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문제 정의
- 이와 같이 목단피의 다양한 생리활성과 품질관리를 위한 연구들은 보고되었지만, 지혈작용을 증강시키기 위하여 포제하여 사용하는 포제된 목단피에 대한 연구는 미비한 실정이다. 따라서 본 연구자들은 지혈작용의 증강을 위해 포제하여 사용하는 목단피 중 (+)-catechin, paeoniflorin및 paeonol 등 3종의 성분에 대하여 함량분석을 비롯한 이화학적 데이터를 측정 및 비교하여 목단피의 포제에 대한 기초자료를 제공하고자 본 실험을 진행하였다.
제안 방법
- 1,16) 따라서 목단피의 시간과 온도에 따른 적절한 포제 방법을 설정하고자 시중 유통 규격품인 목단피를 구입하여 시간(5, 10, 15, 및 20분)과 온도(160, 180, 200, 220 및 240℃)에 따라 포제를 실시하였다. 유통 목단피 원생약과 청초법에 의해 포제된 목단피는 Fig.
- 에 따라 시험하였다. 105℃에서 1시간 건조 된 칭량병의 무게를 단 후 시료 약 2 g을 넣어 그 층의 높이가 5 mm 이하가 되도록 편 다음 무게를 정밀하게 측정하였다. 그 후 105℃에서 5시간 건조한 후 데시케이터에서 식힌 후 칭량병을 꺼내어 그 무게를 정밀하게 달아 건조감량(%)을 계산하였다.
- 관능검사 − 목단피는 지혈작용을 높이기 위해 炒炭하여사용하는데, 단면에 탄화되지 않고 고르게 어두운 색상으로 변한 정도를 기준으로 하였다.
- 관능검사 − 목단피의 최적의 포제 시간과 온도를 설정하기 위하여 청초법으로 포제한 생약에 대하여 본초학 교재14)를 기초로 동국대학교와 대전대학교 한의과대학 본초학 전공자인 이제현 교수와 서영배 교수에 의해 관능검사를 실시하였다.
- 105℃에서 1시간 건조 된 칭량병의 무게를 단 후 시료 약 2 g을 넣어 그 층의 높이가 5 mm 이하가 되도록 편 다음 무게를 정밀하게 측정하였다. 그 후 105℃에서 5시간 건조한 후 데시케이터에서 식힌 후 칭량병을 꺼내어 그 무게를 정밀하게 달아 건조감량(%)을 계산하였다.
- 기기 − 목단피의 함량분석을 위해 LC-20AT pump, DGU20A3 degasser, CTO-20A column oven, SIL-20AC auto sampler 및 SPD-M20A photodiode array(PDA) detector(SPD-M20A)로 구성된 Shimadzu사의 HPLC(Kyoto, Japan)를 사용하였으며, 측정된 데이터 수집과 처리에는 LC solution software(Version 1.24, SP1, Shimadzu, Kyoto,Japan)를 사용하였다.
- 대한약전 수록 약재인 목단피에 대하여 시간(5, 10, 15 및 20분)과 온도(160, 180, 200, 220 및 240℃)에 따라 포제 할 경우 목단피 중 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol과 같은 성분의 함량 변화를 측정하였다. 그 결과 포제 후 목단피에서 (+)-catechin은 MRC2와 MRC10, paeoniflorin은 MC6 및 paeonol은 MRC13에서 가장 높은 함량으로 검출되었다.
- 포제 전 CBR-101A를 해당 온도에서 예비가열 한 후 시료의 포제를 실시하였다. 목단피에 대하여 다음과 같이 온도와 시간에 따른 포제의 조건을 달리하였다; 포제하지 않은 원생약(Moutan Radicis Cortex; MRC1), 160℃-5분(MRC2), 160℃-10분(MRC3), 160℃-15분(MRC4), 160℃20분(MRC5), 180℃-5분(MRC6), 180℃-10분(MRC7), 180℃15분(MRC8), 180℃-20분(MRC9), 200℃-5분(MRC10),200℃-10분(MRC11), 200℃-15분(MRC12), 200℃-20분(MRC13), 220℃-5분(MRC14), 220℃-10분(MRC15), 220℃15분(MRC16), 220℃-20분(MRC17), 240℃-5분(MRC18),240℃-10분(MRC19), 240℃-15분(MRC20), 240℃-20분(MRC21). 이와 같이 시간과 온도에 따른 포제가 완료되면 실온에서 시료를 냉각시킨 후 polyethylene:polypropylene(1:1)bag으로 포장하여 냉장 보관하면서 분석에 사용하였다.
- 목단피의 주요성분으로 알려진 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol에 대하여 포제전·후의 함량 분석을 위해 TableI의 조건에 따라 HPLC 분석을 실시하였다.
- 벤조피렌시험 − 벤조피렌은 원료의 가열과정에서 발생하는 발암성 물질로 본 시험에서 목단피를 고온에서 포제할 경우 발생될 수 있는 벤조피렌에 대하여 목단피 원생약과포제(220℃-15분, 220℃-20분, 240℃-15분 및 240℃-20분)시료 총 5개의 시료에 대하여 각각 약 5.0 g을 사용하여 식품의약품안전청 고시15)에 따라 액체크로마토그래프법으로 시험하였다.
- 09분에 각각 검출되었다. 설정된 분석법을 이용하여 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol 등 3종의 성분에 대하여 포제 전 시료와 시간과 온도에 따른 포제 시료에 대한 성분 변화를 HPLC로 비교 측정하였다(Fig. 5). 분석 결과 포제 전 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol의 함량은 0.
- 정량 − 목단피에 포함된 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol 등 3종의 성분을 대상으로 포제 전·후에 대하여 함량을 분석하였다.
- 에 따라 시험하였다. 즉, 회분에 묽은염산 25 mL을 넣고 5분간 약한 열로 끓여 불용물을 정량용 여과지로 여과하여 잔류물을 열탕으로 잘 씻어 여과지와 함께 건조한 다음 회분과 같은 5시간 강열하여 데시케이터(실리카겔)에서 식힌 다음 그 질량을 정밀하게 달아 산불용성회분량(%)을 계산하였다.
- 에 따라 도가니를 550℃에서 1시간 강열한 후 방치하여 식힌 다음 질량을 정밀하게 단 후 시료 약 2g을 넣어 그 질량을 정밀하게 달고 도가니의 뚜껑을 비스듬히 덮었다. 천천히 온도를 올려 550℃에서 5시간 동안 강열하여 탄화물이 남지 않을 때까지 회화한 후 방치하여 식힌 다음 그 질량을 정밀하게 달고 다시항량이 될 때까지 회화하고 방치하여 식힌 후 그 질량을 정밀하게 달아 회분량(%)으로 하였다.
- 한약재 포제 − 목단피 규격품을 구입하여 온도(160, 180,200, 220 및 240℃)와 시간(5, 10, 15 및 20분)에 따라 포제하였다. 포제 전 CBR-101A를 해당 온도에서 예비가열 한 후 시료의 포제를 실시하였다. 목단피에 대하여 다음과 같이 온도와 시간에 따른 포제의 조건을 달리하였다; 포제하지 않은 원생약(Moutan Radicis Cortex; MRC1), 160℃-5분(MRC2), 160℃-10분(MRC3), 160℃-15분(MRC4), 160℃20분(MRC5), 180℃-5분(MRC6), 180℃-10분(MRC7), 180℃15분(MRC8), 180℃-20분(MRC9), 200℃-5분(MRC10),200℃-10분(MRC11), 200℃-15분(MRC12), 200℃-20분(MRC13), 220℃-5분(MRC14), 220℃-10분(MRC15), 220℃15분(MRC16), 220℃-20분(MRC17), 240℃-5분(MRC18),240℃-10분(MRC19), 240℃-15분(MRC20), 240℃-20분(MRC21).
- 한약재 포제 − 목단피 규격품을 구입하여 온도(160, 180,200, 220 및 240℃)와 시간(5, 10, 15 및 20분)에 따라 포제하였다.
- 확인시험 − 대한약전의 목단피 확인시험법4)에 따라 이 약의 가루 및 목단피 대조생약 2g을 달아 각각 헥산 10 mL에 녹여 3분간 흔들어 섞은 다음 여과하여 검액 및 목단피대조생약 표준액으로 하였다.
대상 데이터
- 1). 목단피 대조생약은 식품의약품안전처(Osong, Korea)로부터 분양받아 사용하였다. 정성 및 정량분석을 위한 메탄올, 아세토나이트릴 및 물은 J.
- , Danbury, CT, USA) 및 포제는CBR-101A(GeneCafe, Ansan, Korea)를 각각 사용하였다. 박층크로마토그래피(thin layer chromatography; TLC) plate(Silica gel 60 F254)는 Merck KGaA(Darmstadt, Germany)로부터 구입하여 사용하였다.
- 시약 − (+)-Catechin(99.3%)은 Biopurify Biochemical(Chengdu, China)에서 구입하였으며, paeoniflorin(99.4%)과 paeonol(99.9%)은 Wako(Osaka, Japan)로부터 구입하여 사용하였다(Fig. 1).
- 실험재료 − 본 실험에 사용된 목단피는 ㈜내몸에닿(Ulsan, Korea)에서 식품의약품안전처 검사기준을 통과한 규격품을 구입하여 동국대학교와 대전대학교 한의과대학 본초학전공 이제현 교수(Gyeongju, Korea)와 서영배 교수(Daejeon, Korea)로부터 감정 후 사용하였다.
- 목단피 대조생약은 식품의약품안전처(Osong, Korea)로부터 분양받아 사용하였다. 정성 및 정량분석을 위한 메탄올, 아세토나이트릴 및 물은 J.T. Baker(Phillipsburg, NJ, USA)에서 구입하였으며, 초산은 Junsei(Tokyo, Japan)에서 구입하였다. 그 외의 모든 시약은 HPLC 또는 특급 시약을 구입하여 사용하였다.
- 24, SP1, Shimadzu, Kyoto,Japan)를 사용하였다. 회화로 Thermolyne 48000 furnace(Barnstead, Dubuque, IA, USA), 건조기 OF-22G(JeioTech,Daejeon, Korea), 초음파추출기 Branson 8510E-DTH(Branson Ultrasonic Co., Danbury, CT, USA) 및 포제는CBR-101A(GeneCafe, Ansan, Korea)를 각각 사용하였다. 박층크로마토그래피(thin layer chromatography; TLC) plate(Silica gel 60 F254)는 Merck KGaA(Darmstadt, Germany)로부터 구입하여 사용하였다.
이론/모형
- 건조감량 − 대한약전의 생약시험법4)에 따라 시험하였다.
- 벤조피렌 − 벤조피렌은 불에 굽거나 훈연 시에 생성되는 발암물질로 알려져 있다. 따라서 220℃ 이상의 고온에서 목단피를 포제 할 경우 생성되는 벤조피렌의 양을 측정하고자 식품의약품안전청 고시15)에 따라 시험을 실시하였다. 시료 중 생목단피(MC1)와 고온에서 포제된 목단피 시료 중 MRC16(220℃-15분), MRC17(220℃-20분), MRC20(240℃15분) 및 MRC21(240℃-20분)에 벤조피렌 시험을 실시한 결과 0.
- 산불용성회분 − 대한약전의 생약시험법4)에 따라 시험하였다.
- 따로 패오놀 표준품 1 mg을 달아 메탄올 10 mL에 녹여 표준액으로 하였다. 이들 액을 가지고 박층크로마토그래프법에 따라 시험하였다. 검액, 목단피 대조생약 표준액 및 표준액 10 µL씩을 TLC plate에 점적 한 후 헥산·에틸아세테이트혼합액(1:1)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 TLC plate를 바람에 말린다.
성능/효과
- 이는 목단피를 포제한 후 paeonol의 함량은 포제 온도와 시간이 증가할수록 점차적으로 낮아진다는 기존의 연구보고와 일부 반대 결과를 보이기도 하였다.17) Paeoniflorin의 경우 포제 전 시료에서는 1.18%로 검출 되었으며, 포제된 목단피에서는 MRC6(180℃, 5분)에서 최고치인 1.08%로 검출되었다. MRC20(240℃, 15분)과 MRC21(240℃, 20분)에서는 paeoniflorin 성분이 검출되지 않았다.
- 검액, 목단피 대조생약 표준액 및 표준액 10 µL씩을 TLC plate에 점적 한 후 헥산·에틸아세테이트혼합액(1:1)을 전개용매로 하여 약 10 cm 전개한 다음 TLC plate를 바람에 말린다. 건조 후 TLC plate에 자외선(주파장 254 nm)을 쪼일 때 검액에서 얻은 여러 개의 반점은 목단피 대조생약 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 Rf값이 같음을 확인하고, 그 중 1개의 반점은 표준액에서 얻은 반점과 색상 및 Rf값이 같음을 확인하였다.
- 건조감량 − 목단피 및 포제된 목단피의 대한약전의 생약 시험법에 따른 목단피의건조감량 시험 결과 8.90±0.05%(n=3)인 반면 포제된 목단피의 건조감량은 2.65±1.19%(n=3)로 나타났다.
- 대한약전 수록 약재인 목단피에 대하여 시간(5, 10, 15 및 20분)과 온도(160, 180, 200, 220 및 240℃)에 따라 포제 할 경우 목단피 중 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol과 같은 성분의 함량 변화를 측정하였다. 그 결과 포제 후 목단피에서 (+)-catechin은 MRC2와 MRC10, paeoniflorin은 MC6 및 paeonol은 MRC13에서 가장 높은 함량으로 검출되었다.
- 82%의 함량을 나타내었다. 동일 온도 즉, 180℃와 200℃에서는 포제 시간이 증가할수록 성분의 함량은 다소 증가하는 것으로 나타났으며, 그 외의 포제 온도에서는 별다른 경향성을 보이지 안았다. 이는 목단피를 포제한 후 paeonol의 함량은 포제 온도와 시간이 증가할수록 점차적으로 낮아진다는 기존의 연구보고와 일부 반대 결과를 보이기도 하였다.
- 41%(n=3))로 목단피의 대한약전의 회분 기준치 이하로 나타났다. 따라서 포제된 목단피의 회분 함량 역시 목단피의 함량과 동일한 6.0%이하로 규정하는 것이 타당할 것으로 사료된다(Table II).
- 24%를 보였다. 또한 (+)-catechin과 paeoniflorin은 포제를 오래 할수록 그 함량이 줄어들었으며, 같은 온도에서는 5분 포제할 경우 다른 포제 시간에 비해 높은 함량을 나타내었다.
- 19%(n=3)로 나타났다. 또한 각각의 시료에 따라 0.61~8.90%로 나타났으므로 목단피의 건조감량은 10.0%이하, 포제된 목단피의 건조감량은 5.0%이하로 규정하는 것이 타당하다고 사료된다(Table II).
- 76%로 대한약전 기준치 이하로 검출되었다. 또한 포제된 시료 중 MRC13(200℃, 20분)에서 가장 높은 1.82%의 함량을 나타내었다. 동일 온도 즉, 180℃와 200℃에서는 포제 시간이 증가할수록 성분의 함량은 다소 증가하는 것으로 나타났으며, 그 외의 포제 온도에서는 별다른 경향성을 보이지 안았다.
- 목단피의 산불용성회분 측정 결과 0.50%(n=3)로 대한약전 기준치에 적합하였으며, 포제된 목단피의 산불용성회분 함량 또한 0.50~0.70% (0.58±0.06%(n=3))로 목단피의 대한약전 산불용성회분 기준치 이하로 나타났다.
- 관능검사 − 목단피는 지혈작용을 높이기 위해 炒炭하여사용하는데, 단면에 탄화되지 않고 고르게 어두운 색상으로 변한 정도를 기준으로 하였다. 본 실험에서 관능검사 결과 목단피의 적절한 포제 온도와 시간은 160℃-20분(MRC5), 180℃-10분(MRC7), 180℃-15분(MRC8), 200℃10분(MRC11), 220℃-5분(MRC14), 220℃-10분(MRC15)및 240℃-5분(MRC18)의 시료가 목단피의 적절한 포제 방법으로 나타났다.
- 5). 분석 결과 포제 전 (+)-catechin, paeoniflorin 및 paeonol의 함량은 0.20, 1.18 및 2.12%로 각각 검출되었으며, 포제 후에는 (+)-catechin이 0.03-0.24%, paeoniflorin이 미검출-1.08% 및 paeonol이 0.76-1.82%로 각각 검출되었다(Table III). 이들 성분들 중 paeonol이 대한약전에 함량분석법이 수록되어 있으며, 그 기준치는 1.
- 분석 결과 포제 전·후 대부분의 목단피에서 paeonol의 함량은 대한약전 기준치에 부합하였으나 MRC20(240℃, 15분)은 함량이 0.76%로 대한약전 기준치 이하로 검출되었다.
- 시료 중 생목단피(MC1)와 고온에서 포제된 목단피 시료 중 MRC16(220℃-15분), MRC17(220℃-20분), MRC20(240℃15분) 및 MRC21(240℃-20분)에 벤조피렌 시험을 실시한 결과 0.1, 불검출, 불검출, 3.9 및 0.4 μg/kg으로 각각 나타났다.
- 0%이하로 제시되어 있다. 이를바탕으로 실험한 목단피의 회분 함량은 4.20%(n=3)로 대한약전 기준치에 적합한 결과를 보였다. 또한 포제된 목단피의 회분 함량 역시 4.
- 확인시험 − 대한약전 기준에 따라 목단피 및 목단피 포제시료의 확인시험 결과 254 nm에서 목단피 대조생약 표준액 및 표준액의 Rf값이 0.59로 나타났으며, 목단피 및 목단피포제 시료에서도 동일한 Rf값에서 갈색의 반점을 나타내는 것으로 보아 대한약전 기준에 적합한 것으로 사료된다(Fig. 3).
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