황련해독탕은 한방산업에서 염증관련 질환에 다빈도로 사용되는 처방이다. 본 연구의 목적은 전통적 한약인 황련해독탕의 항균활성을 확인하고 지표성분을 선정하는 것이다. 황련해독탕의 항균활성을 측정하기 위하여 디스크 확산법과 최소억제농도법을 사용하였다. 사용균주는 Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 23724였으며 대조군으로 oxacillin과 ciprofloxacin을 이용하여 황련해독탕의 항균활성을 확인하였다. 결과적으로 디스크 확산법에서는 S.aureus ATCC 25923에서 황련해독탕 20 mg과 10 mg은 $11.7{\pm}1.3mm$, $8.7{\pm}0.7mm$의 억제환을 형성하였으며 E.coli ATCC 23724에서는 황련해독탕 20 mg이 $8.0{\pm}0.0mm$의 억제환을 형성하였다. 최소억제농도는 S.aureus ATCC 25923가 31.25 mg/mL, E.coli ATCC 23724 에서는 125.0 mg/mL였다. 표준화를 위한 HPLC 정량분석 결과, 황련해독탕은 berberine을 16.55 mg/g 함유하고 있었으며 geniposide를 81.85 mg/g 함유하고 있었다. 천연물을 이용하여 항생제를 개발할 경우에는 내성세균을 억제하고 부작용을 줄일 수 있다는 장점이 있다. 이러한 점을 착안하여 지속적으로 연구를 진행한다면 한방산업과 더불어 여러 산업에서의 발전을 기대할 수 있을 것이다.
황련해독탕은 한방산업에서 염증관련 질환에 다빈도로 사용되는 처방이다. 본 연구의 목적은 전통적 한약인 황련해독탕의 항균활성을 확인하고 지표성분을 선정하는 것이다. 황련해독탕의 항균활성을 측정하기 위하여 디스크 확산법과 최소억제농도법을 사용하였다. 사용균주는 Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 23724였으며 대조군으로 oxacillin과 ciprofloxacin을 이용하여 황련해독탕의 항균활성을 확인하였다. 결과적으로 디스크 확산법에서는 S.aureus ATCC 25923에서 황련해독탕 20 mg과 10 mg은 $11.7{\pm}1.3mm$, $8.7{\pm}0.7mm$의 억제환을 형성하였으며 E.coli ATCC 23724에서는 황련해독탕 20 mg이 $8.0{\pm}0.0mm$의 억제환을 형성하였다. 최소억제농도는 S.aureus ATCC 25923가 31.25 mg/mL, E.coli ATCC 23724 에서는 125.0 mg/mL였다. 표준화를 위한 HPLC 정량분석 결과, 황련해독탕은 berberine을 16.55 mg/g 함유하고 있었으며 geniposide를 81.85 mg/g 함유하고 있었다. 천연물을 이용하여 항생제를 개발할 경우에는 내성세균을 억제하고 부작용을 줄일 수 있다는 장점이 있다. 이러한 점을 착안하여 지속적으로 연구를 진행한다면 한방산업과 더불어 여러 산업에서의 발전을 기대할 수 있을 것이다.
Hwangryunhaedok-tang (HT) is prescribed in oriental medicine to treat inflammation-related diseases. This study examined the anti-bacterial effect to select the index components of Traditional Chinese Medicine (TCM) HT. The disc diffusion method and minimum inhibition concentrations (MIC) tests were...
Hwangryunhaedok-tang (HT) is prescribed in oriental medicine to treat inflammation-related diseases. This study examined the anti-bacterial effect to select the index components of Traditional Chinese Medicine (TCM) HT. The disc diffusion method and minimum inhibition concentrations (MIC) tests were conducted to measure the antibacterial activity of HT. The strains were Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli 23724. Berberine and geniposide were selected as the index components of HT and were analyzed quantitatively by high-performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the inhibition ring was formed at $11.7{\pm}1.3mm$ and $8.7{\pm}0.7mm$ at HT 20 mg and 10 mg on S.aureus ATCC 25923, respectively; and $8.0{\pm}0.0mm$ at HT 20 mg on E.coli ATCC 23724. The MIC were 31.25 mg/mL in S.aureus ATCC 25923 and 125.0 mg/mL in E.coli ATCC 23724. In quantitative analysis for standardization, HT contained 16.55 mg/g of berberine and 81.85 mg/g of geniposide. Overall, when antibiotics are developed using natural products, they may reduce the side effects and inhibit resistant bacteria. If research on HT continuously proceeds, positive developments are expected to be made in oriental medicine as well as in various other industries.
Hwangryunhaedok-tang (HT) is prescribed in oriental medicine to treat inflammation-related diseases. This study examined the anti-bacterial effect to select the index components of Traditional Chinese Medicine (TCM) HT. The disc diffusion method and minimum inhibition concentrations (MIC) tests were conducted to measure the antibacterial activity of HT. The strains were Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli 23724. Berberine and geniposide were selected as the index components of HT and were analyzed quantitatively by high-performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the inhibition ring was formed at $11.7{\pm}1.3mm$ and $8.7{\pm}0.7mm$ at HT 20 mg and 10 mg on S.aureus ATCC 25923, respectively; and $8.0{\pm}0.0mm$ at HT 20 mg on E.coli ATCC 23724. The MIC were 31.25 mg/mL in S.aureus ATCC 25923 and 125.0 mg/mL in E.coli ATCC 23724. In quantitative analysis for standardization, HT contained 16.55 mg/g of berberine and 81.85 mg/g of geniposide. Overall, when antibiotics are developed using natural products, they may reduce the side effects and inhibit resistant bacteria. If research on HT continuously proceeds, positive developments are expected to be made in oriental medicine as well as in various other industries.
각각의 용액을 모두 분주 후 대상 균주를 희석한 용액을 100 uL씩 모두 분주한 후 18∼24시간 동안 배양시킨 후 육안으로 억제 농도를 측정하였다.
대조를 위해 oxacillin (Sigma- Aldrich, MS, USA) 1 ug과 ciprofloxacin (Sigma-Aldrich, MS, USA) 5 ug도 동일한 방법으로 디스크를 제작하였다. 배양 후 디스크 주변의 억제환 직경(mm)을 측정하였다. 이와 같은 실험은 3회 반복 시행하였다.
황련해독탕의 항균활성을 측정하기 위하여 디스크 확산법과 최소억제농 도법을 사용하였다. 사용균주는 Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 23724였으며 대조군으로 oxacillin과 ciprofloxacin을 이용하여 황련해독탕의 항균 활성을 확인하였다. 결과적으로 디스크 확산법에서는 S.
황련, 황백, 황금, 치자를 1:1:1:1의 비율로 총 300 g의 약재를 10배수의 70% EtOH로 3시간 환류추출 하였다. 여과 후 에탄올(EtOH)의 비율을 80%, 90%로 변경하면서 정제하였다. 최종 여액은 동결건조 한 후 실험시까지 냉동보관 하였다.
아무리 생리활성이 뛰어나다고 하여도 품질관리를 위한 표준화가 없다면 제품화는 쉽지 않다. 이에 본 연구에서는 황련해독탕의 지표성분으로 berberine과 geniposide 를 선정하여 정량분석조건을 확립하였다. Berberine은 황련의 대표적인 지표 성분으로 황련은 강한 항균 작용이 있다고 여러 연구에서 보고되었다.
본 연구에서 사용한 황련, 황금, 황백, 치자의 약재(Green Pharm, Namyangju, Korea)는 자체적으로 검증 후 사용하였다. 황련, 황백, 황금, 치자를 1:1:1:1의 비율로 총 300 g의 약재를 10배수의 70% EtOH로 3시간 환류추출 하였다. 여과 후 에탄올(EtOH)의 비율을 80%, 90%로 변경하면서 정제하였다.
황련해독탕의 최소억제농도를 알아보기 위하여 황련해독탕의 농도는 1 g/mL에서 2 fold dilution으로 계단 희석하였고, 대조군으로는 oxacillin과 ciprofloxacin을 동시에 실험 진행하였다. 황련해독탕의 MIC법 항균 실험 결과는 Table 2와 같이 S.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 가이드라인 M07-A10에 따라 대상균주를 Mueller Hinton agar (Becton Dickinson, USA)로 계대 배양한 후 incubator (Jeiotech, Daejeon, Korea)에서 18∼24시간 동안 35.5°C에서 배양하였다.
5 °C로 18∼24시간 동안 배양하였다. 대조를 위해 oxacillin (Sigma- Aldrich, MS, USA) 1 ug과 ciprofloxacin (Sigma-Aldrich, MS, USA) 5 ug도 동일한 방법으로 디스크를 제작하였다. 배양 후 디스크 주변의 억제환 직경(mm)을 측정하였다.
본 연구에서 사용한 황련, 황금, 황백, 치자의 약재(Green Pharm, Namyangju, Korea)는 자체적으로 검증 후 사용하였다. 황련, 황백, 황금, 치자를 1:1:1:1의 비율로 총 300 g의 약재를 10배수의 70% EtOH로 3시간 환류추출 하였다.
분석에 사용된 컬럼은 C18 ODS (25 cm*I.D 50 um, Agilent, CA, USA)이었고, 컬럼오븐은 berberine 은 40°C, geniposide는 35°C로 하였다.
5 McFatland 표준 값을 micro plate reader 625 nm로 측정 후 Mueller Hinton agar에 멸균된 면봉으로 고르게 spreading 하였다. 실험에 사용된 황련해독탕 원료는 동결건조를 통한 원료를 멸균수에 녹여 사용하였다. 디스크 확산법 진행 시 황련해독탕의 최종 농도는 20 mg/20 uL, 10 mg/20 uL 였다.
동결건조기(Ilshinbiobase, Yangju, Korea)는 Lyoph-Pride03 모델을 사용하였으며 감압농축기(Eyela, Tokyo, Japan)는 N-2110 모델을 사용하였다.
각 분석조건에서 이동상의 유속은 1 mL/min로 유지하였다. 이동상으로 사용된 Water (Honeywell, NJ, USA)는 HPLC Grade로 정량분석을 위한 HPLC (Shimadzu, Kyoto, Japan)는 LC-20A, CBM-20A, LC-20AT, SIL-20AC, CTO-20ACM, DGU-20A5R, SPD-M20A, LC-PDA 모델을 사용하였다.
본 연구의 목적은 전통적 한약인 황련해독탕의 항균활성을 확인하고 지표성분을 선정하는 것이다. 황련해독탕의 항균활성을 측정하기 위하여 디스크 확산법과 최소억제농 도법을 사용하였다. 사용균주는 Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 23724였으며 대조군으로 oxacillin과 ciprofloxacin을 이용하여 황련해독탕의 항균 활성을 확인하였다.
성능/효과
결과적으로 디스크 확산법에서는 S.aureus ATCC 25923에서 황련해독탕 20 mg과 10 mg은 11.7±1.3 mm, 8.7±0.7 mm의 억제환을 형성하였으며 E.coli ATCC 23724에서는 황련해독탕 20 mg이 8.0±0.0 mm의 억제환을 형성하였다.
그람양성알균에 사용되는 oxacillin 최소억제농도를 측정한 결과 S.aureus ATCC 25923 균주에서 0.5 ug/mL가 형성되었고 그람음성막대균에 사용되는 ciprofloxacin 최소억제농도를 측정한 결과 E.coli ATCC 23724 균주에서 0.5 ug/mL가 형성되었다.
디스크 확산법 실험의 경우 S.aureus ATCC 25923균주는 황련해독탕 1 g/mL의 농도에서 11.7±1.3 mm의 억제대를 보였고 0.5 g/mL의 농도에서 8.7±0.7 mm의 억제대를 보여 S.aureus ATCC 25923에 대한 농도 의존적인 항균력을 확인할 수 있었다.
991분으로 동일하게 나타났다(Figure 2B). 지표성분으로서 선정하기에 충분히 peak가 분리되었으며 적당한 크기를 나타내었다.
0 mg/mL였다. 표준화를 위한 HPLC 정량분석 결과, 황련해독탕은 berberine을 16.55 mg/g 함유하고 있었으며 geniposide를 81.85 mg/g 함유하고 있었다. 천연물을 이용하여 항생제를 개발할 경우에는 내성세균을 억제하고 부작용을 줄일 수 있다는 장점이 있다.
후속연구
이 같은 천연 항생제는 단일물질로 이루어진 화학적 합성물이 아닌 여러가지 유효성분들의 조합에 의해 생리활성을 보이기 때문에 부작용이 적고 세균의 내성을 억제하는 데에 효율적일 수밖에 없다. 이러한 점을 착안하여 지속적으로 연구를 진행한다면 한방산업과 더불어 여러 산업에서의 발전을 기대할 수 있을 것이다.
coli ATCC 23724 는 표준균주가 아니었기 때문에 내성에서 차이가 생긴 것으로 예측된다. 황련해독탕은 S.aureus ATCC 25923에서의 항균력 이 E.coli ATCC 23724보다 높게 나타나 추가적인 균주에 대한 항균 효능을 확인할 필요가 있을 것으로 사료된다. 천연 항생제와 기존의 항생제를 병용 사용하여 시너지 효능을 기대하는 연구에 oxacillin과 황흑산 에탄올 추출물을 사용한 보고가 있었다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
세균들에게 항생제 내성이 생기는 이유는 무엇인가
세균들은 다양한 경로를 통해 항생제와 접하는 기회가 많아지게 되어 내성을 가지게 된다[1-3]. 다양하게 발생되는 폐수나 가정에서의 하수에 포함된 항생제는 분해되지 않은 상태에서 자연계로 배출되면서 여러가지 항생제에 다중으로 내성을 갖는 다제 내성 세균도 나타나게 되었다[4]. 정상세균 역시도 항생제에 노출되었을 때에는 항생제 내성을 획득할 수 있다[5, 6].
세균이 어떠한 과정을 거쳐 내성을 가지게 되는가
세균에 의한 감염질환의 치료를 위해 화학적인 항생제를 사용한다. 세균들은 다양한 경로를 통해 항생제와 접하는 기회가 많아지게 되어 내성을 가지게 된다[1-3]. 다양하게 발생되는 폐수나 가정에서의 하수에 포함된 항생제는 분해되지 않은 상태에서 자연계로 배출되면서 여러가지 항생제에 다중으로 내성을 갖는 다제 내성 세균도 나타나게 되었다[4].
황련해독탕은 어떤 질병에 효용이 있는 처방인가
황련해독탕은 한방산업에서 염증관련 질환에 다빈도로 사용되는 처방이다. 본 연구의 목적은 전통적 한약인 황련해독탕의 항균활성을 확인하고 지표성분을 선정하는 것이다.
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