선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- pylori에 대한 억제능도 부가할수 있어 상업적인 가치가 향상될 수 있다. 본 연구에서는 DHNA 생산 유산균인 Lactobacillus plantarum 균주 분리와 이의 항 H. pylori 효과에 대해 보고하고자 한다.
제안 방법
- LP2 균주는 선행연구에서 자연치즈(3년 숙성 체다 치즈)로부터 분리되었으며 균주의 동정을 위해 16S rRNA 유전자 염기서열 분석법을 사용하였다. 16S rRNA 유전자 염기서열의 분석은 국내 생명공학회사(Macrogen, Daejeon, Korea)에 의뢰하여 수행하였다. 또한 미국립보건원(NIH) 산하 생명공학정보센터(NCBI; The National Center for Biotechnology Information)의 BLAST (Basic Local Align Search Tool) 프로그램(blastn)을 이용하여 분석된 서열 정보의 상동성(homology)을 조사하였다.
- LP2 균주로 부터의 DHNA 생산 확인은 HPLC 분석으로 수행되었다. 표준물질 DHNA (Sigma-Aldrich)의 머무름 시간(retention time)이 27.
- 16S rRNA 유전자 염기서열의 분석은 국내 생명공학회사(Macrogen, Daejeon, Korea)에 의뢰하여 수행하였다. 또한 미국립보건원(NIH) 산하 생명공학정보센터(NCBI; The National Center for Biotechnology Information)의 BLAST (Basic Local Align Search Tool) 프로그램(blastn)을 이용하여 분석된 서열 정보의 상동성(homology)을 조사하였다.
- 본 연구에서 사용한 유산균은 MRS 배지를 이용하여 37 ℃, 정치배양 하였으며 H. pylori KCTC 12083 균주는 10% Horse blood가 첨가된 Brucella 고체 배지(Difco, Sparks, MD, USA)에서 37 ℃, 미호기성(microaerophilic) 조건(O2 6-12%, CO2 5-8%; AnaeroPack system, Mitsubishi Gas Chem Co., Tokyo, Japan)으로 배양하였다.
- 양성 대조군으로 DHNA (5 ppm) 용액을 동시에 점적하였다. 처리된 고체 배지들은 미호기성 조건(O2 6-12%, CO2 5-8%; AnaeroPack system, Mitsubishi Gas Chem Co.)으로 72 h 배양하였으며 이후 육안으로 paper disc 주변에 형성된 생육저해환 (inhibition zone)을 관찰하였다.
- 컬럼의 온도는 45 ℃로 유지시켰으며 유속은 1 mL/min 으로 하였고 시료 주입량과 검출파장은 각각 20 µL와 254 nm로 하였다.
대상 데이터
- HPLC용 컬럼은 Agilent HC-C18 (4.6 × 150 mm, 5 µm; Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)을 사용하였고 이동상으로 혼합용액(acetonitrile: methanol: water: acetic acid =15: 25: 225: 0.1)을 사용하였으며 암모니아수(ammonium hydroxide; Sigma-Aldrich)를 이용하여 pH 5.5로 조정하였다.
- 농축액에 두 배(400 µL)의 메탄올을 혼합한 후 주사필터(0.45 µm; Sartorius, Göttingen, Germany)로 여과하여 그 여액을 HPLC (high performance liquid chromatography) 분석용 시료로 사용하였다.
- pylori KCTC 12083을 10% Horse blood가 첨가된 Brucella 고체 배지(Difco)에 도말 후 그 위에 직경 8 mm의 paper disc를 올린 다음 시료 200 µL를 점적하였다. 양성 대조군으로 DHNA (5 ppm) 용액을 동시에 점적하였다. 처리된 고체 배지들은 미호기성 조건(O2 6-12%, CO2 5-8%; AnaeroPack system, Mitsubishi Gas Chem Co.
- 이를 동결건조하여 DMSO (Dimethyl Sulfoxide; Sigma-Aldrich) 1 mL에 현탁하였으며 여과(0.22 µm 주사필터, Sartorius) 후 시료로 사용하였다.
- 표준 DHNA 시료는 시약급(Sigma-Aldrich)으로 조제하였는데 적정량을 메탄올에 녹인 후 주사필터(0.45 µm; Sartorius) 로 여과하여 그 여액을 표준시료로 사용하였다.
이론/모형
- LP2 균주는 선행연구에서 자연치즈(3년 숙성 체다 치즈)로부터 분리되었으며 균주의 동정을 위해 16S rRNA 유전자 염기서열 분석법을 사용하였다. 16S rRNA 유전자 염기서열의 분석은 국내 생명공학회사(Macrogen, Daejeon, Korea)에 의뢰하여 수행하였다.
성능/효과
- LP2 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열은 미국생명공학정보센터(NCBI) GenBank 데이터베이스에 등록하였으며(Accession no. KT852804), BLAST 프로그램(blastn)에 의한 상동성 분석 결과 L. plantarum (GenBank accession no. KC422389.1, AB598974.1, JF417991.1 등)과 가장 높은 상동성(일치율 99%)을 보여 LP2 균주를 L. plantarum LP2로 명명하였다.
- pylori 활성을 가지는지 명확히 규명되지 않았다. 본 연구에서는 시료의 pH를 중성으로 보정하였고 또한 박테리오신 생산에 대한 증거가 없어 H. pylori 에 대한 항균활성이 시료 속에 포함된 DHNA에 기인하는 것으로 추정되었다. 앞서 설명한 바와 같이 타 선행연구를 통해 DHNA가 H.
- 1B). 표준물질을 이용한 정량곡선(standard curve; Fig. 1C)에 기초하였을 때 배양 상등액 내에 0.55 ppm의 DHNA가 함유된 것으로 확인되었다. 앞서 설명한 바와 같이 현재까지 DHNA 생산은 주로 일본의 연구그룹에 의해 주도되었으며 생산 균주로 프로피온산균(Propionibacterium freudenreichii)을 사용해왔다10).
후속연구
- pylori는 한국인을 포함하여 전세계적으로 성인들에서 많이 감염되어 있는 것으로 나타나 이를 제어하기 위한 의약품 개발이 활발하다12). 따라서 DHNA 생산 유산균을 분리하여 프로바이오틱스 균주로 개발한다면 장내 유익작용뿐만 아니라 H. pylori에 대한 억제능도 부가할수 있어 상업적인 가치가 향상될 수 있다. 본 연구에서는 DHNA 생산 유산균인 Lactobacillus plantarum 균주 분리와 이의 항 H.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.