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문제 정의
- 한의학에서 안질환 치료에 다용되어 온 약물은 黃連으로서, 黃連이 포함되어 있는 陳皮散, 洗眼湯, 湯泡散 등의 다종 처방들이 현재까지 각막염 원인균에 항균효과가 있는 것으로 보고되었다. 이에 본 연구에서는 점안약으로 이용할 수 있도록 고압멸균법으로 처리한 黃連解毒湯과 각각의 구성 약재 추출물을 가지고 각막염의 원인균인 Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis에 대한 항균효과를 측정하여 연구 결과를 보고하는 바이다.
제안 방법
- , Basingstoke, Hampshire, England)에 도말하였다. 검액은 원액과 50%, 10%, 1%로 희석한 것을 준비하여 멸균된 8 mm Paper disc(Advantec, Toyo Roshi Kaishi, Ltd., Japan)에 각 추출물을 70 μl씩 흡수시켜 피검균을 도말한 배지 위에 paper disc를 올려놓고 36 ℃에서 24시간 동안 배양한 후 disk 주위의 clear zone의 직경(mm)를 측정하여 항균력의 유무를 관찰하였다. 항균력 효과를 비교하기 위하여 퀴놀론계 항균점안제인 오페란 점안액(오플록사신 3 mg/ml, 국제약품)을 검액과 같은 농도로 실험하였다.
- 동일 농도에서 양에 따른 항균력 측정은 희석률에 따른 항균력 측정에서 항균력이 나타난 검액의 원액을 70~10 μl까지 양을 감소하면서 추출물의 희석률에 따른 항균력 측정과 동일한 방법으로 실험하면서 억제환의 크기를 비교하였다.
- 약재를 준비 하여 각질을 제거하고 황련, 황백, 황금, 치자를 각 20 g을 취해 합하여 80 g의 황련해독탕을 준비하고 따로 황련, 황백, 황금, 치자 각각 약재 80 g을 취하여 준비하였다. 취한 약재 80 g당 증류수 500 ml를 넣고 실온에서 12시간 동안 약재를 불린 후 고압멸균기(HV-85, Hirayama, Japan)에서 121 ℃ 30분간 추출하였다.
- 희석률에 따른 억제환 크기 비교 실험에서 각 추출물별로 항균력을 보인 최소희석농도의 검액을 가지고 70~10 μl까지 접종량을 달리하면서 억제환의 생성유무를 측정하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 약재들은 동신대학교 한방병원에서 사용하는 국내산 제품을 사용하였다. 약재는 잡질을 제거하고 형태가 완전한 것을 정선하여 사용하였다.
- 본 실험에 사용한 균주는 질병관리본부(KCDC)로 부터 분양받아 광주광역시 보건환경연구원에서 보관하고 있는 균주로 Table 1에 나타낸 바와 같이 3종의 균을 Trypic Soy Agar 및 Broth(Oxoid LTD., Basingstoke, Hampshire, England) 배지에 접종 incubator(IL-21A, JEIO TECH, Korea)에서 36±1℃에서 배양하였다.
이론/모형
- 희석률에 따른 최소 억제 농도 측정은 Disc diffusion method에 준하여 실험하였다. 항균력 측정은 0.
성능/효과
- 1. 황련해독탕, 황백, 치자 추출액은 70 μl 전 농도 및 원액의 70 μl, 50 μl, 30 μl, 10 μl의 농도에서 안질환 원인균인 S. aureus, S. epidermidis, E. faecalis 에 전혀 항균효과를 보이지 않았다.
- 3. 황금 추출액은 S. aureus, S. epidermidis에 대하여 최소억제농도는 원액 70 μl 전 농도에서만 항균 효과를 나타냈으며 E. faecalis 에는 전혀 항균효과를 보이지 않았다.
- E. faecalis 균에서는 모든 추출물에서 억제효과가 타나나지 않았으며, S. aureus균과 S. epidermidis 균에서는 황련해독탕, 황백, 치자는 70 μl 전 농도에서 억제효과가 타나나지 않았으나, 황련은 50% 농도 70 μl(S. aureus), 10% 농도 70 μl(S. epidermidis)에서, 황금은 100% 농도 70 μl에서 농도 의존적으로 억제효과를 보여 최소 성장 억제 농도 이상에서 항균력이 있음을 알 수 있었다.
- S. aureus 균에 대한 추출물 원액의 접종량에 따른 억제환의 크기 측정 결과 황련해독탕, 황백, 치자는 전 농도에서 억제효과가 타나나지 않았으며, 황련은 70 μl, 50 μl, 30 μl에서 황금은 70 μl에서 억제효과가 나타났다(Table 5).
- S. aureus 균에 대한 희석률에 따른 억제환의 크기 측정 결과 황련해독탕, 황백, 치자는 70 μl 전 농도에서 억제효과가 타나나지 않았으며, 황련은 70 μl 원액, 50% 희석액에서 황금은 70 μl원액에서 억제 효과가 나타났고 오페란 점안액은 전 농도에서 억제효과가 나타났다(Table 2, Fig. 1).
- S. epidermidis 균에 대한추출물 원액의 접종량에 따른 억제환의 크기 측정 결과 황련해독탕, 황백, 치자는 전 농도에서 억제효과가 타나나지 않았으며, 황련은 70 μl, 50 μl, 30 μl, 10 μl에서 황금은 70 μl에서 억제효과가 나타났다(Table 6).
- S. epidermidis 에 대한 희석률에 따른 억제환의 크기 측정 결과 황련해독탕, 황백, 치자는 70 μl 전 농도에서 억제효과가 타나나지 않았으며, 황련은 70 μl원액, 50%, 10% 희석액에서 황금은 70 μl원액에서 억제효과가 나타났고 오페란 점안액은 전 농도에서 억제효과가 나타났다(Table 3, Fig. 2).
- S. epidermidis에 대한 최소억제농도는 10% 농도 50 μl이고, 70 μl 전 농도 및 원액의 70 μl, 50 μl, 30 μl, 10 μl의 농도에서 농도 의존적으로 항균효과를 나타냈으며 E. faecalis 에는 전혀 항균효과를 보이지 않았다.
- 황련과 황금 추출액은 일부 농도에서 항균효과를 나타냈지만 복합처방인 황련해독탕이 항균효과를 보이지 않은 것을 고려할 때, 이는 황련해독탕의 구성성분 중 황련과 황금 추출액이 안질환 세균에 대해 항균력을 가지고 있다는 것을 알 수 있었다. 그러나 대조군으로 사용된 퀴놀론계 항균점안제는 저농도에서도 항균력을 보이는 것과 비교하여 황련과 황금 추출액은 고농도에서 항균력을 보이는 것으로 나타나 항균력을 유지하기 위해서는 고농도를 유지하여야 할 것으로 생각된다.
후속연구
- 이상의 결과로 황련해독탕과 그 구성 약재인 황련, 황백, 황금, 치자 중 황련 추출액은 일부 안질환 원인균 치료에 항생점안제의 대안으로 활용할 수 있을 것으로 생각되며, 치료에 효과적인 추출물의 사용법과 효과적인 추출방법에 대한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
- 이상의 결과를 볼 때 고압멸균 추출한 황련해독탕과 그 구성약물은 E. faecalis 균에 대하여 전혀 항균효과가 있지 않은 것으로 나타났으며, 농도 의존적으로 항균력을 갖는 것으로 나타나난 황련과 황금 추출액은 최 등10, 임 등27이 보고한 국내 안질환 원인균의 32%-38%를 차지하는 Staphylococcus species(S. aureus, S. epidermidis)균에 대하여는 점안제로 사용이 가능할 것으로 판단되나, 좀 더 다양한 안질환 원인 그람양⋅음성균에 대한 연구가 필요 하며 안질환 원인균 중 적정농도에 따른 항균효과에 대한 깊이 있는 연구와 다양한 추출방법에 따른 비교 연구가 필요 할 것으로 사료된다.
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