[논문]능실 추출물 및 그 분획물의 피부 광노화 억제 효능

남진주; 이경은; 박지은; 문성준; 염종경

doi:10.15230/scsk.2014.40.4.321

능실 추출물 및 그 분획물의 피부 광노화 억제 효능
Inhibitory Effect of Fractionated Trapa Japonica Extracts on UVB-induced Skin Photoaging 원문보기

大韓化粧品學會誌 = Journal of the society of cosmetic scientists of Korea, v.40 no.4, 2014년, pp.321 - 330

남진주 (코스맥스 R&I center) , 이경은 (코스맥스 R&I center) , 박지은 (코스맥스 R&I center) , 문성준 (코스맥스 R&I center) , 염종경 (코스맥스 R&I center)

초록
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자외선은 피부의 구조적, 생리학적 변화를 일으키는 대표적인 외부 환경 인자로서 광노화, 일광화상 및 피부암을 일으키는 원인이 된다. 이러한 자외선은 외부적인 스트레스 자극 인자로 작용하여 피부 세포 내에서 비활성 코르티손을 활성 코르티솔로 전환시키는 효소인 $11{\beta}$-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 ($11{\beta}-HSD1$)의 발현 및 활성을 증가시킨다. 이에 본 연구에서는 UVB에 의해 증가된 $11{\beta}-HSD1$의 발현을 효과적으로 억제할 수 있는 천연 추출물을 발굴하고자 하였다. 사람 섬유아세포에 다양한 천연물을 스크리닝한 결과, 능실 추출물이 유의한 효과가 있음을 확인하고, 능실 추출물을 추가 분획하여 사람 섬유아세포와 3D skin model에서 피부 광노화 억제 소재로서의 가능성을 확인하였다. 능실 추출물 및 분획물은 섬유아세포에서 $11{\beta}-HSD1$의 발현을 억제함과 동시에 자외선에 의한 matrix metalloproteinase (MMP)-1, 3, 9 및 염증성 싸이토카인(IL-6, 8)의 발현 증가를 억제하였다. 또한, 3D skin model을 이용한 평가에서, 능실 추출물은 UVB에 의한 MMP-1 단백질 발현을 억제하였고, UVB에 의한 표피 두께 감소 및 각질형성세포의 증식 감소를 회복시켰다. 따라서, 본 연구 결과로부터 능실 추출물 및 분획물은 UVB에 의한 $11{\beta}-HSD1$의 발현 증가와 이에 수반하는 광노화를 효과적으로 예방함을 확인하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

Ultraviolet B (UVB) is a primary environmental factor that induces adverse effects on skin such as photoaging, skin burn and cancer. UVB also increases the expression of $11{\beta}$-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 ($11{\beta}-HSD1$), which converts inactive cortisone to active cortisol in response to a variety of stressors in target tissues. Thus, we have screened new herbal extracts that suppress $11{\beta}-HSD1$ expression induced by UVB in human dermal fibroblasts. We also investigated whether Trapa japonica (TJ) extract and its fractions inhibit UVB-induced photoaging in Hs68 cells and 3D skin model. Results showed that TJ extract inhibited the increase of $11{\beta}-HSD1$ expression in UVB-exposed Hs68 cells significantly. TJ extract and its fractions not only inhibited $11{\beta}-HSD1$ expression, but also suppressed the increase of matrix metalloproteinases (MMP-1, 3, 9) and proinflammatory cytokines (IL-6, 8) in UVB-irritated Hs68 cells. TJ extract also inhibited MMP-1 expression in UVB-irritated 3D skin model. In addition, TJ extract recovered UVB-induced decreases of epidermal thickness and PCNA-positive cells in 3D skin model. Taken together, these results suggest that TJ extract and its fractions inhibit UVB-induced skin photoaging by interfering with $11{\beta}-HSD1$ and MMPs.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

그 결과, 능실 추출물에서 자외선으로 유도한 11 β-HSD1의 발현 증가를 현저하게 억제함을 확인하였고, 이를 바탕으로 능실 추출물을 다시 분획하여 각 분획물별로 자외선에 의한 다양한 광노화 반응에 주는 영향을 확인함으로써 광노화 억제능을 갖는 기능성 소재로서의 이용 가능성을 알아보고자 하였다.
따라서, 본 연구에서는 11 β-HSD1 억제제로 발굴된 능실 M에 대해 섬유아세포에서 광노화 반응에 주는 영향을 평가함으로써, 항노화 소재로서 in vitro 효능을 확인하고자 하였다.
따라서, 본 저자 등은 자외선에 의한 피부 노화의 새로운 원인으로서 11β-HSD1에 주목하고, 11β-HSD1의 발현을 억제하는 천연물을 발굴하고자 하였다.
그 결과, 능실 추출물에서 자외선으로 유도한 11 β-HSD1의 발현 증가를 현저하게 억제함을 확인하였고, 이를 바탕으로 능실 추출물을 다시 분획하여 각 분획물별로 자외선에 의한 다양한 광노화 반응에 주는 영향을 확인함으로써 광노화 억제능을 갖는 기능성 소재로서의 이용 가능성을 알아보고자 하였다. 또한, 3D skin model을 이용한 광노화 평가를 수행하여, 이를 활용한 광노화 평가법을 제안하고자 하였다.
따라서, 본 연구에서는 11 β-HSD1 억제제로 발굴된 능실 M에 대해 섬유아세포에서 광노화 반응에 주는 영향을 평가함으로써, 항노화 소재로서 in vitro 효능을 확인하고자 하였다. 아울러 능실 M에 대한 methylene chloride (MC), ethyl acetate (EA), n-buthanol (nB) 각각의 분획물을 만들어 분획물 별 광노화 반응에 대한 차이를 확인하고자 하였다
이어 본 저자 등은 11β-HSD1을 타겟으로 이를 조절하는 새로운 항노화 소재를 발굴하고자 하였다.

제안 방법

72 h 동안 배양 후 해당 배지를 회수하여 MMP-1 분비량을 측정하기 위해 효소결합 면역흡착분석법(ELISA)을 수행하였으며 H&E 염색을 통한 표피두께 및 PCNA 염색을 통한 표피세포 증식을 측정하였다[12,13].
Epidermal tissue (RHE, SkinEthic laboratories, France)를 growth media에 24 h 동안 안정화한 후 UVB 40 mJ을 4 h 간격으로 3회 조사한 뒤 배지에 능실 추출물을 첨가하였다. 72 h 동안 배양 후 해당 배지를 회수하여 MMP-1 분비량을 측정하기 위해 효소결합 면역흡착분석법(ELISA)을 수행하였으며 H&E 염색을 통한 표피두께 및 PCNA 염색을 통한 표피세포 증식을 측정하였다[12,13].
Nanodrop 2000 (Thermo, USA)를 이용해RNA를 정량하였고 total RNA 2 µg을 DEPC와 함께 70 ℃에서 5 min 동안 가열시킨 후 Reverse Transcription Premix (ELPIS-Biotech, Korea)에 넣고 최종 부피가 20 µL가 되도록 하였다.
UVB를 조사하지 않고 능실 M, MC, EA, nB를 섬유아세포에 처리한 경우에 처리 농도 1, 10 µg/mL에 대해서 어떠한 세포 독성을 나타내지 않았으며, 오히려 농도 의존적으로 섬유아세포의 증식을 활성화시켰다(Figure 1a).
UVB에 의해 증가되는 11β-HSD1에 대한 조절 효과를 보기 위해, UVB를 조사한 섬유아세포에 능실 M, MC, EA, nB를 처리하여 11β-HSD1의 발현량을 측정하였다.
능실 M, MC, EA, nB가 섬유아세포에 주는 영향을 보기 위해 UVB 조사 여부에 따른 세포 생존율을 평가하였다.
다음으로 자외선에 의해 활성화되는 MMPs의 발현에 주는 영향을 보기 위해, UVB를 조사한 섬유아세포에 능실 M, MC, EA, nB를 처리하여 MMP-1, 3, 9에 대한 발현량을 측정하였다.
5%의 수율로 얻었다. 또한, 메탄올 추출물(Methanol; M)을 증류수에 현탁시키고 계통학적 분획방법에 따라 동량의 메틸렌 클로라이드(MethyleneChloride; MC), 에틸아세테이트(Ethyl Acetate; EA), 부탄올(n-Buthanol; nB)을 각각 3회씩 추출하여 분획한 후 감압 농축하여 메틸렌 클로라이드층, 에틸아세테이트층, 부탄올층을 획득하여 각 MC분획, EA분획, nB분획으로 하였다. 양성 대조 물질로서 11β-HSD1특이 억제제인 PF915275 (PF)를 사용하였다.
이상의 in vitro 실험 결과를 바탕으로 in vivo 평가모델로서 최근 주목되는 3D skin model을 이용하여 능실 M의 광노화 억제 효과를 확인하였다. 먼저, UVB를 조사한 피부 조직의 배지를 수거하여 표피에서 분비된 MMP-1의 단백질 발현량을 측정하였다. 그 결과, UVB의 조사는 표피의 MMP-1의 분비를 증가시켜 배지 내에 분비된 MMP-1 단백질이 증가됨을 보였고, 능실 M은 이러한 MMP-1의 분비를 농도 의존적으로 억제시킴을 나타냈다(Figure 5).
문헌적으로 피부 노화에 효과가 있는 것으로 보고된 약 50여 종의 천연물 소재를 확보한 후 섬유아세포에서 자외선으로 유발된 11β-HSD1의 발현을 조절하는 소재를 스크리닝하였다.
그 후 15 mJ/cm²의 UVB를 조사한 뒤, 능실 추출물 및 분획물을 FBS가 첨가되지 않은 배지에 희석한 후 24 h 동안 추가 배양하였다. 배양이 끝난 배지의 상층액을 이용하여 효소결합 면역결합 흡착법을 MMP-1 ELISA kit (Calbiochem, Germany), Type 1 procollagen EIA kit (Dakara, Japan)의 시료로 사용하여 시행한 후 540 nm에서 측정하였다.
그 후 15 mJ/cm²의 UVB와 능실 추출물 및 분획물을 처리한 FBS가 첨가되지 않은 배지를 사용하여 72 h 동안 추가 배양하였다. 배양한 세포를 회수하여 lipa buffer를 이용하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질을 Bradford assay 방법에 따라 정량한 후, Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)하여 분리하였다.
3D skin model은 최근 동물실험대체법으로 관심이 매우 높지만, 이를 활용한 효능 연구는 아직 많지 않다. 본 저자 등은 표피로 이루어진 3D skin model에서 자외선 조사 시에 실제 노화된 피부와 유사한 양상을 나타냄을 확인하고, 본 연구에 활용하였다. 노화된 표피에서는 기저층 각질형성세포의 증식이 감소되어 표피두께의 감소, 세포 분열의 감소 현상이 나타난다[20].
조건의 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 배양 배지는 48 h마다 새로운 배지로 교체하였고, 2 - 3일 간격으로 계대 배양을 시행하였다.
앞서 in vitro 결과를 바탕으로 광노화 반응의 저해 효과가 우수한 능실 M에 대해 3D skin model을 이용한 광노화 억제 효과를 평가하였다. 그 결과, MMP-1의 발현 증가, 표피 두께 감소, PCNA-positive 세포의 감소 등 자외선에 의한 광노화 반응에 대해 능실 M은 농도 의존적으로 모두 유의한 억제 효과를 나타냈다.
얻어진cDNA로부터 11β-HSD1, MMP-1, 3, 9, IL-6, 8을 증폭시키기 위해 5배 희석시킨 cDNA 2 µL를 primer 1 µL, DEPC 7 µL, SYBR Green master mix (Invitrogen LifeTechnology, USA) 10 µL와 함께 StepOne PlusReal-Time PCR system (Applied Biosystems, USA)을 이용하여 PCR을 실시하였다.
이상의 in vitro 실험 결과를 바탕으로 in vivo 평가모델로서 최근 주목되는 3D skin model을 이용하여 능실 M의 광노화 억제 효과를 확인하였다. 먼저, UVB를 조사한 피부 조직의 배지를 수거하여 표피에서 분비된 MMP-1의 단백질 발현량을 측정하였다.
이어 UVB 및 능실 M을 처리한 표피 조직을 채취하여 면역조직화학염색을 실시하였다. UVB를 조사한 표피 조직을 UVB를 조사하지 않은 조직과 비교하여 표피 두께의 감소가 두드러짐을 확인하였고, 능실 M은 이러한 표피 두께의 감소를 유의하게 회복시킴을 나타냈다(Figure 6a, b).
이후에 0.5 µg/mL 농도의 MTT (Sigma, USA) 용액 20 µL을 각각의 well에 첨가하고 4 h 동안 결정화한 후 dimethyl sulfoxide(DMSO, sigma, USA)에 용해하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다(M: 메탄올 추출물 각 1, 10 µg/mL, MC:메틸렌 클로라이드 분획물 각 1, 10 µg/mL, EA: 에틸아세테이트 분획물 각 1, 10 µg/mL, nB: 부탄올 분획물 각 1, 10 µg/mL).
자외선에 의한 MMPs의 발현에 영향을 주는 것으로 알려져 있는 사이토카인[6,7]에 대해 능실 M, MC, EA,nB의 조절 효과를 평가하기 위해 UVB를 조사한 섬유아세포에 각 시료를 처리하여 IL-6, 8에 대한 발현량을 측정하였다. UVB 조사에 따라 IL-6, 8에서 뚜렷한 mRNA 증가를 확인하였고, 각 시료 모두에서 UVB에 의한 IL-6, 8의 증가를 유의하게 억제시킴을 나타냈다(Figure 4a, b).
추출한 단백질을 Bradford assay 방법에 따라 정량한 후, Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)하여 분리하였다. 전기영동 후 단백질을 gel에서 PVDF 막으로 transfer한 뒤, 항체를 결합하여 타겟 단백질을 표지하고 사진 촬영하였다.

대상 데이터

사람 섬유아세포주인 Hs68은 America Type Culture Collection (ATCC)에서 구매하였으며 10%의 Fetal bovine serum (FBS)와 1%의 Antibiotic/antimycotic (AA) 을 첨가한 DMEM (Hyclone, USA)을 이용하여 37 ℃, 5% CO₂조건의 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 배양 배지는 48 h마다 새로운 배지로 교체하였고, 2 - 3일 간격으로 계대 배양을 시행하였다.
양성 대조 물질로서 11β-HSD1특이 억제제인 PF915275 (PF)를 사용하였다.

데이터처리

결과는 means ± SEM로 나타냈고, 모든 통계분석은 student’s t-test를 실시하여 평가하였다.

이론/모형

(b) Hs68 cells were exposed to 15 mJ of UVB before the treatment. The cell viability was measured by MTT assay. M: methanol extract 1, 10 µg/mL, MC: methylene chloride fraction 1, 10 µg/mL, EA: ethyl acetate fraction 1, 10 µg/mL, nB: n-buthanol fraction 1, 10 µg/mL.
능실 추출물 및 분획물의 Hs68 cell에 대한 독성 평가를 위해 MTT assay를 수행하였다. Hs68 cell은 96-well plate에 4 × 104 cells/well로 분주하여 24 h 후에 혈청제거 배지로 교환한 후, 각각의 추출물과 분획물을 처리하여 24 h 배양하였다.
배양한 세포를 회수하여 lipa buffer를 이용하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질을 Bradford assay 방법에 따라 정량한 후, Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)하여 분리하였다. 전기영동 후 단백질을 gel에서 PVDF 막으로 transfer한 뒤, 항체를 결합하여 타겟 단백질을 표지하고 사진 촬영하였다.
한편, 자외선에 의한 피부 노화에서 가장 영향이 큰 것으로 알려진 MMP-1[14]과 type 1 procollagen에 대해서 단백질의 발현량을 ELISA법 및 western blot 방법을 통해 추가 평가하였다. 그 결과, 능실 MC를 제외한 능실 M, EA, nB에서 MMP-1 발현 억제 및 type 1 procollagen 분해 억제 효과를 보였다(Figure 3b, c, d).

성능/효과

노화된 표피에서는 기저층 각질형성세포의 증식이 감소되어 표피두께의 감소, 세포 분열의 감소 현상이 나타난다[20]. 3D skin model에 자외선을 조사하였을 때 표피 두께의 감소, 증식하는 기저세포의 감소를 나타냈으며, 능실M은 이러한 노화 반응을 유의하게 억제함을 확인하였다.
자외선에 의한 MMPs의 발현에 영향을 주는 것으로 알려져 있는 사이토카인[6,7]에 대해 능실 M, MC, EA,nB의 조절 효과를 평가하기 위해 UVB를 조사한 섬유아세포에 각 시료를 처리하여 IL-6, 8에 대한 발현량을 측정하였다. UVB 조사에 따라 IL-6, 8에서 뚜렷한 mRNA 증가를 확인하였고, 각 시료 모두에서 UVB에 의한 IL-6, 8의 증가를 유의하게 억제시킴을 나타냈다(Figure 4a, b).
UVB 조사에 따라 MMP-1, 3, 9 모두에서 현저한 mRNA의 증가를 확인하였고, 각 시료 모두에서 UVB에 의한 MMP-1, 3, 9의 증가를 유의하게 억제시킴을 나타냈다(Figure 3a). 특히 능실 M의 억제 효과가 높게 나타났다.
이어 UVB 및 능실 M을 처리한 표피 조직을 채취하여 면역조직화학염색을 실시하였다. UVB를 조사한 표피 조직을 UVB를 조사하지 않은 조직과 비교하여 표피 두께의 감소가 두드러짐을 확인하였고, 능실 M은 이러한 표피 두께의 감소를 유의하게 회복시킴을 나타냈다(Figure 6a, b). 또한, PCNA 염색을 통해 UVB 조사에 따른 표피 세포의 활성 변화를 평가한 결과,UVB 조사는 표피 세포의 증식을 현저히 억제시킨 반면, 능실 M은 이러한 표피 세포의 활성 감소를 유의하게 회복시킴을 나타냈다(Figure 7a, b).
앞서 in vitro 결과를 바탕으로 광노화 반응의 저해 효과가 우수한 능실 M에 대해 3D skin model을 이용한 광노화 억제 효과를 평가하였다. 그 결과, MMP-1의 발현 증가, 표피 두께 감소, PCNA-positive 세포의 감소 등 자외선에 의한 광노화 반응에 대해 능실 M은 농도 의존적으로 모두 유의한 억제 효과를 나타냈다. 3D skin model은 최근 동물실험대체법으로 관심이 매우 높지만, 이를 활용한 효능 연구는 아직 많지 않다.
그 결과, UVB에 노출된 섬유아세포에서 11β-HSD1의 발현이 증가하였고, 11β-HSD1 저해제를 처리하였을 때 11β-HSD1 발현이 감소하였을 뿐만 아니라 MMPs와 노화 관련 염증성 사이토카인의발현도 억제되었다.
먼저, UVB를 조사한 피부 조직의 배지를 수거하여 표피에서 분비된 MMP-1의 단백질 발현량을 측정하였다. 그 결과, UVB의 조사는 표피의 MMP-1의 분비를 증가시켜 배지 내에 분비된 MMP-1 단백질이 증가됨을 보였고, 능실 M은 이러한 MMP-1의 분비를 농도 의존적으로 억제시킴을 나타냈다(Figure 5).
한편, 자외선에 의한 피부 노화에서 가장 영향이 큰 것으로 알려진 MMP-1[14]과 type 1 procollagen에 대해서 단백질의 발현량을 ELISA법 및 western blot 방법을 통해 추가 평가하였다. 그 결과, 능실 MC를 제외한 능실 M, EA, nB에서 MMP-1 발현 억제 및 type 1 procollagen 분해 억제 효과를 보였다(Figure 3b, c, d).
그 결과, 능실 메탄올 추출물(M)에서 UVB로 유도한 11β-HSD1의 발현 증가를 현저히 억제함을 확인하였다.
이상의 결과를 종합해 보면, 먼저 능실 M 및 그 분획물의 광노화 억제 효과에 대한 차이는 능실 M에서 가장 좋은 효과를 보인 것으로 판단된다. 능실 M은 자외선에 의한 다양한 광노화 반응에서 그 효과가 일관적이고, 가장 높은 효능을 보인 결과가 많았다. 이어 11β-HSD1의 발현을 조절하는 효과가 높은 능실 M, EA, nB는MMP-1, 3, 9의 발현을 조절하는 효과와 잘 일치하였고, 11β-HSD1의 조절 효과가 미약한 능실 MC는 염증성 사이토카인인 IL-6 및 IL-8의 조절 효과가 높았다.
다만, 능실 MC는 MMP-1및 type 1 procollagen의 단백질 발현 조절 효과가 뚜렷하지 않거나 미약한 것으로 나타나, 11β-HSD1의 단백질 조절 효과와 거의 일치하는 경향을 보였다.
이어 자외선으로 11β-HSD1의 발현을 유도한 경우에 능실 M, EA, nB는 mRNA 및 단백질 수준 모두에서 효과적으로 억제한 반면, 능실 MC는 그 효과가 제한적이거나 미약한 것으로 추론되었다. 다음으로 대표적인 광노화 반응인 MMPs와 procollagen 발현에 주는 영향을 확인한 결과, 능실 M,MC, EA, nB는 모두 자외선에 의한 MMP-1, 3, 9의 증가를 유의하게 억제시킴과 동시에 type 1 procollagen의 생성 저해를 회복시켰다. 다만, 능실 MC는 MMP-1및 type 1 procollagen의 단백질 발현 조절 효과가 뚜렷하지 않거나 미약한 것으로 나타나, 11β-HSD1의 단백질 조절 효과와 거의 일치하는 경향을 보였다.
따라서, 자외선이 11β-HSD1의 발현에 직접적으로 영향을 미친다는 것을 알 수 있으며, 본 저자 등은 광노화의 새로운 원인으로서 11β-HSD1의 증가에 주목하였다.
또한, 11β-HSD1 KO 마우스에서는 노화에 따른 진피의 콜라겐 감소가 나타나지 않았고, 상처 후 회복 속도도 매우 빨랐다.
먼저 섬유아세포에 대한 영향을 평가한 결과, 능실 M, MC, EA, nB는 모두 세포 독성 없이 섬유아세포를활성화시키고, 자외선에 의해 감소된 세포 활성을 회복시킴을 보였다. 이어 자외선으로 11β-HSD1의 발현을 유도한 경우에 능실 M, EA, nB는 mRNA 및 단백질 수준 모두에서 효과적으로 억제한 반면, 능실 MC는 그 효과가 제한적이거나 미약한 것으로 추론되었다.
섬유아세포에 대한 UVB 조사가 11β-HSD1의 mRNA 및 단백질 모두 유의하게 증가시킴을 확인하였다.
아울러 11β-HSD1의 조절이 피부 광노화에 대한 새로운 타겟이 될 수 있음을 확인하였다.
다만, 능실MC에서 가장 높은 효과를 보여, 앞서 11β-HSD1 및MMPs에 대한 결과와는 다른 경향을 보였다. 이상의 결과를 종합해 보면, 먼저 능실 M 및 그 분획물의 광노화 억제 효과에 대한 차이는 능실 M에서 가장 좋은 효과를 보인 것으로 판단된다. 능실 M은 자외선에 의한 다양한 광노화 반응에서 그 효과가 일관적이고, 가장 높은 효능을 보인 결과가 많았다.
이상의 결과를 통해 능실 추출물 및 분획물은 11β-HSD1의 발현을 억제함과 동시에 자외선에 의한 광노화 반응을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다.
이어 11β-HSD1의 발현을 조절하는 효과가 높은 능실 M, EA, nB는MMP-1, 3, 9의 발현을 조절하는 효과와 잘 일치하였고, 11β-HSD1의 조절 효과가 미약한 능실 MC는 염증성 사이토카인인 IL-6 및 IL-8의 조절 효과가 높았다.
UVB를 조사하지 않고 능실 M, MC, EA, nB를 섬유아세포에 처리한 경우에 처리 농도 1, 10 µg/mL에 대해서 어떠한 세포 독성을 나타내지 않았으며, 오히려 농도 의존적으로 섬유아세포의 증식을 활성화시켰다(Figure 1a). 이어 UVB를 조사한 후 능실 M, MC, EA, nB를 처리하였을 때, 모든 시료에서 UVB에 의해 감소된 세포 활성이 정상적인 수준으로 다시 회복됨을 보였다(Figure 1b).
이어 각 시료 별로 10 µg/mL의 농도로 24 h 처리하였을 때, 11β-HSD1의 mRNA 수준에서는 모든 시료에서, 72 h 처리하였을 때 단백질 수준에서는 능실 MC를 제외한 시료에서 자외선에 의한 발현 증가를 현저히 억제시킴을 보였다(Figure 2a, b).
이어 자외선으로 11β-HSD1의 발현을 유도한 경우에 능실 M, EA, nB는 mRNA 및 단백질 수준 모두에서 효과적으로 억제한 반면, 능실 MC는 그 효과가 제한적이거나 미약한 것으로 추론되었다.
특히, 능실 M에서 11β-HSD1 발현 억제 효과가 높게 나타났다.

후속연구

따라서, 새로운 항노화 기전으로 11β-HSD1을 타겟으로 한 소재는 염증성 사이토카인 보다는 MMPs발현 조절과 밀접한 관련이 있는 것으로 추론된다. 다만, 보다 정확한 분자 기전에 대해서는 추가 연구가 필요하다.
아울러 11β-HSD1의 조절이 피부 광노화에 대한 새로운 타겟이 될 수 있음을 확인하였다. 따라서, 능실 추출물 및 분획물은 11β-HSD1 조절을 통해 피부 광노화를 억제하는 기능성 소재로서 활용 가능성이 높다고 생각된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	주름이 생기는 주요 원인은 무엇인가?	피부 노화의 가장 두드러진 특징 중 하나는 주름 생성이다. 주름이 생기는 주요 원인으로는 진피층에 존재하는 콜라겐의 감소 또는 생성 억제에 있다[4,5]. 이중 새로 만들어지는 콜라겐이 없다는 사실은 진피의 구조와 형태유지에 중요하고 피부에 단단한 강도를 제공하는 콜라겐 섬유를 정상 수준으로 유지할 수 없다는 것을 의미한다.
	광노화는 무엇인가?	자연적으로 노화된 피부의 특징으로는 잔주름, 창백한 피부색, 피부건조증, 경미한 탄력감소 등으로 설명될 수 있다[1]. 광노화란 햇빛에 항상 노출되는 얼굴, 목, 손등, 팔의 피부에서 관찰되는 노화 현상을 말한다. 광노화된 피부는 자연적으로 노화된 피부에 비하여 주름살이 굵고,깊고, 그 수가 많으며, 잔주름도 많이 발생한다.
	내인성 노화로 인해 변화된 피부가 가진 특징은 무엇인가?	자연노화는 햇빛에 노출되지 않은 피부에서 관찰되는 노화 현상으로 세월이 흘러감에 따라 피할 수 없으며 내인성 노화라고도 한다[1]. 자연적으로 노화된 피부의 특징으로는 잔주름, 창백한 피부색, 피부건조증, 경미한 탄력감소 등으로 설명될 수 있다[1]. 광노화란 햇빛에 항상 노출되는 얼굴, 목, 손등, 팔의 피부에서 관찰되는 노화 현상을 말한다.

참고문헌 (21)

G. Rhie, M. H. Shin, J. Y. Seo, W. W. Choi, K. H. Cho, K. H. Kim, K. C. Park, H. C. Eun, and J. H. Chung, Aging- and photoaging-dependent changes of enzymic and noenzyme antioxidants in the epidermis and dermis of human skin in vivo, J. Invest. Dermatol., 117(5), 1212 (2001).

상세보기
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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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