[논문]추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능

전지민; 유대성; 천종우; 권순식; 전소하; 박수남

doi:10.15230/scsk.2014.40.1.109

추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능
Anti-aging Effect of Inula britannica var. chinensis Flower Extract According to the Extraction Temperature 원문보기

大韓化粧品學會誌 = Journal of the society of cosmetic scientists of Korea, v.40 no.1, 2014년, pp.109 - 120

전지민 ((주)에이씨티 기술연구소) , 유대성 ((주)에이씨티 기술연구소) , 천종우 ((주)에이씨티 기술연구소) , 권순식 (서울과학기술대학교 정밀화학과, 화장품종합기술연구소) , 전소하 (서울과학기술대학교 정밀화학과, 화장품종합기술연구소) , 박수남 (서울과학기술대학교 정밀화학과, 화장품종합기술연구소)

초록
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본 연구에서는 추출 온도에 따른 금불초 꽃(I. britannica var. chinensis) 추출물의 항노화 효능을 알아 보았다. 추출 온도에 따른 세포독성을 살펴본 결과, 상온, $45^{\circ}C$와 $65^{\circ}C$ 추출물 모두 0.1% 이하의 농도에서 세포독성이 관찰되지 않았다. 0.1% 이하의 농도에서 항노화 효능평가를 수행한 결과, 0.1% 농도의 상온 추출물 경우에 멜라닌 생성 억제율은 24.5%로 $45^{\circ}C$와 $65^{\circ}C$ 추출물과 비교하여 멜라닌 생성 억제율이 큰 것으로 나타났다. 0.1% 농도의 상온 추출물을 처리한 세포의 히알루론산 합성 관련 유전자 HAS-1, HAS-2 및 HAS-3의 발현율은 각각 123.3%, 137.8% 및 133.2%를 나타냈으며, 이는 비교물질인 L-ascorbic acid (115.6%, 121.0% 및 131.4%) 경우 보다 약간 크게 나타났다. 금불초 꽃 45 $^{\circ}C$ 추출물의 경우, 0.1%의 농도에서 염증유발 유전자인 TNF-${\alpha}$, COX-2 및 IL-1${\alpha}$의 발현율이 대조군 대비 각각 30.3%, 12.8%, 25.7%로 감소하였으며, 이는 상온, $65^{\circ}C$ 추출물과 비교하여 염증유발 유전자 발현 억제 효과가 더 큰 것으로 나타났다. 이상의 결과들로 볼 때, 금불초 꽃 추출물은 추출 온도에 따라 멜라닌 생성 억제, 히알루론산 합성 관련 유전자 발현 증가 효과, 염증유발 유전자 발현 억제 효과를 나타내며, 그로 인하여 피부에서 미백, 보습, 항염 효능을 통해 피부 항노화 효능을 가질 것으로 사료된다. 이는 금불초 추출물이 항노화 화장품 원료로서 응용 가능성이 있음을 시사한다.

Abstract ▼ AI-Helper

In this study, the extracts of Inula britannica var. chinensis (I. britannica) flower were extracted at three different temperatures (room temperature, $45^{\circ}C$, and $65^{\circ}C$) and their anti-aging effects were studied. Before investigating anti-aging effects of the extracts, their cytotoxicity was tested on B16F10, Hs683, and HaCaT cells. All extracts showed no cytotoxicity at the concentration less than 0.1% (v/v). Melanin synthesis inhibitory activities in B16F10 cells and reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) in Hs683 and HaCaT cells were used to see their anti-aging effects. The room temperature extract at 0.1% showed 24.5% melanin synthesis inhibition, which was better than the $45^{\circ}C$ and $65^{\circ}C$ extracts. In addition, expression rates of the room temperature extract at 0.1% on HAS-1, HAS-2, and HAS-3 related to hyaluronan synthase genes were 123.3%, 137.8%, 133.2%, respectively. which were higher than reference material of L-ascorbic acid. Expression rates of the $45^{\circ}C$ extract at 0.1% on TNF-${\alpha}$, COX-2, and IL-$1{\alpha}$, which are inflammatory related genes, was suppressed to 30.3%, 12.8%, 25.7%, respectively. It was better in anti-in flammatory effect than the room temperature and $65^{\circ}C$ extracts. As results, we showed that I. britannica var. chinensis flower extarcts decreased melanin production and expression of inflammatory related genes and increased the expression rate of hyaluronan synthase genes. Thus, it is believed that the extracts affect anti-aging effects of skin through whitening, moisturizing, and anti-inflammatory processes and could be applicable to cosmetics as a functional cosmetic ingredient.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이어 금불초 꽃 추출물 함유 크림을 제조한 후 크림의 안정성 및 인체 시험을 수행하여 화장품에 금불초 꽃 추출물의 응용 가능성을 제시하였다[26]. 또한 금불초 꽃 추출물을 화장품 원료로 개발하기 위해서 최근 금불초 종(種) 및 개화시기에 따른 항산화 효능과 최적 추출조건을 확립하였다. 그 결과 추출용매는 에탄올, 추출온도는 65℃와, 만개한 금불초(I.
본 연구에서는 추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능을 세포 및 유전자 수준에서 검토하고자 하였다. 미백, 보습, 항염 효능 평가 전에 세포 수준에서 금불초 꽃 추출물의 세포독성을 조사하고 실험에 필요한 추출물의 농도를 결정하였다.
본 연구에서는 추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능을 알아보기 위하여 세포독성, 멜라닌 생성 저해율, 콜라젠과 히알루론산 합성 관련 유전자 및 염증유발 유전자의 발현을 측정하였다.
멜라닌 생성 저해율, 콜라젠과 히알루론산 합성 관련 유전자 및 염증유발 유전자의 발현에 온도별 추출 조건에 따른 금불초 추출물이 어떠한 영향을 미치는지를 평가하였다. 이를 통해 궁극적으로 금불초 꽃 추출물의 최적 추출 조건을 확립하였고 또한 금불초 꽃 추출물이 세포 및 유전자 수준에서 항노화 효능을 갖는 기능성 화장품 소재로서 응용 가능성이 있음을 알았기에 이를 보고하고자 한다.

제안 방법

각 유전자들의 primer 서열은 Table 1과 같다. PCR에 의하여 생성된 산물은 1% agarose gel에서 전기영동 하여 image analyzer로 확인하였으며 각 band의 intensity는 Densitometric program (Gene Tools, Syngene, UK)을 이용하여 측정하였다.
PCR은 cDNA로부터 COL1A1 (Procollagen type I), MMP-1 (Matrix metalloproteinase-1)과 MMP-2 유전자를 증폭하기 위하여 cDNA 3 μL, 10X buffer [10 mM Tris - HCl (pH 8.8), (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4] 5 μL, 2.5 mM dNTP 2 μL, 10 pmol primer 각각 2 μL, taq polymerase 0.5 μL를 혼합하고 증류수를 더하여 50 μL로 조정하였다.
배양 후 배지를 제거하고 금불초 꽃 추출물을 적정 농도에 맞도록 희석액을 처리하여 24 h 배양한 후에 Trizol reagent(Invitrogen, USA)를 사용하여 total RNA를 추출하였다. RNA의 순도와 무결성은 A260/A280비율 측정을 통해 확인하였고, RNA 수득률은 260 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. cDNA합성은 3 μg의 total RNA를 Oligo dT 15 (500 ng/μL) primer, dNTP (10 mM), RTase inhibitor (40 units/μL), Powerscript Ⅱ RTase (Clontech, USA)를 첨가하여 25℃에서 10 min 간 primer annealing, 42℃에서 60 min간 cDNA를 합성하고 95℃에서 5 min간 RTase denaturation 시켰다.
cDNA합성은 3 μg의 total RNA를 Oligo dT 15 (500 ng/μL) primer, dNTP (10 mM), RTase inhibitor (40 units/μL), Powerscript Ⅱ RTase (Clontech, USA)를 첨가하여 25℃에서 10 min 간 primer annealing, 42℃에서 60 min간 cDNA를 합성하고 95℃에서 5 min간 RTase denaturation 시켰다.
하에서 24 h 동안 배양하였다. 다음날 세포의 배양 배지를 제거하고 금불초 꽃 추출물을 적정 농도에 맞도록 희석한 희석액을 처리하여 24 h 배양한 후에 세포를 수거하여 용해, 건조시키고 1N NaOH 용액에 멜라닌을 용해시켜 400 nm에서 흡광도를 측정하였다.
미백, 보습, 항염 효능 평가 전에 세포 수준에서 금불초 꽃 추출물의 세포독성을 조사하고 실험에 필요한 추출물의 농도를 결정하였다. 멜라닌 생성 저해율, 콜라젠과 히알루론산 합성 관련 유전자 및 염증유발 유전자의 발현에 온도별 추출 조건에 따른 금불초 추출물이 어떠한 영향을 미치는지를 평가하였다. 이를 통해 궁극적으로 금불초 꽃 추출물의 최적 추출 조건을 확립하였고 또한 금불초 꽃 추출물이 세포 및 유전자 수준에서 항노화 효능을 갖는 기능성 화장품 소재로서 응용 가능성이 있음을 알았기에 이를 보고하고자 한다.
미백 효능 평가를 위한 B16F10 (mouse melanoma) 세포주, 주름개선 및 보습 효능 평가를 위한 Hs683 (human fibroblast) 세포주, 항염 효능평가를 위한 HaCaT 세포주(human keratinocyte)를 각 well에 1 × 105 cells/well의 농도로 분주한 후 37℃, 5% CO2하에서 24 h 동안 배양하였다.
본 연구에서는 추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능을 세포 및 유전자 수준에서 검토하고자 하였다. 미백, 보습, 항염 효능 평가 전에 세포 수준에서 금불초 꽃 추출물의 세포독성을 조사하고 실험에 필요한 추출물의 농도를 결정하였다. 멜라닌 생성 저해율, 콜라젠과 히알루론산 합성 관련 유전자 및 염증유발 유전자의 발현에 온도별 추출 조건에 따른 금불초 추출물이 어떠한 영향을 미치는지를 평가하였다.
Hs683 세포를 6 well plate에 각 5×10⁵ cells/well의 농도로 분주한 후, 37℃, 5% CO₂하에서 24 h 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 금불초 꽃 추출물을 적정 농도에 맞도록 희석액을 처리하여 24 h 배양한 후에 Trizol reagent(Invitrogen, USA)를 사용하여 total RNA를 추출하였다. RNA의 순도와 무결성은 A260/A280비율 측정을 통해 확인하였고, RNA 수득률은 260 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.
보습 효능 평가는 주름개선 효능 평가와 동일한 방법으로 Hs683 세포에서 RT-PCR 기법을 이용하여 보습 관련 유전자의 발현 양을 확인하였으며, 각 유전자들의 primer 서열은 Table 2와 같다.
본 연구에 앞서 저자들은 금불초 꽃 추출물의 피부 상재균에 대한 항균 및 항산화활성을 측정하였다. 실험결과 추출물 중 에틸아세테이트 분획이 여드름균에 대한 항균 및 총항산화능에 있어서 큰 활성을 나타냄을 확인한 바 있다[22].
또한 각 세포주에 대한 독성평가 결과, 사람유래의 Hs683 세포와 HaCaT 세포의 경우 세포 생존율의 감소가 모두 비슷한 수준으로 나타났으며, 마우스유래의 B16F10 세포의 경우에는 금불초 꽃 추출물의 농도가 2% 이상인 경우에 급격하게 세포 생존율이 감소하였다. 상온, 45℃와 65℃ 추출물은 모두 0.1% 이하의 농도에서 온도와 세포주에 대한 독성이 없는 것으로 나타났기 때문에 항노화 효능 평가는 0.1% 이하의 농도로 수행하였다.
만개한 금불초의 꽃을 상온에서 자연 건조 72 h 후 추출에 사용하였다. 이전 연구의 추출조건을 참조하여 에탄올을 추출용매로 사용하였고[25], 상온, 45℃ 와 65℃에서 4 h 동안 추출하였다. 추출 후 여액을 항노화 효능 평가에 이용하였다.
추출 온도별 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능 평가를 위하여 각 효능 평가에 사용되는 세포주에 대한 세포독성 평가를 수행하였고, 이에 대한 결과는 Figure 1과 같다. 상온, 45℃와 65℃ 추출물 모두 추출 온도와 추출물의 농도가 증가함에 따라 세포 생존율이 감소하는 경향을 나타내었다.
추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 보습 효능 평가를 위하여 주름개선 효능 평가와 동일한 방법으로 Hs683 세포에서 RT-PCR 수행을 통해 히알루론산 합성 관련 유전자 발현을 측정하였다. 보습효능에 대한 비교물질로는 주름개선 효능과 마찬가지로 항노화 효능이 우수한 것으로 알려져 있는 L-ascorbic acid를 사용하였다.
추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 주름개선 효능 평가를 위하여 Hs683 세포에서 RT-PCR 수행을 통해 콜라겐 합성 관련 유전자 발현을 측정하였다. 주름 개선 효능에 있어서 비교물질로는 강력한 항산화 작용 및 콜라젠 합성으로 항노화 효능이 우수한 것으로 알려져 있는 L-ascorbic acid를 사용하였다[28,29].
추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항염 효능 평가를 위하여 주름개선 및 보습 효능 평가와 동일한 방법으로 HaCaT 세포에서 RT-PCR을 수행하여 염증유발 관련 유전자 발현을 측정하였다. 염증 효능에 대한 비교물질로는 항염 효능이 우수한 것으로 알려져 있는 D-panthenol을 사용하였고[30], 이에 대한 결과는 Figure 5와 같다.
이전 연구의 추출조건을 참조하여 에탄올을 추출용매로 사용하였고[25], 상온, 45℃ 와 65℃에서 4 h 동안 추출하였다. 추출 후 여액을 항노화 효능 평가에 이용하였다.
콜라젠의 합성과 관련된 유전자 발현은 primer를 이용하여 RT-PCR로 측정하였다. Hs683 세포를 6 well plate에 각 5×10⁵ cells/well의 농도로 분주한 후, 37℃, 5% CO₂하에서 24 h 동안 배양하였다.
항염 효능 평가는 HaCaT 세포에서 주름개선 및 보습 효능 평가와 동일한 방법으로 RT-PCR 기법을 이용하여 염증 관련 유전자의 발현 양을 확인하였으며, 각 유전자들의 primer 서열은 Table 3과 같다.

대상 데이터

Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), β-arbutin 및 L-ascorbic acid 는 Sigma (USA)로부터 구입하여 사용하였고, 추출 및 분획용 용매는 모두 특급시약을 사용하였다.
만개한 금불초의 꽃을 상온에서 자연 건조 72 h 후 추출에 사용하였다. 이전 연구의 추출조건을 참조하여 에탄올을 추출용매로 사용하였고[25], 상온, 45℃ 와 65℃에서 4 h 동안 추출하였다.
추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 보습 효능 평가를 위하여 주름개선 효능 평가와 동일한 방법으로 Hs683 세포에서 RT-PCR 수행을 통해 히알루론산 합성 관련 유전자 발현을 측정하였다. 보습효능에 대한 비교물질로는 주름개선 효능과 마찬가지로 항노화 효능이 우수한 것으로 알려져 있는 L-ascorbic acid를 사용하였다. Figure 4에서와 같이, 상온 추출물의 경우, 농도 증가와 함께 히알루론산 합성 관련 유전자인 HAS-1, HAS-2와 HAS-3 모두의 발현을 증가시키는 것으로 나타났으며, L-ascorbic acid와 비슷한 수준의 발현 증가를 보였다.
본 연구에 사용한 금불초는 봉양야생화(충북 제천시 신월동 205-2)로부터 재배된 것으로 사용하였고, 상온에서 자연건조 72 h 후 추출하였다. Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), β-arbutin 및 L-ascorbic acid 는 Sigma (USA)로부터 구입하여 사용하였고, 추출 및 분획용 용매는 모두 특급시약을 사용하였다.
사람 섬유아세포주(human fibroblast cell line, Hs683)와 마우스 유래 멜라닌 세포주(mouse melanoma, B16F10)는 Korean Cell Line Bank (KCLB, Korea)에서 분양 받았으며, 사람 각질형성 세포주(human keratinocyte cell line, HaCaT)는 Fusenig 박사(German Cancer Research Center, DKFZ, Heidelberg, Germany)로부터 분양 받아 사용하였다. 이를 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS, Gibco, USA), 100 U/mL의 streptomycin, 100 U/mL의 penicillin 항생제(Gibco, USA)가 포함된 Dulbeco’s modified eagle’s medium (DMEM, Gibco, USA)배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 조건의 세포 배양기에서 배양하였다.
추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 항염 효능 평가를 위하여 주름개선 및 보습 효능 평가와 동일한 방법으로 HaCaT 세포에서 RT-PCR을 수행하여 염증유발 관련 유전자 발현을 측정하였다. 염증 효능에 대한 비교물질로는 항염 효능이 우수한 것으로 알려져 있는 D-panthenol을 사용하였고[30], 이에 대한 결과는 Figure 5와 같다. 상온 추출물과 65℃ 추출물의 경우에는 염증유발 관련 유전자인 TNF-α, COX-2와 IL-1α 모두의 발현에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

데이터처리

실험결과는 각 군의 t-test를 실시하여 대조군과 실험군 간 유의성 여부를 가설평균 차 5% (p < 0.05)로 하여 p-value가 0.05 이하인 경우 통계적으로 유의한 차이가 없는 것으로 해석하였다.

성능/효과

1) 추출 온도별 세포독성 평가 결과 B16F10, Hs683, HaCaT 세포 모두 0.1%의 농도에서 세포독성이 없는 것으로 나타나 0.1% 이하의 농도에서 각 세포를 이용한 효능 평가를 수행하였다.
2) 추출 온도에 따른 금불초 꽃 추출물의 멜라닌 생성 저해율 평가 결과, 0.1% 농도의 상온 추출물에서 멜라닌 생성 저해율이 24.47%로 45℃, 65℃ 추출물보다 높은 것으로 나타나 멜라닌 생성을 저해하여 미백 효능이 있을 것으로 사료되며, 미백 효능은 상온추출물의 경우가 가장 우수할 것으로 사료된다.
3) 콜라겐 합성 관련 유전자의 발현 측정 결과, 45℃와 65℃ 추출물의 경우에는 COL1A1, MMP-1와 MMP-2 유전자 모두 발현에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났고, 상온 추출물의 경우에는 0.1%의 농도에서 MMP-1 유전자 발현율이 71.3%로 대조군 대비 28.7% 감소되는 것으로 나타났으나 COL1A1과 MMP-2유전자의 발현에는 영향을 미치지 않았다. 또한 L-ascorbic acid와 비교하여 콜라겐 합성 관련 유전자의 발현에 미치는 영향이 미미한 것으로 나타났다.
4) 히알루론산 합성 관련 유전자 발현 측정 결과, 상온 추출물의 경우에서만 농도 의존적으로 HAS-1, HAS-2와 HAS-3 유전자 모두 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 상온 추출물 0.
45℃ 추출물 0.1%의 농도에서 TNF-α, COX-2와 IL-1α의 발현율은 각각 69.7%, 87.2%, 74.3%로 나타났고, D-panthenol은 71.2%, 103.1%, 61.3%로 나타나 염증유발 유전자의 발현을 억제하여 항염 효능이 있을 것으로 사료되며, 45℃ 추출물의 경우 가장 우수한 항염 효능 나타낼 것으로 사료된다.
45℃ 추출물의 경우에는 농도가 증가함에 따라 TNF-α, COX-2와 IL-1α 모두의 발현을 감소시키는 것으로 나타났고, 비교물질인 D-panthenol과 비슷한 수준의 발현 감소를 보였다.
Figure 4에서와 같이, 상온 추출물의 경우, 농도 증가와 함께 히알루론산 합성 관련 유전자인 HAS-1, HAS-2와 HAS-3 모두의 발현을 증가시키는 것으로 나타났으며, L-ascorbic acid와 비슷한 수준의 발현 증가를 보였다. 45℃ 추출물의 경우에는 농도가 증가함에 따라 오히려 HA1-1 유전자의 발현을 감소시키는 것으로 나타났고, HAS-2과 HAS-3 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 또한 65℃ 추출물의 경우에는 농도가 증가함에 따라 HAS-2유전자의 발현을 증가시키고, HAS-1과 HAS-3 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
Figure 3에서와 같이, 상온 추출물의 경우는 농도가 증가함에 따라 MMP-1 유전자의 발현을 감소시키는 것으로 나타났으나 COL1A1과 MMP-2 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 45℃, 65℃ 추출물의 경우는 모두 COL1A1, MMP-1와 MMP-2 유전자 발현에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 그러나 상온, 45℃와 65℃ 추출물들은 L-ascorbic acid와 비교하여 콜라젠 합성 관련 유전자의 발현에 미치는 영향은 미미한 것으로 나타났다.
5) 염증유발 유전자 발현 측정 결과, 45℃ 추출물의 경우에서만 농도 의존적으로 TNF-α, COX-2와 IL-1α 유전자 모두 발현을 감소시키는 것으로 나타났다.
또한 금불초 꽃 추출물을 화장품 원료로 개발하기 위해서 최근 금불초 종(種) 및 개화시기에 따른 항산화 효능과 최적 추출조건을 확립하였다. 그 결과 추출용매는 에탄올, 추출온도는 65℃와, 만개한 금불초(I. britannica) 꽃 추출물을 이용하는 경우가 free radical 소거활성과 활성산소로 유도된 세포 손상에 대하여 세포를 보호하는 효과가 가장 우수한 최적의 추출 조건임을 확인하였다[25].
따라서, 추출 온도에 따른 금불초 꽃의 항노화 효능을 평가한 결과, 상온 추출물의 경우 미백, 보습 효능이 우수한 것으로 나타났고, 45℃ 추출물의 경우에는 항염 효능이 우수한 것으로 나타났다. 65℃ 추출물의 경우에는 앞서 밝힌 이전의 연구결과 항산화 효능이 가장 우수한 것으로 나타났다.
45℃ 추출물의 경우에는 농도가 증가함에 따라 오히려 HA1-1 유전자의 발현을 감소시키는 것으로 나타났고, HAS-2과 HAS-3 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 또한 65℃ 추출물의 경우에는 농도가 증가함에 따라 HAS-2유전자의 발현을 증가시키고, HAS-1과 HAS-3 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
7% 감소되는 것으로 나타났으나 COL1A1과 MMP-2유전자의 발현에는 영향을 미치지 않았다. 또한 L-ascorbic acid와 비교하여 콜라겐 합성 관련 유전자의 발현에 미치는 영향이 미미한 것으로 나타났다. 이에 따라 금불초 꽃 추출물은 콜라젠 합성 유전자 발현 촉진에 의한 주름개선 효능은 없을 것으로 사료된다.
상온, 45℃와 65℃ 추출물 모두 추출 온도와 추출물의 농도가 증가함에 따라 세포 생존율이 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 각 세포주에 대한 독성평가 결과, 사람유래의 Hs683 세포와 HaCaT 세포의 경우 세포 생존율의 감소가 모두 비슷한 수준으로 나타났으며, 마우스유래의 B16F10 세포의 경우에는 금불초 꽃 추출물의 농도가 2% 이상인 경우에 급격하게 세포 생존율이 감소하였다. 상온, 45℃와 65℃ 추출물은 모두 0.
65℃ 추출물의 경우에는 앞서 밝힌 이전의 연구결과 항산화 효능이 가장 우수한 것으로 나타났다. 상기 결과를 통해 금불초 꽃 추출물은 추출 온도에 따라서 나타나는 항노화 효능이 각기 다름을 알 수 있었다. 따라서 금불초 꽃 추출물은 목적하는 효능에 따라 추출 온도를 달리하여 사용한다면 항노화 화장품 소재로서 다양한 활용이 가능할 것으로 기대한다.
4) 히알루론산 합성 관련 유전자 발현 측정 결과, 상온 추출물의 경우에서만 농도 의존적으로 HAS-1, HAS-2와 HAS-3 유전자 모두 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 상온 추출물 0.1%의 농도에서 HAS-1, HAS-2와 HAS-3의 발현율은 각각 123.3%, 137.8%, 133.2%로 L-ascorbic acid 115.6%, 121.0%, 131.4%보다 높았고, 이에 따라 금불초 꽃 추출물은 히알루론산 합성 관련 유전자 발현 증가로 인한 보습 효능이 있을 것으로 사료되며, 상온 추출물의 경우 보습 효능이 가장 우수할 것으로 사료된다.
상온 추출물과 65℃ 추출물의 경우에는 염증유발 관련 유전자인 TNF-α, COX-2와 IL-1α 모두의 발현에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
추출 온도별 금불초 꽃 추출물의 항노화 효능 평가를 위하여 각 효능 평가에 사용되는 세포주에 대한 세포독성 평가를 수행하였고, 이에 대한 결과는 Figure 1과 같다. 상온, 45℃와 65℃ 추출물 모두 추출 온도와 추출물의 농도가 증가함에 따라 세포 생존율이 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 각 세포주에 대한 독성평가 결과, 사람유래의 Hs683 세포와 HaCaT 세포의 경우 세포 생존율의 감소가 모두 비슷한 수준으로 나타났으며, 마우스유래의 B16F10 세포의 경우에는 금불초 꽃 추출물의 농도가 2% 이상인 경우에 급격하게 세포 생존율이 감소하였다.

후속연구

상기 결과를 통해 금불초 꽃 추출물은 추출 온도에 따라서 나타나는 항노화 효능이 각기 다름을 알 수 있었다. 따라서 금불초 꽃 추출물은 목적하는 효능에 따라 추출 온도를 달리하여 사용한다면 항노화 화장품 소재로서 다양한 활용이 가능할 것으로 기대한다.
따라서, 금불초 꽃 추출물은 추출 온도에 따라서 미백, 보습, 항염, 항산화 효능과 같은 다양한 항노화 효능을 가지며 이는 금불초 활성성분 중 플라보노이드에 기인한 것으로 사료된다. 이에 향후 추출 온도에 따른 금불초 꽃의 활성 성분 확인에 대한 연구가 필요하다고 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	피부는 어떤 역할을 하는가?	피부는 전신을 둘러싸며 외부로부터 여러 가지 자극 및 장해, 혹은 건조로부터 생체를 보호하는 역할을 하고 있다. 몇 가지 내인적 및 외인적 인자들이 복잡한 피부 노화 현상에 기여하고 있다.
	산화적 스트레스는 구체적으로 피부에 어떤 악영향을 주는가?	결과적으로 산화적 스트레스는 피부 세포 및 성분들의 손상을 유발한다. 특히 피부 진피층의 결합조직인 콜라젠 및 엘라스틴 섬유의 절단 및 비정상적인 교차결합, 세포 외 매트릭스 구성 성분들의 함량 감소뿐만 아니라 피부 면역 세포인 랑게르한스 세포의 감소 및 섬유 단백질과 히아루론산(hyaluronic acid, HA)과 같은 글라이코사미노글라이칸(glycosaminoglycan, GAG) 등의 세포 외 매트릭스 구성 성분들을 생성하는 섬유아세포의 능력 감소 등 심각한 손상이 발생한다. 히아루론산은 GAG의 중요한 성분으로서 피부조직의 수분 유지/보유 능력이 뛰어나며, 영양성분의 저장과 확산뿐만 아니라 세포의 분열, 분화 및 이동에도 관여한다[2-4].
	본 연구에서는 항염 효능 평가를 어떤 방식으로 하였는가?	항염 효능 평가는 HaCaT 세포에서 주름개선 및 보습 효능 평가와 동일한 방법으로 RT-PCR 기법을 이용하여 염증 관련 유전자의 발현 양을 확인하였으며, 각 유전자들의 primer 서열은 Table 3과 같다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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