[논문]새우에서 분리된 Vibrio species 동정을 위한 VITEK 2 system방법과 species-specific PCR방법 비교 평가

이정민; 이원준; 김민주; 조용선; 이진성; 이현진; 윤상우; 김근성

doi:10.13103/jfhs.2015.30.3.281

새우에서 분리된 Vibrio species 동정을 위한 VITEK 2 system방법과 species-specific PCR방법 비교 평가
Comparative Evaluation of the VITEK 2 System and Species-specific PCR Methods for the Detection of Vibrio Species Isolated from Shrimp 원문보기

한국식품위생안전성학회지 = Journal of food hygiene and safety, v.30 no.3, 2015년, pp.281 - 288

이정민 (중앙대학교 식품공학과) , 이원준 (중앙대학교 식품공학과) , 김민주 (중앙대학교 식품공학과) , 조용선 (한국식품연구원 식품분석센터) , 이진성 (경기대학교 생명과학과) , 이현진 ((주)디에스라인 기업부설연구소) , 윤상우 ((주)디에스라인 기업부설연구소) , 김근성 (중앙대학교 식품공학과)

초록
AI-Helper

Vibrio 속에 속한 세균에 의한 식중독은 오염된 해산물 식품의 섭취로 인하여 빈번하게 발생하고 있다. 그러므로 해산물을 날것으로 섭취하는 한국인의 특성을 고려할 때, 빠르고 정확한 Vibrio 검출기술은 식품위생 및 공중보건의 측면에서 매우 중요하다. 이와 관련하여 본 연구에서는 전통적인 배지를 이용한 동정방법의 단점을 보완할 수 있는 생화학적 방법인 Vitek 2 system방법과 분자생물학적 방법인 species-specific PCR 방법을 사용하여 얻은 동정결과를 비교 평가하고자 하였다. 본 연구에서는 5개의 Vibrio 표준균주와 16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 Vibrio 속으로 확인된 24개의 분리균주가 이용되었다. Vitek 2 system방법을 이용한 경우, 이와 같이 본 연구에 사용된 29개 균주 중 Vibrio 표준균주 2개(2/5, 40%), 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 15개(15/24, 62.5%) 등의 총 17개 균주(17/29, 58.6%)가 Vibrio 종으로 동정되었다. 그리고 species-specific PCR방법을 이용한 경우, 위의 29개 균주 중 Vibrio 표준균주 5개(5/5, 100%), 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 16개(16/24, 66.7%) 등의 총 21개 균주(21/29, 72.5%)가 Vibrio 종으로 동정되었다. Vitek 2 system방법과 species-specific PCR방법을 이용하여 동정된 결과를 비교하였을 때 표준균주 중 V. parahaemolyticus, V. mimicus 등의 2개(2/5, 40%), 새우분리균주 24개 중에서 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 7개 (7/24, 29.2%) 등의 총 9개(9/29, 31%) 균주들에 대한 동정결과만이 일치하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

Vibrio is a genus of Gram-negative, curved, halophilic, and non-spore-forming bacteria. Some of the Vibrio species, such as V. cholerae and V. parahaemolyticus, often contaminate seafood products and occasionally cause human diseases when the seafood products are ingested. A total of 24 Vibrio strains were isolated from shrimp samples on Thiosulphate citrate bile salt sucrose (TCBS) media in this study. All of the 24 isolates were confirmed to belong to the genus Vibrio by using 16S rRNA gene sequence analyses. Vitek 2 system and species-specific polymerase chain reaction (PCR) methods were used to further identify a total of 29 Vibrio strains at the species level, including the 24 shrimp Vibrio isolates and five Vibrio reference strains. The specificities of the two methods to identify Vibrio strains at the species level were compared in this study. The species-specific PCR method was designed to detect five different Vibrio species, such as Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus, and Vibrio mimicus. From the 24 Vibrio shrimp isolates, the Vitek 2 system method could identify 15 (62.5%) strains as Vibrio species and 7 (29.2%) strains as non-Vibrio species, but could not identify the rest 2 (8.3%) strains. But species-specific PCR method could identify 16 (66.7%) strains as Vibrio species and could not identify the rest 8 (33.3%) strains. Among the 24 Vibrio shrimp strains, these two methods could unanimously identify 7 (7/24, 29.2%) strains (2 V. parahaemolyticus, 4 V. alginolyticus, and 1 V. mimicus). Considering that such different identification results were obtained using the two different methods in this study, identification method for Vibrio species must be carefully chosen.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

그러므로 본 연구에서는 해산물에서 가장 빈번하게 검출되는 세균인 Vibrio 종(species)을 대상으로 하여 생화학적 방법인 Vitek 2 system 방법과 분자생물학적 방법인 species-specific PCR 방법의 동정결과를 비교·평가하고자 하였다.
본 연구에서는 5개의 Vibrio 표준균주와 TCBS 배지상에서 분리된 123개 Vibrio 의심 분리균주 중 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 24개의 분리 균주를 대상으로 비교실험을 진행하였다. 균주는 3% NaCl 이 포함된 Nutrient agar (Merck, Darmstadt, Germany) 배지에 2회 계대 배양을 하여 활성화하였다.
본 연구에서는 해산물에서 가장 빈번하게 검출되는 세균인 Vibrio 속을 대상으로 하여 생화학적 방법인 Vitek 2 system 방법과 분자생물학적 방법인 species-specific PCR 방법의 동정결과를 비교·평가하고자 하였다.

제안 방법

5%) 분리균주가 Vibrio 속에 속하는 것으로 확인되었다. 16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 최종적으로 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개는 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법을 이용한 species 수준의 동정실험에 이용되었다.
총 123개 새우 분리균주를 대상으로 16S rRNA gene sequencing을 수행하였다. 16S rRNA gene sequencing을 통하여 확보된 분리균주의 16S rRNA gene 염기서열을 대상으로 하여 Blast 검색하여 GeneBank상의 data와 비교 분석하였다. 16S rRNA gene sequencing 분석결과, 총 123개 새우 분리균주 중 24개(19.
PCR 반응액은 forward primer와 reverse primer (100 pmole/µL) 각각 2 µL, 2 × Taq PCR Smart Mix (Solgent Co., Daejeon, South Korea) 20 µL, 그리고 template DNA는 26 µL 로 총량은 50 µL 로 하였다.
PCR 반응액은 forward primer와 reverse primer (100 pmole/1 µL) 각각 2 µL, 2 × Taq PCR Smart Mix (Solgent Co., Daejeon, South Korea) 20 µL, 그리고 template DNA는 26 µL로 총량은 50 µL로 하였다.
, Daejeon, South Korea) 20 µL, 그리고 template DNA는 26 µL로 총량은 50 µL로 하였다. PCR은 Gene Pro Thermal Cycler TC-E-48D (Hangzhou Bioer Technology, Binjiang, China)를 사용하여 수행하였다. 본 실험에 이용된 16S rRNA gene primer 염기서열과 반응조건은 Table 1에 나타내었다.
본 실험에 이용된 16S rRNA gene primer 염기서열과 반응조건은 Table 1에 나타내었다. PCR을 수행한 후 PCR 산물은 1.5% agarose gel에 전기영동 한 후 SL-20 High Performance DNA image visualizer (Seoulin Scientific Co. Ltd., Seongnam, South Korea)로 target band를 확인하였다. 또한 16S rRNA gene PCR 증폭산물에 대하여 DNA sequencing을 수행하였다.
, Daejeon, South Korea) 20 µL, 그리고 template DNA는 26 µL로 총량은 50 µL로 하였다. PCR은 Gene Pro Thermal Cycler TC-E-48D (Hangzhou Bioer Technology, Binjiang, China)를 사용하여 수행하였다. 본 실험에 이용된 16S rRNA gene primer 염기서열과 반응조건은 Table 1에 나타내었다.
본 실험에 이용된 16S rRNA gene primer 염기서열과 반응조건은 Table 1에 나타내었다. PCR을 수행한 후 PCR 산물은 1.5% agarose gel에 전기영동 한 후 SL-20 High Performance DNA image visualizer (Seoulin Scientific Co. Ltd., Seongnam, South Korea)로 target band를 확인하였다. 또한 16S rRNA gene PCR 증폭산물에 대하여 DNA sequencing을 수행하였다.
16S rRNA gene의 sequencing은 dideoxynucleotide-chain-terminating DNA sequencing 원리를 기초로 하는 ABI 3730XL DNA Analyzer를 이용하였다. Sequencing을 통하여 확보한 16S rRNA gene 염기서열은 GenBank상의 basic local alignment search tool (BLAST) 프로그램을 이용하여 이미 GenBank에 등록된 16S rRNA gene 염기서열과의 상동성을 비교 분석하였다.
Vibrio 선택배지를 이용하여 분리된 새우 분리균주의 속명을 확인하기 위하여 16S rRNA gene primer를 이용하여 PCR을 수행하였다. PCR 반응액은 forward primer와 reverse primer (100 pmole/1 µL) 각각 2 µL, 2 × Taq PCR Smart Mix (Solgent Co.
Vibrio 선택배지인 TCBS 배지상에 형성된 colony 중 yellow와 green 색을 띠는 colony를 Vibrio 속 세균으로 판정하고 순수 분리하였다. 그 결과 총 750 g의 새우 검체(5개 원산지로부터 각 원산지 별로 150 g씩 확보된 새우 검체)로부터 Vibrio 의심균주 123개를 확보하였다.
85% NaCl)으로 10진 희석법에 따라 계열희석 하였다. 각 검체의 희석액을 Thiosulphate citrate bile salt sucrose (TCBS, Difco, Becton Dickinson Co., Sparks, MD, USA) 배지를 이용하여 37℃에서 24시간 배양하여 운동성이 있고, yellow나 green color를 띄는 colony를 Vibrio 속 세균으로 순수분리 하였다.
, Seongnam, South Korea)로 target band를 확인하였다. 또한 16S rRNA gene PCR 증폭산물에 대하여 DNA sequencing을 수행하였다. 16S rRNA gene의 sequencing은 dideoxynucleotide-chain-terminating DNA sequencing 원리를 기초로 하는 ABI 3730XL DNA Analyzer를 이용하였다.
본 연구에 이용된 5개의 Vibrio 표준균주와 TCBS 배지상에서 분리된 123개 Vibrio 의심 분리균주 중 16S rRNA gene sequencing을 이용한 동정 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개에 대하여 5개 species 별로 각 Vibrio species에 특이적인 primer를 이용하여 species-specific PCR 을 수행하였다. PCR 반응액은 forward primer와 reverse primer (100 pmole/µL) 각각 2 µL, 2 × Taq PCR Smart Mix (Solgent Co.
총 123개 새우 분리균주를 대상으로 16S rRNA gene sequencing을 수행하였다. 16S rRNA gene sequencing을 통하여 확보된 분리균주의 16S rRNA gene 염기서열을 대상으로 하여 Blast 검색하여 GeneBank상의 data와 비교 분석하였다.
활성화된 균주는 0.45% NaCl 용액을 사용하여 densicheck에서 0.5 McFarland로 희석을 한 후 GNI card에 분주하여 Vitek 2 system (bioMerieux, Marcy l'Etoile, France)으로 분석을 수행하였다.

대상 데이터

연구에서는 5종의 Vibrio 표준균주가 이용되었다. V. parahaemolyticus ATCC 27969, V. vulnificus ATCC 27562, V. mimicus ATCC 33653, V. alginolyticus ATCC 17749는 American Type Culture Collection (ATCC)로 부터 분양 받았으며, V. cholerae NIH 35A3은 미국국립보건원(National Institutes of Health, NIH)으로 부터 분양 받았다
PCR은 Gene Pro Thermal Cycler TC-E-48D (Hangzhou Bioer Technology, Binjiang, China)를 사용하여 수행하였다. 본 실험에 이용된 16S rRNA gene primer 염기서열과 반응조건은 Table 1에 나타내었다. PCR을 수행한 후 PCR 산물은 1.
본 연구에서 이용된 Vibrio 분리균주는 강화, 남양, 인천, 홍성, 그리고 태안 지역에서 확보한 새우로부터 분리되었다. 수집한 각 원산지 별 새우 검체 150 g을 균질화 시킨후 각 검체를 멸균희석액(0.
연구에서는 5종의 Vibrio 표준균주가 이용되었다. V.

데이터처리

5 McFarland로 희석을 한 후 GNI card에 분주하여 Vitek 2 system (bioMerieux, Marcy l'Etoile, France)으로 분석을 수행하였다. 결과 판독은 Advanced Expert System (AES) software에 의해 자동으로 분석 및 판독하여 동정하였다. 판독결과 신뢰도 90% 이상을 올바른 동정으로 판정하였다.

이론/모형

또한 16S rRNA gene PCR 증폭산물에 대하여 DNA sequencing을 수행하였다. 16S rRNA gene의 sequencing은 dideoxynucleotide-chain-terminating DNA sequencing 원리를 기초로 하는 ABI 3730XL DNA Analyzer를 이용하였다. Sequencing을 통하여 확보한 16S rRNA gene 염기서열은 GenBank상의 basic local alignment search tool (BLAST) 프로그램을 이용하여 이미 GenBank에 등록된 16S rRNA gene 염기서열과의 상동성을 비교 분석하였다.
Vibrio 표준균주 5개와 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개를 대상으로 Vitek 2 system 방법에 의하여 분석을 수행하였으며 분석결과는 Table 2에 나타내었다. 5개 Vibrio 표준균주 중 V.
본 연구에서 이용된 Vibrio 분리균주는 강화, 남양, 인천, 홍성, 그리고 태안 지역에서 확보한 새우로부터 분리되었다. 수집한 각 원산지 별 새우 검체 150 g을 균질화 시킨후 각 검체를 멸균희석액(0.85% NaCl)으로 10진 희석법에 따라 계열희석 하였다. 각 검체의 희석액을 Thiosulphate citrate bile salt sucrose (TCBS, Difco, Becton Dickinson Co.
, Sparks, MD, USA) broth에 증균배양 하였다. 증균배양 후 다음과 같이 boiling method를 이용하여 배양액으로부터 genomic DNA를 추출하였다. 배양액 1 mL를 14,000 rpm으로 3분간 원심분리하여 상등액을 제거하고, cell pellet을 확보하였다.

성능/효과

alginolyticus ATCC 17749)는 동정이 되지 않았다. 16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 Vibrio 속으로 동정되었던 24개의 분리균주 중 15개가 Vitek 2 system 방법에 의한 분석을 통하여 Vibrio species 수준으로 동정되었다. 나머지 9개의 분리균주 중 6개 분리균주는 Sphingomonas paucimobilis로 동정되었고, 1개 분리균주는 Acinetobacter haemolyticus로 동정되었으며, 나머지 2개의 분리균주는 동정되지 않았다.
16S rRNA gene sequencing을 통하여 확보된 분리균주의 16S rRNA gene 염기서열을 대상으로 하여 Blast 검색하여 GeneBank상의 data와 비교 분석하였다. 16S rRNA gene sequencing 분석결과, 총 123개 새우 분리균주 중 24개(19.5%) 분리균주가 Vibrio 속에 속하는 것으로 확인되었다. 16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 최종적으로 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개는 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법을 이용한 species 수준의 동정실험에 이용되었다.
Vibrio 표준균주 5개와 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개를 대상으로 Vitek 2 system 방법에 의하여 분석을 수행하였으며 분석결과는 Table 2에 나타내었다. 5개 Vibrio 표준균주 중 V. parahaemolyticus ATCC 27969와 V. mimicus ATCC 33653는 probability가 각각 99%와 96%로 예상했던 결과와 일치하였다. 그러나 나머지 3개의 표준균주(V.
Species-specific PCR 방법을 이용한 경우, Vibrio 표준균주 5개(5/5, 100%) 모두 Vibrio 종으로 동정이 되었으며, 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개 중 16개(16/24, 66.7%)도 Vibrio 종으로 동정이 되어서 총 21개 균주(21/29, 72.5%)가 Vibrio 종으로 동정되었으며, 나머지 8개 균주(8/29, 27.5%)는 Vibrio 종으로 동정이 되지 않았다.
Vibrio 표준균주 5개와 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개를 대상으로 speciesspecific PCR을 수행한 결과, 5개의 Vibrio 표준균주에서 각각 Vibrio species에 해당하는 target band가 확인되었다. 위의 결과로 보아 각 Vibrio species-specific primer가 각각의 Vibrio species에 특이적으로 반응한다는 것을 확인할 수 있었다.
Vitek 2 system 방법을 이용한 경우, Vibrio 표준균주 2개(2/5, 40%), 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 15개(15/24, 62.5%) 등의 총 17개 균주(17/29, 58.6%)가 Vibrio 종으로 동정되었으며, 나머지 12개 균주(12/29, 41.4%)는 Vibrio 종으로 동정이 되지 않았다.
Vibrio 선택배지인 TCBS 배지상에 형성된 colony 중 yellow와 green 색을 띠는 colony를 Vibrio 속 세균으로 판정하고 순수 분리하였다. 그 결과 총 750 g의 새우 검체(5개 원산지로부터 각 원산지 별로 150 g씩 확보된 새우 검체)로부터 Vibrio 의심균주 123개를 확보하였다.
위의 결과로 보아 각 Vibrio species-specific primer가 각각의 Vibrio species에 특이적으로 반응한다는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 Vibrio 속으로 동정되었던 24개의 분리균주 중 16개 분리균주는 species-specific PCR 방법을 통하여 Vibrio species 수준으로 동정되었고, 나머지 8개 분리균주는 동정되지 않았다. 각 species-specific primer를 이용하여 PCR을 수행한 결과는 Table 3에 나타내었다.
16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 Vibrio 속으로 동정되었던 24개의 분리균주 중 15개가 Vitek 2 system 방법에 의한 분석을 통하여 Vibrio species 수준으로 동정되었다. 나머지 9개의 분리균주 중 6개 분리균주는 Sphingomonas paucimobilis로 동정되었고, 1개 분리균주는 Acinetobacter haemolyticus로 동정되었으며, 나머지 2개의 분리균주는 동정되지 않았다.
mimicus 5종에 대한 species-specific primer를 이용하여 신속하고 정확한 동정결과를 얻을 수 있었다. 다만, 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개 중 동정되지 않은 8개 균주는 V. parahaemolyticus, V. cholerae, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. mimicus 종외에 다른 Vibrio species로 사료된다.
분자생물학적 방법인 species-specific PCR 방법은 V. parahaemolyticus, V. cholerae, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. mimicus 5종에 대한 species-specific primer를 이용하여 신속하고 정확한 동정결과를 얻을 수 있었다. 다만, 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개 중 동정되지 않은 8개 균주는 V.
2%) 등의 총 9개(9/29, 31%) 균주들의 동정결과만이 일치하였다. 불일치한 결과 중 대상 미생물의 target gene이 기존 보고된 specific한 gene을 이용하여 문헌상^22,23)에 보고 됐던 점과 Vitek 2 system 방법의 부정확성^24,25)에 대한 보고를 감안할 때 species-specific PCR 방법이 더 정확하다는 것을 확인 할 수 있었다.
Vibrio 표준균주 5개와 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 24개를 대상으로 speciesspecific PCR을 수행한 결과, 5개의 Vibrio 표준균주에서 각각 Vibrio species에 해당하는 target band가 확인되었다. 위의 결과로 보아 각 Vibrio species-specific primer가 각각의 Vibrio species에 특이적으로 반응한다는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 16S rRNA gene sequencing 결과에 의하여 Vibrio 속으로 동정되었던 24개의 분리균주 중 16개 분리균주는 species-specific PCR 방법을 통하여 Vibrio species 수준으로 동정되었고, 나머지 8개 분리균주는 동정되지 않았다.
결과 판독은 Advanced Expert System (AES) software에 의해 자동으로 분석 및 판독하여 동정하였다. 판독결과 신뢰도 90% 이상을 올바른 동정으로 판정하였다.
그리고 이와 같이 두 가지 방법을 통하여 동정된 결과를 비교하였을 때 일부 상이한 결과를 확인하였다. 표준 균주를 포함한 총 29개의 Vibrio 균주를 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법으로 각각 동정한 결과, Vibrio 표준균주 2개(2/5, 40%), 16S rRNA gene sequencing 결과 Vibrio 속으로 확인된 분리균주 7개(7/24, 29.2%) 등의 총 9개(9/29, 31%) 균주들의 동정결과만이 일치하였다. 불일치한 결과 중 대상 미생물의 target gene이 기존 보고된 specific한 gene을 이용하여 문헌상^22,23)에 보고 됐던 점과 Vitek 2 system 방법의 부정확성^24,25)에 대한 보고를 감안할 때 species-specific PCR 방법이 더 정확하다는 것을 확인 할 수 있었다.

후속연구

그러나 이와 같은 배지배양법은증균배양, 선택배양, 생화학적 동정 확인시험을 포함하여 5-7일 정도의 긴 기간이 소요되고 노동력의 소모가 많으며 배양조건에 따라 혹은 실험자에 따라 결과의 판정이 달라지는 어려움이 있다. 게다가 실제 병원성이 있는 Vibrio 종을 검출하기 위해서는 추가적인 확인시험이 필요하다. 따라서 이러한 단점을 보완할 수 있는 신속검출기법이 현재까지 지속적으로 개발 되어지고 있으며 실제로 많은 새로운 검출방법들이 소개되었다⁹⁾.
현재 다른 세균 species에 비해 Vibrio species에 대한 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법의 연구가 미흡하여 추가실험이 요구된다. 또한 본 연구에서 24개 새우 Vibrio 분리균주를 대상으로 하여 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법을 비교하였을 때 결과가 상당부분 불일치하기 때문에 표준균주를 포함하여 좀더 많은 분리균주를 확보하여 추가적인 확인실험을 해야할 필요성이 있다. 마지막으로 본 연구를 통하여 얻은 연구결과들은 보다 정확한 Vibrio 종(species) 검출방법 개발을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
또한 본 연구에서 24개 새우 Vibrio 분리균주를 대상으로 하여 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법을 비교하였을 때 결과가 상당부분 불일치하기 때문에 표준균주를 포함하여 좀더 많은 분리균주를 확보하여 추가적인 확인실험을 해야할 필요성이 있다. 마지막으로 본 연구를 통하여 얻은 연구결과들은 보다 정확한 Vibrio 종(species) 검출방법 개발을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
현재 다른 세균 species에 비해 Vibrio species에 대한 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법의 연구가 미흡하여 추가실험이 요구된다. 또한 본 연구에서 24개 새우 Vibrio 분리균주를 대상으로 하여 Vitek 2 system 방법과 species-specific PCR 방법을 비교하였을 때 결과가 상당부분 불일치하기 때문에 표준균주를 포함하여 좀더 많은 분리균주를 확보하여 추가적인 확인실험을 해야할 필요성이 있다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	Vitek 2 system 방법의 장점은?	미생물의 기질 분해능을 근거로 하여 동정하는 Vitek 2 system 방법은 컴퓨터 프로그램을 이용하여 결과를 분석하고, 이미 보유하고 있는 data base와 비교하여 동정하는 방식이다10,11). 이러한 미생물 동정 시스템 방법은 실험자의 주관적인 견해를 배제하고 소요시간을 줄여 준다는 장점이 있으나, 미생물의 동정을 표현형적 특징에만 의존하여 수행하기 때문에 정확한 동정 결과를 얻을 수 없다는 단점이 있다12). 하지만 분리균주의 동정에 대한 Vitek 2 system 방법의 유용성이 정확하게 밝혀지지 않은 실정임에도 불구하고 현재 미생물 동정실험에 널리 사용되고 있어 Vitek 2 system 방법에 대한 평가가 요구된다13).
	Vibrio 속이란?	Vibrio 속은 그람 음성, 호염성 간균으로 해수, 기수, 담수 지역 등 해양환경에 널리 분포한다1). 또한, Vibrio 속 중의 일부 종은 사람에게 치명적인 병원균으로 작용하며, 콜레라균(Vibrio cholerae), 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 그리고 패혈증균(Vibrio vulnificus) 등의 병원성 세균이 포함된다2).
	Vibrio 속에 포함되어 있는 병원성 세균은?	Vibrio 속은 그람 음성, 호염성 간균으로 해수, 기수, 담수 지역 등 해양환경에 널리 분포한다1). 또한, Vibrio 속 중의 일부 종은 사람에게 치명적인 병원균으로 작용하며, 콜레라균(Vibrio cholerae), 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 그리고 패혈증균(Vibrio vulnificus) 등의 병원성 세균이 포함된다2). 특히 장염비브리오균(V.

참고문헌 (26)

Kim, S.M., Won, K.M., Woo, S.H., Li, H., Kim, E.J., Choi, K.J., Cho, M.Y., Kim, S.H. and Park, S.I.: Vibrios isolated from diseased marine culturing fishes in Korea. J. Fish Pathol. 18, 133-145 (2005).
Diggles, B.K., Carson, J., Hine, P.M., Hickman, R.W. and Tait, M.J.: Vibrio species associated with mortalities in hatchery-reared turbot (Colistium nudipinnis) and brill (C. guntheri) in New Zealand. Aquaculture 183, 1-12 (2000).

상세보기
Joseph, S.W., Cowell, R.R. and Kaper, J.B.: Vibrio parahaemolyticus and related halophilic vibrios. Crit. Rev. Microbiol. 10, 77-123 (1983).
Su, Y.C. and Liu, C.: Vibrio parahaemolyticus: A concern of seafood safety. Food Microbiol. 24, 549-558 (2007).

상세보기
Jung, S.H., Hur, M.J., Ju, J.H., Kim, K.A., Oh, S.S., Go, J.M., Kim, Y.H. and Im, J.S.: Microbiological evaluation of raw vegetables. J. Food Hyg. Safety 21, 250-257 (2006).
Kim, M.H. and Shin, W.S.: Microbiological quality of raw and cooked foods in middle and high school food service establishments. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 37, 1343-1356 (2008).

원문보기 상세보기
Korea Food and Drug Administration.: Food & Drug Statistical Yearbook for 2009. Available from http://www.kfda.go.kr/index.kfda?mid96&pageNo1&seq7181&cmdv, Accessed Nov. 10 (2009).
Lee, S.K., Wang, H.Z., Law, S.H., Wu, R.S. and Kong, R.Y.: Analysis of the 16S-23S rDNA intergenic spacers (IGSs) of marine vibrios for species-specific signature DNA sequences. Marine pollution Bulletin 44, 412-420 (2002).

상세보기
Chon, J.W., Hyeon, J.Y., Hwang, I.G., Kwak, H.S., Han, J.A., Chung, Y.H., Song, K.Y. and Seo, K.H.: Comparison of the standard culture method and real-time PCR for the detection of Vibrio parahaemolyticus in seafoods and vegetables. Korean J. Food Sci. Technol. 42, 355-360 (2010).
Miller, L.T.: Single derivatization method for routine analysis of bacterial whole-cell fatty acid methyl esters, including hydroxyl acids. J. Clin. Microbiol. 16, 584-586 (1982).
Stager, C.E. and Davis, J.R.: Automated systems for identification of microorganisms. Clin. Microbiol. Rev. 5, 302-327 (1992).

상세보기
Jill, K.W., Hanko, G., Stewart, R., Pape, J. and Nachamkin, I.: Comparison of three commercial systems for identification of yeasts commonly isolated in the clinical microbiology laboratory. J. Clin. Microbiol., 37, 1967-1970 (1999).

상세보기
Tang, Y.W., Ellis, N. M., Hopkins, M. K., Smith, D. H., Dodge, D. E. and Persing, D. H.: Comparison of phenotypic and genotypic techniques for identification of unusual aerobic pathogenic Gram-negative bacilli. J. Clin. Microbiol. 36, 3674-3679 (1998).

상세보기
Yeon S.H., Jeong W..J. and Park J.S.: The diversity of culturable organotrophic bacteria from local solar salterns. J. Microbiol. 43, 1-10 (2005).

원문보기 상세보기
Hernandez, G. and Olmos, J.: Molecular identification of pathogenic and nonpathogenic strains of Vibrio harveyi using PCR and RAPD. Appl. Microbiol. Biotechnol. 63, 722-727 (2003).
Rivas, R., Garcia-Fraile, P., Mateos, P. F., Martinez-Molina, E. and Velazquez, E.: Photobacterium halotolerans sp. Nov.,isolated from lake Martel in Spain. Inc. J. Syst. Evol. Microbiol. 56, 1067-1071 (2003).
Thompson, F. L., Gevers, D., Thompson, C. C., Dawyndt, P., Naser, S., Hoste, B., Munn, C. B. and Swings, J.: Phylogeny and molecular identification of vibrios on the basis of multilocus sequence analysis. Appl. Microbiol. Biotechnol. 71, 5107-5115 (2005).
Yoon, M., Kim, K.J., Shin, J.H, Seo, S.P. and Yang, D.U.: Identification of Vibrio vulnificus by the Vitek GNI+ card. Korean J. Clin. Pathol. 20, 314-319 (2000).
Ryang, D. W., Koo, S. B., Shin, M. G., Shin, J. H. and Suh, S. P.: Molecular typing of Vibrio vulnificus isolated from clinical specimens by pulsed-field gel electrophoresis and random amplified polymorphic DNA analysis. Jpn. J. Infect. Dis. 52, 38-41 (1999).
Yoon, Y.J., Kim, D.Y., Lee, C.H., Lee, U.Y., Koh, Y.H., Kim, S.K. and Kim, J.W.: Isolation and Identification of Vibrio species contaminated in imported frozen seafoods. J. Fd. Hyg. Safety 15, 128-136 (2000).
O'Hara, C.M., Westbrook, G.L. and Miller, J.M.: Evaluation of Vitek GNI+ and Becton Dickinson microbiology systems Crystal E/NF identification systems for identification of members of the family Enterobacteriaceae and other gramnegative, glucose-fermenting and non-glucose-fermenting bacilli. J. Clin. Microbiol. 35, 3269-3273 (1997).
Cheryl, L.T., Jayna, S.P., Nancy, D.P., Evangeline, G.S., Cheryl, A.B. and Nancy, A.S.: Identification of Vibrio isolates by a multiplex PCR assay and rpoB sequence determination. J. Clin. Microbiol., 45, 134 (2007).

상세보기
Angela, D.P., Giuseppina, C., Giuseppina, T., Domenico, C. and Vito, T.F.: A collagenase-targeted multiplex PCR assay for identification of Vibrio alginolyticus, Vibrio cholerae, and Vibrio parahaemolyticus. J. Food Prot. 68, 150-153 (2005).

상세보기
Lee, S. H., Jang, S. J., Moon, D. S., Park, Y. J., Ahn, G. Y., Han, H. L., Chaulagain, B. P. and Jenog, O. Y.: Evaluation of the detectability of vitek II system for inducible clindamycin resistance in Staphylococci. Kor. J. Lab. Med. 25, 406-410 (2005).
Eisner, A., Gorkiewicz, G., Feierl, G., Leitner, E., Kofer, J., Kessler, H. H. and Marth, E.: Identification of glycopeptideresistant Enterococci by Vitek 2 system and conventional and real-time polymerase chain reaction. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 53, 17-21 (2005).

상세보기
Thwe, S. M., Kobayashi, T., Luan, T., Shirai, T., Onodera, M. and Hamada-Sato N.: Isolation, characterization, and utilization of ${\gamma}$ -aminobutyric acid (GABA)-producing lactic acid bacteria from Myanmar fishery products fermented with boiled rice. Fisheries Science 77, 279-288 (2011).

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증