[국내논문]Murine Macrophage RAW 264.7 세포에서 누은분홍잎(Acrosorium yendoi Yamada)의 추출물과 에틸아세테이트 분획물에 대한 항염증 효과 Anti-inflammatory Effects on 80% Ethanol Extract and Ethyl Acetate Fraction of Acrosorium yendoi Yamada in Murine Macrophage RAW 264.7 Cells원문보기
본 연구는 누은분홍잎(Acrosorium yendoi Yamada) 80% 에탄올를 가지고 추출한 후 추출물을 극성에 따라 순차적으로 용매분획을 실시하여, 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물들의 염증반응의 주체가 되는 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에서 LPS로 유도된 NO의 생성억제 효과, 그리고 iNOS와 COX-2의 단백질 발현 억제효과, PGE2 생성 억제 효과 및 TNF-α와 IL-6등과 같은 pro-inflammatory cytokines 생성 억제효과 등을 알아보았다. 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에 LPS로 자극을 주고 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물을 처리하여 확인해본 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 NO와 PGE2 생성 억제 활성이 가장강하게 나타났으며, 농도 의존적으로 NO 및 PGE2 생성억제 활성을 보임을 확인할 수 있었고, 세포독성평가(LDH)에서는 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 50㎍/㎖ 이하의 농도에서는 세포독성이 나타나지 않았다. 또한, 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 확인할 수 있었으며, 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적으로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있었다. 이상의 결과는 누은분홍잎에 대한 효능, 이화학적 성분 및 유효성분등에 대한 연구가 전무하여 본 결과를 통해 누은분홍잎 추출물 및 활성 분회물을 이용한 항염증 효능을 갖는 유효성분 분리 및 이를 통한 작용기전 연구에 중요한 기초자료가 될 것이라 사료되고, 또한 안전하고 효과적인 항염증 관련 의약품, 의약외품 및 기능성 식품소재 개발에 대한 가능성을 제시하였다.
본 연구는 누은분홍잎(Acrosorium yendoi Yamada) 80% 에탄올를 가지고 추출한 후 추출물을 극성에 따라 순차적으로 용매분획을 실시하여, 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물들의 염증반응의 주체가 되는 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에서 LPS로 유도된 NO의 생성억제 효과, 그리고 iNOS와 COX-2의 단백질 발현 억제효과, PGE2 생성 억제 효과 및 TNF-α와 IL-6등과 같은 pro-inflammatory cytokines 생성 억제효과 등을 알아보았다. 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에 LPS로 자극을 주고 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물을 처리하여 확인해본 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 NO와 PGE2 생성 억제 활성이 가장강하게 나타났으며, 농도 의존적으로 NO 및 PGE2 생성억제 활성을 보임을 확인할 수 있었고, 세포독성평가(LDH)에서는 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 50㎍/㎖ 이하의 농도에서는 세포독성이 나타나지 않았다. 또한, 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 확인할 수 있었으며, 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적으로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있었다. 이상의 결과는 누은분홍잎에 대한 효능, 이화학적 성분 및 유효성분등에 대한 연구가 전무하여 본 결과를 통해 누은분홍잎 추출물 및 활성 분회물을 이용한 항염증 효능을 갖는 유효성분 분리 및 이를 통한 작용기전 연구에 중요한 기초자료가 될 것이라 사료되고, 또한 안전하고 효과적인 항염증 관련 의약품, 의약외품 및 기능성 식품소재 개발에 대한 가능성을 제시하였다.
This study describes a preliminary evaluation of the anti-inflammatory activity of Acrosorium yendoi Yamada extracts. A. yendoi Yamada was extracted using 80% ethanol and then fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate and butanol. To screen for anti-inflammatory agents effectively, we f...
This study describes a preliminary evaluation of the anti-inflammatory activity of Acrosorium yendoi Yamada extracts. A. yendoi Yamada was extracted using 80% ethanol and then fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate and butanol. To screen for anti-inflammatory agents effectively, we first examined the inhibitory effect of 80% EtOH extract and solvent fractions of A. yendoi Yamada on the production of pro-inflammatory factors and cytokines stimulated with lipopolysaccharide. In addition, we examined the inhibitory effect of 80% EtOH extract and solvent fractions of A. yendoi Yamada on pro-inflammatory mediators (NO, iNOS, PGE2, and COX-2) in RAW 264.7 cells. In the sequential fractions of n-hexane and EtOAc inhibited the NO and PGE2 production and the protein level of iNOS and COX-2, and protein expression of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, and IL-6). These results suggest that A. yendoi Yamada may have significant effects on inflammatory factors and may be provided as possible anti-inflammatory therapeutic seaweed.
This study describes a preliminary evaluation of the anti-inflammatory activity of Acrosorium yendoi Yamada extracts. A. yendoi Yamada was extracted using 80% ethanol and then fractionated sequentially with n-hexane, ethyl acetate and butanol. To screen for anti-inflammatory agents effectively, we first examined the inhibitory effect of 80% EtOH extract and solvent fractions of A. yendoi Yamada on the production of pro-inflammatory factors and cytokines stimulated with lipopolysaccharide. In addition, we examined the inhibitory effect of 80% EtOH extract and solvent fractions of A. yendoi Yamada on pro-inflammatory mediators (NO, iNOS, PGE2, and COX-2) in RAW 264.7 cells. In the sequential fractions of n-hexane and EtOAc inhibited the NO and PGE2 production and the protein level of iNOS and COX-2, and protein expression of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, and IL-6). These results suggest that A. yendoi Yamada may have significant effects on inflammatory factors and may be provided as possible anti-inflammatory therapeutic seaweed.
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문제 정의
본 연구에서는 누은분홍잎 추출물을 대상으로 염증성 질환 의 예방 및 치료제 개발의 기초자료로 사용 될 수 있는지 탐색하 고, 누은분홍잎이 항염증 활성을 갖는 자원으로서 활용가치의 여부를 확인하기 위해 기능성을 밝히고자 극성에 따라 순차적 으로 용매 분획을 활용 분획물을 제작하였다. 이렇게 제작된 시료를 LPS로 자극된 RAW 264.
제안 방법
7 세포는 10배 농도로 조제된 추출물 시료 50 ㎕와 450 ㎕의 LPS (1 ㎍/㎖)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하였고 전배 양과 동일 조건에서 배양하였다. 24시간 후 배양 배지를 원심분 리(12,000 rpm, 3 분)하여 얻어진 상층액의 pro-inflammatory cytokines 생성 함량을 측정하였다. 모든 시료는 정량 전까지 -20℃ 이하에 보관하였다.
iNOS의 발현 양을 검토하기 위한 항체로는 anti-mouse iNOS (Calbiochem, La Jolla, CA, USA)를 COX-2의 발현 양을 검토하기 위한 항체로는 anti-mouse COX-2 (BD Biosciences Pharmingen, San Jose, CA, USA)를 TTBS 용액에서 1:1000으 로 희석하여 상온에서 2시간 반응시킨 후 TTBS로 3회 세정하였다. 2차 항체로는 HRP (horse radish peroxidase)가 결합된 anti- mouse IgG (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK)를 1:5000으로 희석하여 상온에서 30분 간 반응시킨 후, TTBS로 3회 세정하여 ECL 기질(Amersham Biosciences, Piscat- away, NJ, USA)과 1~3분 간 반응 후 X-ray 필름에 감광하였다.
5 × 105 cells/㎖)를 DMEM 배지에 실시예 의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양 한 후 배 양 배지를 얻어 3, 000 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. LDH (lactate dehydrogenase) assay는 non-radioactive cytotoxicity assay kit (Promega)를 이용하여 측정했으며, 96 well plate에 원심 분리하여 얻은 배양 배지 50 ㎕와 reconstituted substrate mix를 50 ㎕를 넣고, 실온에서 30분 반응시킨 후 50 ㎕의 stop solution을 넣은 후 microplate reader (Bio-TEK Instruments Inc., Vermont, WI, USA)를 사용하여 490 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대 조군(LDH control, 1:5000)의 흡광도 값과 비교하여 세포독성 을 평가하였다.
, 1994), 염증이 수반된 조직 주변에 NO 생성이 급격하게 늘어나면서 초기 염증을 유발하고 악화시키는데 관여한다. LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 생성되는 Nitric oxide(NO)에 대한 누은분홍잎 추출물의 억제효과를 알아보기 위해서 세포에 생성된 NO 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 그 결과 80% 에탄올 추 출물, 헥산과 에틸아세테이트 분획물에서 대조군인 LPS 단독 처리군에 비해 높은 NO 생성 억제효과를 관찰할 수 있었다.
누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 의한 염증 매개인자인 NO, PGE₂생성 억제 활성이 iNOS와 COX-2의 발현 억제로 인한 것 인지 확인하기 위하여 단백질 수준에서의 발현을 Western blot analysis로 확인하였다. RAW 264.7 cell에 LPS (1 ㎍/㎖)와 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물(50 ㎍/㎖)을 24시간 처리한 후 iNOS, COX-2의 발현 억제 활성을 확인하였다. 그 결과 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 알 수 있으며(Fig.
, 1991, Burrell R, 1994). RAW 264.7 cell에서 누은분 홍잎의 전염증성 cytokine인 TNF-α와 IL-6의 발현에 미치는 영향을 ELISA kit를 이용하여 조사하였다. RAW 264.
1% Tween 20 + TBS) 용액에서 상온에서 2시간 동안 실시하였다. iNOS의 발현 양을 검토하기 위한 항체로는 anti-mouse iNOS (Calbiochem, La Jolla, CA, USA)를 COX-2의 발현 양을 검토하기 위한 항체로는 anti-mouse COX-2 (BD Biosciences Pharmingen, San Jose, CA, USA)를 TTBS 용액에서 1:1000으 로 희석하여 상온에서 2시간 반응시킨 후 TTBS로 3회 세정하였다. 2차 항체로는 HRP (horse radish peroxidase)가 결합된 anti- mouse IgG (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK)를 1:5000으로 희석하여 상온에서 30분 간 반응시킨 후, TTBS로 3회 세정하여 ECL 기질(Amersham Biosciences, Piscat- away, NJ, USA)과 1~3분 간 반응 후 X-ray 필름에 감광하였다.
그리고 80% 에탄올 추출물 2 g을 정확히 취하여 증류수 400 ㎖에 현탁시킨 후, n-hexane (400 ㎖ × 3), ethyl acetate (400 ㎖ × 3), buthanol (400 ㎖ × 3)로 순차적으로 분획 및 농축하여 각각의 분획물을 확보한 후 동결 건조하여 n-heaxane, ethyl acetate 및 buthanol 그리고 잔사물를 얻었다. 각 분획물은 해당 용매로 용해시켜 0.2 ㎛ membrane filter (Advantec MFS Inc. USA)로 제균하였고 제작된 추출물 및 분획물은 제주테크노파크 생물종 다양성연구소 –20℃에서 보관하면서 본 연구에 사용하였다.
, Vermont, WI, USA)를 사용하여 490 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 대 조군(LDH control, 1:5000)의 흡광도 값과 비교하여 세포독성 을 평가하였다.
누은분홍잎 미세말(230 g) 시료를 80% 에탄올을 이용하여 상 온에서 24시간 동안 3회 침출하였으며, 그 후 상층액을 회수하고 감압 농축하여 에탄올 추출물(20 g)을 얻었다. 그리고 80% 에탄올 추출물 2 g을 정확히 취하여 증류수 400 ㎖에 현탁시킨 후, n-hexane (400 ㎖ × 3), ethyl acetate (400 ㎖ × 3), buthanol (400 ㎖ × 3)로 순차적으로 분획 및 농축하여 각각의 분획물을 확보한 후 동결 건조하여 n-heaxane, ethyl acetate 및 buthanol 그리고 잔사물를 얻었다. 각 분획물은 해당 용매로 용해시켜 0.
누은분홍잎 건조시료 230 g을 80% 에탄올로 추출한 후 여과 하여 얻어진 추출액을 감압 농축하여 조추출물 20 g을 얻었다. 그리고 여기서 얻어진 에탄올 추출물 2 g을 10배량의 증류수로 현탁 시킨 후에 헥산(n-hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 그리고 부탄올(BuOH) 등을 순차적으로 분획하여 헥산 층에서 504 ㎎ (25.24%), 에틸아세테이트 층에서 220 ㎎ (11.01%), 부탄올 층에서 151 ㎎ (7.56%) 및 잔사인 물 층에서 1, 123 ㎎ (56.19%)의 분획물을 얻었다. 에탄올 추출물에 대한 각 순차분획물 중 부탄 올 분획물 수율이 7.
누은분홍잎 미세말(230 g) 시료를 80% 에탄올을 이용하여 상 온에서 24시간 동안 3회 침출하였으며, 그 후 상층액을 회수하고 감압 농축하여 에탄올 추출물(20 g)을 얻었다. 그리고 80% 에탄올 추출물 2 g을 정확히 취하여 증류수 400 ㎖에 현탁시킨 후, n-hexane (400 ㎖ × 3), ethyl acetate (400 ㎖ × 3), buthanol (400 ㎖ × 3)로 순차적으로 분획 및 농축하여 각각의 분획물을 확보한 후 동결 건조하여 n-heaxane, ethyl acetate 및 buthanol 그리고 잔사물를 얻었다.
7 세포에서 처리한 후 염증성 매개 인자인 NO와 PGE2의 생성억제 효과 및 이를 합성하는 iNOS와 COX-2 단백질 발현 억제 효능을 확인하였다. 또한, 염증성 cytokine인 TNF-α 및 IL-6의 생성 억제 효과를 조사하였다.
본 연구는 누은분홍잎(Acrosorium yendoi Yamada) 80% 에 탄올를 가지고 추출한 후 추출물을 극성에 따라 순차적으로 용 매분획을 실시하여, 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물들의 염증 반응의 주체가 되는 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에서 LPS 로 유도된 NO의 생성억제 효과, 그리고 iNOS와 COX-2의 단백질 발현 억제효과, PGE2 생성 억제 효과 및 TNF-α와 IL-6등과 같은 pro-inflammatory cytokines 생성 억제효과 등을 알아보 았다. 대식세포 계열인 RAW 264.
5 × 105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate에 접종하고, 실 시예의 시료와 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양은 Griess 시약[1% (w/v) sulfanilamide, 0.1% (w/v) naphylethylenediamine in 2.5% (v/v) phosphoric acid]을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 세포배양 상등액 100 ㎕와 Griess 시약 100 ㎕를 혼합 하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 540 ㎚에서 흡 광도를 측정하였다.
세포배양 상등액 100 ㎕와 Griess 시약 100 ㎕를 혼합 하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 540 ㎚에서 흡 광도를 측정하였다. 생성된 NO의 양은 sodium nitrite (NaNO2) 를 standard로 비교하였다.
본 연구에서는 누은분홍잎 추출물을 대상으로 염증성 질환 의 예방 및 치료제 개발의 기초자료로 사용 될 수 있는지 탐색하 고, 누은분홍잎이 항염증 활성을 갖는 자원으로서 활용가치의 여부를 확인하기 위해 기능성을 밝히고자 극성에 따라 순차적 으로 용매 분획을 활용 분획물을 제작하였다. 이렇게 제작된 시료를 LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 처리한 후 염증성 매개 인자인 NO와 PGE2의 생성억제 효과 및 이를 합성하는 iNOS와 COX-2 단백질 발현 억제 효능을 확인하였다. 또한, 염증성 cytokine인 TNF-α 및 IL-6의 생성 억제 효과를 조사하였다.
대상 데이터
American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA)으로부터 생쥐(murine) 대식세포주인 RAW 264.7을 구입 하여, 10% fetal bovine serum (FBS), penicillin (100 units/㎖), 및 streptomycin (100 g/㎖)을 첨가하여 Dulbeccos Modified Eagles Medium (DMEM; GIBCO Inc.)에서 보관하였다. 이들 세포들은 37℃에서 95% air, 5% CO2가습 공기 조건 하 포화 상태 (subconfluence)에서 배양하였으며, 3일마다 계대 배양하였다.
제주특별자치도 제주시 구좌읍 행원리 해역에서 2013년 3월 25일에 채집하여 동정된 누은분홍잎(시료관리 및 표본번호: K-192)을 담수를 이용하여 부착생물을 제거한 후, 시료를 음건 한 다음 마쇄기로 분쇄하여 미세말화 한 후 4℃에 보관하면서 추출용 시료로 사용하였다.
데이터처리
실험결과는 3번 이상의 독립적인 실험의 데이터를 mean ± standard error 값으로 나타내었다. 실험군 사이의 통계적 유의 성 검정은 student's t-test 분석방법을 사용하였다(* P < 0.
실험결과는 3번 이상의 독립적인 실험의 데이터를 mean ± standard error 값으로 나타내었다. 실험군 사이의 통계적 유의 성 검정은 student's t-test 분석방법을 사용하였다(* P < 0.05, ** P < 0.01).
이론/모형
yendoi Yamada. Cytotoxicity was determined using the LDH method. Values are the mean ± SEM of triplicate experiments.
모든 시료는 정량 전까지 -20℃ 이하에 보관하였다. Pro-inflammatory cytokines 정량 은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량 하였으며 standard 에 대한 표준곡선의 r2값은 0.99 이상이었다.
, 2002). 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 의한 염증 매개인자인 NO, PGE₂생성 억제 활성이 iNOS와 COX-2의 발현 억제로 인한 것 인지 확인하기 위하여 단백질 수준에서의 발현을 Western blot analysis로 확인하였다. RAW 264.
성능/효과
7 cell에서 누은분 홍잎의 전염증성 cytokine인 TNF-α와 IL-6의 발현에 미치는 영향을 ELISA kit를 이용하여 조사하였다. RAW 264.7 cell에 LPS (1 ㎍/㎖)와 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물(50 ㎍/㎖)을 처리하고 TNF-α와 IL-6의 생성 억제 활성을 확인한 결과, TNF-α인 경우 에틸아세테이트 분획물이 가장 높은 생 성억제 활성을 보이고, IL-6인 경우는 헥산 및 에틸아세테이트 분획물이 높은 생성 억제 활성을 보였다(Fig. 4-A, 5-A). 또한 농도 의존적으로 에틸아세테이트 분획물에서 TNF-α와 IL-6 생성 억제 활성을 보임을 알 수 있다(Fig.
, 2007). RAW 264.7 cell에 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물(50 ㎍/㎖)과 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양한 후 PGE₂ELISA assay kit를 이용하여 PGE₂ 생성 억제 활성을 확인한 결과, 에틸아세테이트 분획물이 가장 높은 PGE2 생성 억제 활성을 보였다(Fig. 2-A). 또한 에틸아세 테이트 분획물에서 농도 의존적으로 PGE2 생성 억제 활성을 보 임을 확인할 수 있었다(Fig.
LDH는 모든 세포의 세포질 안에 존재하는 효소로서 pyruvic acid 와 lactic acid 간의 가역적 전환에 관여하여 촉매작용을 하며, LDH를 내포한 조직이 파괴될 때 혈액 중으로 흘러나와 혈중 LDH가 상승한다. RAW 264.7 세포(1.5 × 105 cells/㎖)에 시험 약물과 LPS (1 ㎍/㎖)를 동시 처리하여 24시간 배양한 후, LDH assay 방법을 이용하여 세포 독성을 확인한 결과, 누은분홍잎 모든 추출물 및 분획물에서 세포독성이 나타나지 않았다(Fig. 1-A, B).
7 세포에서 생성되는 Nitric oxide(NO)에 대한 누은분홍잎 추출물의 억제효과를 알아보기 위해서 세포에 생성된 NO 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 그 결과 80% 에탄올 추 출물, 헥산과 에틸아세테이트 분획물에서 대조군인 LPS 단독 처리군에 비해 높은 NO 생성 억제효과를 관찰할 수 있었다. 특히 에틸아세테이트 분획물인 경우 50 ㎍/㎖의 농도에서도 세포 독성 효과도 보이지 않으면서 우수한 NO 생성 억제효과를 보여 주었다(Fig.
7 cell에 LPS (1 ㎍/㎖)와 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물(50 ㎍/㎖)을 24시간 처리한 후 iNOS, COX-2의 발현 억제 활성을 확인하였다. 그 결과 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 알 수 있으며(Fig. 3-A), 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적 으로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있다(Fig. 3-B).
7 세포에서 LPS 로 유도된 NO의 생성억제 효과, 그리고 iNOS와 COX-2의 단백질 발현 억제효과, PGE2 생성 억제 효과 및 TNF-α와 IL-6등과 같은 pro-inflammatory cytokines 생성 억제효과 등을 알아보 았다. 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에 LPS로 자극을 주고 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물을 처리하여 확인해본 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 NO와 PGE2 생성 억제 활성이 가장 강하게 나타났으며, 농도 의존적으로 NO 및 PGE2 생성 억제 활성을 보임을 확인할 수 있었고, 세포독성평가(LDH)에서 는 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 50 ㎍/㎖ 이하의 농도에서는 세포독성이 나타나지 않았다. 또한, 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 확인할 수 있었으 며, 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적으 로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있었다.
2-A). 또한 에틸아세 테이트 분획물에서 농도 의존적으로 PGE2 생성 억제 활성을 보 임을 확인할 수 있었다(Fig. 2-B).
7 세포에 LPS로 자극을 주고 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물을 처리하여 확인해본 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 NO와 PGE2 생성 억제 활성이 가장 강하게 나타났으며, 농도 의존적으로 NO 및 PGE2 생성 억제 활성을 보임을 확인할 수 있었고, 세포독성평가(LDH)에서 는 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 50 ㎍/㎖ 이하의 농도에서는 세포독성이 나타나지 않았다. 또한, 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 확인할 수 있었으 며, 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적으 로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있었다. 이상의 결과는 누은분홍잎에 대한 효능, 이화학적 성분 및 유효성분 등에 대한 연구가 전무하여 본 결과를 통해 누은분홍잎 추출물 및 활성 분회물을 이용한 항염증 효능을 갖는 유효성분 분리 및 이를 통한 작용기전 연구에 중요한 기초자료가 될 것이라 사료 되고, 또한 안전하고 효과적인 항염증 관련 의약품, 의약외품 및 기능성 식품소재 개발에 대한 가능성을 제시하였다.
19%)의 분획물을 얻었다. 에탄올 추출물에 대한 각 순차분획물 중 부탄 올 분획물 수율이 7.56%로 가장 낮았고, 물 분획물이 56.19%로 가장 높은 수율을 보였다(Scheme 1).
후속연구
또한, 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 확인할 수 있었으 며, 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적으 로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있었다. 이상의 결과는 누은분홍잎에 대한 효능, 이화학적 성분 및 유효성분 등에 대한 연구가 전무하여 본 결과를 통해 누은분홍잎 추출물 및 활성 분회물을 이용한 항염증 효능을 갖는 유효성분 분리 및 이를 통한 작용기전 연구에 중요한 기초자료가 될 것이라 사료 되고, 또한 안전하고 효과적인 항염증 관련 의약품, 의약외품 및 기능성 식품소재 개발에 대한 가능성을 제시하였다.
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