[논문]국내에서 유통되는 8종의 식육감별을 위한 multiplex PCR법 개발

허은정; 고은경; 윤향진; 김연화; 김영조; 박현정; 위성환; 문진산

doi:10.13103/jfhs.2016.31.1.28

국내에서 유통되는 8종의 식육감별을 위한 multiplex PCR법 개발
Development of Multiplex PCR Assay for Identification of Eight Species from Meats in Korea 원문보기

한국식품위생안전성학회지 = Journal of food hygiene and safety, v.31 no.1, 2016년, pp.28 - 35

허은정 (식품의약품안전처) , 고은경 (농림축산검역본부 동물약품관리과) , 윤향진 (농림축산검역본부 동물약품관리과) , 김연화 (농림축산검역본부 동물약품관리과) , 김영조 (식품의약품안전처) , 박현정 (식품의약품안전처) , 위성환 (농림축산검역본부 동물약품관리과) , 문진산 (농림축산검역본부 동물약품관리과)

초록
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본 연구에서는 국내 대표 식육인 소, 돼지, 닭, 오리의 4종 식육과 염소, 양, 말, 칠면조의 4종 식육을 동시에 신속하게 감별할 수 있는 2 set의 multiplex PCR법을 개발하고자 미토콘드리아 16S RNA에서 종 특이부위를 선발하고 각 종에 대한 특이도를 높이기 위하여 인위적인 미스매치를 주어 프라이머를 제작한 후 8종 식육의 274개 시료를 대상으로 특이도와 민감도를 조사하였다. 그 결과 소, 돼지, 닭, 오리 모든 시료에서 각각 279, 94, 192, 477 bp의 증폭산물이, 말, 양, 염소, 칠면조의 모든 시료에서 각각 152 bp, 271 bp, 670 bp, 469 bp에서 뚜렷한 PCR 유전자 산물이 확인되어 모든 축종에서 100%의 특이도를 나타내어 축종별 감별력이 우수한 것으로 나타났다. 8종의 축종별로 DNA를 $10ng/{\mu}l$으로 정량한 후 혼합물을 10배씩 단계 희석하여 반응여부를 조사한 결과, 소, 돼지, 오리에서는 100 fg까지, 닭에서는 1 pg까지 검출됨을 확인할 수 있었다. 소, 돼지, 닭, 오리고기를 99.9%, 99%, 90%, 70%, 50%, 30%, 10%, 1%, 0.1%의 비율로 혼합한 식육과 $83^{\circ}C$ 20분, $100^{\circ}C$ 30분, $121^{\circ}C$ 10분에서 각각 열처리한 가열 혼합육에 대하여 검출한계를 조사한 결과 마지막 단계의 희석 비율인 모든 혼합육의 0.1%에서 검출이 가능하였으며, 열처리 혼합육에서는 닭에서는 1% 농도에서 소와 돼지의 혼합육에서 0.1% 농도에서 검출되어 민감도가 높음을 확인할 수 있었다. 본 연구에서 개발된 multiplex PCR법은 특이도 및 민감도에 있어서 국내 대표 식육을 감별하는데 있어서 유용한 것으로 평가된다.

Abstract ▼ AI-Helper

Species identification of animal tissues in meat products is an important issue to protect the consumer from illegal and/or undesirable adulteration; for economic, religious and health reasons. In this reason, accurate analytical methods are needed for the labeling of meat products with requiring simple and fast procedure. Recently, applications of PCR in food analysis have been increased because of their simplicity, specificity and sensitivity. Therefore, in this study, a multiplex PCR assay was developed for the simultaneous identification of eight species of cow, pig, chicken, duck, goat, sheep, horse and turkey from raw meats. The primers were designed in different regions of mitochondrial 16S RNA after alignment of the available sequences in the GenBank database. Two multiplex primer sets were designed as Set 1 (cow, pig, chicken, duck) and Set 2 (goat, sheep, horse, turkey), respectively. Total 274 samples from cow (n = 55), pig (n = 30), chicken (n=30), and duck (n = 30), goat (n = 40), sheep (n = 33), horse (n = 41), and turkey (n = 15) were tested. The primers generated specific fragments of 94, 192, 279, 477 bp (pig, chicken, cow, duck), 670, 271, 152, 469 bp (goat, sheep, horse, turkey) lengths for eight species, respectively. The animal species specificity was 100% in all eight samples in the multiplex PCR assay. The detection limit of the multiplex PCR assay showed from 100 fg to 1 pg of template DNA from extracted from raw meats. When applying multiplex PCR assays to sample from pork/beef and pork/chicken, beef/chicken tested raw mixed meats and heat-treated ($83^{\circ}C$ for 30min, $100^{\circ}C$ for 20min, and $121^{\circ}C$ for 10min) mixtures, detection limit was 0.1% level beef, pork and pork in beef and chicken in pork and 1.0% level pork in chicken. This study suggest that the developed multiplex PCR assay can be used for rapid and simultaneous species identification of cow, pig, chicken, duck, goat, sheep, horse and turkey from meats.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이에 본 연구에서는 국내에서 가장 널리 유통되고 있는 소, 돼지, 닭, 오리, 염소, 양, 말, 칠면조 8종의 식육, 혼합육, 열처리 가공육에 대하여 동시에 신속하게 감별할 수 있는 multiplex PCR법을 개발하였다. 이를 위하여 미토콘드리아 16S RNA에서 종 특이부위를 선발하고 각 종에 대한 특이도를 높이기 위하여 인위적인 미스매치를 주어 프라이머를 제작하여 국내 대표 식육인 소, 돼지, 닭, 오리의 4종 식육과 염소, 양, 말, 칠면조의 4종 식육을 동시에 감별할 수 있는 두 set의 multiplex PCR법을 각각 개발하였다.
. 이에 본 연구에서는 이러한 점을 감안하여 최종 선발된 종 특이적 전방향 및 역방향 프라이머 셋트에 대해 PCR 증폭산물의 강도를 고려하여 반응당 해당 프라이머의 농도를 Table 1에서와같이 조절하고, PCR 반응 조건을 평가하였다. 그 결과 검사시료인 DNA (5 ng/uL) 2 uL와 프라이머 믹스 2 uL, 2X PCR premix 10 uL, 증류수 6 uL를 첨가하여 95℃에서15분간 전-변성을 실시한 후 95℃에서 30초간 변성, 60℃에서 30초간 어닐링, 72℃에서 1분간 연장을 35사이클 수행한 후 마지막으로 72℃에서 3분간 최종 연장 과정을 수행할 때 가장 적절한 반응 조건을 보이는 것으로 나타났다(Table 2).
최종 선발된 축종별 PCR 프라이머를 이용하여 증폭된 단편의 크기가 예상된 대립유전자의 크기 범위 내에 존재하는지와 PCR 조건의 적정성을 재평가하기 위하여 본 연구에서 8종의 식육 274개 시료를 대상으로 특이도를 조사하였다. 그 결과 프라이머 Set 1(소, 돼지, 닭, 오리)에서는 소, 돼지, 닭, 오리 4종의 모든 시료의 축종에서 Fig.

제안 방법

8종의 식육으로부터 DNA의 추출 및 정제는 Dneasy Blood & Tissue kit (Qiagen GmbH, Hiden, Germany)를 사용하여 실시하였다.
Multiplex PCR 반응에는 Veriti 96 well Thermal Cycler (ABI, USA)를 사용하였고, PCR 반응조건은 95℃에서 15분간 전-변성(pre-denaturation)을 실시한 후 95℃에서 30초간 변성(denaturalization), 58℃에서 30초간 어닐링(annealing), 72℃에서 1분간 연장(extention)을 35 사이클로 수행한 후, 마지막으로 72℃에서 3분간 최종 연장 과정을 수행하였다(Table 2). PCR 증폭 산물은 증폭된 단편의 크기가 예상된 대립유전자 크기 범위 내에 존재하는지와, PCR 조건의 적정성 여부를 확인하기 위하여 EtBr (ethidium bromide)이 포함된 3% 아가로스 젤에 전기영동하고 UV상에서 관찰하였다.
Multiplex PCR법의 특이도 및 검출한계의 조사를 위해 생육을 포함하여 인위적으로 제조한 국내 대표 식육인 소, 돼지, 닭고기 혼합하고, 식육가공품의 가공조건을 고려하여 열처리하였다. 즉, 쇠고기와 돼지고기, 돼지고기와 닭고기, 쇠고기와 닭고기 등 3종으로 각각 혼합하였다.
Multiplex PCR 반응에는 Veriti 96 well Thermal Cycler (ABI, USA)를 사용하였고, PCR 반응조건은 95℃에서 15분간 전-변성(pre-denaturation)을 실시한 후 95℃에서 30초간 변성(denaturalization), 58℃에서 30초간 어닐링(annealing), 72℃에서 1분간 연장(extention)을 35 사이클로 수행한 후, 마지막으로 72℃에서 3분간 최종 연장 과정을 수행하였다(Table 2). PCR 증폭 산물은 증폭된 단편의 크기가 예상된 대립유전자 크기 범위 내에 존재하는지와, PCR 조건의 적정성 여부를 확인하기 위하여 EtBr (ethidium bromide)이 포함된 3% 아가로스 젤에 전기영동하고 UV상에서 관찰하였다.
미국의 NCBI (National Center for Biotechnology Infor- mation)에 등록된 소, 돼지, 닭, 오리, 말, 양, 염소, 칠면조의 미토콘드리아 DNA (16S RNA) 염기서열 정보를 바탕으로 상동성을 검사하여 축종별 종 특이적인 염기서열을 갖는 부분을 선발하였다. 각각의 구간에서 증폭하였을 때 각기 다른 크기의 PCR 증폭산물이 생성될 수 있는 프라이머를 제작한 후 8종의 축종에 대한 감별력이 있는 것을 최종 마커 후보도 선발하도록 최종 선발된 소, 돼지, 닭, 오리 4종의 프라이머 셋트와 말, 양, 염소, 칠면조 4종에 대한 각각의 마커는 150 bp이상에서 700 bp이하의 각기 다른 크기의 PCR 증폭산물이 생성될 수 있도록 설계하였다 (Table 1).
이에 반하여 돼지, 양, 염소, 닭의 4종 각 프라이머는 다른 종에 결합하는 비특이 밴드를 형성하였다. 그리하여 특이도를 향상시키기 위해 야생형(wild type)의 염기 위치에 인위적인 미스매치(mismatch) 염기를 삽입하여 비특이 밴드가 증폭되지 않도록 하였다.
본 연구에서는 국내에서 축산물로 소비되고 있는 8종의 식육 중 주요 식품인 소, 돼지. 닭, 오리와 나머지 4종의 축종으로 구분하여 검사 비용 및 비특이 문제를 해결하여 검사의 정확도를 높이고자 Two set의 Primer를 이용하여 multiplex PCR법을 개발하였다. 즉, Set 1은 소, 돼지, 닭, 오리 검출용으로, Set 2는 양, 말, 염소, 칠면조를 한 번에 검출할 수 있는 용도로 구분하여 각각 4종 개체씩 섞인 게놈 DNA를 이용하였으며, 음성 대조군(negative control)으로는 증류수를 사용하여 교차오염의 여부를 확인하였다.
또한, 쇠고기, 돼지고기, 닭고기 혼합육에 대하여 식육가공품의 가공조건을 고려하여, 83°C에서 30분, 100°C에서 20분, 121°C에서 10분으로 각각 열처리하였다.
1%가 되도록 혼합하였다. 또한, 쇠고기, 돼지고기, 닭고기 혼합육에 해당하는 식육가공품의 가공조건을 고려하여, 83℃에서 30분, 100℃에서 20분, 121℃에서 10분으로 각각 열처리한 다음 축종감별의 특이도와 민감도(검출한계)를 조사하였다.
미국의 NCBI (National Center for Biotechnology Infor- mation)에 등록된 소, 돼지, 닭, 오리, 말, 양, 염소, 칠면조의 미토콘드리아 DNA (16S RNA) 염기서열 정보를 바탕으로 상동성을 검사하여 축종별 종 특이적인 염기서열을 갖는 부분을 선발하였다. 각각의 구간에서 증폭하였을 때 각기 다른 크기의 PCR 증폭산물이 생성될 수 있는 프라이머를 제작한 후 8종의 축종에 대한 감별력이 있는 것을 최종 마커 후보도 선발하도록 최종 선발된 소, 돼지, 닭, 오리 4종의 프라이머 셋트와 말, 양, 염소, 칠면조 4종에 대한 각각의 마커는 150 bp이상에서 700 bp이하의 각기 다른 크기의 PCR 증폭산물이 생성될 수 있도록 설계하였다 (Table 1).
식육에 대한 축종 확인을 위하여 미국 식육감별법으로 등재되어 있는 Biokits raw species identification test kit™ 및 Biokits cooked species identification test kit™(BioKits, USA)로 검사하여 키트의 검사결과와 일치한 시료만 채택하여 PCR 검사에 사용하였다11).
이러한 점을 고려하여 본 연구에서는 민감도 및 특이도가 높은 multiplex PCR법을 개발하고자 미국의 NCBI에 등록된 소, 돼지, 닭, 오리, 말, 양, 염소, 칠면조 8종의 미토콘드리아 16S RNA 염기서열 정보를 바탕으로 소 29개, 돼지 13개, 닭 18개, 오리 10개, 말 22개, 양 9개, 염소 5개, 칠면조 15개의 마커를 일차적으로 선발하였다. 선발된 마커를 이용하여 프라이머를 제작한 후 증폭시켰을 때 소, 돼지, 닭, 오리의 경우에는 50~500 bp 이하로, 말, 양, 염소, 칠면조의 경우에는 150~700 bp 이하의 각기 다른 크기의 PCR 증폭산물이 생성될 수 있도록, 그리고 다른 축종에 교차반응을 보이지 않도록 프라이머를 제작한 다음 축종별 10두씩 genomic DNA를 추출하여 검사를 실시한 결과 소, 오리, 말, 칠면조 4종의 각 프라이머의 경우에는 다른 종에서는 증폭되지 않는 것을 확인할 수 있었다.
이에 본 연구에서는 국내에서 가장 널리 유통되고 있는 소, 돼지, 닭, 오리, 염소, 양, 말, 칠면조 8종의 식육, 혼합육, 열처리 가공육에 대하여 동시에 신속하게 감별할 수 있는 multiplex PCR법을 개발하였다. 이를 위하여 미토콘드리아 16S RNA에서 종 특이부위를 선발하고 각 종에 대한 특이도를 높이기 위하여 인위적인 미스매치를 주어 프라이머를 제작하여 국내 대표 식육인 소, 돼지, 닭, 오리의 4종 식육과 염소, 양, 말, 칠면조의 4종 식육을 동시에 감별할 수 있는 두 set의 multiplex PCR법을 각각 개발하였다.
닭, 오리와 나머지 4종의 축종으로 구분하여 검사 비용 및 비특이 문제를 해결하여 검사의 정확도를 높이고자 Two set의 Primer를 이용하여 multiplex PCR법을 개발하였다. 즉, Set 1은 소, 돼지, 닭, 오리 검출용으로, Set 2는 양, 말, 염소, 칠면조를 한 번에 검출할 수 있는 용도로 구분하여 각각 4종 개체씩 섞인 게놈 DNA를 이용하였으며, 음성 대조군(negative control)으로는 증류수를 사용하여 교차오염의 여부를 확인하였다. 각각의 primer sequence와 multiplex PCR을 위한 DNA 농도는 Table 1과 같다.
식육검사법의 축종 특이도와 검출한계를 평가하기 위하여 혼합육 제조 및 열처리 조건은 다음과 같이 실시하였다. 즉, 인위적으로 쇠고기와 돼지고기, 돼지고기와 닭고기, 쇠고기와 닭고기 등 3종으로 각각 혼합하여 쇠고기, 돼지고기, 닭고기를 비율별로 9:1로 혼합하였다. 또한, 쇠고기, 돼지고기, 닭고기 혼합육에 대하여 식육가공품의 가공조건을 고려하여, 83°C에서 30분, 100°C에서 20분, 121°C에서 10분으로 각각 열처리하였다.
8종의 식육으로부터 DNA의 추출 및 정제는 Dneasy Blood & Tissue kit (Qiagen GmbH, Hiden, Germany)를 사용하여 실시하였다. 추출 및 정제한 게놈 DNA의 정량분석은 Spectrophotometer AND-1000 (Nanodrop, USA)을 이용하였으며, 260-280 nm에서 흡광도를 측정하여 DNA의 농도와 순도를 확인하였다. 멸균증류수를 이용하여 모두 5 ng/uL로 보정한 후 실험 사용 전까지 −20°C에 보관하였다.
한편, 본 연구에서 개발된 multiplex PCR법을 적용하여 국내에서 혼합육에 주로 사용되는 소와 돼지, 돼지와 닭, 소와 닭의 혼합 비율을 각각 99.9%, 99%, 90%, 70%, 50%, 30%, 10%, 1%, 0.1%의 비율로 혼합하여 검출한계를 조사하였다. 그 결과 모든 혼합육에서 마지막 단계의 희석비율인 0.
즉, 쇠고기와 돼지고기, 돼지고기와 닭고기, 쇠고기와 닭고기 등 3종으로 각각 혼합하였다. 혼합비율은 두 종류의 비율이 각각 99.9%, 99%, 90%, 70%, 50%, 30%, 10%, 1%, 0.1%가 되도록 혼합하였다. 또한, 쇠고기, 돼지고기, 닭고기 혼합육에 해당하는 식육가공품의 가공조건을 고려하여, 83℃에서 30분, 100℃에서 20분, 121℃에서 10분으로 각각 열처리한 다음 축종감별의 특이도와 민감도(검출한계)를 조사하였다.

대상 데이터

2012년 1월부터 12월까지 8종 식육의 274개 시료(소 55, 돼지 30, 닭 30, 오리 30, 염소 40, 말 41, 양 33, 칠면조 15두)를 1년 동안 도축장 및 식육판매업체에서 채취하였다. 식육검사법의 축종 특이도와 검출한계를 평가하기 위하여 혼합육 제조 및 열처리 조건은 다음과 같이 실시하였다.
본 연구에서는 국내에서 축산물로 소비되고 있는 8종의 식육 중 주요 식품인 소, 돼지. 닭, 오리와 나머지 4종의 축종으로 구분하여 검사 비용 및 비특이 문제를 해결하여 검사의 정확도를 높이고자 Two set의 Primer를 이용하여 multiplex PCR법을 개발하였다.

성능/효과

이에 본 연구에서는 이러한 점을 감안하여 최종 선발된 종 특이적 전방향 및 역방향 프라이머 셋트에 대해 PCR 증폭산물의 강도를 고려하여 반응당 해당 프라이머의 농도를 Table 1에서와같이 조절하고, PCR 반응 조건을 평가하였다. 그 결과 검사시료인 DNA (5 ng/uL) 2 uL와 프라이머 믹스 2 uL, 2X PCR premix 10 uL, 증류수 6 uL를 첨가하여 95℃에서15분간 전-변성을 실시한 후 95℃에서 30초간 변성, 60℃에서 30초간 어닐링, 72℃에서 1분간 연장을 35사이클 수행한 후 마지막으로 72℃에서 3분간 최종 연장 과정을 수행할 때 가장 적절한 반응 조건을 보이는 것으로 나타났다(Table 2).
1%의 비율로 혼합하여 검출한계를 조사하였다. 그 결과 모든 혼합육에서 마지막 단계의 희석비율인 0.1% 농도에서도 증폭산물이 검출되었다(Fig. 5A). 또한, 혼합육을 식육가공조건을 고려하여 83℃ 20분, 100℃ 30분, 121℃ 10분 동안 각각 열처리한 다음 축종별 검출한계를 조사한 결과, 소, 돼지고기에서는 0.
최종 선발된 축종별 PCR 프라이머를 이용하여 증폭된 단편의 크기가 예상된 대립유전자의 크기 범위 내에 존재하는지와 PCR 조건의 적정성을 재평가하기 위하여 본 연구에서 8종의 식육 274개 시료를 대상으로 특이도를 조사하였다. 그 결과 프라이머 Set 1(소, 돼지, 닭, 오리)에서는 소, 돼지, 닭, 오리 4종의 모든 시료의 축종에서 Fig. 1에서와 같이 각각 279, 94, 192, 477 bp의 특이 유전자 증폭 산물을 확인할 수 있었다. 또한, 소, 돼지, 닭, 오리의 DNA를 혼합한 시료의 경우 각각의 축종 특이적인 PCR 증폭 산물이 검출되었다(Fig.
2). 동일한 시료를 대상으로 프라이머 Set 2(말, 양, 염소, 칠면조)에 적용한 바, 말에서는 152 bp, 양은 271 bp, 염소는 670 bp, 칠면조는 469 bp에서 뚜렷한 PCR 유전자 산물이 확인되었지만, 소, 돼지, 닭, 오리의 시료에는 반응하지 않는 것으로 나타났다(Fig. 3). 또한, 말, 양, 염소, 칠면조와 소, 돼지, 닭, 오리의 DNA를 혼합한 시료에서도 위와 동일한 결과를 나타내었다 (Data not shown).
또한, 본 연구에서 개발된 Multiplex PCR법의 검출한계를 조사하기 위하여 축종별로 DNA를 10 ng/µl으로 정량한 후 혼합물을 10배씩 단계 희석하여 반응여부를 조사한 결과, 소, 돼지, 오리에서 100 fg/uL 까지 검출되었고, 닭에서는 1 pg/uL 까지 검출됨을 확인할 수 있었다(Fig. 4).
1에서와 같이 각각 279, 94, 192, 477 bp의 특이 유전자 증폭 산물을 확인할 수 있었다. 또한, 소, 돼지, 닭, 오리의 DNA를 혼합한 시료의 경우 각각의 축종 특이적인 PCR 증폭 산물이 검출되었다(Fig. 2). 동일한 시료를 대상으로 프라이머 Set 2(말, 양, 염소, 칠면조)에 적용한 바, 말에서는 152 bp, 양은 271 bp, 염소는 670 bp, 칠면조는 469 bp에서 뚜렷한 PCR 유전자 산물이 확인되었지만, 소, 돼지, 닭, 오리의 시료에는 반응하지 않는 것으로 나타났다(Fig.
5A). 또한, 혼합육을 식육가공조건을 고려하여 83℃ 20분, 100℃ 30분, 121℃ 10분 동안 각각 열처리한 다음 축종별 검출한계를 조사한 결과, 소, 돼지고기에서는 0.1% 농도에서, 닭고기에서는 1% 농도에서도 증폭산물이 검출되었다(Fig. 5B). 이러한 결과는 Ha 등(2006)⁹⁾이 12S rRNA-tRNA^val16S rRNA 부위로 소, 산양, 면양 그리고 사슴을 검출하고 감별하기 위해서 동일한 annealing 온도에서 99~108 bp 범위의 PCR 산물이 증폭되어 가열 처리된 식육에 대해서 감별이 가능하였고, 혼합된 시료에서 검출한계가 0.
이러한 점을 고려하여 본 연구에서는 민감도 및 특이도가 높은 multiplex PCR법을 개발하고자 미국의 NCBI에 등록된 소, 돼지, 닭, 오리, 말, 양, 염소, 칠면조 8종의 미토콘드리아 16S RNA 염기서열 정보를 바탕으로 소 29개, 돼지 13개, 닭 18개, 오리 10개, 말 22개, 양 9개, 염소 5개, 칠면조 15개의 마커를 일차적으로 선발하였다. 선발된 마커를 이용하여 프라이머를 제작한 후 증폭시켰을 때 소, 돼지, 닭, 오리의 경우에는 50~500 bp 이하로, 말, 양, 염소, 칠면조의 경우에는 150~700 bp 이하의 각기 다른 크기의 PCR 증폭산물이 생성될 수 있도록, 그리고 다른 축종에 교차반응을 보이지 않도록 프라이머를 제작한 다음 축종별 10두씩 genomic DNA를 추출하여 검사를 실시한 결과 소, 오리, 말, 칠면조 4종의 각 프라이머의 경우에는 다른 종에서는 증폭되지 않는 것을 확인할 수 있었다. 이에 반하여 돼지, 양, 염소, 닭의 4종 각 프라이머는 다른 종에 결합하는 비특이 밴드를 형성하였다.
위와 같이 본 연구에서 개발되어진 소, 돼지, 닭, 오리의 4종 식육과 염소, 양, 말, 칠면조의 4종 식육을 동시에 감별할 수 있는 두 종류 set의 multiplex PCR법은 분쇄육 등 혼합식육과 열처리 혼합식육에 있어서 국내 대표 식육 8종을 감별하는데 있어서 유용하며, 특이도 및 민감도에 있어서도 우수한 것으로 평가되었다. 향후 다양한 축산물가공품을 대상으로 축종감별에 대한 종합적인 평가가 이루어진다면 제품의 원재료 표시제를 비롯하여 식육감별을 위한 효과적인 방법으로 제시될 수 있을 것으로 사료된다.

후속연구

위와 같이 본 연구에서 개발되어진 소, 돼지, 닭, 오리의 4종 식육과 염소, 양, 말, 칠면조의 4종 식육을 동시에 감별할 수 있는 두 종류 set의 multiplex PCR법은 분쇄육 등 혼합식육과 열처리 혼합식육에 있어서 국내 대표 식육 8종을 감별하는데 있어서 유용하며, 특이도 및 민감도에 있어서도 우수한 것으로 평가되었다. 향후 다양한 축산물가공품을 대상으로 축종감별에 대한 종합적인 평가가 이루어진다면 제품의 원재료 표시제를 비롯하여 식육감별을 위한 효과적인 방법으로 제시될 수 있을 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	현행 축산물 가공기준 및 성분규격에 명시된 식육감별을 위한 검사법은 어떤 것들이 있는가?	현행 축산물의 가공기준 및 성분규격에는 식육감별을 위한 검사법으로서 이화학적 방법, 혈청학적 검사법, 효소면역학적검사법, 유전자검사법이 있다20). glycogen검사법, 지방검사법 및 자비법은 식육감별기준이 모호하거나 매우 주관적이고, DNA hybridization법과 혈청학적 검사법인 면역혈청침강반응, 미량겔 확산법 그리고 한천겔 확산법은 근연종에서 교차반응이 발생하며, 히스티딘 디펩타이드법은 두 가지 이상의 혼합육에서는 식육을 감별할 수 없는 단점이 있다11,16).
	현재 사용 중인 식육감별을 위한 검사법들의 단점은 무엇인가?	현행 축산물의 가공기준 및 성분규격에는 식육감별을 위한 검사법으로서 이화학적 방법, 혈청학적 검사법, 효소면역학적검사법, 유전자검사법이 있다20). glycogen검사법, 지방검사법 및 자비법은 식육감별기준이 모호하거나 매우 주관적이고, DNA hybridization법과 혈청학적 검사법인 면역혈청침강반응, 미량겔 확산법 그리고 한천겔 확산법은 근연종에서 교차반응이 발생하며, 히스티딘 디펩타이드법은 두 가지 이상의 혼합육에서는 식육을 감별할 수 없는 단점이 있다11,16).
	mt DNA 유전자에 기반을 둔 PCR 검사가 반추류, 가금류, 개, 고양이와 같은 축종을 감별하는데 널리 쓰는 이유는 무엇인가?	식육품종감별에 있어서 최근에 국내외 여러 연구자가 식육감별을 위하여 12S rRNA, 16S rRNA, 그리고 cytochrome b (cyt b)와 같은 미토콘드리아 DNA (mt DNA) 유전자에 기반을 둔 PCR 검사를 활용하고 있다. 이 검사법은 신속성, 민감성, 특이성에서 우수하기 때문에 반추류(소, 면양, 산양, 사슴), 가금류(닭, 칠면조, 오리, 거위), 개, 고양이, 그리고 돼지와 같은 축종을 감별하는데 가장 널리 쓰이고 있다9,14,17,18,22,24,29). 특히, mt DNA 유전자는 핵 내 DNA보다 세포당 수천 개의 copy number가 있어 열변성에 의해 야기된 DNA 단편으로부터 적절한 크기로 증폭될 수 있고, 다양한 축종에서 보고된 염기서열의 유용성뿐만 아니라 동물 mt DNA 유전자 구성에 관한 방대한 정보를 가지고 있다.

참고문헌 (31)

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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