본 연구는 제주도 해변의 벌판에서 드물게 자라는 산유자(Xylosma congesta) 잎 에탄올 추출물의 화장품 기능성 소재로서의 활용 가능성을 알아보기 위하여 cell culture model 및 in vitro assay system을 이용하여 미백, 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 분석하였다. 그 결과 산유자 잎 에탄올 추출물은 B16F10 세포에 세포독성 없이 효과적으로 ${\alpha}$-MSH에 의해 유도된 melanin 합성을 억제함으로써 높은 미백 활성을 가지는 것이 관찰되었다. CCD-986SK 세포를 이용하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성 능력을 procollagen 합성시험을 통해 분석한 결과, 양성 대조군으로 사용한 TGF-${\beta}$ 만큼은 아니지만 농도별로 각각 120, 122%의 procollagen 합성을 증가시키는 것을 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성을 확인하였다. 또한 RAW 264.7 murine macrophage를 이용하여 NO 생성 억제능을 분석함으로써 산유자 잎 에탄올 추출물의 항염증 활성 정도를 측정한 결과, LPS에 의해 유도된 NO 생성이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 감소하는 결과를 얻을 수 있었다. DPPH 법, ABTS 법, ORAC 법을 이용하여 항산화 활성을 분석한 결과, $50{\mu}g/mL$의 농도에서 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능이 각각 75.2, 99.1% 증가하는 것이 확인 되었다. ORAC activity assay kit를 이용하여 항산화 활성을 측정한 결과 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 높은 항산화 활성이 관찰 되었고, DPPH와ABTS 라디칼 소거능 결과와 유사하게 $50{\mu}g$/mL의 농도에서 가장 높은 항산화 활성($573.74{\pm}0.79{\mu}M$ TE/g)을 나타내었다. 이러한 결과를 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물이 높은 미백과 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 나타내는 것을 확인 할 수 있었으며, 기능성 화장품 소재로서의 활용가능성을 제시 할 수 있었다.
본 연구는 제주도 해변의 벌판에서 드물게 자라는 산유자(Xylosma congesta) 잎 에탄올 추출물의 화장품 기능성 소재로서의 활용 가능성을 알아보기 위하여 cell culture model 및 in vitro assay system을 이용하여 미백, 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 분석하였다. 그 결과 산유자 잎 에탄올 추출물은 B16F10 세포에 세포독성 없이 효과적으로 ${\alpha}$-MSH에 의해 유도된 melanin 합성을 억제함으로써 높은 미백 활성을 가지는 것이 관찰되었다. CCD-986SK 세포를 이용하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성 능력을 procollagen 합성시험을 통해 분석한 결과, 양성 대조군으로 사용한 TGF-${\beta}$ 만큼은 아니지만 농도별로 각각 120, 122%의 procollagen 합성을 증가시키는 것을 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성을 확인하였다. 또한 RAW 264.7 murine macrophage를 이용하여 NO 생성 억제능을 분석함으로써 산유자 잎 에탄올 추출물의 항염증 활성 정도를 측정한 결과, LPS에 의해 유도된 NO 생성이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 감소하는 결과를 얻을 수 있었다. DPPH 법, ABTS 법, ORAC 법을 이용하여 항산화 활성을 분석한 결과, $50{\mu}g/mL$의 농도에서 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능이 각각 75.2, 99.1% 증가하는 것이 확인 되었다. ORAC activity assay kit를 이용하여 항산화 활성을 측정한 결과 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 높은 항산화 활성이 관찰 되었고, DPPH와ABTS 라디칼 소거능 결과와 유사하게 $50{\mu}g$/mL의 농도에서 가장 높은 항산화 활성($573.74{\pm}0.79{\mu}M$ TE/g)을 나타내었다. 이러한 결과를 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물이 높은 미백과 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 나타내는 것을 확인 할 수 있었으며, 기능성 화장품 소재로서의 활용가능성을 제시 할 수 있었다.
In the present study, we investigated the biological activities of Xylosma congesta leaf ethanol extract (XCO) using a variety of in vitro and cell culture model systems for anti-melanogenic, anti-wrinkle, anti-inflammatory and anti-oxidant activities. First, XCO markedly inhibited ${\alpha}$
In the present study, we investigated the biological activities of Xylosma congesta leaf ethanol extract (XCO) using a variety of in vitro and cell culture model systems for anti-melanogenic, anti-wrinkle, anti-inflammatory and anti-oxidant activities. First, XCO markedly inhibited ${\alpha}$-melanocyte stimulating hormone-stimulated melanin synthesis in B16F10 cells. Secondly, XCO marginally induced procollagen synthesis in CCD-986SK cells. Thirdly, XCO dose-dependently suppressed lipopolysaccharide-induced nitric oxide (NO) production in RAW 264.7 cells. XCO did not affect cell viability at different concentrations used in this study, indicating that XCO-mediated inhibition of melanin, procollagen and NO synthesis is not mediated by cytotoxicity. Finally, XCO was found to exert anti-oxidant effect. Taken together, these findings demonstrate for the first time that XCO possesses anti-melanogenic, anti-wrinkle, anti-inflammatory and anti-oxidant activities, and suggest further evaluation and development of XCO as a functional supplement or cosmetic that may be useful for whitening skin, reducing wrinkles and treating inflammatory responses.
In the present study, we investigated the biological activities of Xylosma congesta leaf ethanol extract (XCO) using a variety of in vitro and cell culture model systems for anti-melanogenic, anti-wrinkle, anti-inflammatory and anti-oxidant activities. First, XCO markedly inhibited ${\alpha}$-melanocyte stimulating hormone-stimulated melanin synthesis in B16F10 cells. Secondly, XCO marginally induced procollagen synthesis in CCD-986SK cells. Thirdly, XCO dose-dependently suppressed lipopolysaccharide-induced nitric oxide (NO) production in RAW 264.7 cells. XCO did not affect cell viability at different concentrations used in this study, indicating that XCO-mediated inhibition of melanin, procollagen and NO synthesis is not mediated by cytotoxicity. Finally, XCO was found to exert anti-oxidant effect. Taken together, these findings demonstrate for the first time that XCO possesses anti-melanogenic, anti-wrinkle, anti-inflammatory and anti-oxidant activities, and suggest further evaluation and development of XCO as a functional supplement or cosmetic that may be useful for whitening skin, reducing wrinkles and treating inflammatory responses.
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문제 정의
산유자 잎의 생리활성 기능에 관한 연구는 많지 않으며, 특히 미백, 주름억제 및 항산화 소재로써의 활용 가능성을 확인한 연구는 거의 없다. 따라서 본 연구에서는 산유자 잎 에탄올 추출물의 미백, 주름억제, 항염증 및 항산화 활성을 cell culture model 및 in vitro assay system을 이용하여 분석함으로써 기능성 화장품 소재로서의 응용 가능성을 확인해 보고자 하였다.
본 연구는 제주도 해변의 벌판에서 드물게 자라는 산유자 (Xylosma congesta) 잎 에탄올 추출물의 화장품 기능성 소재로서의 활용 가능성을 알아보기 위하여 cell culture model 및 in vitro assay system을 이용하여 미백, 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 분석하였다. 그 결과 산유자 잎 에탄올 추출물은 B16F10 세포에 세포독성 없이 효과적으로 α-MSH에 의해 유도된 melanin 합성을 억제함으로써 높은 미백 활성을 가지는 것이 관찰되었다.
제안 방법
1 M NaNO2 (Sodium nitrite)로 표준곡선을 그리고, 1% sulfanilamide와 0.1% N-(1-naphtyl) ethylenediamine dihydrochloride reagent를 1:1로 혼합 후, 배지 상등액과 reagent를 각각 50 µL씩 혼합하여 10분간 상온에서 배양 후, 540 nm에서 흡광도를 측정하여 NO생성 억제능을 측정하였다.
100 nM의 α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH)를 처리하여 melanogenesis를 유도하고 산유자 잎 에탄올 추출물에 의한 미백 활성을 분석하였다.
ABTS 라디칼 소거능은 Miller 등 (1993)과 Dudonne 등(2009)의 방법을 변형하여 측정하였다. 7 mM ABTS 용액과 2.
B16F10 mouse melanoma 세포, RAW 264.7 murine macrophage 그리고 CCD-986SK human fibroblast 세포를 96-well plates (4×104/well)에 배양하고, 농도별로 조건 에 맞게 산유자 추출물을 처리하여 24시간 배양하였다.
B16F10 세포를 6 well plate에 1×105 /well의 세포수로 분주하고 24시간 배양 후, 100 nM의 α-MSH로 melanogenesis를 유도하고 arbutin (양성대조군)과 산유자 잎 에탄올 추출물을 농도별로 처리 후 72시간 배양하였다.
DPPH 라디칼 소거능은 시료내 항산화 물질의 활성을 간단하게 측정하는 방법으로 Blois (1958) 와 Ozgen 등(2006)의 방법을 변형하여 측정하였다. 농도별로 희석한 산유자 잎 에탄올 추출물 100 µL에 메탄올에 용해시킨 200 µM DPPH 용액 100 µL를 넣어서 30분 동안 상온에서 반응시켰다.
Free radical initiator solution을 각 well 마다 25 mL씩 넣고 잘 섞은 뒤 excitation (480 nm)과 emission (520 nm)으로 37°C에서 60분간 2분 간격으로 30번 fluorescence의 감소율을 측정하였다.
Procollagen 합성능 측정.
RAW 264.7 세포를 96 well plate에 4×104/well의 세포 수로 분주하고 24시간 후 NO synthesis mitogen으로 쓰이는 Lipopolysaccharide (LPS) 를 0.5 µg/mL농도로 처리하여 NO synthesis를 유도하고 산유자 잎 에탄올 추출물에 의한 항염증 활성을 Griess reagent system (Promega, USA)으로 분석하였다.
Serum free media로 교체 후, 산유자 잎 에탄올 추출물을 처리하여 24시간 배양하였고 배양된 세포의 배지를 수거하여 Procollagen type I C-peptide EIA kit (MK101, TAKARA, Japan)를 이용하여 procollagen양을 측정하였다.
Free radical initiator solution을 각 well 마다 25 mL씩 넣고 잘 섞은 뒤 excitation (480 nm)과 emission (520 nm)으로 37°C에서 60분간 2분 간격으로 30번 fluorescence의 감소율을 측정하였다. 결과 값은 산유자 잎 에탄올 추출물 첨가와 blank의 area under curve (AUC)값을 나타낸 후 trolox를 이용하여 작성한 검량선에 대입하여 나타내었다.
DPPH나 ABTS 라디칼 소거능과 달리 ORAC assay는 라디칼 소거능이 아닌 퍼옥시라디칼 생성제인 AAPH에 의한 산화반응이 시료내의 항산화 물질로 인하여 형광의 정도가 감소하는 것을 이용한다(Ou 등, 2002). 대조군으로 trolox를 사용하여 형광물질과 결합시킴으로써 항산화 활성을 평가하였다. ORAC activity assay kit를 이용하여 60분간 2분마다 fluorescence의 감소율을 측정한 결과, Fig 4C에서와 같이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 높은 항산화 활성이 관찰되었고, ORAC를 Trolox equivalent (TE)값으로 산출한 결과 DPPH 라디칼 소거능과 ABTS 라디칼 소거능 결과와 마 찬가지로 50 µg/mL의 농도에서 573.
4 µg/mL로 측정되었다. 마지막으로 ORAC assay를 통해 산유자 잎 에탄올 추출물의 항산화 활성을 측정하였다. DPPH나 ABTS 라디칼 소거능과 달리 ORAC assay는 라디칼 소거능이 아닌 퍼옥시라디칼 생성제인 AAPH에 의한 산화반응이 시료내의 항산화 물질로 인하여 형광의 정도가 감소하는 것을 이용한다(Ou 등, 2002).
상기의 결과를 통해서 산유자 잎 에탄올 추출물의 미백활성과 주름개선 활성이 확인됨에 따라 또다른 생리활성을 확인하기 위해 항염증 활성을 분석하였다. 본 연구에서는 항염증 활성 분석에 많이 사용되는 RAW 264.7 murine macrophage를 이용하여 NO 생성 억제능 분석을 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 항염증 활성 정도를 측정하였다. 먼저, 산유자 잎 에탄올 추출물을 25, 50, 그리고 100 µg/mL 농도로 처리하고 세포 생존율을 관찰한 결과, RAW 264.
최근 화장품 소재 개발은 미백 효능뿐 만 아니라 주름개선이나 항염증, 항산화 등 여러 활성을 지니는 소재를 개발하는데 많은 노력을 기울이고 있다(Kawabata 등, 2011; Tatsuno 등, 2011; Jin 등, 2012). 본 연구에서도 앞선 결과를 바탕으로 산유자 잎 에탄올 추출물의 미백 효능뿐 만 아니라 다양한 활성 능력을 확인하기 위해 먼저, 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성 능력을 procollagen 합성 시험을 통해 분석하였다. 산유자 잎 에탄올 추출물 50 µg/mL과 100 µg/mL에서 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였고(Fig 2A), TGF-β를 처리하였을 경우 음성대조군에 비해 procollagen 합성이 150% 증가하였으며 산유자 잎 에탄올 추출물을 50, 100 µg/mL 처리 하였을 때 음성대조군에 비해 각각 120, 122%의 procollagen 합성이 증가하였으며, 통계적으로 유의한 결과를 나타내었다(Fig 2B).
산유자 잎 에탄올 추출물의 ORAC value는 Ou 등(2002)의 방법을 변형하여 ORAC activity assay kit (Cell Biolabs #STA-345, USA)를 이용하여 측정하였다. Antioxidant standard인 trolox를 농도별로 희석하여 96 well plate에 25 µL 를 넣고 1× Fluorescein solution을 각 well 마다 150 µL씩 넣어 잘 섞은 후, 37°C에서 30분 배양하였다.
피부 melanin 합성 저해능은 피부 미백효능의 중요한 지표로 알려져 있다. 산유자 잎 에탄올 추출물의 melanin 합성 저해능을 평가 하기 위하여 먼저 B16F10 세포의 세포 생존율에 미치는 영향을 확인하였다. 산유자 잎 에탄올 추출물을 125, 250, 그리고 500 µg/mL 농도로 처리하고 24시간 배양한 후에 MTT 방법으로 세포 생존율을 관찰한 결과, 산유자 잎 에탄올 추출물이 B16F10 세포에 세포독성을 나타나지 않는 것을 확인하였다(Fig 1A).
산유자 잎 에탄올 추출물의 세포 독성 분석.
산유자 잎 에탄올 추출물의 항산화 활성을 분석하기 위해 DPPH, ABTS, 그리고 ORAC assay를 수행하였다.
산유자 잎 에탄올 추출물이 α-MSH에 의해 유도된 B16F10 세포의 melanin 합성에 미치는 영향을 확인하기 위하여 125, 250, 500 µg/mL 농도로 처리하고 72시간 배양한 후에 melanin 합성량을 측정하였다.
상기의 결과를 통해서 산유자 잎 에탄올 추출물의 미백활성과 주름개선 활성이 확인됨에 따라 또다른 생리활성을 확인하기 위해 항염증 활성을 분석하였다. 본 연구에서는 항염증 활성 분석에 많이 사용되는 RAW 264.
희석된 용액 100 µL와 농도별로 희석한 산유자 잎 에탄올 추출물 100 µL를 상온에서 6분간 반응시키고 ELISA reader를 이용하여 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 항산화제인 BHA를 사용하였고, 산유자 잎 에탄올 추출물에 대한 IC50 값을 구해 평가하였다.
ELISA reader (Molecular Device, USA)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 항산화제인 butylated hydroxyanisole (BHA)를 사용하였고, 산유자 잎 에탄올 추출물의 IC50 값을 구해 평가하였다.
양성대조군은 transforming growth factor-β (TGF-β)를 사용하였고 음성대조군은 동일한 배지에서 산유자 잎 에탄올 추출물을 첨가하지 않은 상태로 배양하였다.
분쇄한 산유자 잎 분말 10 g을 80% 에탄올 100 mL에 침적시키고 24시간 동안 상온에서 교반하여 추출하였다. 얻어진 추출물을 여과하여 얻어진 여액과, 그 여과로 분리된 추출 잔사를 80% 에탄올에서 다시 침적, 24시간 동안 상온에서 교반하고 1시간 sonification 시킨 후 여과하여 얻어진 여액을 혼합하여 감압농축하고 동결 건조하여 고형상의 산유자 추출물을 수득하였다.
대상 데이터
미백 활성 분석에 사용되는 B16F10 mouse melanoma 세포를 American Type Culture Collection (ATCC, USA)으로부터 구입하여 10% fetal bovine serum-Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (10% FBSDMEM, Gibco, life technologies, USA)으로 37°C, 5% CO2의 조건에서 배양하여 실험에 사용하였다.
추출물에 사용된 산유자 (Xylosma congesta)는 2013년 2월 4일 제주도 서귀포시 안덕면 화순리 일대 곶자왈 지역에서 채취 후 깨끗하게 수세한 후 40ºC 열풍 건조하여 분쇄기로 분쇄하였다.
항염증 활성 분석에 사용되는 RAW 264.7 murine macrophage 를 ATCC로부터 구입하여 10% FBS-DMEM 배지에 37°C, 5% CO2의 조건에서 배양하여 실험에 사용하였다.
데이터처리
실험 결과의 통계학적 유의성은 Student’s t-test로 분석하였으며, p value가 0.05 미만일 경우 통계적으로 유의한 것으로 판정하였다 (*p <0.05; **p <0.01).
이론/모형
산유자 잎 에탄올 추출물이 세포생존율에 미치는 영향을 확인하기 위하여 3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay를 수행하였다. B16F10 mouse melanoma 세포, RAW 264.
성능/효과
α-MSH에 의해 유도된 melanin 합성 (100%)이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 감소하는 결과 (125 µg/mL: 57.9%, 250 µg/mL: 22%, 500 µg/ mL: 13.8%)를 얻을 수 있었고, 이러한 melanin 합성 저해능은 양성대조군으로 사용한 arbutin (66.3%)보다 높게 나타나는 것을 확인하였다(Fig 1B).
CCD-986SK 세포를 이용하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성 능력을 procollagen 합성시험을 통해 분석한 결과, 양성 대조군으로 사용한 TGF-β 만큼은 아니지만 농도별로 각각 120, 122%의 procollagen 합성을 증가시키는 것을 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성을 확인하였다.
DPPH 법, ABTS 법, ORAC 법을 이용하여 항산화 활성을 분석한 결과, 50 µg/mL의 농도에서 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능이 각각 75.2, 99.1% 증가하는 것이 확인 되었다.
ORAC activity assay kit를 이용하여 60분간 2분마다 fluorescence의 감소율을 측정한 결과, Fig 4C에서와 같이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 높은 항산화 활성이 관찰되었고, ORAC를 Trolox equivalent (TE)값으로 산출한 결과 DPPH 라디칼 소거능과 ABTS 라디칼 소거능 결과와 마 찬가지로 50 µg/mL의 농도에서 573.74±0.79 µM TE/g으로 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다.
ORAC activity assay kit를 이용하여 항산화 활성을 측정한 결과 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 높은 항산화 활성이 관찰 되었고, DPPH와ABTS 라디칼 소거능 결과와 유사하게 50 µg/mL의 농도에서 가장 높은 항산화 활성 (573.74±0.79 µM TE/g)을 나타내었다.
그 결과 산유자 잎 에탄올 추출물은 B16F10 세포에 세포독성 없이 효과적으로 α-MSH에 의해 유도된 melanin 합성을 억제함으로써 높은 미백 활성을 가지는 것이 관찰되었다.
다음으로 산유자 잎 에탄올 추출물의 항염증 활성을 확인하기 위해 LPS로 RAW 264.7 cell의 NO 생성을 유도하여 Griess reagent를 이용하여 NO 생성량을 측정한 결과, Fig 3B 에 제시된 바와 같이 LPS에 의해 유도된 NO 생성이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 (25–100 µg/mL) 감소하는 결과를 얻을 수 있었다.
CCD-986SK 세포를 이용하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성 능력을 procollagen 합성시험을 통해 분석한 결과, 양성 대조군으로 사용한 TGF-β 만큼은 아니지만 농도별로 각각 120, 122%의 procollagen 합성을 증가시키는 것을 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물의 주름개선 활성을 확인하였다. 또한 RAW 264.7 murine macrophage를 이용하여 NO 생성 억제능을 분석함으로써 산유자 잎 에탄올 추출물의 항염증 활성 정도를 측정한 결과, LPS에 의해 유도된 NO 생성이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 감소하는 결과를 얻을 수 있었다. DPPH 법, ABTS 법, ORAC 법을 이용하여 항산화 활성을 분석한 결과, 50 µg/mL의 농도에서 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능이 각각 75.
먼저, 산유자 잎 에탄올 추출물을 25, 50, 그리고 100 µg/mL 농도로 처리하고 세포 생존율을 관찰한 결과, RAW 264.7 cell에서 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다 (Fig 3A).
3%)보다 높게 나타나는 것을 확인하였다(Fig 1B). 본 결과를 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물은 B16F10 세포에 세포독성 없이 효과적으로 melanin 합성을 억제함으로써 높은 미백 활성을 가지는 것으로 사료된다.
79 µM TE/g으로 가장 높은 항산화 활성을 나타내었다. 본 결과를 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물이 높은 항산화 활성을 나타내는 것을 확인 할 수 있었다.
산유자 잎 에탄올 추출물 50 µg/mL과 100 µg/mL에서 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였고(Fig 2A), TGF-β를 처리하였을 경우 음성대조군에 비해 procollagen 합성이 150% 증가하였으며 산유자 잎 에탄올 추출물을 50, 100 µg/mL 처리 하였을 때 음성대조군에 비해 각각 120, 122%의 procollagen 합성이 증가하였으며, 통계적으로 유의한 결과를 나타내었다(Fig 2B). 본 결과를 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물이 양성대조군 만큼은 아니지만, CCD-986SK human fibroblast 세포의 procollagen 합성을 증가시킴으로써 주름개선 활성을 가지는 것을 확인 할 수 있었다.
7 cell의 NO 생성을 유도하여 Griess reagent를 이용하여 NO 생성량을 측정한 결과, Fig 3B 에 제시된 바와 같이 LPS에 의해 유도된 NO 생성이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도 의존적으로 (25–100 µg/mL) 감소하는 결과를 얻을 수 있었다. 본 실험 결과는 Yang 등(2009)이 발표한 논문과 유사하게 산유자 잎 에탄올 추출물이 RAW 264.7 cell에서 세포독성 없이 LPS에 의해 유도된 NO 생성을 억제하는 것을 확인하였으며, NO생성 억제에 따른 높은 항염증 활성을 가지는 것을 알 수 있었다.
산유자 잎 에탄올 추출물 50 µg/mL과 100 µg/mL에서 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였고(Fig 2A), TGF-β를 처리하였을 경우 음성대조군에 비해 procollagen 합성이 150% 증가하였으며 산유자 잎 에탄올 추출물을 50, 100 µg/mL 처리 하였을 때 음성대조군에 비해 각각 120, 122%의 procollagen 합성이 증가하였으며, 통계적으로 유의한 결과를 나타내었다(Fig 2B).
산유자 잎 에탄올 추출물에 의한 ABTS 라디칼 소거능은 DPPH 라디칼 소거능 결과와 유사하게 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 소거능이 증가 하는 것이 확인 되었고, DPPH 라디칼 소거능 결과와 유사하게 50 µg/mL의 농도에서 가장 높은 99.7%의 ABTS 라디칼 소거능이 관찰 되었다 (Fig 4B).
산유자 잎 에탄올 추출물을 125, 250, 그리고 500 µg/mL 농도로 처리하고 24시간 배양한 후에 MTT 방법으로 세포 생존율을 관찰한 결과, 산유자 잎 에탄올 추출물이 B16F10 세포에 세포독성을 나타나지 않는 것을 확인하였다(Fig 1A).
산유자 잎 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과, Fig 4A에서와 같이 산유자 잎 에탄올 추출물의 농도에 따라 DPPH 라디칼 소거능이 증가하는 것이 확인되었고, 100 µg/mL보다는 오히려 50 µg/mL의 농도에서 가장 높은 75.2%의 소거능이 관찰 되었다.
후속연구
상기의 결과들을 통해 산유자 잎 에탄올 추출물이 높은 미백과 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 보유하는 것을 확인 할 수 있었으며, 이러한 결과는 천연물 유래 다양한 생리활성을 보유한 기능성 화장품 소재로서의 활용을 위한 기초자료로 이용 될 수 있을 것으로 사료된다.
79 µM TE/g)을 나타내었다. 이러한 결과를 통하여 산유자 잎 에탄올 추출물이 높은 미백과 주름개선, 항염증 및 항산화 활성을 나타내는 것을 확인 할 수 있었으며, 기능성 화장품 소재로서의 활용가능성을 제시 할 수 있었다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
Melanin 색소의 합성 과정은 어떻게 되는가?
Melanin은 생물체에 널리 분포 되어 있는 고분자의 천연색소 성분으로 정상적인 경우 외부의 피부 자극에 대한 저항력을 주지만 과도한 합성의 경우 주근깨나 검버섯과 같은 색소침착을 일으킨다(Lerner와 Fitzpatrick, 1950; Jung 등, 1995; Costin과 Hearing, 2007). Melanin 색소의 합성 과정은 melanin 생합성 과정의 중요 enzyme인 tyrosinase가 tyrosine을 기질로 하여 3,4-dihydroxy-phenylalanine과 dopaquinone으로 변환되는 연속적인 효소적 산화 (hydroxylation and oxidation)와 중합반응 과정을 통하여 이루어진다(Lerner와 Fitzpatrick, 1950; Aroca 등, 1993; Costin과 Hearing, 2007). Melanin 색소 합성에 중요한 tyrosinase를 저해하는 미백제 개발이 많이 진행되고 있는 가운데, 대표적인 tyrosinase저해제로 kojic acid, hydroquinone, arbutin, retinoids등이 알려져 있으나 안전성의 문제로 사용에 제한이 있다.
Melanin은 무엇인가?
Melanin은 생물체에 널리 분포 되어 있는 고분자의 천연색소 성분으로 정상적인 경우 외부의 피부 자극에 대한 저항력을 주지만 과도한 합성의 경우 주근깨나 검버섯과 같은 색소침착을 일으킨다(Lerner와 Fitzpatrick, 1950; Jung 등, 1995; Costin과 Hearing, 2007). Melanin 색소의 합성 과정은 melanin 생합성 과정의 중요 enzyme인 tyrosinase가 tyrosine을 기질로 하여 3,4-dihydroxy-phenylalanine과 dopaquinone으로 변환되는 연속적인 효소적 산화 (hydroxylation and oxidation)와 중합반응 과정을 통하여 이루어진다(Lerner와 Fitzpatrick, 1950; Aroca 등, 1993; Costin과 Hearing, 2007).
한방에서 산유자 나무의 용도는 무엇인가?
산유자 나무(Xylosma congesta)는 이나무과(Flacourtiaceae)의 상록 소교목으로 아시아에서는 한국, 일본, 중국, 필리핀, 인도네시아에 분포하며 주로 관상용으로 사용된다. 우리나라에서는 남부해변의 벌판에서 드물게 자라는 것으로 알려져 있으며 한방에서는 수피를 황달 치료에 사용하는 것으로 알려져 있다. 산유자 잎의 생리활성 기능에 관한 연구는 많지 않으며, 특히 미백, 주름억제 및 항산화 소재로써의 활용 가능성을 확인한 연구는 거의 없다.
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