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문제 정의
- 본 연구에서는 sinigrin 추출법과 HPLC 분석조건을 제시 함으로써 돌산갓 뿐 만 아니라 갓을 이용한 다양한 제품 중의 sinigrin 추출과 저장기간에 따른 sinigrin 함량변화에 대한 체계적인 분석연구에 기초자료로 제시하고자 한다.
제안 방법
- 각 파장별 standard curve의 regression equation을 이용하여 돌산갓의 수분함량을 제외한 실제 갓의 무게를 이용하여 정량화하였고 Fig. 3은 최적의 UV detector 파장을 선택하기 위해 228 nm 와 242 nm에서 sinigrin 함량을 측정한 결과이다.
- 돌산갓 부위별 용매추출 후 syringe filter 0.45 μm(Toyo Roshi Kaisha, Ltd, Tokyo, Japan)로 여과한 여액을 vial에담아 3회 반복 측정하여 분석하였다.
- 돌산갓의 부위별 sinigrin 함량 측정을 위해 뿌리, 줄기, 잎을 원통여지에 각각 10 g씩 취하고 round flask에 50% acetonitrile(CH3CN) 200 mL를 넣어 soxhlet extractor와 연결 하여 water bath 92℃, 24시간 추출하여 실온에서 냉각 후사용하였다(15). 10% ammonium chloride(NH4Cl), 60% CH2OH, 70% CH3OH (16)은 시료 부위별로 각각 10 g씩취하여 용매 200 mL로 2~3분간 교반 후 Whatman No.
- 정량분석을 위한 표준시약으로 sinigrin을 이용하였으며 125, 250, 500, 1000 ppm의 농도로 제조하여 표준곡선을 작성하였다. HPLC chromatogram의 peak area와 관계는 228 nm과 242 nm에서 각각 r2=1.
- 최적의 추출 용매를 선택하기 위해 돌산갓을 뿌리, 줄기, 잎으로 나누어 50% CH3CN, 10% NH4Cl, 60% CH2 OH, 70% CH3OH 로 각각 추출하였고, 이때 sinigrin 함량은 Fig. 4와 같았다. 50% CH3CN에서 돌산갓의 부위별 sinigrin 함량이 다른 용매들보다 높게 나타났으며 10% NH4Cl, 60% CH2OH, 70% CH3OH 은 큰 차이가 없음을 확인할 수 있었다.
- 4에 나타내었다. 추출 용매는 50% CH3CN를 사용하였고, UV detector 파장은 228 nm에서 분석하여 retention time(RT)으로 비교하였다. 표준물질과 돌산갓의 부위별 추출물의 RT는 sinigrin 2.
- 표준시약 sinigrin을 125, 250, 500, 1000 ppm의 농도로 제조하여 228 nm, 242 nm에서 3회 반복 측정하였으며 평균 값으로 standard curve을 Fig. 2에 나타냈다.
대상 데이터
- 45 μm(Toyo Roshi Kaisha, Ltd, Tokyo, Japan)로 여과한 여액을 vial에담아 3회 반복 측정하여 분석하였다. Sinigrin과 그 유도물 질의 UV detector 파장은 228 nm와 242 nm에서 측정하였으며 HPLC 분석 조건은 Table 1과 같다.
- 본 실험에 사용한 돌산갓(Dolsan leaf mustard, Brassica juncea)은 전남 여수시 돌산읍 소재 돌산갓 영농조합에서 2014년 3월 20일에 파종하여 5월 26일에 수확된 갓을 구입 하여 사용하였다. 돌산갓은 뿌리, 줄기, 잎 세 부분으로 나누어 분쇄하여 사용하였다. 추출 및 분석을 위한 시약은 sinigrin(Sigma Chemical CO.
- 본 실험에 사용한 돌산갓(Dolsan leaf mustard, Brassica juncea)은 전남 여수시 돌산읍 소재 돌산갓 영농조합에서 2014년 3월 20일에 파종하여 5월 26일에 수확된 갓을 구입 하여 사용하였다. 돌산갓은 뿌리, 줄기, 잎 세 부분으로 나누어 분쇄하여 사용하였다.
- 또한 돌산갓 부위별 sinigrin 함량은 줄기부위에서 728 ppm으로 가장 높게 나타났으며, 뿌리와 잎에서는 각각 539 ppm, 345 ppm으로 나타났다. 이 결과 로부터 이후 실험에서는 UV detector 파장을 228 nm로 측정하였다.
- 돌산갓은 뿌리, 줄기, 잎 세 부분으로 나누어 분쇄하여 사용하였다. 추출 및 분석을 위한 시약은 sinigrin(Sigma Chemical CO., St. Louis, MO, USA), acetonitrile(J.T. Baker, USA), ammonium chloride(SAMCHUN PURE CHEMICAL CO., LTD.), CH3OH(J.T. Baker, USA), CH2OH(DUKSAN PURE CHEMICAL CO., LTD.)을 사용 하였다.
성능/효과
- 4와 같았다. 50% CH3CN에서 돌산갓의 부위별 sinigrin 함량이 다른 용매들보다 높게 나타났으며 10% NH4Cl, 60% CH2OH, 70% CH3OH 은 큰 차이가 없음을 확인할 수 있었다. Tao 등(15)의 보고에 의하면 갓의 종자에 함유된 glucosinolates 함량 조사에서 추출 용매로 water, 60% CH2OH, 10% NH4Cl을 사용했을 때 10% NH4Cl, 60% CH2OH, water 순으로 보고하였으나 본 연구에서는 차이가 나타나지 않았다.
- 지금까지 보고된 결과에 의하면 Brassica species의 seed 중에서 Brassica juncea에서는 glucoraphanin이 검출되지 않았다. 그러나 본연구의 결과로부터 seed와 식물에 함유된 생리활성 물질에는 차이가 있음을 알 수 있었다. 특히 돌산갓에 대한 sinigrin 분석 자료가 거의 없어, 향후 십자화과 경엽채소류의 추가적인 비교 분석 및 연구가 필요하다고 판단된다.
- 본 연구에서도 sinigrin은 UV detector 파장을 비교하였을 때 242 nm보다 228 nm가 높게 나타났다. 또한 돌산갓 부위별 sinigrin 함량은 줄기부위에서 728 ppm으로 가장 높게 나타났으며, 뿌리와 잎에서는 각각 539 ppm, 345 ppm으로 나타났다. 이 결과 로부터 이후 실험에서는 UV detector 파장을 228 nm로 측정하였다.
- Tsao(16)과 Rungapamestry(17)는 detector 228 nm에서 sinigrin을 측정하였고 allylisothiocyanate는 242 nm에서 측정했을 때 감도가 높게 나타났다고 하였다. 본 연구에서도 sinigrin은 UV detector 파장을 비교하였을 때 242 nm보다 228 nm가 높게 나타났다. 또한 돌산갓 부위별 sinigrin 함량은 줄기부위에서 728 ppm으로 가장 높게 나타났으며, 뿌리와 잎에서는 각각 539 ppm, 345 ppm으로 나타났다.
- 035 min으로 나타났다. 이 결과는 돌산갓 부위별 추출물의 RT와 표준물질의 RT가 거의 일치한다는 것을 보여주었다. 또한 돌산갓 잎의 경우 줄기와 뿌리에서 나타나지 않은 다른 peak(RT 2.
후속연구
- 그러나 본연구의 결과로부터 seed와 식물에 함유된 생리활성 물질에는 차이가 있음을 알 수 있었다. 특히 돌산갓에 대한 sinigrin 분석 자료가 거의 없어, 향후 십자화과 경엽채소류의 추가적인 비교 분석 및 연구가 필요하다고 판단된다.
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