암 및 위림프종과 같은 소화성 질환의 중요 인자로 인식되고 있으며(Marshall 등 1984, 1988), 세계보건기구(WHO) 산하 국제 종양연구국(IARC)의 실행위원회에서 H. pylori는 발암 유발원 제1군이라고 정의하였다(WHO 1994). H.
	Helicobacter pylori 감염치료를 위한 항생제 투여의 문제점은?	이러한 H. pylori 감염 치료를 위한 제균 방법으로 항생제를 투여하지만, 최근에 항생제로 인한 부작용, 내성 균주의 출현, 위액 내의 항생제가 세균이 있는 점액층 및 점막에까지 도달하지 못하는 문제 등으로 인하여 치료에 어려움이 있다. 특히, 3제 요법 중에서 주로 사용되는 항생제 metronidazole과 clarithromycin의 내성이 높아지고 있으며(Debets-Ossenknopp 등 1999; Vasquez 등 1996), 우리나라에서도 점차 H.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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