[논문]비알코올성 지방간 세포 모델에서 소분청음의 지방증 완화 효능 연구

이혜인; 김지수; 김천중; 김하나; 양태준; 정상준; 최창원

doi:10.14374/hfs.2016.24.2.100

비알코올성 지방간 세포 모델에서 소분청음의 지방증 완화 효능 연구
Research on Anti-lipogenic Effect of Sobuncheong-eum on Experimental Cellular Model of Non-alcoholic Fatty Liver Disease 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.24 no.2, 2016년, pp.100 - 107

이혜인 (동신대학교 한의과대학) , 김지수 (동신대학교 한의과대학) , 김천중 (동신대학교 한의과대학) , 김하나 (동신대학교 한의과대학) , 양태준 (동신대학교 한의과대학) , 정상준 (동신대학교 한의과대학) , 최창원 (동신대학교 한의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The purpose of this study is to evaluate the anti-lipogenic effect of Sobuncheong-eum on non-alcoholic fatty liver disease in free fatty acid induced cellular model. Methods : HepG2 cells were treated with palmitate for 24h to overload intracellular triglyceride (TG) content in the presence or absence of Sobuncheong-eum extract. After palmitate treatment, Intracellular TG content was measured with TG assay kit. Several lipogenesis related markers, including AMP-activated protein kinase (AMPK), sterol regulatory element-binding transcription factor-1c (SREBP-1c), acetyl-CoA carboxylase (ACC), and fatty acid synthase (FAS), were assessed using Western-blot analyses and RT-PCR. Results : Palmitate markedly increased intracellular TG in HepG2 cells, and which were alleviated by coadministered Sobuncheong-eum extract. Sobuncheong-eum extract activated AMPK, which plays a key role in reducing hepatic lipid accumulation, and reduced lipogenic fators, SREBP-1c, ACC, and FAS. Conclusions : Taken together, it is conceivable that Sobuncheong-eum has an potential to alleviate steatosis, and which may be mediated by activating AMPK at least in part.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이에 저자들은 비알코올성 지방간에 적용 가능한 한약들을 탐색하던 중, 소분청음 (小分淸飮)이 HepG2 cell에 지방산으로 유도한 비알코올성 지방간 세포 모델에서 지방증 (steatosis)을 완화시키는 효능을 확인하고, 그 기전을 조사하여 보고하는 바이다.

제안 방법

HepG2 cell에 대하여 소분청음 추출물이 세포독성을 나타내지 않는 농도 범위를 측정하기 위하여, HepG2 cell에 다양한 농도의 소분청음 추출물을 처리하고 MTT assay를 통해 HepG2 cell의 세포 활성도를 측정하였다. 소분청음 추출물은 1,500 μg/ml 이하의 농도에서는 세포 활성도를 떨어뜨리지 않았다 (Figure 1).
본 연구에서는 비알코올성 지방간에 대한 소분청음의 치료 효능을 확인해보고자, HepG2 cell에 지방산을 처리하여 유도한 비알코올성 지방간 세포 모델에서, 소분청음이 세포 내 중성지방 (triglyceride) 함량에 미치는 변화를 관찰하였다. 아울러, 소분청음이 lipogenesis를 억제하는 AMPK의 활성화에 미치는 영향과 lipogenic genes인 SREBP-1c, ACC, 및 FAS 발현에 대한 영향을 조사하였다.
본 연구에서는 비알코올성 지방간에 대한 소분청음의 치료 효능을 확인해보고자, HepG2 cell에 지방산을 처리하여 유도한 비알코올성 지방간 세포 모델에서, 소분청음이 세포 내 중성지방 (triglyceride) 함량에 미치는 변화를 관찰하였다. 아울러, 소분청음이 lipogenesis를 억제하는 AMPK의 활성화에 미치는 영향과 lipogenic genes인 SREBP-1c, ACC, 및 FAS 발현에 대한 영향을 조사하였다. 그 결과 소분청음은 HepG2 cell에서 palmitate에 의한 세포 내 지질 축적을 뚜렷히 완화하였으며, 세포내 지질 축적에 관여하는 SREBP-1c, ACC, 및 FAS의 발현을 감소시켰다.

대상 데이터

HepG2 cell은 human hepatocellular carcinoma 기원 세포로서 American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA)에서 구입하였다. 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin, 및 10% heat‐inactivated fetal bovine serum을 첨가한 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)을 이용하여, 37℃, 5% CO2 환경에서 배양하였다.

이론/모형

SREBP-1c, ACC 및 FAS의 mRNA 발현 정도를 측정하기 위하여 semi-quantitative RT-PCR을 시행하였다. 먼저 RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany)로 total RNA를 추출하였다.
소분청음 추출물이 세포 활성도를 떨어뜨리는지 확인하기 위하여 MTT assay를 시행하였다. HepG2 Cell을 96-well plate에 1 × 104 cells/well의 밀도로 투입하고 24 시간 후 소분청음 추출물을 여러 가지 농도 (0, 50, 100, 300, 500, 700, 1,000, 1,500 μg/ml)로 투약하고 다시 24 시간 배양하였다.

성능/효과

아울러, 소분청음이 lipogenesis를 억제하는 AMPK의 활성화에 미치는 영향과 lipogenic genes인 SREBP-1c, ACC, 및 FAS 발현에 대한 영향을 조사하였다. 그 결과 소분청음은 HepG2 cell에서 palmitate에 의한 세포 내 지질 축적을 뚜렷히 완화하였으며, 세포내 지질 축적에 관여하는 SREBP-1c, ACC, 및 FAS의 발현을 감소시켰다. 또한, 이러한 anti-lipogenic effect를 유발하는 AMPK를 활성화시키는 것이 확인되었다.
소분청음(小分淸飮)은 『景岳全書』에 최초 수록된 처방으로 그 효능을 “治小水不利, 濕滯腫脹, 不能受補等證, 此方主之”라 하여, 濕滯傷中으로 인한 제반 증상에 사용하는 것으로 기록되어 있다7). 따라서, 소분청음은 濕濁內結하여 발생한 비알코올성 지방간에도 치료 효능이 있을 것으로 추론하였다.
이상의 결과를 요약하면, 소분청음 추출물은 1,500 μg/ml 이하의 농도에서는 HepG2 cell의 세포활성도를 억제하지 않으며, 300 ~ 1,000 μg/ml의 농도에서 HepG2 cell의 세포 내 중성 지방 함량을 통계적으로 의미있게 감소시켰다. 또한, 300 μg/ml 농도에서 phospho-AMPK를 증가시켜, palmitate로 유발된 SREBP-1c, ACC, 및 FAS의 발현을 감소시켰다.
이상의 결과를 요약하면, 소분청음 추출물은 1,500 μg/ml 이하의 농도에서는 HepG2 cell의 세포활성도를 억제하지 않으며, 300 ~ 1,000 μg/ml의 농도에서 HepG2 cell의 세포 내 중성 지방 함량을 통계적으로 의미있게 감소시켰다. 또한, 300 μg/ml 농도에서 phospho-AMPK를 증가시켜, palmitate로 유발된 SREBP-1c, ACC, 및 FAS의 발현을 감소시켰다.

후속연구

또한, 이러한 anti-lipogenic effect를 유발하는 AMPK를 활성화시키는 것이 확인되었다. 향후, 후속 동물 실험을 계획하고 있으며, 동물 실험 중 안전성에 대한 평가도 함께 계획하고 있다.

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