[논문]사독의 인체 폐암세포(A549)에 대한 Natural Killer 세포 세포독성 촉진 효과

이지인; 송호섭

doi:10.13045/acupunct.2015007

사독의 인체 폐암세포(A549)에 대한 Natural Killer 세포 세포독성 촉진 효과
Snake Venom-enhanced Cytotoxic Effect of Natural Killer Cells on A549 Human Lung Cancer Cell Growth 원문보기

The acupuncture = 대한침구의학회지, v.32 no.1, 2015년, pp.79 - 88

이지인 (가천대학교 한의과대학 침구의학교실) , 송호섭 (가천대학교 한의과대학 침구의학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The purpose of this research was to investigate the cytotoxic effect of Natural Killer(NK)-92 cell and Snake Venom, and to elucidate its mechanism on human lung carcinoma cell A549. Methods : In order to figure out whether Snake Venom enhances the cytotoxic effect of NK-92 cell in A549 cell, Cell Viability Assay was conducted. Also, in order to observe the changes of Caspase-3 and Caspase-8, both of which are proteinases that advance apoptosis, and the changes of TNRF and DR3, which are Death Receptors of the extrinsic pathway of apoptosis, Western Blot Analysis was conducted. By conducting RT-PCR analysis, we have tried to confirm Perforin, Granzyme B, and GADPH, all of which are cytotoxic-related proteins. Lastly, in order to observe the effect of Snake Venom on NO formation within human lung carcinoma cells, NO determination was conducted. Results : 1. After conducting Cell Viability Assay, Snake Venom enhanced the cytotoxic effect of NK-92 cell and inhibited the growth of A549. 2. Western Blot Analysis caused proteinases Caspase-3 and Caspase-8, which advance apoptosis, to increase in the combined treatment group, but not in treatment groups that focused only on either Snake Venom or NK-92 cell in A549 lung carcinoma cells. 3. Western Blot Analysis caused an expression of TNFR2 and DR3, both of which are Death Receptors of the apoptosis extrinsic pathway, in the combined treatment group, but not intreatment groups that focused only on either Snake Venom or NK-92 cell in A549 human lung carcinoma cells. 4. After conducting NO determination, NO formation within A549 cell showed no significant changes in both treatment groups that focused NK-92 cell and combined treatment group. 5. After conducting RT-PCR, the expression of Granzyme B and Perforin, which are cytotoxic-related proteins within A549 human lung carcinoma cells, showed growth in the combined treatment group, but not the treatment group that focused only on NK-92 cell. Conclusion : It has been indicated that, when it comes to the A549 cell, Snake Venom enhances the increase of Death Receptor expression and continuous apoptosis reaction, leading to the enhancement of the cancer cell cytotoxic effect of the NK-92 cell. It is expected that Snake Venom can be used with the NK-92 cell for further lung cancer treatment.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

Trypan blue를 흡수한 징후를 보이는 세포는 죽은 것으로, Trypan blue를 배제한 세포는 살아있는 세포로 간주하였다. 각 분석은 세 번 반복하여 오차를 줄이고자 하였다.
따라서 이번 연구에서는 사독이 인체 폐암 세포인 A549에서 NK-92 세포의 암세포 성장 억제 효과를 더욱 촉진시켜 면역반응을 활성화시키는 BRM으로서의 가능성이 있는지에 대해 알아보고, 암세포의 세포자멸사 기전 촉진에 있어서 어떠한 기전을 증강시키는지 밝혀 보고자 한다.
사독과 NK-92세포가 A549 인간 폐암 세포에서 NK-92세포독성과 연관된 단백질인 perforin, granzyme B의 발현을 증강시키는지 알아보고자 하였다. Perforin, granzyme B는 RT-PCR 분석을 통해 조사하였다.
사독과 NK-92세포가 A549 인체 폐암세포에서 TNFR2, DR3와 같은 세포사멸 수용체와 대표적인 세포자멸 조절 단백질인 bax, caspase-3, caspase-8, cleaved caspase-3, cleaved caspase-8의 발현 증가를 촉진하는지 확인하고자 하였다.

제안 방법

A549 인간 폐암 세포에서 NK-92 세포가 NO pathway를 통하여 세포 독성에 영향을 미치는지를 확인하기 위해, NK-92세포와의 배양 여부 및 사독 처리 여부에 따라 상층액의 아질산성 질소(nitrite) 축적 정도를 griess reaction으로 평가하였다. NK-92세포와 배양하거나 사독을 처리하여 공동 배양하였을 때, 대조군과 비교하여 상층액의 NO 정도는 거의 증가하지 않았다(Fig.
NK-92세포의 처리는 20 % fetal bovine serum(FBS), 100 IU/㎖ penicillin, 100 ㎍/㎖ streptomycin 및 10 ㎍/㎖ intereukin-2(IL-2)를 포함하는 MEM alpha 배지에서 배양하였다. A549 세포는 37 ℃, 5 % CO₂ incubator 조건에서 10 % FBS, 100 IU/㎖ penicillin, and 100 ㎍/㎖ streptomycin을 함유한 RPMI 1640 배지 내에서 배양하였다.
사독과 NK-92세포가 A549 인간 폐암 세포에서 NK-92세포독성과 연관된 단백질인 perforin, granzyme B의 발현을 증강시키는지 알아보고자 하였다. Perforin, granzyme B는 RT-PCR 분석을 통해 조사하였다. 결과적으로 NK-92세포에 사독을 처리하여 공동 배양하였을 때가 NK-92만 배양하는 것보다 perforin의 발현이 두드러지게 증가하였으며, granzyme B는 NK-92세포에 사독을 처리하여 공동 배양하였을 때가 NK-92만 배양하는 것에 비해 다소 증가함을 확인할 수 있었다(Fig.
Vipera lebetina turanica 뱀에서 추출한 사독이 NK-92 세포의 항암효과에 어떠한 영향을 미치는지, 그 과정에서 어떤 기전이 관여되어 있는지 몇 가지 실험을 통해 분석하였다. A549 폐암 세포와 NK-92 세포를 공동 배양할 때와, A549와 SVT를 공동으로 배양하였을 때 A549 폐암 세포의 생존율이 낮아지는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 기존 연구 결과와 일치한다^17,18).
사독이 A549 인체 폐암 세포에서 NK-92의 성장억제 효과를 촉진하는지를 평가하기 위해 direct cell counting을 통해 세포 활성도를 분석하였다. A549 세포는 단독 배양하거나 NK-92세포와 공동으로 배양하였고, 사독을 처리하거나 혹은 처리하지 않은 상태로 24시간 동안 배양하였다.
살아 있는 세포 수 확인을 위하여 A549 폐암 세포 및 NK-92와 공동 배양된 A549 세포를 24-well plates(5×104 cells/well)에 분주하였으며, 그 후 4 ㎍/㎖ 농도의 snake venom을 처리하여 배양하였다.
생화학적 면역 분석을 위해 세포는 lysis buffer(50 ㎛ tris, pH 8.0, 150 ㎛NaCl, 0.02 % NaN₃, 0.2 % SDS, 1 ㎛ phenylmethylsulfonyl fluoride, 10 l/㎖ aprotinin, 1 % igapel 630(Sigma Chemical Co, St Louis, MO, USA), 10 ㎛ NaF, 0.5 ㎛ EDTA, 0.1 ㎛ EGTA, 0.5 % sodium deoxycholate)로 세포를 용해하였으며, 23,000 rpm의 속도로 1시간 동안 원심분리 처리를 거쳤다. 정량화된 단백질 시료(80 ㎍)를 SDS-12 % polyacrylamide gel 전기 영동법(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)으로 분리한 뒤, 분리된 단백질을 nitrocellulose membrane(Hybond ECL; Amersham Pharmacia Bio-tech Inc, Piscataway, NJ, USA)으로 옮겼다.
세포는 트립신 처리 후 1,500 rpm으로 5분간 원심분리하고, 하층에 분리된 pellet에 인산염 완충 식염수(phosphate-buffered saline) 10 ㎖를 부어 재현탁하였다. 암세포 현탁액 (suspension) 각 0.9 ㎖에 0.2 % trypan blue 0.1 ㎖를 첨가하여 재부유 과정을 거쳤다. 현탁액 한 방울의 분량을 neubauer chamber에 채우고 살아 있는 암 세포를 감별하여 counting 하였다.
역전사 반응 후 polymerase chain reaction(PCR) 반응에 사용한 primer는 5’-3’ GCCAACT TTGCAGCCCAG로 perforin을, granzyme B 분석에는 5’-3 TGCTTCCTGTAGTTAGTAGC 염기 서열을 이용하였다.
Total RNA는 RNeasy kit(Qiagen, Valencia, CA, USA)를 활용하여 추출하였다. 역전사반응은 RNA to cDNA kit(Applied Biosystems by Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA를 template로 PCR을 시행하였는데, 96 ℃에서 1분간 변성시키고, 반응과정으로 각각 96 ℃에서 1분간, 60 ℃ 혹 63 ℃에서 1분간, 그리고 72 ℃에서 1분간 총 30 cycle을 수행하였다.
인체의 폐암 세포 A549 세포주에서 사독이 NK-92 세포의 암세포 성장 억제를 더욱 효과적으로 유도하는지에 대하여 실험하였으며 다음과 같은 결과를 도출하였다.
역전사반응은 RNA to cDNA kit(Applied Biosystems by Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA를 template로 PCR을 시행하였는데, 96 ℃에서 1분간 변성시키고, 반응과정으로 각각 96 ℃에서 1분간, 60 ℃ 혹 63 ℃에서 1분간, 그리고 72 ℃에서 1분간 총 30 cycle을 수행하였다. 역전사 반응 후 polymerase chain reaction(PCR) 반응에 사용한 primer는 5’-3’ GCCAACT TTGCAGCCCAG로 perforin을, granzyme B 분석에는 5’-3 TGCTTCCTGTAGTTAGTAGC 염기 서열을 이용하였다.
1 ㎖를 첨가하여 재부유 과정을 거쳤다. 현탁액 한 방울의 분량을 neubauer chamber에 채우고 살아 있는 암 세포를 감별하여 counting 하였다. Trypan blue를 흡수한 징후를 보이는 세포는 죽은 것으로, Trypan blue를 배제한 세포는 살아있는 세포로 간주하였다.

대상 데이터

A549 세포(5×104 cells/well)를 하룻밤 동안 배양한 후 NK-92 세포(5×104 cells/well)를 동일 well에 첨가하여 배양하였다.
NK-92세포의 처리는 20 % fetal bovine serum(FBS), 100 IU/㎖ penicillin, 100 ㎍/㎖ streptomycin 및 10 ㎍/㎖ intereukin-2(IL-2)를 포함하는 MEM alpha 배지에서 배양하였다. A549 세포는 37 ℃, 5 % CO₂ incubator 조건에서 10 % FBS, 100 IU/㎖ penicillin, and 100 ㎍/㎖ streptomycin을 함유한 RPMI 1640 배지 내에서 배양하였다. A549와 NK-92 세포를 공동 배양할 경우에는 MEM alpha와 RPMI 1640을 1:1로 혼합한 배지에서 배양하였고, 미세공 폴리카보네이트 막(porous polycarbonate membrane, pore size 0.
NK-92 자연살해세포, A549 폐암세포는 The American Type Culture Collection(Manassas, VA, USA)에서 구입하였다. Gibco Life Technologies(Grand Island, NY, USA)에서 RPMI 1640, MEM alpha, penicillin, streptomycin 및 fetal bovine serum(FBS)를 구매하여 연구에 활용하였다.
달리 명시되지 않은 기타 시약은 Sigma Chemical Co에서 구입하였다. NK-92 자연살해세포, A549 폐암세포는 The American Type Culture Collection(Manassas, VA, USA)에서 구입하였다. Gibco Life Technologies(Grand Island, NY, USA)에서 RPMI 1640, MEM alpha, penicillin, streptomycin 및 fetal bovine serum(FBS)를 구매하여 연구에 활용하였다.
Vipera lebetina turanica로부터 추출한 사독은 Sigma Chemical Co(St Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Western blot analysis에 사용된 TNFR2, DR3, bax, caspase-3 and cleaved caspase-3, caspase-8 and cleaved caspase-8과 같은 이차항체들은 모두 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA, USA)로부터 구매하였다.
Vipera lebetina turanica로부터 추출한 사독은 Sigma Chemical Co(St Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Western blot analysis에 사용된 TNFR2, DR3, bax, caspase-3 and cleaved caspase-3, caspase-8 and cleaved caspase-8과 같은 이차항체들은 모두 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA, USA)로부터 구매하였다. 달리 명시되지 않은 기타 시약은 Sigma Chemical Co에서 구입하였다.
Western blot analysis에 사용된 TNFR2, DR3, bax, caspase-3 and cleaved caspase-3, caspase-8 and cleaved caspase-8과 같은 이차항체들은 모두 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA, USA)로부터 구매하였다. 달리 명시되지 않은 기타 시약은 Sigma Chemical Co에서 구입하였다. NK-92 자연살해세포, A549 폐암세포는 The American Type Culture Collection(Manassas, VA, USA)에서 구입하였다.
A549 세포(5×10⁴ cells/well)를 하룻밤 동안 배양한 후 NK-92 세포(5×10⁴ cells/well)를 동일 well에 첨가하여 배양하였다. 모든 세포의 배양은 Costar(Corning, NY, USA)사의 24-well plates를 활용하였다.

데이터처리

Graphpad prism 4 ver. 4.03 소프트웨어(GraphPad Software, La Jolla, CA)를 활용하여 데이터를 분석하였다. 데이터는 mean ± SD 형식으로 표기하였으며, 모든 데이터 수치 차이는 일원변량분석(one-way analysis)를 활용해 계산하였다.
데이터는 mean ± SD 형식으로 표기하였으며, 모든 데이터 수치 차이는 일원변량분석(one-way analysis)를 활용해 계산하였다.
분산분석에서 p-value가 통계적 유의성을 보일 때, Dunnett's test로 사후 검정하였다.

이론/모형

그 후 blot은 anti-rabbit과 anti-mouse immunoglobulin G-horseradish peroxidase(1:2,000 dilutions, Santa Cruz Biotechnology Inc, Santa Cruz, CA, USA) 혼합액에서 배양하였다. Western blot 결과는 ECL western blotting detection system을 이용하여 가시화하였다.
상층액의 아질산성 질소 축적은 griess reaction을 활용하여 평가하였다. 각 50 µl의 배양 상층액을 동일한 양의 griess reagent과 혼합하여 10분 동안 실온에서 배양하였다.
세포자멸사 조절 단백질 및 세포사멸 수용체는 western blot analysis을 통해 확인하였다. TNFR2, DR3는 NK-92세포만 단독으로 배양했을 때보다 사독을 처리하여 NK-92과 공동 배양하였을 때 발현이 두드러지게 증가하였다(Fig.
5 % sodium deoxycholate)로 세포를 용해하였으며, 23,000 rpm의 속도로 1시간 동안 원심분리 처리를 거쳤다. 정량화된 단백질 시료(80 ㎍)를 SDS-12 % polyacrylamide gel 전기 영동법(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)으로 분리한 뒤, 분리된 단백질을 nitrocellulose membrane(Hybond ECL; Amersham Pharmacia Bio-tech Inc, Piscataway, NJ, USA)으로 옮겼다. 단백질이 옮겨진 막을 0.

성능/효과

1. Cell viability assay를 시행한 결과 사독은 NK-92세포의 세포독성효과를 촉진시켜 폐암세포 A549의 증식을 억제하였다. 또한 NK-92세포와 사독을 24시간 공동 배양하여도 사독은 NK-92 세포에 형태학적 변화를 유발하지 않았다.
2. Western blot analysis 시 A549 폐암세포에서 사독이나 NK-92 세포 단독처리군에 비해 사독 및 NK-92 세포 동시 처리군에서 세포자멸사를 진행시키는 단백분해효소인 caspase-3, 8이 증가하였다.
3. Western blot analysis 시 A549 폐암세포에서 사독 및 NK-92 세포 단독처리군에 비해 사독 및 NK-92세포 동시 처리군에서 세포자멸사 외인성 경로의 death receptor인 TNFR2, DR3 발현이 증가하였다.
4. NO determination 시 A549 세포에서의 NO 생성은 NK-92 세포 단독처리군과 사독 및 NK-92 세포 동시처리군 모두에서 유의한 변화가 나타나지 않았다.
5. RT-PCR 시 A549 폐암세포에서 세포독성 매개 단백인 granzyme B, perforin의 발현은 NK-92 단독처리군에 비해 사독 및 NK-92 세포 동시처리군에서 유의하게 증가하였다.
1에서 제시한 바와 같이, 사독 및 NK-92 cell은 인간 폐암세포 A549의 세포 증식을 각각 억제하였다. A549 세포를 단독으로 배양한 대조군과 비교하였을 때 NK cell 과 사독을 공동 배양하였을 때 세포 수를 유의하게 감소시킨 것을 확인할 수 있었다. NK-92세포에 사독을 24시간 동안 처리하여 대조군과 비교하였을 때 세포 형태학적인 변화는 관찰되지 않았다
Perforin, granzyme B는 RT-PCR 분석을 통해 조사하였다. 결과적으로 NK-92세포에 사독을 처리하여 공동 배양하였을 때가 NK-92만 배양하는 것보다 perforin의 발현이 두드러지게 증가하였으며, granzyme B는 NK-92세포에 사독을 처리하여 공동 배양하였을 때가 NK-92만 배양하는 것에 비해 다소 증가함을 확인할 수 있었다(Fig. 4).
A549 폐암 세포와 NK-92 세포를 공동 배양할 때와, A549와 SVT를 공동으로 배양하였을 때 A549 폐암 세포의 생존율이 낮아지는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 기존 연구 결과와 일치한다^17,18). 나아가 본 연구에서는 A549 폐암 세포에 SVT와 NK-92세포를 함께 배양한 경우 A549 세포의 생존율을 현저히 낮추는 것을 확인하였다(Fig. 1). 또한 NK-92 세포를 SVT와 24시간 배양하였을때 NK-92 세포가 형태학적으로 아무런 변화가 없어, 4 ㎍/㎖의 농도의 사독은 NK-92 세포 생존 여부에는 영향을 주지 않음을 시사하였다(Fig.
2). 동시에 bax, caspase-3, caspase-8, cleaved caspase-3, cleaved caspase-8 또한 NK-92세포만 배양했을 때보다 사독을 처리하여 NK-92와 공동 배양하였을 때 발현이 증가하였다(Fig. 2).
따라서 위 연구 결과로 사독이 NK-92세포의 세포독성 작용을 유의하게 증가시키며, 세포독성 작용이 NO 생성 증가와는 무관하게 세포자멸 기전의 내ㆍ외인 기전을 촉진시킴으로써 유도된다는 것을 확인할 수 있었다. 현재 암세포 치료의 대안으로 떠오르는 면역치료에서 사독이 효과적인 BRM으로 활용될 것이라 기대한다.
Cytochrome C는 직접적으로 세포의 necrosis를 유도하며 동시에 이와 별개로 apoptotic protease-activating factor(APAF-1)을 자극하여 caspase9를 활성화시키고 활성화된 caspase-9에 의해 연쇄적으로 caspase-3이 활성화되어 세포자멸사를 유도하기도 하여 결과적으로 caspase 의존 세포자멸사 경로에 관여한다²⁵⁾. 따라서 위 연구 결과로서 4 ㎍/㎖ 농도의 사독이 NK-92세포에서 perforin 및 cranzyme B 과립의 방출을 유도하여 과립을 매개로 한 세포자멸 효과를 촉진하며, 그 중 perforin의 방출 촉진이 더욱 두드러져 세포에 pore형성을 유도하는 작용이 뚜렷함을 확인할 수 있었다.
또한 Fig. 4의 결과에서 RT-PCR 분석 결과 세포독성 매개 단백인 granzyme B, perforin의 발현이 NK-92 단독처리군에 비해 사독 동시 처리군에서 유의하게 증가됨을 알 수 있으며, 특히 granzyme B에 비하여 perforin이 두드러지게 증가하였음을 관찰할 수 있다. Perforin은 NK 세포에서 cytoplasmic granules에 저장되어 있다가 표적세포와 접촉 등의 자극으로 세포 상해성 림프구와 표적세포 간의 간극에 방출되며, 방출된 perforin 단위체가 표적 세포의 원형질막에 삽입되어 집합체로 중합한 결과 구멍(pore)을 형성하게 된다.
1). 또한 NK-92 세포를 SVT와 24시간 배양하였을때 NK-92 세포가 형태학적으로 아무런 변화가 없어, 4 ㎍/㎖의 농도의 사독은 NK-92 세포 생존 여부에는 영향을 주지 않음을 시사하였다(Fig. 1).
NK 세포핵에서 NO의 영향으로 interferon-γ(IFN-γ)등 cytokine을 생성하게 되어 이 물질이 육종(sarcoma)세포 억제 및 암세포 전이를 억제하는 세포자멸 유도기전으로 밝혀지고 있다^30,31) . 본 실험에서 NO determination 결과 NK-92 세포 단독처리군과 사독 및 NK-92 세포 동시 처리군 모두에서 NO의 유의한 변동은 없었다(Fig. 3). 이는 사독을 처리하였을 때 나타나는 A549 세포 수 감소가 NK-92세포의 세포자멸사 기전 중에서 nithric oxide pathway와는 연관이 없음을 의미한다.
Bax는 Bcl-2계 중 하나이며, 세포자멸사 과정 중 미토콘드리아가 관여된 기전(과립 매개, 혹은 내 경로)에서 tBid와 함께 미토콘트리아 외부막과 결합해 cytochrome C 방출을 유도하는데 일조한다^22,29). 이번 연구에서 A549 단독 배양한 군에 비하여 NK-92세포와 공동 배양한 군이 bax, cleaved Caspase-3및 cleaved Caspase-8이 유의하게 증가하였으며, 더불어 사독처리 시 해당 물질들이 더욱 증가함을 확인할 수 있다 (Fig. 2). 이는 NK-92 세포가 A549 세포의 세포자멸사 반응을 유도하는 데에 SVT가 해당 반응을 촉진암을 의미한다.
DD가 있는 세포사멸 수용체는 여섯 가지로 알려져 있으며 각기 다른 리간드에 의해 세포사멸 수용체가 활성화되어 FasL은 DR1에, TNF는 DR2에, VEGI는 DR3에, TRAIL은 DR4와 DR5에 각각 부착하여 세포자멸을 유도하는 신호로서 작용하게 된다²²⁾. 이번 연구에서 western blot analysis을 통해 확인된 바와 같이, 세포사멸 수용체인 TNFR2, DR3가 NK-92세포 단독으로 배양했을 때보다 사독을 처리하여 NK-92세포와 공동 배양하였을 때 발현이 증가하였다 (Fig. 2). 이는 4 ㎍/㎖ 농도의 사독이 NK-92세포의 세포자멸 외인성 경로를 촉진하였음을 입증하는 것이다.

후속연구

따라서 위 연구 결과로 사독이 NK-92세포의 세포독성 작용을 유의하게 증가시키며, 세포독성 작용이 NO 생성 증가와는 무관하게 세포자멸 기전의 내ㆍ외인 기전을 촉진시킴으로써 유도된다는 것을 확인할 수 있었다. 현재 암세포 치료의 대안으로 떠오르는 면역치료에서 사독이 효과적인 BRM으로 활용될 것이라 기대한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	자연살해세포의 항종양효과와 관련있다고 밝혀진 기전은 무엇인가?	자연살해세포(natural killer cell, NK cell)는 선천성 면역반응에 중추적인 역할을 하며, 세포 독성 림프구로 바이러스 감염 세포나 종양세포를 용해하거나 직접 세포독성 작용을 한다. 자연살해세포의 작용 기전 중 항종양효과와 관련 있다고 밝혀진 기전은 항체 의존성 세포 매개형 세포독성(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)과 자연세포독성 수용체(natural cytotoxicity receptors, NCRs)들에 의해 매개되는 자연살해 기전이다. 이러한 기전으로 인한 항암효과는 여러 연구에서 밝혀진바 있다7-9).
	인체의 폐암 세포 A549 세포주에서 사독이 NK-92 세포의 암세포 성장 억제를 효과적으로 유도하는지에 대하여 실험한 연구의 결론은?	1. Cell viability assay를 시행한 결과 사독은 NK-92세포의 세포독성효과를 촉진시켜 폐암세포 A549의 증식을 억제하였다. 또한 NK-92세포와 사독을 24시간 공동 배양하여도 사독은 NK-92 세포에 형태학적 변화를 유발하지 않았다. 2. Western blot analysis 시 A549 폐암세포에서 사독이나 NK-92 세포 단독처리군에 비해 사독 및 NK-92 세포 동시 처리군에서 세포자멸사를 진행시키는 단백분해효소인 caspase-3, 8이 증가하였다. 3. Western blot analysis 시 A549 폐암세포에서 사독 및 NK-92 세포 단독처리군에 비해 사독 및 NK-92세포 동시 처리군에서 세포자멸사 외인성 경로의 death receptor인 TNFR2, DR3 발현이 증가하였다. 4. NO determination 시 A549 세포에서의 NO 생성은 NK-92 세포 단독처리군과 사독 및 NK-92 세포 동시처리군 모두에서 유의한 변화가 나타나지 않았다. 5. RT-PCR 시 A549 폐암세포에서 세포독성 매개 단백인 granzyme B, perforin의 발현은 NK-92 단독처리군에 비해 사독 및 NK-92 세포 동시처리군에서 유의하게 증가하였다.
	자연살해세포의 특징은?	자연살해세포(natural killer cell, NK cell)는 선천성 면역반응에 중추적인 역할을 하며, 세포 독성 림프구로 바이러스 감염 세포나 종양세포를 용해하거나 직접 세포독성 작용을 한다. 자연살해세포의 작용 기전 중 항종양효과와 관련 있다고 밝혀진 기전은 항체 의존성 세포 매개형 세포독성(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)과 자연세포독성 수용체(natural cytotoxicity receptors, NCRs)들에 의해 매개되는 자연살해 기전이다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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